Name: construction of an affordable and easy-to-build zebrafish facility
Uploaded: 2014-11-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 19 s
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Die Autoren möchten die Office of Research der Presbyterian College School of Pharmacy für die finanzielle Unterstützung dieses Projektes durch die kleine Apotheke Auszeichnungen für Forschung &amp; Collaboration (SPARC) Zuschlags danken. Die Autoren danken Herrn John Smink, Leiter der Wassertiere Research Laboratory, Clemson University, Clemson, SC für seine technische Unterstützung Manuskript überarbeitet.

HINWEIS: Diese Protokolle an die Richtlinien der IACUC der Presbyterian College. 1. Erwerben Materialien In Tabelle 1. 2. Setzen Sie die 5 Lager Chrome Nach den Anweisungen des Herstellers. Dies wird verwendet, um die Einrichtung Haus. 3. Konstruieren Sie den Wasserbehälter und Filtersystem (1A und 2). <ol><li> Mit 1A als ein Führer, das Layout, die 18 Gallonen-Eimer, Pumpe, Filter und UV-Lampe zum endgültigen Aufstellort und Größe zu bestimmen. </li><li> Nachdem Teile angelegt, zu messen und schneiden Sie die ¾ &quot;PVC-Rohr auf die Länge für die Montage benötigt. Variieren die Längen aller Rohre nach bestimmten Raumbedarf und Einschränkungen. </li><li> Setzen Sie die Rohre und Formstücke wie zuvor mit dem PVC-Primer und Zement gelegt, siehe unten (3.3.2 und 3.3.3). <ol><li> Sand die Schnittkanten des Rohres mit Sandpapier, bis sie glatt anfühlt ein sindd gibt es keine Ablagerungen. </li><li> Prime die Außenseite des Rohres und das Innere der Armatur mit dem gekauften PVC Primer mit dem mitgelieferten Tupfer aus der PVC-Grundierung. </li><li> Zementieren Sie die Rohr und Fitting zusammen durch Anwendung der PVC-Kleber auf die Außenseite des Rohres mit dem mitgelieferten Tupfer. Wiederholen Sie für alle Schritte, die PVC Verklebung benötigen. </li><li> Platzieren Sie die 18-Gallonen-Eimer auf einer Seite des Regalkonstruktion. </li><li> Installieren eines Einbaubuchse in der Seite des Vorratstanks. </li><li> Bringen Sie einen ¾ &quot;PVC-Rohr mit dem Schott. </li><li> Schließen Sie das andere Ende des ¾ &quot;Rohr zum Pumpeneinlaß mit einem ¾&quot; Gewinde machen Fitting. </li><li> Schließen Sie die Filter an die Pumpe mit zwei 90-Grad-Bogen und ¾ &quot;PVC-Rohr. <ol><li> Verwenden Sie einen Papierfilter, gefolgt von einem Aktivkohle-Filter, um im Wasser herauszufiltern Schutt und reduzieren Chlor und chemischen Ebenen. </li></ol></li><li> Schließen Sie die UV-Lampe auf den Filter according den Herstelleranweisungen. </li></ol></li><li> Befestigen Sie die Pumpe und Filtersystem zur Oberseite des ersten Regal des Racks mit Drahtbinder. Variieren Sie die Reihenfolge der Montage und Befestigung nach der Größe und Layout der gewählten Regal / Rack. </li><li> 1 BioBalls pro Liter Wasser in den Wasserbehälter, wenn die Pumpe und die Filteranlage zusammengebaut und an dem Regal angebracht ist. </li></ol> 4. Bauen Sie die Hauptversorgungsleitung (1B und 2). <ol><li> Messen und schneiden Sie ein Stück ¾ &quot;PVC-Rohr, um die UV-Lampe an das Stromnetz anschließen </li><li> Verwenden Sie einen ¾ &quot;PVC-T, um die Hauptversorgungsleitung zu starten, indem Sie den Abschlag auf den ¾&quot; PVC Auspuff aus dem UV-Filter. . <ol><li> Fügen Sie ein Schaltventil, um den Boden der PVC-T als Abfluss für Wartung Spülen der Anlage dienen. </li><li> Starten Sie die Hauptversorgungsleitung von der Spitze des ¾ &quot;PVC-stück von Mess- und Schneide ¾&quot; PVCRohr auf die gewünschte Länge zu Zufuhrleitungen für jedes der Fächer an der Zahnstange vorzusehen. </li><li> Installieren ¾ &quot;PVC-T-Stücke für die