نود أن نشكر البروفسور أندرس جيبسون للمساعدة في توفير الأوعية المستخدمة في التجارب. وتم تمويل هذه الدراسة من منحة ألف لوا إلى سة.

تستخدم الأنسجة، والبروتوكول لهذه الورقة فيما يلي المبادئ التوجيهية الأخلاقية بجامعة غوتنبرغ.
1-الأنسجة التحضير والتخزين
<ol><li>قطع الأنسجة المحيطة من الوريد الصافن تم استردادها باستخدام الملقط الجراحي ومقص. ملاحظة: يتم تشريح الوريد الصافن من الجزء السفلي من البشر من جراحي الأوعية الدموية. الوريد الصافن المستخدمة في هذه الورقة جزء غير المستخدمة بعد عملية جراحية.</li>
	<li>لمنع التسرب أثناء التروية، اضطر جميع الفروع الجانبية في أهدافها مع خياطة الجروح والملقط.</li>
	<li>الاحتفاظ الوريد في أنبوب 50 مل يحتوي على 40 مل من المحلول الملحي العازلة الفوسفات (PBS). أغسل الوريد عن طريق تغيير برنامج تلفزيوني 2-3 مرات لإزالة الدم الزائد. تخزين على المنوال بالتجميد في-80 درجة مئوية.</li>
</ol>2-إعداد الأجهزة ديسيلولاريزيشن ومفاعل حيوي ريسيلولاريزيشن
ملاحظة: باستخدام مقص، قص الأنابيب السليكون كما هو مبين في الجدول 1.
<ol><li>
الإعداد ديسيلولاريزيشن 1 (لنضح X-100 تريتون والغسيل)
	<ol>
<li>إلى ل 2 غرفة (الحوض البلاستيك)، الشريط كل ثلاث قطع من الأنبوب A كما هو مبين في الشكل 1 ألف. ملاحظة: الشريط أنبوب واحد لجدار واحد حيث يلامس الحافة الجزء السفلي من الدائرة (مدخل للمنظفات) واثنان أنابيب أخرى إلى الحائط المقابل بمسافة 5-10 سم بين اعتماداً على طول الوريد. كما ينبغي أن تكون مسجلة 5 سم على الأقل من هذه الأنابيب الكلمة للدائرة (مدخل ومخرج) في الوريد.</li>
		<li>باستخدام موصلات اللوير الذكور والإناث، الاتصال في سلسلة مدخل للمنظفات متبوعاً ب أنبوب إلى أنبوب أنبوب أنبوب ج و وأخيراً إلى مدخل الوريد. مكان الأنبوب و في الكاسيت لتحوي مضخة أنا.</li>
		<li>أخذ أنبوب آخر ج وتواصل واحدة من نهاية للتيار الاتجاه. وضع الطرف الآخر في جرة زجاجية مع مخرج الخرطوم السفلي يوضع 45 سم فوق الدائرة (منفذ المنظفات) والشريط لتأمين. أخذ أنبوب ز ودفع واحدة من نهاية مأخذ خرطوم جرة الزجاج ووضع الطرف الآخر في قاعة الوريد. ملاحظة: الصور لإكمال الإعداد (الأسهم الحمراء)، ودائرة، واتجاه تدفق (الأسهم البيضاء) ويبين الشكل 1A.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
الإعداد ديسيلولاريزيشن 2 (نضح تنبب)
	<ol>
<li>وعاء زجاجي 1 لتر، ومكان واحدة من نهاية الأنبوب ج (مدخل المنظفات) في الجرة حتى يلامس الأنبوب السفلي الجرة.</li>
		<li>توصيل الطرف الآخر للأنبوب و تليها أنبوب جيم مكان الطرف الآخر من الأنبوب ج في الجرة حتى عمق نصف (المدخل في الوريد). وضع أنبوب و في الكاسيت مضخة تمعجية أنا.</li>
		<li>أخذ أنبوب د ووضع نهاية واحدة في الجرة (المنفذ في الوريد) حتى عمق نصف والطرف الآخر في جرة زجاجية مع خرطوم أسفل توضع على ارتفاع 45 سم من مدخل على المنوال (منفذ المنظفات). لتأمين، الشريط الأنابيب مدخل ومخرج للمنظفات.</li>
		<li>وضع جرة زجاجية 1 لتر على محرض مغناطيسية وإبقاء المغناطيس داخل الزجاجة.</li>
		<li>أخذ أنبوب ز ودفع نهاية واحدة على منفذ خرطوم جرة الزجاج ووضع الطرف الآخر في جرة زجاجية 1 لتر. ملاحظة: الصورة لإكمال الإعداد (الأسهم الحمراء)، يظهر اتجاه الدائرة وتدفق (الأسهم البيضاء) في الشكل 1B.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
الإعداد ديسيلولاريزيشن 3 (نضح الدناز)
	<ol>
<li>تأخذ زجاجة زجاج 250 مل ووضع طرفي أنبوب مكان جيم المنطقة الوسطى من الأنبوب في الكاسيت مضخة تمعجية الثاني. ملاحظة: واحدة من نهاية الأنبوب هو مدخل الحل والنهاية الأخرى للأنبوب متصلاً بمدخل على المنوال. ويترك منفذاً على المنوال مجاناً في الحل.</li>
		<li>ضع الإعداد كلها بما في ذلك ضخ عند 37 درجة مئوية. ويبين الشكل 1الصورة لإكمال الإعداد واتجاه تدفق.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
مفاعل حيوي ريسيلولاريزيشن
	<ol>
<li>تبقى على استعداد جميع أجزاء كما هو مبين في الشكل 2 ألف.</li>
		<li>كما هو مبين في الشكل 2 (ب)، تتخذ غطاء 4 منافذ وإدراج في كل منفذ وأنبوب ح (المنفذ في الوريد) وأنبوب أنا (مدخل الإعلام) وأنبوب J (المدخل في الوريد). إدراج الطرف الآخر من أنبوب ح في منفذال 4 (وسائل الإعلام). ملاحظة: عرض الحد الأقصى 4-منفذ من الجزء العلوي ليظهر في الشكل 2. لسهولة الإدراج من الأنابيب، قطع الحواف نقطة حادة مع مقص.</li>
		<li>ثني الطرف الآخر من أنبوب ي في شكل U والتعادل مع خياطة الجروح. الاتصال الموصلات الحد الداخلي نهايات أنابيب ح & ج.</li>
		<li>ضع الأنبوب 60 مل مع قاعدة مسطحة في زجاجة زجاج 250 مل ومن ثم ضع الإعداد جعلت أعلاه في الأنبوب كما هو موضح في الشكل 2D. كما هو موضح في الشكل 2E، قم بتوصيل أنابيب K و E و K في السلسلة. قم بتوصيل أنبوب واحد ك إلى مدخل على المنوال وأنبوب آخر ك إلى مدخل وسائل الإعلام. ملاحظة: يعتبر الرسم التخطيطي للإعداد، واتجاه التدفق في الشكل 2 واو.</li>
		<li>تعقيم في مفاعل حيوي بالتعقيم.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3-إعداد الحلول
<ol><li>حل 1 (10 x المياه): إضافة إلى 1 لتر من الماء عالي النقاوة، ز 2 من أزيد الصوديوم و 18.6 g حمض الإيثيلين (يدتا). يقلب حتى يتم حل الأملاح.</li>
	<li>حل 2 (1 x المياه): تأخذ 100 مل من محلول 1 وإضافة 900 مل من الماء عالي النقاوة.</li>
	<li>الحل 3 (5 × Triton X-100): إلى 950 مل من الماء عالي النقاوة، إضافة 50 مل من Triton X-100، ز 1 من أزيد الصوديوم، و 9.3 ز يدتا. يقلب حتى يذوب.</li>
	<li>حل 4 (1 × Triton X-100): تأخذ 200 مل من محلول 3 وإضافة 800 مل من الماء عالي النقاوة.</li>
	<li>الحل 5 (1 x TnBP): إضافة 10 مل تنبب مع ماصة 10 مل إلى 990 مل من محلول 2.</li>
	<li>الحل 6 (40 [كونيتز] وحدة/مل الدناز): إضافة 2,000 [كونيتز] وحدات دناسي في 50 مل من دولبيكو "الفوسفات المخزن المؤقت المالحة" التي تحتوي على كاكل2 ومجكل2. إعداد جديدة واستخدامها على الفور.</li>
	<li>حل 7 (PBS): إضافة 24 غرام كلوريد الصوديوم 0.6 جم من كلوريد البوتاسيوم، ز 4.32 من فوسفات الصوديوم وز 0.72 من فوسفات البوتاسيوم إلى 3 لتر الماء عالي النقاوة. يقلب حتى يذوب. قم بضبط ال pH إلى 7.4. تعقيم 1 لتر من برنامج تلفزيوني في اﻷوتوكﻻف وتخزينها بشكل منفصل.</li>
	<li>الحل 8 (0.1% حمض الاستيك): إضافة إلى 50 مل من محلول معقم 7، 50 ميليلتر من حمض الاستيك. إعداد جديدة واستخدامها على الفور.</li>
</ol>4-إعداد متوسطة غشائي
<ol><li>إضافة 5 مل من لام الجلوتامين، 5 مل مكافحة المضادة، 50 مل مصل أساسها الإنسان وجميع مكونات EGM-2 طقم عامل النمو باستثناء الجنين المصل البقري إلى 500 مل الوسط MCDB131 تحت غطاء عقيمة.</li>
</ol>5-ديسيلولاريزيشن الوريد الصافن
<ol><li>ذوبان الجليد في الوريد الصافن البشرية من-80 درجة مئوية في درجة حرارة الغرفة. تجميد مرة أخرى في-80 درجة مئوية وذوبان الجليد مرة أخرى عند درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>قص خزعة طول 2 ملم باستخدام مقص وإصلاحها في فورمالدهايد ح 24-48 في درجة حرارة الغرفة. ربط كل نهاية الوريد لانتقادات لاذعة الموصل اللوير الذكور والإناث مع خياطة.</li>
	<li>الاتصال الوريد للإعداد ديسيلولاريزيشن 1 وملء L 1 حل 2. نتخلل لمدة 15 دقيقة في 35 مل/دقيقة إفراغ محتويات برنامج الإعداد.</li>
	<li>إضافة 1 لتر حل 4 ونتخلل لإفراغ محتويات الإعداد من 4 ح في 35 مل/دقيقة.</li>
	<li>إضافة 500 مل من محلول 2 ونتخلل للحد الأدنى 5 إفراغ محتويات برنامج الإعداد. كرر هذه الخطوة. قطع الوريد من نضح الإعداد 1 والاتصال نضح الإعداد 2.</li>
	<li>إضافة 1 لتر حل 5 وتشغيل محرض ونتخلل عن ح 4 في 35 مل/دقيقة. ملاحظة: حل 5 تبدو غائمة بعد تحول محرض وطوال فترة التروية.</li>
	<li>قطع الوريد من نضح الإعداد 2 وغسل الوريد في داخل وخارج مع المحاقن أو ماصة 10 مل من 4 تغييرات في الماء عالي النقاوة لمدة 5-10 دقائق.</li>
	<li>الاتصال على المنوال نضح الإعداد 3 وإضافة 50 مل من محلول 6 ونتخلل في 10 مل/دقيقة في دائرة 37 درجة مئوية 4 حاء إفراغ محتويات الإعداد وقطع الوريد من الإعداد.</li>
