Hallo, ich bin Dr. Jihad, der Leiter des Center P Lab. Das Ziel dieses Videos ist es, einen angepassten gekühlten Zellprozessor zu zeigen, der in der Ösenisolationsanlage ohne Auswirkungen auf die Umwelt sowie bei der Rückgewinnung der Zellen eingesetzt wird. Beginnen Sie mit dem Vorkühlen der leichten und schweren Dichtegradienten und des Zellprozessor-Kits auf vier Grad Celsius.
Bereiten Sie als Nächstes den Zellprozessor vor, indem Sie ihn 45 Minuten lang vorkühlen. Setzen Sie das Pre-Cool-Cell-Prozessor-Kit in den Zellenprozessor für den standardmäßigen ethanolgekühlten doppelwandigen Gradientenhersteller ein. Verbinden Sie die beiden Glaskammern und legen Sie sie auf einen Magnetrührverschluss. Klemmen Sie den Schlauch zwischen die beiden Kammern. Kühl.
Der Gradient Maker mit einem Ethanol-Umlaufkühler bei null Grad Celsius nach dem Abkühlen. Stellen Sie die Pumpendrehzahl auf 150 Milliliter pro Minute ein, um die Kammer mit 130 Millilitern starkem Dichtegradienten am Boden des Beutels zu füllen. Sobald sich der starke Gradient im Beutel befindet, schließen Sie das Hämostat zwischen zwei Kammern.
Geben Sie dann 130 Milliliter hoher Dichte in das vordere Becherglas und 140 Milliliter niedrige Dichte in das hintere Becherglas.Dez. Klemmen Sie den Hämostaten zwischen die beiden Kammern und stellen Sie dann eine Pumpendrehzahl von 50 Millilitern pro Minute ein, um einen kontinuierlichen Gradienten zwischen zwei Kammern zu erzeugen. Bereiten Sie als Nächstes menschliche mononukleäre Buffy-Coat-Zellen für die Reinigung aus mehreren gepoolten anonymen Buffy-Coats vor, die aus Vollblutabfallprodukten gesammelt wurden, die von der Blutbank bereitgestellt wurden.
Nach der Trennung werden fünf Milliliter mit spezifischem Gewicht, das einer mononukleären Zellsuspension niedriger Dichte ähnelt, in einen Transferbeutel mit einer Peristaltikpumpe gegeben, die auf 25 Milliliter pro Minute eingestellt ist. Beladen Sie den vorgeformten Gradienten mit 30 Millilitern mononukleärer Zellsuspension unter Verwendung einer vorkalibrierten Thermosonde. Ununterbrochen. Messen Sie die Temperatur im Zellprozessor mit einem digitalen Thermoelement, das mit einer sterilen Thermosonde verbunden ist.
Überwachen Sie die Temperatur von Gradienten und Zellen während des Prozesses. Stellen Sie den Zellenprozessor am Ende der Gradientenbelastung auf 537 G ein, um die vom Rotor erzeugte Wärme zu minimieren. Schalten Sie den Zellenprozessor aus, damit das Hydrauliksystem auf das Niveau vor dem Lauf zurückkehren und Luft ablassen kann.
Starten Sie dann den Zellprozessor bei 537 G neu und fügen Sie 130 Milliliter schwere und 140 Milliliter niedrige Dichtegradienten hinzu, um einen kontinuierlichen Dichtegradienten bei einer Durchflussrate von 50 Millilitern pro Minute und 4,3 Grad Celsius zu erzeugen. Laden Sie anschließend 30 Milliliter Buffy-Coat-Zellsuspension auf einen Lastdichtegradienten mit einer Durchflussrate von 25 Millilitern pro Minute und sechs Grad Celsius. Geben Sie nach dem Beladen der Zellen nach fünf Minuten 50 Milliliter Waschlösung in den Zellprozessor.
Sammeln Sie den geschleuderten Gradienten in 12 Flaschen mit einer Durchflussrate von 100 Millilitern pro Minute und einem Füllrohr von fünf Grad Celsius, eine mit 100 Millilitern Waschmedien und 150 Millilitern Zellen. Füllen Sie dann die Röhrchen zwei bis 12 mit 225 Millilitern Waschmedien und 25 Millilitern Zellen. Die Bewertung luftgetragener Partikel in Reinraumumgebungen, Klasse C und Klasse B, zeigte, dass es keinen Überschuss von 0,5 und fünf Mikrometern luftgetragenen Partikeln gemäß den Normen Reinraum, GMP-Klasse C, Klasse B und BSL gab.
Während der ersten vier Schritte wurde kein signifikanter Unterschied in den Gradiententemperaturen beobachtet, wobei beide Prozessoren etwa 4,5 Grad Celsius beibehielten. Nach der Zentrifugation und während der Sammelschritte stieg die Temperatur jedoch zu Beginn und am Ende der Sammelschritte für beide Prozessoren an. Darüber hinaus wirken sich die gekühlten Zellprozessoren auf die Reinigung menschlicher Zellen aus.
Nach der Zentrifugation wurden Effizienz und Lebensfähigkeit bestimmt. Die Temperatur der gesammelten Zellen stieg leicht auf 8,5 Grad Celsius an. Aktive Luftprobenahme und Sterilitätsscreening zeigten kein Wachstum.