horizontalen Linien, die jedes Regal des Racks geben wird. </li><li> Gegebenenfalls (und vorgeschlagen), einen ¾ &quot;Ein-Aus-Ventil für jeden Regal Zuleitung für die Isolierung von jedem Regal und ein modularer Aufbau des Systems ermöglicht. </li></ol></li><li> Verwenden Sie einen ¾ &quot;PVC-Rohr als Druckminderleitung auf dem obersten Regal. Wenn diese Linie verläuft auf der Rückseite des Regals, verwenden Sie dieses Regal für die Lagerung. Beenden Sie den Druckminderer Zeile in der Hauptabgasleitung (1B) mit einem ¾ &quot;Schaltventil. </li><li> Wenn die oben genannten Schritte durchgeführt wurden, grundieren und Zement die PVC-Rohr zusammen wie bisher bei der Konstruktion des Behälters und Filtersystem. </li></ol> 5. Bauen Sie die Hauptabgasleitung (1C und 2). <ol><li> Führen der vertikalen Länge der Hauptabgasleitung auf der anderen Seite der Zahnstange fROM Die Hauptversorgungsleitung. Verwenden Sie ein 2 &quot;PVC-Rohr für diese vertikale Linie, um die Hauptversorgungsleitung an den oberen und Ableitungen aus den Aquarien von jedem Regal erhalten. </li><li> Schneiden Sie die Stücke von 2 &quot;PVC-Rohr für die vertikale Hauptabgasleitung und mit 2&quot; PVC-T-Stücke, um die Fischbehälter Abflussleitungen von jedem Regal erhalten. Beenden Sie die Hauptabgasleitung im Vorratstank, um das Recyclingwasser über einen Schwammfilter zu vertreiben. </li><li> Schneiden Sie ein ein Zoll Öffnen der gesamten Länge der 2 &quot;PVC-Rohrstücke und heften sich an vertikalen Hauptabgasleitung mit PVC-stücke für die horizontalen Abflussleitungen aus den Aquarien. </li><li> Verschließen Sie die 2 &quot;horizontale Abflussleitungen mit einem 2&quot; PVC-Kappe. </li><li> Prime und festigen die Stücke mit den notwendigen Armaturen (Steckverbinder, Brustwarzen oder Ellenbogen). </li></ol> 6. Bauen Sie die Aquarien (Abbildung 3). <ol><li> Mit dem Bohrer, schneiden Sie ein 1 1/8 &quot;Loch an der Rückseite des Aquariums 1&quot; unterhalb der Oberkante mit einer Lochsäge. </li><li&gt; Schieben Sie einen Gewinde ¾ &quot;PVC-Stecker-Adapter (mit einem # 18 O-Ring befestigt) durch das Loch (von der Innenseite des Tanks nach außen). </li><li> Anbringen und festziehen 90 Grad 3/4 &quot;Gewinde PVC Ellbogen zum männlichen Adapter, um das Aquarium Auspuffrohr zu schaffen. Fügen Sie ein Stück feines Netz vor dem Einschrauben der Haltemutter an Zebrafischen gehen durch das Abgassystem zu verhindern. </li><li> Stellen Sie das Aquarium mit dem Auspuffrohr endet in den offenen Raum der Entleerung der Schlange hinter den Tanks </li></ol> 7. Starten des Wassersystems <ol><li> In mehreren Behältern, wie dem für den Behälter verwendet wird, messen die dreifache Menge an Wasser innerhalb des Systems enthalten sind. Lassen Sie dieses Wasser bei Raumtemperatur stehen zur Konditionierung für 48 Stunden. </li><li> Wasser hinzu, bis das System und lassen Sie es für mindestens 3 Tage zu zirkulieren. <ol><li> Wechseln Sie das Wasser in der Anlage kräftig in den ersten 3 Tagen nach der Kreislauf, um das System von Verunreinigungen zu befreien that befinden sich innerhalb der Rohre. </li></ol></li><li> In Starterzebrafisch und lassen Sie den Stickstoffkreislauf zu etablieren. Normalisieren pH in einen konsistenten 7. Halten sieben Zebrafisch pro 1,8 l, und füttern sie zweimal täglich während der Woche und einmal täglich an den Wochenenden wie Linbo 4 und McNabb 6 vorgeschlagen. </li><li> Überwachen Sie die Nitrat (&lt;75 mg / l), Nitrit (&lt;10 mg / l) und Ammonium (0 mg / l) täglich während der ersten Woche nach der Zugabe von Fisch und zweimal wöchentlich einmal gewünschten Spiegel wurden mit regelmäßigen Wasserwechsel beibehalten . </li></ol>