	<li>الاتصال على المنوال نضح الإعداد 1، ملء L 1 حل 2 ونتخلل بين عشية وضحاها في 35 مل/دقيقة تكرار الخطوات من 5.4 إلى 5.9 4 مرات (لما مجموعة 5 دورات). أخذ خزعة مرة أخرى كما ذكر في الخطوة 5، 2. ملاحظة: تخطي الخطوة الجزء الثاني 5.8 في دورات 1 و 3.</li>
	<li>إفراغ محتويات برنامج الإعداد. ملء L 1 حل 2 ونتخلل عن 24 ساعة في 35 مل/دقيقة الحل تغيير 2 بعد 12 حاء إفراغ محتويات برنامج الإعداد. ملء 1 لتر الماء عالي النقاوة ونتخلل عن 24 ساعة في 35 مل/دقيقة تغير الماء عالي النقاوة بعد 12 h.Empty محتويات برنامج الإعداد. ملء 1 لتر حل 7 ونتخلل عن 24 ساعة في 35 مل/دقيقة الحل تغيير 7 بعد 12 ساعة.</li>
</ol>6-تحقق ديسيلولاريزيشن
<ol><li>أغسل الفورمالين الثابتة خزعات في الماء عالي النقاوة للحد الأدنى 15 عملية في معالج أنسجة عقب البروتوكولات القياسية وتضمين في البارافين22.</li>
	<li>قص 5 ميكرومتر الأقسام باستخدام مبضع ووصمة عار مع الهيماتوكسيلين و 0.2 في المائة الكحولية ويوزين ماير (H & E) عقب البروتوكولات القياسية22.</li>
	<li>عرض تحت مجهر للتحقق من وجود خسارة الأنوية في الأنسجة ديسيلولاريزيد مقارنة بأنسجة طبيعية.</li>
</ol>7-ريسيلولاريزيشن
<ol><li>تعقيم الوريد بوضعه في أنبوب 50 مل تحتوي على 50 مل من محلول 8. تحرض على تناوب 80 في الدقيقة (لفة في الدقيقة) في شاكر ح 1 في 37 درجة مئوية.</li>
	<li>التعامل مع الوريد تحت الاندفاق الصفحي (الجيش اللبناني) مجلس الوزراء من الآن فصاعدا للحفاظ على العقم. نقل في السياق استخدام الملقط المعقم لأنبوب 50 مل جديدة تحتوي على 50 مل من حل معقم 7 و 500 ميليلتر لمكافحة مكافحة. تحرض على النحو الوارد أعلاه ل 12 حاء 7 الحل تغير مرتين على الأقل في بين.</li>
	<li>استخدام الملقط العقيمة، نقل في الاتجاه إلى أنبوب 50 مل جديدة وإضافة 50 مل من وسائل الإعلام بطانية. تحرض على النحو الوارد أعلاه ح 11.</li>
	<li>تجميع مفاعل حيوي باستخدام قفازات معقمة ضمن القوات المسلحة اللبنانية مجلس الوزراء. ربط الوريد إلى في مفاعل حيوي المنطلق مدخل ومخرج بخياطة العقيمة والملقط.</li>
	<li>الاتصال على المنوال إلى مفاعل حيوي والتعبئة مع المتوسط نفسها. إضافة الهيبارين في 50 وحدة دولية/مل ونتخلل عن ح 1 في 2 مل/دقيقة في 37 درجة مئوية.</li>
	<li>جمع 15-25 مل دم الطازج (اعتماداً طول على المنوال) من الجهة المانحة في أنابيب vacutainer الهيبارين المغلفة وتمييع 1:1 مع الحل ستين. إضافة فيما بعد، المستمدة من الغدة الصماء الأوعية الدموية غشائي عامل النمو (EG-فيجف، 80 نانوغرام/مل) وعامل النمو تنتجها الخلايا الليفية الأساسية (ب-صندوق الأجيال القادمة، 4 ميليلتر/mL) أسيتيل حمض الصفصاف (5 ميكروغرام/مل).</li>
	<li>الانتقال في مفاعل حيوي لحاضنة 37 درجة مئوية مع 5% CO2 ونتخلل عن ح 48 في 2 مل/دقيقة.</li>
	<li>تقريبا بعد 12 ساعة، نقل مفاعل حيوي للقوات المسلحة اللبنانية مجلس الوزراء، تأخذ قطره دم وقياس الجلوكوز جلوكوز دم جهاز الرصد باستخدام. إذا كان المستوى أقل من 3 مليمول/لتر، إضافة السكر جلب في النطاق من 7-9 mmol/l. كرر هذه الخطوة كل ح 8-12.</li>
	<li>بعد 48 ساعة، نقل مفاعل حيوي إلى القوات المسلحة اللبنانية مجلس الوزراء واستنزاف الدم من مفاعل حيوي. إضافة 30 مل من محلول معقم 7 ونتخلل لأدنى 5 استنزاف الحل. إضافة 30 مل من محلول معقم 7 ونتخلل لأدنى 5 كرر مرتين أو حتى لون الدم الحمراء المفقودة. ملاحظة: يمكن أن تؤخذ الخزعة لتحقق المرفق الخلية. قطع الوريد وقطع حواف 5 مم الوريد مع المقص وتجاهلها. أخذ خزعة كما ذكر في الخطوة 5، 2 والاتصال في السياق مرة أخرى إلى مفاعل حيوي (خطوة اختيارية).</li>
	<li>إضافة 30-45 مل متوسطة بطانية ونتخلل عن 96 ساعة في الحاضنة في 2 مل/دقيقة. ملاحظة: إضافة المتوسطة غشائي حتى هي مغمورة في الوريد.</li>
	<li>الانتقال مفاعل حيوي إلى مجلس الوزراء القوات المسلحة اللبنانية وقطع الوريد ريسيلولاريزيد وقطع حواف 5 مم الوريد باستخدام مقص وتجاهل. أخذ خزعة كما ذكر في الخطوة 5، 2.</li>
</ol>8-تحقق ريسيلولاريزيشن
<ol><li>اتبع الإرشادات الموجودة في المقطع 6 وأداء تلطيخ ح & ه. دراسة الشرائح تحت مجهر لوجود خلايا.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brockbank, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cryopreservation+upon+vein+function+in+vivo.">Effects of cryopreservation upon vein function in vivo.</a> Cryobiology. 31 (1), 71-81 (1994).</li><li>O'Donnell, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+operative+findings+with+angiographic+and+noninvasive+hemodynamic+factors+associated+with+failure+of+polytetrafluoroethylene+grafts.">Correlation of operative findings with angiographic and noninvasive hemodynamic factors associated with failure of polytetrafluoroethylene grafts.</a> Journal of Vascular Surgery. 1 (1), 136-148 (1984).</li><li>Atala, A., Bauer, S. B., Soker, S., Yoo, J. J., Retik, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+autologous+bladders+for+patients+needing+cystoplasty.">Tissue-engineered autologous bladders for patients needing cystoplasty.</a> Lancet. 367 (9518), 1241-1246 (2006).</li><li>Raya-Rivera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+autologous+urethras+for+patients+who+need+reconstruction:+an+observational+study.">Tissue-engineered autologous urethras for patients who need reconstruction: an observational study.</a> Lancet. 377 (9772), 1175-1182 (2011).</li><li>Macchiarini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+transplantation+of+a+tissue-engineered+airway.">Clinical transplantation of a tissue-engineered airway.</a> Lancet. 372 (9655), 2023-2030 (2008).</li><li>Olausson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+an+allogeneic+vein+bioengineered+with+autologous+stem+cells:+a+proof-of-concept+study.">Transplantation of an allogeneic vein bioengineered with autologous stem cells: a proof-of-concept study.</a> Lancet. 380 (9838), 230-237 (2012).</li><li>Olausson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Application+of+Tissue-Engineered+Veins+Using+Autologous+Peripheral+Whole+Blood:+A+Proof+of+Concept+Study.">In Vivo Application of Tissue-Engineered Veins Using Autologous Peripheral Whole Blood: A Proof of Concept Study.</a> EBioMedicine. 1 (1), 72-79 (2014).</li><li>Ott, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+orthotopic+transplantation+of+a+bioartificial+lung.">Regeneration and orthotopic transplantation of a bioartificial lung.</a> Nature Medicine. 16 (8), 927-933 (2010).</li><li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix.">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nature Medicine. 16 (7), 814-820 (2010).</li><li>Conconi, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracheal+matrices,+obtained+by+a+detergent-enzymatic+method,+support+in+vitro+the+adhesion+of+chondrocytes+and+tracheal+epithelial+cells.">Tracheal matrices, obtained by a detergent-enzymatic method, support in vitro the adhesion of chondrocytes and tracheal epithelial cells.</a> Transplant International. 18 (6), 727-734 (2005).</li><li>Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+of+tissues+and+organs.">Decellularization of tissues and organs.</a> Biomaterials. 27 (19), 3675-3683 (2006).</li><li>Zhang, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+of+human+fetal+mesenchymal+stem+cells+for+off-the-shelf+bone+tissue+engineering+application.">The potential of human fetal mesenchymal stem cells for off-the-shelf bone tissue engineering application.</a> Biomaterials. 33 (9), 2656-2672 (2012).