الهدف من هذا الفيلم هو إظهار إجراءات نهجنا الجديد للمرضى الذين يعانون من خلل المبيض. وظيفة المبيض تنخفض تدريجيا خلال الشيخوخة وبعض الحالات المرضية الفسيولوجية بما في ذلك شذوذ karyotype، وأمراض المناعة الذاتية، والعلاج الكيميائي والإشعاعي، وجراحات المبيض. أظهرت معظم النساء في منتصف العمر مع انخفاض احتياطي المبيض استجابة المبيض سيئة لتحفيز المبيض تسفر عن البويضات ناضجة.
وعلاوة على ذلك، أظهر المرضى الصغار الذين يعانون من انخفاض عدد بصيلات النمل أيضا استجابة المبيض الضعيفة لتحفيز المبيض. الحفاظ على الخصوبة مهم لإنقاذ OCS المحتملة للحمل في المستقبل. للحفاظ على الخصوبة، تم تأسيس حفظ البويضات بالتبريد.
ومع ذلك ، يمكن لهؤلاء المرضى استجابة المبيض الفقراء استرداد عدد محدود جدا من البويضات حتى بعد التحفيز السليم للمبيض ، مما يؤدي إلى اشتراط إجراءات مكلفة متكررة لضمان عدد كاف من البويضات لضمان طفل واحد. لحل هذه القضايا، قمنا مؤخرا بتطوير التنشيط في المختبر، إجراء IVA، الذي يمكننا من تحفيز المرحلة المبكرة من بصيلات المبيض لتطوير مرحلة ما قبل الجريب النملي. يمكن أن يعزز إجراء IVA الأصلي نمو الجريبات الأولية والأولية والثانوية عن طريق تجزئة قشرة المبيض ، مما يؤدي إلى اضطراب إشارات فرس النهر.
ثم يتبع ذلك يومين من زراعة مع Akt إشارة المحفز. هذا الإجراء مناسب لمرضى POI الذين يعانون من عدد قليل من الجريبات المتبقية. ومع ذلك ، فإن هذا الإجراء هو علاج مفرط للمرضى الذين لديهم بصيلات ثانوية متعددة.
بالنسبة للمرضى الذين لديهم بعض بصيلات الثانوية المتبقية، أنشأنا طريقة تسمى IVA خالية من المخدرات واختبرنا بالفعل إمكانية تعزيز نمو الجريبات الثانوية عن طريق تعطيل مسار إشارات فرس النهر فقط. لقد كان لدينا أيضا بعض الحالات الناجحة للتسليم عن طريق IVA خالية من المخدرات. لقد نشرنا بالفعل الإجراء الجراحي للدواء مجانا IVA وبروتوكول التحفيز المبيض التالية.
في هذا الفيديو، نقدم تفاصيل الطرق المختبرية المطلوبة لIVA الخالية من المخدرات. قمنا بتجنيد المرضى لIVA خالية من المخدرات على أساس معايير بولونيا. يمكن أن يكون لدى المرضى بصيلات ثانوية متعددة.
في البداية، تمت إزالة جزء من القشرة من أحد المبيضين أو كليهما عن طريق تنظير البطن. مرضى POR هم أولئك الذين لديهم المبيضين متوسطة الحجم. في معظم المرضى، استخرجنا جزءا فقط من الأنسجة القشرية من المبيضين على أحد الجانبين أو كليهما.
تم نقل الأنسجة الحرجة المستخرجة على الفور إلى طبق ثقافة يحتوي على وسيط ثقافة مع عازل HEPES ، وتشريح هذا النسيج الصغير إلى مكعبات صغيرة لاضطراب إشارات فرس النهر. سيتم عرض تفاصيل الإجراء في هذا الفيديو. مسار إشارات فرس النهر ضروري للحفاظ على الحجم الأمثل للجهاز.
ويتكون هذا المسار من العديد من منظمي النمو السلبي. بمجرد تعطل إشارات فرس النهر ، يتم تقليل مستويات الفوسفور في YAP ، وهي واحدة من منظمي النمو السلبي الذين يعملون في سلسلة كيناز ، وزيادة المستويات النووية ل YAP. YAP يعمل بالتنسيق مع عوامل النسخ TEAD لزيادة عامل نمو CCN المصب.