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	<li>Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , (2010).</li><li>Grim, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemogen+(hemgn),+a+transcription+factor+that+regulates+erythropoiesis+and+skeletogenesis+in+zebrafish.">Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish.</a> , (2013).</li><li>Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular,+easy-to-assemble,+low-cost+facility.">Modular, easy-to-assemble, low-cost facility.</a> Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).</li><li>Linbo, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+(Danio+rerio)+husbandry+and+colony+maintenance+at+the+Northwest+Fisheries+Science+Center.">Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center.</a> U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. 69, 4196 (2012).</li><li>McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Don't+be+afraid+to+set+up+your+fish+facility.">Don't be afraid to set up your fish facility.</a> Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).</li><li>Garcia, R. L., Sanders, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+cleaning+and+disinfection+procedures+in+a+zebrafish+rerio)+facility.">Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).</li><li>Rivas-Boyero, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+characterization+of+a+nociceptin+receptor+from+zebrafish+(Danio+rerio).">Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio).</a> J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).</li><li>Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+regulates+dopaminergic+neuron+differentiation+via+miR-133b.">Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b.</a> Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).</li><li>Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodr&#237;guez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mu+opioid+from+the+zebrafish+exhibits+functional+characteristics+as+those+of+mammalian+mu+opioid+receptor.">Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor.</a> Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).</li></ol>

Die Autoren erklären, von Interesse für dieses Papier keine Konflikte.

Der Hauptzweck dieses Artikels ist es zu zeigen, dass der Bau eines Funktionszebrafisch-Anlage ist nicht kompliziert und kann von Anfänger Fisch Forscher mit minimalem Konstruktionswissen aufgebaut werden. Darüber hinaus zeigt dieser Artikel, dass die Materialien für diese Funktionszebrafisch-Anlage kann leicht und kostengünstig aus lokalen Haustierfachhandel oder Baumarkt erworben werden. Nachdem alle Materialien und Werkzeuge sind die Konstruktion des Systems erfasst und die Aquarien dauert etwa einen Arbeitstag. ...