</li><li>Elebring, E., Kuna, V. K., Kvarnstrom, N., Sumitran-Holgersson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold-perfusion+decellularization+of+whole-organ+porcine+pancreas+supports+human+fetal+pancreatic+cell+attachment+and+expression+of+endocrine+and+exocrine+markers.">Cold-perfusion decellularization of whole-organ porcine pancreas supports human fetal pancreatic cell attachment and expression of endocrine and exocrine markers.</a> Journal of Tissue Engineering. 8, 2041731417738145 (2017).</li><li>Masumoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-engineered+cardiac+tissue+sheets+with+cardiomyocytes+and+vascular+cells+for+cardiac+regeneration.">Human iPS cell-engineered cardiac tissue sheets with cardiomyocytes and vascular cells for cardiac regeneration.</a> Science Reports. 4, 6716 (2014).</li><li>Wiles, K., Fishman, J. M., De Coppi, P., Birchall, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Host+Immune+Response+to+Tissue-Engineered+Organs:+Current+Problems+and+Future+Directions.">The Host Immune Response to Tissue-Engineered Organs: Current Problems and Future Directions.</a> Tissue Engineering Part B Reviews. 22 (3), 208-219 (2016).</li><li>Young, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+in+the+eyes+of+an+immunologist.">Endothelial cells in the eyes of an immunologist.</a> Cancer Immunology Immunotherapy. 61 (10), 1609-1616 (2012).</li><li>Graham, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+seeding+of+prosthetic+vascular+grafts:+early+experimental+studies+with+cultured+autologous+canine+endothelium.">Endothelial cell seeding of prosthetic vascular grafts: early experimental studies with cultured autologous canine endothelium.</a> Archives of Surgery. 115 (8), 929-933 (1980).</li><li>Onuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+endothelialization+model+for+the+study+of+Dacron+graft+healing.">Accelerated endothelialization model for the study of Dacron graft healing.</a> Annals of Vascular Surgery. 11 (2), 141-148 (1997).</li><li>Clowes, A. W., Kirkman, T. R., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+arterial+graft+healing.+Rapid+transmural+capillary+ingrowth+provides+a+source+of+intimal+endothelium+and+smooth+muscle+in+porous+PTFE+prostheses.">Mechanisms of arterial graft healing. Rapid transmural capillary ingrowth provides a source of intimal endothelium and smooth muscle in porous PTFE prostheses.</a> American Journal of Pathology. 123 (2), 220-230 (1986).</li><li>L'Heureux, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tissue-engineered+blood+vessels+for+adult+arterial+revascularization.">Human tissue-engineered blood vessels for adult arterial revascularization.</a> Nature Medicine. 12 (3), 361-365 (2006).</li><li>Syedain, Z. H., Meier, L. A., Lahti, M. T., Johnson, S. L., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+of+completely+biological+engineered+grafts+following+decellularization+into+the+sheep+femoral+artery.">Implantation of completely biological engineered grafts following decellularization into the sheep femoral artery.</a> Tissue Engineering Part A. 20 (11-12), 1726-1734 (2014).</li><li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections.">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li><li>Pollack, A. A., Taylor, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+exercise+and+body+position+on+the+venous+pressure+at+the+ankle+in+patients+having+venous+valvular+defects.">The effect of exercise and body position on the venous pressure at the ankle in patients having venous valvular defects.</a> Journal of Clinical Investigation. 28 (3), 559-563 (1949).</li><li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-molecular-weight+peptides+derived+from+extracellular+matrix+as+chemoattractants+for+primary+endothelial+cells.">Low-molecular-weight peptides derived from extracellular matrix as chemoattractants for primary endothelial cells.</a> Endothelium. 11 (3-4), 199-206 (2004).</li><li>van Ark, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+2+diabetes+mellitus+is+associated+with+an+imbalance+in+circulating+endothelial+and+smooth+muscle+progenitor+cell+numbers.">Type 2 diabetes mellitus is associated with an imbalance in circulating endothelial and smooth muscle progenitor cell numbers.</a> Diabetologia. 55 (9), 2501-2512 (2012).</li><li>Steen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+lungs+from+a+non-heart-beating+donor.">Transplantation of lungs from a non-heart-beating donor.</a> Lancet. 357 (9259), 825-829 (2001).</li><li>Van Raemdonck, D., Neyrinck, A., Cypel, M., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex-vivo+lung+perfusion.">Ex-vivo lung perfusion.</a> Transplant International. 28 (6), 643-656 (2015).</li><li>Cross, M. J., Claesson-Welsh, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF+and+VEGF+function+in+angiogenesis:+signalling+pathways,+biological+responses+and+therapeutic+inhibition.">FGF and VEGF function in angiogenesis: signalling pathways, biological responses and therapeutic inhibition.</a> Trends in Pharmacological Science. 22 (4), 201-207 (2001).</li><li>Peplow, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor-+and+cytokine-stimulated+endothelial+progenitor+cells+in+post-ischemic+cerebral+neovascularization.">Growth factor- and cytokine-stimulated endothelial progenitor cells in post-ischemic cerebral neovascularization.</a> Neural Regeneration Research. 9 (15), 1425-1429 (2014).</li><li>Xiao-Yun, X., Zhao-Hui, M., Ke, C., Hong-Hui, H., Yan-Hong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucagon-like+peptide-1+improves+proliferation+and+differentiation+of+endothelial+progenitor+cells+via+upregulating+VEGF+generation.">Glucagon-like peptide-1 improves proliferation and differentiation of endothelial progenitor cells via upregulating VEGF generation.</a> Medical Science Monitor. 17 (2), BR35-BR41 (2011).</li><li>Dragoni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+stimulates+endothelial+colony+forming+cells+proliferation+and+tubulogenesis+by+inducing+oscillations+in+intracellular+Ca2++concentration.">Vascular endothelial growth factor stimulates endothelial colony forming cells proliferation and tubulogenesis by inducing oscillations in intracellular Ca2+ concentration.</a> Stem Cells. 29 (11), 1898-1907 (2011).</li><li>Sai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+fibroblast+growth+factor+is+essential+to+maintain+endothelial+progenitor+cell+phenotype+in+TR-BME2+cells.">Basic fibroblast growth factor is essential to maintain endothelial progenitor cell phenotype in TR-BME2 cells.</a> Biological and Pharmaceutical Bulletin. 37 (4), 688-693 (2014).</li><li>Gallus, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin+and+other+platelet-aggregation+inhibiting+drugs.">Aspirin and other platelet-aggregation inhibiting drugs.</a> Medical Journal of Asutralia. 142 (1), 41-47 (1985).</li></ol>