من ناحية أخرى، actin البلمرة من التمثيل كروي، G-أكتين، إلى شكل خيوط، F-أكتين، مهم لصيانة شكل الخلية والحركة. التعريفي ذكرت سابقا من تشكيل F-actin يعطل إشارات فرس النهر ويحفز فرط النمو في خلايا هيلا الإنسان. أبلغنا سابقا عن زيادة تجزؤ المبيض تكوين F-actin ، ويؤدي إلى انخفاض مستوى الفوسفور من YAP.
وهو يؤدي إلى زيادة التعبير عن عامل نمو CCN. بعد القطع، يتم تطعيم هذه المكعبات في المبيض المتبقي. يمكن لهذا الإجراء تعزيز نمو الجريبات الثانوية المتبقية ويؤدي إلى زيادة عدد البويضات الناضجة.
يتكون IVA الخالي من المخدرات من أربع خطوات. لقد نشرنا بالفعل العملية الجراحية لIVA الخالية من المخدرات. يرجى الرجوع إلى تلك الأدبيات لاستخراج قشرة المبيض والتطعيم التلقائي.
هنا نعرض الإجراءات التفصيلية للطرق المختبرية المطلوبة لIVA الخالية من المخدرات. في الخطوة الأولى، نظهر كيف يتم إجراء تفتيت قشرة المبيض. في الخطوة الثانية، نعرض كيفية تحميل مكعبات المبيض القشرية في الجهاز لزرعها، هنا، سوف تظهر تجزؤ قشرة المبيض.
تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل اللجنة الأخلاقية لمعهدنا، وتم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا لمدونة أخلاقيات الجمعية الطبية العالمية. تفتيت قشرة المبيض. الأدوات التالية المطلوبة لهذه الخطوة: طبق، شاش معقم، مقص غرامة، ملقط غرامة، ومشرط.
نحن عادة ما تستخدم هذا النوع من طبق والشاش العقيم ولكن المنتجات الأخرى مثل طبق بيتري البلاستيك، طبق زجاجي، وهلم جرا، قد تكون مناسبة أيضا لهذا الإجراء، وأي نوع من الشاش العقيم هو أيضا مناسبة. ومع ذلك نوصي بشدة باستخدام هذا الشكل من ملقط ومشرط. بالإضافة إلى ذلك، استخدم لوحة ساخنة للحفاظ على درجة حرارة الأطباق التي تحتوي على الأنسجة مكان تحت الستائر العقيمة.
يتم نقل الأنسجة القشرية على الفور إلى الطبق الذي يحتوي على mHTF. التقاط صورة مع اسم المريض لربط مع بيانات المريض. سجل حجم الأنسجة وسمكها وحالتها.
إزالة الأنسجة النخاعية المتبقية. قبل تفتيت الأنسجة، قم بإزالة أنسجة النخاع. ضع القشرة على الشاش العقيم
كما هو مبين في الفيديو ، يتم ترطيب الشاش مع المتوسطة. خلال هذا الإجراء، وتطبيق المتوسطة مع ماصة المتاح قبل أن يجف سطح القشرة. إزالة الأنسجة المتبقية مع مقص صغير حتى سمك يصل إلى 1-2 ملليمتر.
في المرضى POR، وتقع بصيلات الثانوية أعمق من ملليمتر واحد من سطح القشرة، لذلك لا تجعل الأنسجة أقل من ملليمتر واحد في سمك. قطع جانب واحد من قشرة كل نسيج إلى شريط قياس واحدا تلو خمسة ملليمتر للتحليل النسيجي لتحديد وجود بصيلات المتبقية. وضع هذا الشريط في أنبوب 1.5 ملليلتر مع ثقافة المتوسطة والحفاظ على أربع درجات مئوية حتى تحديد.