In-vivo-Modelle sind wesentlich umfassender und biomedizinischen Forschung, da sie eine in-vitro-Forschung auf dem System und organismischen Ebene übersetzt werden. Zum Beispiel Forschung mit kleinen Säugetieren, insbesondere Nagern, wurde es als notwendig für die Entwicklung von Arzneimitteln und zur Verbesserung des zur Verfügung stehenden Medikamente erwiesen. Allerdings könnte die Komplexität (finanziell und logistisch) machen es praktisch unmöglich ist, aufzubauen und zu pflegen Nagetier Einrichtungen für Experimente schlägt bei kleinen Forschungs akademischen Institutionen. Dennoch kann in vivo Forschung unter Verwendung anderer Tierarten, die weniger aufwendige Logistik erfordert. Zebrafisch (Danio rerio) wurden erfolgreich als in vivo Modell zur Genetik, Entwicklung, Pathophysiologie und Pharmakologie 1,2,10,11,12 studieren. Im Vergleich zu r Die zur Zebrafisch für Experimente beherbergen Einrichtungen sind relativ einfach und deutlich günstigerOdent Einrichtungen. Kim et al. 3 wurden kürzlich im Detail eine 80 Tankzebrafisch-Gehäuse-System, das für ca. $ 1500, die beide Teile und Arbeitskosten umfasst gebaut werden können beschrieben. Dies steht in krassem Gegensatz zu den fast 8500 $, die erforderlich wäre, um eine fertige, 80 Tanksystem aus einer beliebigen Anzahl von kommerziellen Anbietern zu kaufen. Jedoch ist die Beschreibung durch Kim et al. kann kompliziert und schwierig für Anfänger Fischforschung folgen. Wir glauben, dass ein Zebrafisch-Anlage kann in vereinfachter Weise für eine Investition von $ 1500 gebaut werden. Die Einrichtung einer In-vivo-Anlage in kleinen akademischen Einrichtungen bietet ihre Fähigkeiten ein zusätzliches Instrument, um stärker und gründlicher Forschung zu produzieren. In durch in vivo-Ergebnisse unterstützt vitro-Daten in der Regel produzieren umfassen biomedizinischen Forschung als Daten unter Verwendung von In-vitro-Ansätze. Daher ist dieImplementierung einer In-vivo-Forschungsanlage wird entscheidend zur Steigerung der Institution Erfolg in der Gesamtforschungsvorhaben (Student Engagement in Forschung, Veröffentlichungen, Kommunikation, Verfolgung von Drittmitteln, etc.). Der Bau eines Zebrafisch-Anlage, wie die in dieser Studie beschrieben ist während gende finanziellen Zeiten ideal für Forschung akademischen Einrichtungen mit begrenzten Möglichkeiten (oder Institutionen ohne in vivo Forschungseinrichtungen).

<table><tbody><tr><td>Item</td><td>Brand</td><td>Quantity</td><td></td></tr><tr><td>74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit</td><td>Style Selections</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>18-Gallon General Bucket/Tote</td><td>Centrex Plastics: LLC&amp;nbsp;Rugged Tote</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord</td><td>Master Electrician</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp</td><td>Smartpond&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Whole House Water Replacement Filter</td><td>Whirlpool</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing</td><td>Whirlpool</td><td>2</td><td></td></tr><tr><td>Thread Seal Tape</td><td>William H Harvey</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>8-fl oz LO-VOC PVC Cement</td><td>Oatey&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>8-fl oz LO-VOC Primer</td><td>Oatey&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing</td><td>Mister Landscaper&amp;nbsp;</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve</td><td>Mister Landscaper</td><td>33</td><td></td></tr><tr><td>9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter</td><td>&amp;nbsp;Mister Landscaper</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>Drop-In Filter with House&amp;nbsp;</td><td>Whirlpool</td><td>6</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia 90-Degree PVC Elbow</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia 90-Degree Tee</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow</td><td>LASCO</td><td>15</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>LASCO</td><td>7</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Tee</td><td>LASCO</td><td>12</td><td></td></tr><tr><td>2-in Dia PVC Cap</td><td>LASCO</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>LASCO</td><td>2</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve</td><td>American Valve</td><td>5</td><td></td></tr><tr><td>1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td><td>Lasco</td><td>8</td><td></td></tr><tr><td>3/4-in Dia PVC Cap</td><td>Lasco</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>2-In x 5-Ft Pvc Pipe</td><td>Charlotte Pipe</td><td>4</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;-In x 10-Ft Pvc pipe</td><td>Charlotte Pipe</td><td>3</td><td></td></tr><tr><td>11/16x1-7/80 PVC ring</td><td>SXT</td><td>10</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac12;&amp;rdquo; PVC male adapter</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;&amp;rdquo; PVC coupling&amp;nbsp;</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac12;&amp;rdquo; PVC female adapter&amp;nbsp;</td><td>SXT</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>link</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.8 L Dual Beta Keeper</td><td>Top Fin</td><td>27</td><td></td></tr><tr><td>&amp;frac34;&amp;rdquo; PVC male adapter (w/ #18 O-ring)</td><td>SXT</td><td>28</td><td></td></tr><tr><td>90-degree &amp;frac34;&amp;rdquo; threaded PVC elbow</td><td>SXT</td><td>27</td><td></td></tr><tr><td>Fine Mesh</td><td>N/A</td><td>1 yard</td><td></td></tr><tr><td>Bulkhead Connector</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Hacksaw</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Drill</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Hole saw</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Adjustable Wrench</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Pliers&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Tape Measure</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Safety Glasses</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr><tr><td>Work Gloves</td><td>N/A</td><td>1</td><td></td></tr></tbody></table>