سة يحمل أسهم في فيريجرافت، إحدى الشركات التي رخصت تكنولوجيا الأنسجة الهندسة الأوعية الدموية. ليس لها علاقة بالكشف عن المؤلفين الآخرين.

هذه التقنية المقدمة هنا ديسيلولاريزيشن الأوردة الصافن هو طريقة سهلة وبسيطة وفعالة من حيث التكلفة التي يمكن أن تطبق أيضا على جميع شرايين قطرها صغير مثل الأوردة الحبل السري والثديية. الحلول ديسيلولاريزيشن وهذه التركيزات المستخدمة في هذا الأسلوب من أعمالنا السابقة نتائج6،7. على الرغم من أن نوصي 5 دورات ديسيلولاريزيشن، في بعض الأوردة كما لاحظنا ديسيلولاريزيشن كاملة في 3 دورات. ومع ذلك، تم الحصول على النتائج استنساخه باستخدام 5 دورات. تطبيق هذا البروتوكول، ونحن ديسيلولاريزيد الأوردة ذات أطوال مختلفة تصل إلى 30 سم بنجاح (غير منشورة النتيجة). رفع منفذاً لحل ديسيلولاريزيشن من 45 سم سيقوم بإنشاء ضغطه من 33 ملم زئبق داخل الوريد. في تجربتنا، فقد لاحظنا هذا كخطوة أساسية في ديسيلولاريزينج وفي السياق كله موحدا وتكاثر في 5 دورات. الضغط الذي تم اختياره هو 3 إضعاف الضغط الوريد الصافن العادية (5-10 ملم زئبقي) ولكن هو نفسه كما هو الحال في غير كفء الأوردة (الدوالي)23. وبالإضافة إلى ذلك، يمكننا التكهن أن هذا الضغط العالي سوف يخلق قوة كبيرة على جدران الوريد وقد، ولذلك، تساعد في إزالة خلية كفاءة وأسرع.
منذ تنبب المذيبات عضوية وغير قابلة للذوبان في الماء، إثارة مواد التنظيف حتى يصبح غائم الهامة؛ وبخلاف ذلك، سوف تطفو المنظفات. ولنفس السبب، إبقاء تنبب مختلطة في الحل، وضع أنبوب منفذ للمنظفات في الجزء العلوي من جرة زجاج مع مخرج الخرطوم. كفاءة إزالة تنبب من الوريد بعد يمكن رؤية استعماله في كل دورة بسبب غياب العائمة تنبب قطرات في الماء غسلها. وقد لاحظنا أيضا أن تخطي الخطوة الدناز أيضا إنتاج أنسجة ديسيلولاريزيد ولكن لوحظ في حالات قليلة، محتوى المرتفع نسبيا من الحمض النووي في الأنسجة ديسيلولاريزيد. كما ضغط عالية ومعدلات تدفق عالية ليست مطلوبة من أجل كفاءة الدناز النشاط، يمكن استخدام معدل التروية منخفضة (10 مل/دقيقة). تم استخدام مضخة تمعجية مختلفة كما يساعد صغر حجمها في سهولة التعامل من برنامج الإعداد. إذ لاحظنا أن الضرر من معظم الخلايا أثناء ديسيلولاريزيشن النتائج في دورة 2، فإننا نقترح تخطي الدناز المعاملة خلال دورات 1 و 3 (النتيجة غير منشورة). حتى ولو لم يتم القيام بالتوصيف والتحديد الكمي للمصفوفة خارج الخلية البروتينات في هذه المخطوطة، أظهرت تجربتنا السابقة مع مماثلة ديسيلولاريزيشن البروتوكولات الحفاظ على خصائص النشاط الحيوي، المصفوفة خارج الخلية بنية والبروتينات7. على الرغم من أن تنتج تجاربنا الكمي الأولية مع هذه الأوردة نتيجة مماثلة (غير منشورة)، ستعزز النتائج المنشورة بالفعل هذه الثقة.
ريسيلولاريزيشن استخدام الدم عملية سهلة ومريحة على خلايا نخاع العظام الموسع كما واحدة يمكن تجنب خلية التوسع في أوقات طويلة، والطفرات العفوية في توسيع نطاق الخلايا وغزو الجراحية وعدم الراحة للمريض. حيث أنه من المعروف أن endothelialization يحدث أيضا من تعميم ابكس، افترضنا أن التروية بالدم يليه نضح مع بطانية المتوسطة ستكون كافية ريسيلولاريزيشن. ويعتبر سلامة الأنسجة الوريد هندسيا باستخدام أسلوب مماثل من النتائج الناجحة لزرع الأعضاء عندما تم زرع اثنين من هذه الأوردة في الأطفال مع انسداد الوريد البابي خارج الكبد7. يمكننا التكهن بأن تسمح عوامل النمو في المصفوفة خارج الخلية ديسيلولاريزيد مرفق تعميم ابكس من الدم24. ريسيلولاريزيشن الأوردة بعد بروتوكول مماثل أظهرت الخلايا إيجابية مستقبلات VEGF-2 وكتلة من التمايز (CD) 14 في التجويف بينما CD45 إذ تعرب عن الخلايا شوهدت في الغلالة7. يمكننا أن نتصور أيضا أن لا يمكن ملاحظة طبقة غشائي مستمر في جميع الحالات لا سيما عند استخدام الدم من المرضى كبار السن ومريضة كما هو معروف أن هؤلاء الأفراد قد انخفضت الأرقام المتداولة السلف الخلايا25. بيد أننا تفترض أن التروية بالخاصة بالمستلم الدم قد تخفي العديد من مولدات المضادات التي يتم كشفها بسبب ديسيلولاريزيشن وقد وبالتالي تقليل احتمالات ردود الفعل الملتهبة المعاكسة عند زرعها بدلاً من زرع فقط ديسيلولاريزيد الأوعية الدموية. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن إيداع التروية الدموية مستويات متزايدة من عوامل النمو في التجويف والغلالة التي قد توظف بدورها زيادة في إعداد تعميم السلف الخلايا الناتجة في عملية سريعة ريسيلولاريزيشن في فيفو.
مزايا تصميم مفاعل حيوي المستخدمة في هذه الدراسة هي التعقيم الكامل والجمعية سهلة، والفعالية من حيث التكلفة، وسهولة التعامل وإمكانية أقل من الضرر. في تجربتنا، استخدام التصميم الحالي، الأوردة كانت ريسيلولاريزيد يصل إلى 10 سم في الطول. حتى ولو أورده يصل إلى 25 سم في الطول أيضا يمكن أن ريسيلولاريزيد عن طريق الحفاظ على المنوال في شكل "U" بداخل مفاعل حيوي، وهذا ينبغي أن يتم التحقق من صحة. يظهر تصميم مفاعل حيوي أن اتجاه التدفق في هذا السياق ضد الجاذبية وهو مصمم على هذا النحو لأنها طبيعية اتجاه التدفق لهذه الأوردة في البشر. هو نضح ح 12 خطوة متوسطة غشائي مسبق على المنوال وزيادة التقارب للحجز على ابكس واردة. إضافة الهيبارين إضافي ونضح ح 1 سوف يخفض خطر تشكيل جلطات الدم في الأنابيب أثناء التروية الدموية.
حجم الدم المطلوب فيعتمد على طول الوريد. ونحن نتابع لحجم الدم والمبدأ الأساسي أن على المنوال ينبغي أن تكون غارقة في الدم. أثناء التعامل مع الدم كميات أكبر من 45 مل، خلط أحياناً قد تكون مطلوبة لمنع تراكم الخلية في الجزء السفلي من مفاعل حيوي. وأضاف لدينا الحل لستين الدم نظراً لأنه يحتوي على كمية عالية من البروتينات والمكونات المطلوبة للحفاظ على أنسجة صحية خلال جهاز زرع26،27. إضافة VEGF وب-صندوق الأجيال القادمة مفيد كما هي عوامل نمو الأوعية القوية28 ووجودهم الحث على الهجرة، والانتشار، والتفريق بين ابكس29،،من3031،32 . يستند مقدار VEGF وأضاف لدينا نتائج غير منشورة السابق كان ينظر فيها إلى انتشار ابكس في 80 نانوغرام/مليلتر. بالإضافة للاسبرين يحول دون تنشيط الصفائح الدموية33 مما يقلل من فرص تمسكهم بطبقة بطانية. الرصد المستمر وإضافة السكر أيضا سيكون مفيداً لتكاثر الخلايا ومنع انحلال الدم خلايا الدم الحمراء.
منذ عينة دم بسيطة فقط مطلوب من المتلقي، فإنه يمكن اعتبار إجراء سهلة والممكنة التي تتطلب خبرة تقنية أقل. حتى ولو، يأخذ الإجراء بأكمله المعروضة هنا من البداية إلى النهاية 20 يوما، تخزين الأوردة ديسيلولاريزيد سوف يقصر المنتج على الرف الإجراء لمدة 8 أيام للمرضى. على الرغم من أن تقنيا تخزين عروق ديسيلولاريزيد لا ينبغي أن تؤثر كفاءة ريسيلولاريزيشن، فإنه يجب تقييم. يمكن استخدام الأوردة هندسة الأنسجة التي تم إنشاؤها باتباع هذا الإجراء في العيادة لجراحات الالتفافية، الاستعاضة عن إعاقة الأوردة، عدم كفاية الوريدية مما يؤدي إلى توسع الأوردة دون الحاجة لقمع المناعة ومما يوفر نوعية أفضل من الحياة بالنسبة للمريض.