إعداد مكعبات المبيض القشرية. بعد إزالة أنسجة النخاع، مجزأة القشرية المبيض لاضطراب إشارات فرس النهر. في البداية، قطع القشرة إلى واحد تلو الآخر من قبل شرائط 10 ملليمتر باستخدام مشرط.
ثم قطع هذه الشرائط إلى مكعبات صغيرة مكعبات ملليمتر واحد. في الوسط ، يكون النسيج زلقا ويصعب قطعه. لسهولة القطع، وقطع الشرائط عن طريق الضغط على مشرط بدلا من سحب على ذلك.
بعد القطع، عد عدد المكعبات وإعداد لصناعة السيارات في التطعيم. لتجنب تغيرات الضغط التناضحي في الوسط، أضف الوسط باعتدال قبل تطعيم الأنسجة تلقائيا. بالنسبة لطعوم المبيض التلقائي، يسمح استخدام جهاز على شكل قنية بتحميل أسهل.
تحتوي هذه الخطوة على خطوتين. في السابق، كانت تزرع شظايا المبيض واحدا تلو الآخر باستخدام ملقط تحت تنظير البطن. ومع ذلك، استغرق الأمر حوالي ثلاث إلى أربع ساعات لإتمام الجراحة.
في هذا الإجراء، نستخدم جهازا على شكل علبة مصنوع من حقنة داخلية واسطوانة خارجية. هذا هو شكل بسيط وخفيفة الوزن. بالإضافة إلى ذلك، طرف هذا الجهاز هو من شكل دائري.
لا توجد نقاط حادة تتجنب إلحاق الضرر بموقع الزراعة. باستخدام هذا النوع من الأجهزة يسمح بإحضار ما يصل إلى 20 إلى 30 مكعبا إلى موقع الزرع في وقت واحد. وهذا يؤدي إلى كفاءة زرع والحد من وقت الجراحة.
تحميل شظايا قشرية المبيض. إعداد IVA كانولا. إعداد IVA cannula وغسل هذا الجهاز في mHTF.
كرر أسبيرات والتفريغ المتوسطة عدة مرات. ملء غيض من cannular عن طريق التجسس حوالي 100 ميكرولتر من المتوسط. هذا هو لتجنب المكعبات من السحب أثناء تحميل جزء الأنسجة.
تحميل مكعبات القشرية. اختيار مكعب بواسطة ملقط ناعم ووضعه في غيض من cannular. يعتمد عدد المكعبات المطعمة تلقائيا على حجم موقع الزراعة.
كرر تحميل المكعبات واحدا تلو الآخر حتى تصل إلى الرقم المستهدف. بعد تحميل المكعبات، مرر القنية إلى الجراح بعناية. إذا لم يكن موقع التطعيم جاهزا ، فإن الجزء من العلب الذي يحتوي على مكعبات المبيض يجب أن يتم الاحتفاظ به بواسطة الأصابع لتجنب انخفاض درجة حرارة المكعبات.
لقد أبلغنا بالفعل عن النتائج السريرية ل IVA الخالية من المخدرات. يرجى الرجوع إلى الورقة المنشورة حول النتائج السريرية. تطلب هذا البروتوكول المختبري 30 إلى 50 دقيقة لمريض واحد.
متوسط الوقت هو لمدة 10 إلى 20 دقيقة لتجزئة قشرة المبيض، و 20 إلى 30 دقيقة لتحميل هذه الشظايا إلى قنية IVA. هذا يعتمد على حجم الأنسجة، ولكن تقريبا جميع المرضى يمكن الانتهاء في هذا الوقت المتوسط. الاستنتاجات. IVA خالية من المخدرات هو نهج جديد لعلاج العقم لمرضى POR مع انخفاض احتياطي المبيض.
هذا البروتوكول المختبري يؤدي إلى تقليل الوقت اللازم للجراحة وفقدان شظايا أثناء زرع. يمكن أن تصبح التقنية المختبرية ل IVA الخالية من المخدرات أساس التطبيق المستقبلي زراعة أنسجة المبيض للحصول على البويضات الناضجة دون تطعيم.