construction of an affordable and easy-to-build zebrafish facility

In vivo biomedizinischen Forschung ist von zentraler Bedeutung, um in vitro Erkenntnisse in die klinische Fortschritte zu übersetzen. Kleine akademischen Institutionen mit beschränkten Ressourcen finden es praktisch unmöglich ist, aufzubauen und zu pflegen typischen Nagetiereinrichtungen für die Forschung. Zebrafisch-Untersuchung wurde nachgewiesen, dass eine wertvolle Alternative zur in vivo Erforschung der Pharmakologie, Physiologie, Entwicklung und genetische Untersuchungen sein. Dieser Artikel beschreibt, dass eine funktionelle Zebrafisch-Anlage kann auf eine einfache und kostengünstige Art und Weise aufgebaut werden. Wir zeigen, dass eine solche Einrichtung könnte in etwa einen Arbeitstag mit minimalem Werkzeuge und Know-how aufgebaut werden. Die Kosten für das 27 1,8 l Aquarium Zebrafisch-Anlage in dieser Studie aufgebaut war ungefähr $ 1.500. Wir gehen davon aus, dass die Aufrechterhaltung eines ersten Arbeits 150 Fischkolonie für 3 Monate ist $ 1.000. Dieses Projekt beteiligten Studenten, die eingeführt wurden, um der Zebrafisch aquaculturing für Forschung schlägt.

Der Bau der Pumpe und Flters Systems Wenn das Rack montiert und den ersten Schritt gesetzt ist, um die Pumpe und Filtersystem zu bauen. Die Filter sind mit der Systempumpe verbunden sind und über der unteren Ebene des ersten Abschnitts, die eine einfache Wartung des Filters und Austausch ermöglicht entfernt. In ähnlicher Weise wird die UV-Lampe mit PVC-Rohr mit dem Filter verbunden und an Ort und Stelle mit Kunststoffkabelbinder gehalten, um für den einfachen Austausch der UV-Lampe nach Bedarf <stron...

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Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

Bau eines erschwinglichen und einfach zu bauen Zebrafisch Einrichtung

In vivo biomedical research is pivotal to translate in vitro findings into clinical advances. Small academic institutions with limited resources find it ...

construction-of-an-affordable-and-easy-to-build-zebrafish-facility

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

16.3K Aufrufe.  Presbyterian College School of Pharmacy. A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