قنوات الأوعية الدموية مطلوبة من أجل العديد من الشروط السريرية مثل تمدد الأوعية الدموية وتضيق الشريان السباتي وتصلب الشرايين مما يؤدي إلى مشاكل حادة في الأوعية الدموية. الجراحين استخدام قنوات الأوعية الدموية ذاتي، متمكنة أو الاصطناعية لاستعادة إمدادات الدم الوظيفية. على الرغم من أن استخدام الأوعية الدموية الذاتي لا يزال ينظر في النهج المثالي، والتوافر في المرضى الذين يقتصر مجورلي. البدائل مثل الطعوم الاصطناعية أو متمكنة فيها مشاكل عميقة مع العلاجات المثبطة للمناعة وسالكيه الفقيرة مما يؤدي إلى ريوبيريشن1،2، أسفر عن الصحة الرئيسية الأعباء الاقتصادية للبلدان. هندسة الأنسجة من الأوعية الدموية يهدف إلى توفير الطعوم مع التماثل طبيعي وخلايا ذاتي. وهكذا، المناعي المتلقية تسلم الاختلاس زرع بالذات ومنذ هذه طعم يحتوي على البروتينات الطبيعية والخلايا في التكوين الأصلي، قد تعمل على نحو أفضل بالمقارنة مع البدائل الحالية. هندسة الأنسجة الأجهزة، مثل المثانة3مجرى البول4،5من القصبة الهوائية والاوردة6،7، قد استخدمت بنجاح في العيادة.
هندسة الأنسجة لإنتاج الطعوم شخصية يتطلب طعم من مانح متبوعاً ديسيلولاريزيشن وريسيلولاريزيشن. ديسيلولاريزيشن تكنولوجيا واعدة لإزالة الخلايا من الأنسجة والأعضاء9،،من810. يمكن إجراء ديسيلولاريزيشن بالطرق الفيزيائية والكيميائية والانزيميه المحددة11 أو بالجمع بينها. في الاستخدام الأمثل لهذه الأساليب، يمكن أن يكون ديسيلولاريزيد الأنسجة البروتينات الهيكلية والوظيفية المماثلة في مصفوفة خارج الخلية مماثلة لانسجة أصلية. هذه الأجهزة تملك القدرات الجوهرية لتعزيز مرفق والهجرة، وانتشار، وتمايز الخلايا الجذعية واردة.
ريسيلولاريزيشن عملية دينامية لبذر الخلايا إلى الفساد، ويمكن استخدام الخلايا الجذعية المتلقية لزرع السريرية. وتشمل الخلايا الجذعية المستخدمة حاليا لمثل هذه الأغراض نخاع العظام، والوسيطة وهيئة المقيمين3،،من56. وقد استخدمت الحيوان والدراسات الموجهة نحو البحوث الخلايا الجذعية من أصول الوسيطة التي تكون الجنين والمستحثه pluripotent12،،من1314. وتتطلب هذه العملية مفاعل حيوي (غرفة التي تحمل على المنوال ويوفر الشروط اللازمة مثل درجة الحرارة والغازات والحموضة والضغط)، خلايا وثقافة الإعلام. هو التحدي في ريسيلولاريزيشن للحصول على العدد المطلوب من الخلايا من نوع معين، واستراتيجية نثر البذور التي يمكن أن تصل إلى خلايا الأنسجة كاملة أو الجهاز. على الرغم من لا أنسجة كاملة أو الجهاز وقد ولدت هيكلياً ووظيفيا وتقييمها حتى الآن، عدة أوجه التقدم في هذا الميدان والنتائج الأولية تظهر إمكانية المستقبل15. المهمة الرئيسية لهذا السياق يكمن في البطانة لومينال الذي يتحكم بتسلل خلايا التحريضية إلى الأنسجة وطبقة العضلات الملساء الأوسط الذي يساعد في انقباض، وتوفر أيضا قوة إجراء ضغط الدم16. وقد أثبتت الدراسات أن endothelialization يحدث أثناء الضرر، من ملامسة أو من تعميم خلايا السلف غشائي (ابكس) في الدم17،،من1819. استراتيجيتنا ريسيلولاريزيشن الأوردة يعتمد على ابكس الحالية في تعميم الدم.
هندسة الأنسجة للاوردة والشرايين أجريت عدة مجموعات في أعقاب مختلف ديسيلولاريزيشن وريسيلولاريزيشن استراتيجيات20،21. كما يؤديها مجموعتنا ووضع استراتيجيات للاوردة الحرقفي والثديية6،7ديسيلولاريزيشن وريسيلولاريزيشن. وأجرى ديسيلولاريزيشن بالانفعالات الوريد في تريتون X-100، تراي-ن-بوتيل الفوسفات (تنبب)، وإنزيم ديوكسيريبونوكليسي (الدناز). وأجرى ريسيلولاريزيشن استخدام نخاع العظام تستمد العضلات بطانية والسلس خلايا6 أو الدم المحيطي7. ريسيلولاريزيد الأوردة أما بروتوكول تبشر السريرية في توفير إمدادات الدم الوظيفية في زرع للأطفال المرضى بانسداد الوريد البابي خارج الكبد6،7.
وقد وضعنا حاليا نسخة معدلة من نفس البروتوكول لأداء محسن وسهلة للتعامل مع ديسيلولاريزيشن، وريسيلولاريزيشن، ومفاعل حيوي عروق صغيرة القطر. بروتوكول ديسيلولاريزيشن الحالي يتطلب نضح المنظفات عن طريق الوريد باستخدام الضغط بدلاً من إثارة الشغب مع المنظفات. ويشمل البروتوكول ريسيلولاريزيشن خطوة إضافية من preconditioning لتحسين الالتصاق الخلية وإضافة عوامل النمو في تعميم للدم من أجل تحسين التصاق الخلايا والبقاء على قيد الحياة وانتشار. ونحن قد تحسنت أيضا تصميم مفاعل حيوي باستخدام المنتجات المتاحة تجارياً. في هذه الورقة، نقدم وصفاً مفصلاً للبروتوكول المعدل لأداء ديسيلولاريزيشن وريسيلولاريزيشن للاوردة الصافن البشرية.

<table><tbody><tr><td>4-Port Cap</td><td>CPLabSafety</td><td>WF-GL45-4Kit</td><td></td></tr><tr><td>Acetyl salicylic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5376</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Anti</td><td>Life Technologies</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>B-FGF</td><td>Lonza</td><td>cc-4113B</td><td></td></tr><tr><td>Blood Glucose monitoring system - Free style Lite</td><td>Abbott</td><td>70808-70</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8769</td><td></td></tr><tr><td>DNase-I</td><td>Worthington</td><td>LS0020007</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s PBS with CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; and MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8662</td><td></td></tr><tr><td>EDTA disodium salt dihydrate</td><td>AlfaAesar</td><td>A15161.OB</td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 Growth Factors Kit</td><td>Lonza</td><td>CC-4176</td><td></td></tr><tr><td>EG-VEGF</td><td>Peprotech</td><td>100-44</td><td></td></tr><tr><td>Glass bottle 250ml</td><td>VWR</td><td>2151593</td><td>Any bottle with GL45 cap can be used</td></tr><tr><td>Glass bottle 1L</td><td>VWR</td><td>2151595</td><td>Any bottle with GL45 cap can be used</td></tr><tr><td>Glass jar 500ml with bottom hose outlet</td><td>Kimble Chase Life Science</td><td>14607</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Leo</td><td>387107</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Coated Vacutainer Tubes</td><td>Becton Dickinson</td><td>368480</td><td></td></tr><tr><td>Human AB Serum</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3667</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Life Technologies</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Luer Female with 1/8&quot; ID Barb</td><td>Oina</td><td>LF-2PP-QC</td><td>For 3X5mm silicon tube</td></tr><tr><td>Luer Female with 3/32&quot; ID Barb</td><td>Oina</td><td>LF-1.5PP-QC</td><td>For 2X4mm silicon tube</td></tr><tr><td>Luer Male with 3/32&quot; ID Barb</td><td>Oina</td><td>LM-1.5PP-QC</td><td>For 2X4mm silicon tube</td></tr><tr><td>Luer Male with 1/8&quot; ID Barb</td><td>Oina</td><td>LM-2PP-QC</td><td>For 3X5mm silicon tube</td></tr><tr><td>Luer Male with 5/32&quot; ID Barb</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-45518-06</td><td>For 5X8mm silicon tube</td></tr><tr><td>MCDB 131</td><td>Life Technologies</td><td>10372-019</td><td></td></tr><tr><td>Per acetic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>433241</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltic pump I</td><td>Masterflex</td><td>7524-45</td><td>For Decellularization setup 1 and 2. The cassette used is 7519-75</td></tr><tr><td>Peristaltic pump II</td><td>Ismatec</td><td>ISM941</td><td>For Decellularization setup 3 and Recellularization bioreactor.</td></tr><tr><td>Potassium chloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>Potassium hydrogen phosphate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9791</td><td></td></tr><tr><td>Reducing Connector 1.5mmX2.5mm</td><td>Biotech</td><td>ISM569A</td><td></td></tr><tr><td>Shaker</td><td>Ika</td><td>KS4000 i&amp;nbsp; control</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Azide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71290</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>13423</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hydrogen phosphate</td><td>Merck</td><td>71640-M</td><td></td></tr><tr><td>Steen solution</td><td>Xvivo</td><td>19004</td><td></td></tr><tr><td>Suture</td><td>Agnthos</td><td>14817</td><td></td></tr><tr><td>Tri-n-butyl Phosphate</td><td>AlfaAesar</td><td>A16084.AU</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X-100</td><td>AlfaAesar</td><td>A16046.OF</td><td></td></tr><tr><td>Tube 60ml with flat base</td><td>Sarstedt</td><td>60596</td><td></td></tr><tr><td>Tube A</td><td>VWR</td><td>2280706</td><td>Cut 3 pieces, each of 25 cm length for decellularization perfusion steup 1 and 2</td></tr><tr><td>Tube B</td><td>VWR</td><td>2280706</td><td>Cut 1 piece of 35 cm length for decellularization perfusion steup</td></tr><tr><td>Tube C</td><td>VWR</td><td>2280706</td><td>Cut 5 pieces, each of 75 cm length for decellularization perfusion steups 1-3</td></tr><tr><td>Tube D</td><td>VWR</td><td>2280706</td><td>Cut 1 piece of 90 cm length for decellularization perfusion steup 2</td></tr><tr><td>Tube E</td><td>VWR</td><td>2280706</td><td>Cut 1 piece of 20 cm length for recellularization perfusion steup</td></tr><tr><td>Tube F</td><td>VWR</td><td>2280713</td><td>Cut 2 pieces, each of 15 cm length for decellularization perfusion steup 1 and 2</td></tr><tr><td>Tube G</td><td>VWR</td><td>2280713</td><td>Cut 2 pieces, each of 60 cm length for decellularization perfusion steup 1 and 2</td></tr><tr><td>Tube H</td><td>VWR</td><td>2280703</td><td>Cut 1 piece of 15 cm length for recellularization perfusion steup</td></tr><tr><td>Tube I</td><td>VWR</td><td>2280703</td><td>Cut 1 piece of 20 cm length for recellularization perfusion steup</td></tr><tr><td>Tube J</td><td>VWR</td><td>2280703</td><td>Cut 1 piece of 25 cm length for recellularization perfusion steup</td></tr><tr><td>Tube K</td><td>VWR</td><td>2280703</td><td>Cut 2 pieces, each of 35 cm length for recellularization perfusion steup</td></tr></tbody></table>

decellularization and recellularization methodology for human saphenous veins

قنوات الأوعية المستخدمة خلال معظم جراحات الأوعية الدموية هي الطعوم متمكنة أو الاصطناعية التي غالباً ما تؤدي إلى المضاعفات الناجمة عن الكبت المناعي وسالكيه الفقيرة. هندسة الأنسجة يقدم حلاً رواية لتوليد الطعوم شخصية مع مصفوفة خارج الخلية طبيعية التي تحتوي على الخلايا للمستلم باستخدام أسلوب ديسيلولاريزيشن وريسيلولاريزيشن. نعرض طريقة مفصلة لأداء ديسيلولاريزيشن البشرية الوريد الصافن وريسيلولاريزيشن قبل التروية الدموية المحيطية. كان ديسيلولاريزيد الوريد بنسبة 1% بيرفوسينج X-100 تريتون، 1% تراي-ن-بوتيل-الفوسفات (تنبب) و 2000 [كونيتز] وحدة من ديوكسيريبونوكليسي (الدناز). كانت perfused Triton X-100 وتنبب في الدقيقة 35 مل ح 4 بينما كان perfused الدناز في 10 مل/دقيقة عند 37 درجة مئوية ح 4. وعلى المنوال غسلها في الماء عالي النقاوة وبرنامج تلفزيوني وتعقيمها ثم في حمض الاستيك 0.1%. وكان غسلها مرة أخرى في برنامج تلفزيوني وإخضاع في المتوسط بطانية. كان متصلاً مفاعل حيوي الوريد و perfused مع بطانية المتوسطة التي تحتوي على 50 وحدة دولية/مل أنجز الهيبارين ل 1 h. ريسيلولاريزيشن بملء مفاعل حيوي بدماء جديدة، المخفف 1:1 في حل ستين، وإضافة المستمدة من الغدة الصماء والأوعية الدموية عوامل النمو غشائي (80 نانوغرام/مل) وعوامل النمو الأساسية تنتجها الخلايا الليفية (4 ميليلتر/mL) أسيتيل حمض الصفصاف (5 ميكروغرام/مل). مفاعل حيوي ثم انتقلت إلى حاضنة و perfused ح 48 في 2 مل/دقيقة مع الحفاظ على السكر بين 3-9 ملمول/ل. في وقت لاحق، على المنوال كان غسلها مع برنامج تلفزيوني ومليئة ببطانية المتوسطة و perfused ح 96 في الحاضنة. المعاملة مع Triton X-100 وتنبب الدناز ديسيلولاريزيد الوريد الصافن في 5 دورات. السياق ديسيلولاريزيد بدت بيضاء على عكس الأوردة العادية وريسيلولاريزيد (أحمر فاتح). الهيماتوكسيلين & ويوزين (H & E) تلطيخ أظهرت وجود نواة فقط في العادي ولكن ليس في الأوردة ديسيلولاريزيد. في السياق ريسيلولاريزيد، ح & ه تلطيخ أظهرت وجود خلايا على سطح لومينال الوريد.

مورفولوجيا الإجمالي الوريد العادي هو الضوء الأحمر (الشكل 3A). يتم فقدان اللون الأحمر في دورات ديسيلولاريزيشن التدريجي (دورة 2، الرقم 3 (ب)؛ ودورة 3، الرقم 3) ومن دورةال 5، يبدو شاحب وأبيض (3D الشكل). تبدو السياق ريسيلولاريزيد بعد التروية الدموية (الشكل 3E) ونضح غشائي وسائط الإعلام (الشكل 3F) أحمر في لون. 5 دورات العلاج ديسيلولاريزيشن بنجاح إزالة الخلايا من هذا السياق كما شوهدت لا الأنوية الأزرق في تلطيخ ح & ه (الشكل 4 باء). وفي المقابل، اعتبرت نويات عدة في السياق العادي (الشكل 4 أ). ويعتبر وجود خلايا المرفقة على الجانب لومينال في تلطيخ ح & ه في السياق ريسيلولاريزيد بالدم ح 48 (الشكل 4، السهام السوداء) وبعد التروية مع متوسطة بطانية لمدة 96 ساعة (3D الشكل، السهام السوداء).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig1.jpg"> الشكل 1 : تجميع الأجهزة نضح ديسيلولاريزيشن. A) الصورة تبين الإعداد ديسيلولاريزيشن المجمعة 1 X-100 تريتون والغسيل. إظهار الأسهم البيضاء مسار تدفق للحلول والأسهم الحمراء تشير إلى مداخل ومنافذ الوريد والحلول. ب) الصورة تظهر الإعداد ديسيلولاريزيشن المجمعة 2 لنضح تنبب. وبالمثل، كما هو الحال في الإعداد ديسيلولاريزيشن 1، تشير الأسهم البيضاء إلى مسار تدفق للحلول والأسهم الحمراء تشير إلى مداخل ومنافذ الوريد والحلول. ج) صورة تظهر الإعداد ديسيلولاريزيشن المجمعة 3 لنضح ديوكسيريبونوكليسي. إظهار الأسهم البيضاء مسار تدفق للحلول والأسهم الحمراء تشير إلى مداخل الوريد والحلول. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/57803/57803fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a> 
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig2.jpg"> الشكل 2 : إعداد وتجميع مفاعل حيوي ريسيلولاريزيشن. A) صورة تبين المواد المطلوبة لتجميع في مفاعل حيوي. ب) صورة داخل غطاء 4-منفذ عرض موضع الحد من الموصلات (الأسهم الحمراء)، يشير إلى الاتصال مدخل الوريد ومنفذ (الأسهم البيضاء) وترتيب أنابيب ح وأنا وياء نهاية الأنبوب ح الحرة يوضع داخل مفاعل حيوي لإعادة الوسائط. ج) يتبين أنابيب كل منهما الذهاب والخروج من الجانب العلوي من 4 ميناء كاب. د) صورة تظهر مفاعل حيوي المجمعة. ه) صورة تظهر الإعداد مفاعل حيوي كامل مع مضخة تمعجية. تمديد أنابيب ك الاتصالات من مفاعل حيوي مضخة تمعجية. و) التمثيل التخطيطي نظام التروية مفاعل حيوي كله. الأسهم البرتقالية تشير إلى اتجاه التدفق. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/57803/57803fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a> 
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig3.jpg"> الشكل 3 : الإجمالي مورفولوجيا الأوردة خلال ديسيلولاريزيشن وريسيلولاريزيشن- A) مورفولوجية الإجمالي من السياق العادي يبدو أحمر اللون. اللون يتم فقدان مع الإعداد المتزايدة من دورات ديسيلولاريزيشن ب) دورة 2 و ج) دورة 3. د) من 5 دورات، والمنطلق يبدو شاحب وأبيض. وعلى المنوال بعد بيرفوسينج مع ه) للدم من أجل ح 48 وو) مع متوسطة بطانية لمدة 96 ساعة تبدو مرة أخرى أحمر في لون. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/57803/57803fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig4.jpg"> الشكل 4 : توصيف عروق ديسيلولاريزيد وريسيلولاريزيد- والهيماتوكسيلين ويوزين تلطيخ صورة A) السياق العادي يحتوي على العديد من الأنوية الأزرق ولكنها غائبة في ب) ديسيلولاريزيد الوريد. في هذا السياق ريسيلولاريزيد مع ج) دم ح 48 ومع د) قد لاحظت المتوسطة بطانية ل 96 ح، مرفق للخلايا (الأسهم السوداء) في التجويف. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/57803/57803fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins at JoVE.com