Serie: Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A 3-dimensional (3D)-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related research fields. Thanks to its unique features, including large fecundity, embryo translucency, rapid and simultaneous development, etc., zebrafish embryos are often used for large scale toxicity assessment of chemicals and drug/compound screening. A typical screening procedure involves adult zebrafish spawning, embryos selection, and arraying the embryos into multi-well plates. From there, embryos are subjected to exposure and the toxicity of chemical, or the effectiveness of the drugs/compounds can be evaluated relatively quickly based on phenotypic observations. Among these processes, embryos arraying is one of the most time-consuming and labor-intensive steps that limits the throughput level. In this protocol, we present an innovative approach that makes use of a 3D-printed arraying template coupled with vacuum manipulation to speed up this laborious step. The protocol herein describes the overall design of the arraying template, a detailed experimental setup and step-by-step procedure, followed by representative results. When implemented, this approach should prove beneficial in a variety of research applications using zebrafish embryos as testing subjects.

A 3-dimensional 3D-printed Template for High Throughput Zebrafish Embryo Arraying

Here, we present a protocol to design and fabricate a zebrafish embryo arraying template, followed by a detailed procedure on the use of such template for high throughput zebrafish embryo arraying into a 96-well plate.

Eine 3-dimensionale (3D)-gedruckte Vorlage für hohen Durchsatz Zebrafish Embryos anordnen

The zebrafish is a globally recognized fresh water organism frequently used in developmental biology, environmental toxicology, and human disease related ...

Forschung

Umwelt

Microstructured Devices for Optimized Microinjection and Imaging of Zebrafish Larvae

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning fundamental developmental biology through to large-scale genetic and chemical screens. However, many experiments, especially those related to infection and xenograft models, rely on microinjection and imaging of embryos and larvae, which are laborious techniques that require skill and expertise. To improve the precision and throughput of current microinjection techniques, we developed a series of microstructured devices to orient and stabilize zebrafish embryos at 2 days post fertilization (dpf) in ventral, dorsal, or lateral orientation prior to the procedure. To aid in the imaging of embryos, we also designed a simple device with channels that orient 4 zebrafish laterally in parallel against a glass cover slip. Together, the tools that we present here demonstrate the effectiveness of photolithographic approaches to generate useful devices for the optimization of zebrafish techniques.

Microinjection of zebrafish embryos and larvae is a crucial but challenging technique used in many zebrafish models. Here, we present a range of microscale tools to aid in the stabilization and orientation of zebrafish for both microinjection and imaging.

Mikrostrukturierter Apparate für optimierte Mikroinjektion und Imaging von Zebrafischlarven

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning ...

Entwicklungsbiologie

Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system measures spontaneous behaviors and the response to an aversive stimulus, which is shown to the larvae via a PowerPoint presentation. The recorded images are analyzed with an ImageJ macro, which automatically splits the color channels, subtracts the background, and applies a threshold to identify individual larvae placement in the lanes. We can then import the coordinates into an Excel sheet to quantify swim speed, preference for edge or side of the lane, resting behavior, thigmotaxis, distance between larvae, and avoidance behavior. Subtle changes in behavior are easily detected using our system, making it useful for behavioral analyses after exposure to environmental toxicants or pharmaceuticals.

Our laboratory developed a novel high-throughput automated imaging system that is useful for the detection of several different behaviors in 7-day-old zebrafish larvae. The system can be used for detecting subtle changes in behavior after the larvae have been exposed to environmental toxicants or pharmaceuticals.

Automatisierte Hochdurchsatz-Analysen in Behavioral Zebrafischlarven

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system ...

Neurowissenschaften

The Zebrafish Tol2 System: A Modular and Flexible Gateway-Based Transgenesis Approach

Fetal alcohol spectrum disorders (FASD) are characterized by a highly variable set of structural defects and cognitive impairments that arise due to prenatal ethanol exposure. Due to the complex pathology of FASD, animal models have proven critical to our current understanding of ethanol-induced developmental defects. Zebrafish have proven to be a powerful model to examine ethanol-induced developmental defects due to the high degree of conservation of both genetics and development between zebrafish and humans. As a model system, zebrafish possess many attributes that make them ideal for developmental studies, including large numbers of externally fertilized embryos that are genetically tractable and translucent. This allows researchers to precisely control the timing and dosage of ethanol exposure in multiple genetic contexts. One important genetic tool available in zebrafish is transgenesis. However, generating transgenic constructs and establishing transgenic lines can be complex and difficult. To address this issue, zebrafish researchers have established the transposon-based Tol2 transgenesis system. This modular system uses a multisite Gateway cloning approach for the quick assembly of complete Tol2 transposon-based transgenic constructs. Here, we describe the flexible Tol2 system toolbox and a protocol for generating transgenic constructs ready for zebrafish transgenesis and their use in ethanol studies.