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

ديسيلولاريزيشن ومنهجية ريسيلولاريزيشن للاوردة الصافن البشرية

هنا، يمكننا وصف بروتوكول ديسيلولاريزيشن الوريد الصافن باستخدام المنظفات وريسيلولاريزيشن نضح الدم المحيطي والمتوسطة بطانية.

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...

decellularization-recellularization-methodology-for-human-saphenous

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Bioengineering

14.1K Views.  University of Gothenburg. هنا، يمكننا وصف بروتوكول ديسيلولاريزيشن الوريد الصافن باستخدام المنظفات وريسيلولاريزيشن نضح الدم المحيطي والمتوسطة بطانية.

Video: Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to recreate or mimic the liver microstructure with grounds up approach using tissue engineering and microfabrication techniques have not been successful so far due to this design challenge. In addition, synthetic biomaterials used to create scaffolds for liver tissue engineering applications have been limited in inducing tissue regeneration and repair in large part due to the lack of specific cell binding motifs that would induce the proper cell functions2. Decellularized native tissues such blood vessels3and skin4on the other hand have found many applications in tissue engineering, and have provided a practical solution to some of the challenges. The advantage of decellularized native matrix is that it retains, to an extent, the original composition, and the microstructure, hence enhancing cell attachment and reorganization5.
In this work we describe the methods to perform perfusion-decellularization of the liver, such that an intact liver bioscaffold that retains the structure of major blood vessels is obtained. Further, we describe methods to recellularize these bioscaffolds with adult primary hepatocytes, creating a liver graft that is functional in vitro, and has the vessel access necessary for transplantation in vivo.

Perfusion decellularization is a novel technique to produce whole liver scaffolds that retains the organ's extracellular matrix composition and microarchitecture. Herein, the method of preparing whole organ scaffolds using perfusion decellularization and subsequent repopulation with hepatocytes is described. Functional and transplantable liver grafts can be generated using this technique.

وDecellularization Recellularization الأكباد من الجامعة

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to ...

Autologous Endothelial Progenitor Cell-Seeding Technology and Biocompatibility Testing For Cardiovascular Devices in Large Animal Model

Implantable cardiovascular devices are manufactured from artificial materials (e.g. titanium (Ti), expanded polytetrafluoroethylene), which pose the risk of thromboemboli formation1,2,3. We have developed a method to line the inside surface of Ti tubes with autologous blood-derived human or porcine endothelial progenitor cells (EPCs)4. By implanting Ti tubes containing a confluent layer of porcine EPCs in the inferior vena cava (IVC) of pigs, we tested the improved biocompatibility of the cell-seeded surface in the prothrombotic environment of a large animal model and compared it to unmodified bare metal surfaces5,6,7 (Figure 1). This method can be used to endothelialize devices within minutes of implantation and test their antithrombotic function in vivo. 
Peripheral blood was obtained from 50 kg Yorkshire swine and its mononuclear cell fraction cultured to isolate EPCs4,8. Ti tubes (9.4 mm ID) were pre-cut into three 4.5 cm longitudinal sections and reassembled with heat-shrink tubing. A seeding device was built, which allows for slow rotation of the Ti tubes. 
We performed a laparotomy on the pigs and externalized the intestine and urinary bladder. Sharp and blunt dissection was used to skeletonize the IVC from its bifurcation distal to the right renal artery proximal. The Ti tubes were then filled with fluorescently-labeled autologous EPC suspension and rotated at 10 RPH x 30 min to achieve uniform cell-coating9. After administration of 100 USP/ kg heparin, both ends of the IVC and a lumbar vein were clamped. A 4 cm veinotomy was performed and the device inserted and filled with phosphate-buffered saline. As the veinotomy was closed with a 4-0 Prolene running suture, one clamp was removed to de-air the IVC. At the end of the procedure, the fascia was approximated with 0-PDS (polydioxanone suture), the subcutaneous space closed with 2-0 Vicryl and the skin stapled closed. 
After 3 - 21 days, pigs were euthanized, the device explanted en-block and fixed. The Ti tubes were disassembled and the inner surfaces imaged with a fluorescent microscope.
We found that the bare metal Ti tubes fully occluded whereas the EPC-seeded tubes remained patent. Further, we were able to demonstrate a confluent layer of EPCs on the inside blood-contacting surface.
Concluding, our technology can be used to endothelialize Ti tubes within minutes of implantation with autologous EPCs to prevent thrombosis of the device. Our surgical method allows for testing the improved biocompatibility of such modified devices with minimal blood loss and EPC-seeded surface disruption.

A method for seeding titanium blood-contacting biomaterials with autologous cells and testing biocompatibility is described. This method uses endothelial progenitor cells and titanium tubes, seeded within minutes of surgical implantation into porcine venae cavae. This technique is adaptable to many other implantable biomedical devices.

غشائي ذاتي السلف الخلوي البذر التكنولوجيا واختبار توافق مع الحياة للحصول على أجهزة القلب والأوعية الدموية في نموذج حيواني كبير

Implantable cardiovascular devices are manufactured from artificial materials (e.g. titanium (Ti), expanded polytetrafluoroethylene), which pose the risk ...

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Cancer is one of the leading causes of death worldwide. Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture systems, which inadequately reflect physiological conditions in vivo. Biological 3D matrices provide cells an environment in which cells can self-organize, allowing the study of tissue organization and cell differentiation. Such scaffolds can be seeded with a mixture of different cell types to study direct 3D cell-cell-interactions. To mimic the 3D complexity of cancer tumors, our group has developed a 3D in vitro tumor test system.	
	Our 3D tissue test system models the in vivo situation of malignant peripheral nerve sheath tumors (MPNSTs), which we established with our decellularized porcine jejunal segment derived biological vascularized scaffold (BioVaSc). In our model, we reseeded a modified BioVaSc matrix with primary fibroblasts, microvascular endothelial cells (mvECs) and the S462 tumor cell line. For static culture, the vascular structure of the BioVaSc is removed and the remaining scaffold is cut open on one side (Small Intestinal Submucosa SIS-Muc). The resulting matrix is then fixed between two metal rings (cell crowns).	
	Another option is to culture the cell-seeded SIS-Muc in a flow bioreactor system that exposes the cells to shear stress. Here, the bioreactor is connected to a peristaltic pump in a self-constructed incubator. A computer regulates the arterial oxygen and nutrient supply via parameters such as blood pressure, temperature, and flow rate. This setup allows for a dynamic culture with either pressure-regulated pulsatile or constant flow.	
	In this study, we could successfully establish both a static and dynamic 3D culture system for MPNSTs. The ability to model cancer tumors in a more natural 3D environment will enable the discovery, testing, and validation of future pharmaceuticals in a human-like model.

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Methods to create human 3D tumor tissues as test systems are described. These technologies are based on a decellularized Biological Vascularized Scaffold (BioVaSc), primary human cells and a tumor cell line, which can be cultured under static as well as under dynamic conditions in a flow bioreactor.

هندسة الأنسجة ل3D الإنسان<em&gt; في المختبر</em&gt; نظام ورم اختبار

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Generation and Grafting of Tissue-engineered Vessels in a Mouse Model

The construction of vascular conduits is a fundamental strategy for surgical repair of damaged and injured vessels resulting from cardiovascular diseases. The current protocol presents an efficient and reproducible strategy in which functional tissue engineered vessel grafts can be generated using partially induced pluripotent stem cell (PiPSC) from human fibroblasts. We designed a decellularized vessel scaffold bioreactor, which closely mimics the matrix protein structure and blood flow that exists within a native vessel, for seeding of PiPSC-endothelial cells or smooth muscle cells prior to grafting into mice. This approach was demonstrated to be advantageous because immune-deficient mice engrafted with the PiPSC-derived grafts presented with markedly increased survival rate 3 weeks after surgery. This protocol represents a valuable tool for regenerative medicine, tissue engineering and potentially patient-specific cell-therapy in the near future.