This work describes a protocol for the modular Tol2 transgenesis system, a gateway-based cloning method to create and inject transgenic constructs into zebrafish embryos.

Das Zebrafish Tol2-System: Ein modularer und flexibler Gateway-basierter Transgenese-Ansatz

Fetal alcohol spectrum disorders (FASD) are characterized by a highly variable set of structural defects and cognitive impairments that arise due to ...

Untersuchung der Entwicklung mit optogenetischer Signalmanipulation im Zebrafisch

Optogenetic Signaling Activation in Zebrafish Embryos

Signaling pathways orchestrate fundamental biological processes, including development, regeneration, homeostasis, and disease. Methods to experimentally manipulate signaling are required to understand how signaling is interpreted in these wide-ranging contexts. Molecular optogenetic&#160;tools can provide reversible, tunable manipulations of signaling pathway activity with a high degree of spatiotemporal control and have been applied in vitro, ex vivo, and in vivo. These tools couple light-responsive protein domains, such as the blue light homodimerizing light-oxygen-voltage sensing (LOV) domain, with signaling effectors to confer light-dependent experimental control over signaling. This protocol provides practical guidelines for using the LOV-based bone morphogenetic protein (BMP) and Nodal signaling activators bOpto-BMP and bOpto-Nodal in the optically accessible early zebrafish embryo. It describes two control experiments: A quick phenotype assay to determine appropriate experimental conditions, and an immunofluorescence assay to directly assess signaling. Together, these control experiments can help establish a pipeline for using optogenetic tools in early zebrafish embryos. These strategies provide a powerful platform to investigate the roles of signaling in development, health, and physiology.

Autor im Rampenlicht: Manipulation der Signalübertragung in Zebrafischembryonen, um Entscheidungen über das Schicksal von Zellen zu entschlüsseln 

Optogenetic manipulation of signaling pathways can be a powerful strategy to investigate how signaling is decoded in development, regeneration, homeostasis, and disease. This protocol provides practical guidelines for using light-oxygen-voltage sensing domain-based Nodal and bone morphogenic protein (BMP) signaling activators in the early zebrafish embryo.

Optogenetische Signalaktivierung in Zebrafischembryonen

Signaling pathways orchestrate fundamental biological processes, including development, regeneration, homeostasis, and disease. Methods to experimentally ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and behavioural research. As a vertebrate, zebrafish share considerable genetic sequence similarity with humans and are being used as an animal model for various human disease conditions. The advantages of zebrafish in comparison to other common vertebrate models include high fecundity, low maintenance cost, transparent embryos, and rapid development. Due to the spur of interest in zebrafish research, the need to establish and maintain a productive zebrafish housing facility is also increasing. Although literature is available for the maintenance of a zebrafish laboratory, a concise video protocol is lacking. This video illustrates the protocol for regular housing, feeding, breeding and raising of zebrafish larvae. This process will help researchers to understand the natural behaviour and optimal conditions of zebrafish husbandry and hence troubleshoot experimental issues that originate from the fish husbandry conditions. This protocol will be of immense help to researchers planning to establish a zebrafish laboratory, and also to graduate students who are intending to use zebrafish as an animal model.

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

This protocol outlines regular maintenance and care to maintain optimal conditions for zebrafish husbandry. The video illustrates the protocol for system maintenance, regular housing, feeding, breeding, and raising of zebrafish larvae.

Regelmäßige Pflege und Wartung eines Zebrafisch (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) Labor: Eine Einführung

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

Biologie

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model congenital abnormalities. During the first day of life, the zebrafish embryo progresses through many developmental stages including fertilization, cleavage, gastrulation, segmentation, and the organogenesis of structures such as the kidney, heart, and central nervous system. The anatomy of a young zebrafish embryo presents several challenges for the visualization and analysis of the tissues involved in many of these events because the embryo develops in association with a round yolk mass. Thus, for accurate analysis and imaging of experimental phenotypes in fixed embryonic specimens between the tailbud and 20 somite stage (10 and 19 hours post fertilization (hpf), respectively), such as those stained using whole mount in situ hybridization (WISH), it is often desirable to remove the embryo from the yolk ball and to position it flat on a glass slide. However, performing a flat mount procedure can be tedious. Therefore, successful and efficient flat mount preparation is greatly facilitated through the visual demonstration of the dissection technique, and also helped by using reagents that assist in optimal tissue handling. Here, we provide our WISH protocol for one or two-color detection of gene expression in the zebrafish embryo, and demonstrate how the flat mounting procedure can be performed on this example of a stained fixed specimen. This flat mounting protocol is broadly applicable to the study of many embryonic structures that emerge during early zebrafish development, and can be implemented in conjunction with other staining methods performed on fixed embryo samples.

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

The zebrafish embryo is an excellent model for developmental biology research. During embryogenesis, zebrafish develop with a yolk mass, which presents three-dimensional challenges for sample observation and analysis. This protocol describes how to create two-dimensional flat mount preparations of whole mount in situ (WISH) stained zebrafish embryo specimens.

Wohnung Berge Vorbereitung für Beobachtung und Analyse der Zebrafisch-Embryo Proben von Bunt Ganze Berge<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierung

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model ...

A Manual Small Molecule Screen Approaching High-throughput Using Zebrafish Embryos

Zebrafish have become a widely used model organism to investigate the mechanisms that underlie developmental biology and to study human disease pathology due to their considerable degree of genetic conservation with humans. Chemical genetics entails testing the effect that small molecules have on a biological process and is becoming a popular translational research method to identify therapeutic compounds. Zebrafish are specifically appealing to use for chemical genetics because of their ability to produce large clutches of transparent embryos, which are externally fertilized. Furthermore, zebrafish embryos can be easily drug treated by the simple addition of a compound to the embryo media. Using whole-mount in situ hybridization (WISH), mRNA expression can be clearly visualized within zebrafish embryos. Together, using chemical genetics and WISH, the zebrafish becomes a potent whole organism context in which to determine the cellular and physiological effects of small molecules. Innovative advances have been made in technologies that utilize machine-based screening procedures, however for many labs such options are not accessible or remain cost-prohibitive. The protocol described here explains how to execute a manual high-throughput chemical genetic screen that requires basic resources and can be accomplished by a single individual or small team in an efficient period of time. Thus, this protocol provides a feasible strategy that can be implemented by research groups to perform chemical genetics in zebrafish, which can be useful for gaining fundamental insights into developmental processes, disease mechanisms, and to identify novel compounds and signaling pathways that have medically relevant applications.

The zebrafish is an excellent experimental organism to study vertebrate developmental processes and model human disease. Here, we describe a protocol on how to perform a manual high-throughput chemical screen in zebrafish embryos with a whole-mount in situ hybridization (WISH) read-out.

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Bau eines erschwinglichen und einfach zu bauen Zebrafisch Einrichtung

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Eine 3-dimensionale (3D)-gedruckte Vorlage für hohen Durchsatz Zebrafish Embryos anordnen

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Das Zebrafish Tol2-System: Ein modularer und flexibler Gateway-basierter Transgenese-Ansatz

Optogenetische Signalaktivierung in Zebrafischembryonen

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Regelmäßige Pflege und Wartung eines Zebrafisch (

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