Here, we present a protocol to generate tissue engineered vessel grafts that are functional for grafting into mice by double seeding partially induced pluripotent stem cell (PiPSC) - derived smooth muscle cells and PiPSC - derived endothelial cells on a decellularized vessel scaffold bioreactor.

جيل ومسمار سفن الهندسة الأنسجة في نموذج الفأر

The construction of vascular conduits is a fundamental strategy for surgical repair of damaged and injured vessels resulting from cardiovascular diseases. ...

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal hyperplasia (IH) that eventually leads to vessel occlusion and graft failure. Mechanical forces, particularly low shear stress and high wall tension, are thought to initiate and to sustain these cellular and molecular changes, but their exact contribution remains to be unraveled. To selectively evaluate the role of pressure and shear stress on the biology of IH, an ex&#160;vivo perfusion system (EVPS) was created to perfuse segments of human saphenous veins under arterial regimen (high shear stress and high pressure). Further technical innovations allowed the simultaneous perfusion of two segments from the same vein, one reinforced with an external mesh. Veins were harvested using a no-touch technique and immediately transferred to the laboratory for assembly in the EVPS. One segment of the freshly isolated vein was not perfused (control, day 0). The two others segments were perfused for up to 7 days, one being completely sheltered with a 4 mm (diameter) external mesh. The pressure, flow velocity, and pulse rate were continuously monitored and adjusted to mimic the hemodynamic conditions prevailing in the femoral artery. Upon completion of the perfusion, veins were dismounted and used for histological and molecular analysis. Under ex&#160;vivo conditions, high pressure perfusion (arterial, mean = 100 mm Hg) is sufficient to generate IH and remodeling of human veins. These alterations are reduced in the presence of an external polyester mesh.

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

The mechanisms leading to the development of intimal hyperplasia (IH) and vein graft failure are still poorly understood. This study describes an ex&#160;vivo system to perfuse human veins under controlled flow and pressure. Furthermore the efficiency of external mesh reinforcement to limit the development of IH was evaluated.

إجراءات الصافن عروق الإنسان<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الإرواء والتعزيز الخارجي

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Medicine

Procurement and Perfusion-Decellularization of Porcine Vascularized Flaps in a Customized Perfusion Bioreactor

Large volume soft tissue defects lead to functional deficits and can greatly impact the patient&#39;s quality of life. Although surgical reconstruction can be performed using autologous free flap transfer or vascularized composite allotransplantation (VCA), such methods also have disadvantages. Issues such as donor site morbidity and tissue availability limit autologous free flap transfer, while immunosuppression is a significant limitation of VCA. Engineered tissues in reconstructive surgery using decellularization/recellularization methods represent a possible solution. Decellularized tissues are generated using methods that remove native cellular material while preserving the underlying extracellular matrix (ECM) microarchitecture. These acellular scaffolds can then be subsequently recellularized with recipient-specific cells.
This protocol details the procurement and decellularization methods used to achieve acellular scaffolds in a pig model. In addition, it also provides a description of the perfusion bioreactor design and setup. The flaps include the porcine omentum, tensor fascia lata, and the radial forearm. Decellularization is performed via ex vivo perfusion of low concentration sodium dodecyl sulfate (SDS) detergent followed by DNase enzyme treatment and peracetic acid sterilization in a customized perfusion bioreactor.
Successful tissue decellularization is characterized by a white-opaque appearance of flaps macroscopically. Acellular flaps show the absence of nuclei on histological staining and a significant reduction in DNA content. This protocol can be used efficiently to generate decellularized soft tissue scaffolds with preserved ECM and vascular microarchitecture. Such scaffolds can be used in subsequent recellularization studies and have the potential for clinical translation in reconstructive surgery.

The protocol describes the surgical procurement and subsequent decellularization of vascularized porcine flaps by the perfusion of sodium dodecyl sulfate detergent through the flap vasculature in a customized perfusion bioreactor.

شراء ونزع الخلايا من اللوحات الوعائية الخنازير في مفاعل حيوي مخصص للتروية

Large volume soft tissue defects lead to functional deficits and can greatly impact the patient&#39;s quality of life. Although surgical reconstruction ...

Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

Patients with severe traumatic injuries and tissue loss require complex surgical reconstruction. Vascularized composite allotransplantation (VCA) is an evolving reconstructive avenue for transferring multiple tissues as a composite subunit. Despite the promising nature of VCA, the long-term immunosuppressive requirements are a significant limitation due to the increased risk of malignancies, end-organ toxicity, and opportunistic infections. Tissue engineering of acellular composite scaffolds is a potential alternative in reducing the need for immunosuppression. Herein, the procurement of a rat hindlimb and its subsequent decellularization using sodium dodecyl sulfate (SDS) is described. The procurement strategy presented is based upon the common femoral artery. A machine perfusion-based bioreactor system was constructed and used for ex vivo decellularization of the hindlimb. Successful perfusion decellularization was performed, resulting in a white translucent-like appearance of the hindlimb. An intact, perfusable, vascular network throughout the hindlimb was observed. Histological analyses showed the removal of nuclear contents and the preservation of tissue architecture across all tissue compartments.

Procurement and Decellularization of Rat Hindlimbs Using an Ex Vivo Perfusion-Based Bioreactor for Vascularized Composite Allotransplantation

We describe the surgical technique and decellularization process for composite rat hindlimbs. Decellularization is conducted using low-concentration sodium dodecyl sulfate through an ex vivo machine perfusion system.

شراء وإزالة الخلايا من الأطراف الخلفية للفئران باستخدام مفاعل حيوي قائم على التروية خارج الجسم الحي لزراعة الخيول المركبة الوعائية

Patients with severe traumatic injuries and tissue loss require complex surgical reconstruction. Vascularized composite allotransplantation (VCA) is an ...

Synergizing Antegrade Endoscopic with Bridging Vein Harvesting for Improvement of Great Saphenous Vein Graft Quality from the Lower Leg

Antegrade endoscopic harvesting of autografts for bypass grafting may be an optimal strategy addressing excellent graft quality and reduced post-operative wound complications. This standardized protocol for antegrade endoscopic vein harvesting (EVH) from the lower leg has the potential to be introduced to routine coronary artery bypass grafting (CABG). Patients undergoing CABG surgery are positioned on a surgical table with two additional foam rollers below the extended legs, enabling antegrade EVH from the lower leg. Following minimally invasive surgical access through a bridging vein harvest technique, an endoscopic optical dissector is inserted antegrade into the wound. The main vessel and side branches are dissected under continuous optical control of vein quality status and the working channel. After, an endoscopic optical retractor is inserted with an internal bipolar electrocoagulation device for precise, safe, and tissue-protective interruption of side branches. After release of the vein, the vessel is cut off at the proximal and distal ends under optical control, retrieved from the wound, then cannulated and flushed with heparinized saline. Finally, all side branches of the vein graft are double-clipped. Vascular histology is analyzed in a randomized selection of vein samples. After applying this standardized EVH protocol, the learning curve was shown to be steep, and graft quality was sufficient for coronary artery bypass grafting in every case. There was no conversion to surgical harvesting and low risks for tissue damage and bleeding. Leg positioning and synergizing EVH with bridging vein harvesting improved procedural success and vein graft quality. In our hands, antegrade EVH from the lower leg was feasible, demonstrating straightforward graft dissection as well as adequate macroscopic and microscopic graft quality with preserved endothelial integrity. In conclusion, the introduced technique is safe, shows excellent vein autograft quality, and illustrates feasibility for elective and urgent isolated CABG and combined CABG scenarios.

Presented here is a protocol for antegrade endoscopic vein harvesting from the lower leg, which can safely be introduced in routine coronary artery bypass grafting. Vein grafts present excellent graft quality following this standardized protocol with positioning of the legs, minimally invasive access to the vein, and antegrade endoscopic vein harvesting.

التازر بالتنظير الوريدي مع تجميع الوريد لتحسين جوده طعم الوريد الكبير من الساق السفلي

Antegrade endoscopic harvesting of autografts for bypass grafting may be an optimal strategy addressing excellent graft quality and reduced post-operative ...

A Training and Testing System for Performing Vascular Reconstruction In Vitro

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has yet to be developed. In this study, we introduce an in vitro training and testing system using a magnetic anchoring technique with which a trainee can practice manual vascular reconstruction individually. Additionally, this system can also be used to test the quality of the reconstruction. The described system includes a vascular reconstruction training machine, magnetic tractors, and a magnetic suture puller. In this manuscript, we detail an end-to-end vein anastomosis using porcine right and left iliac veins. To identify the potential damage caused by a magnetic suture puller on the suture, we created three groups with six segments of 4-0 polypropylene sutures each: a control group with no intervention on the polypropylene suture, a group in which the polypropylene suture is manually pulled with sterile gloves 20x, and a magnetic puller group in which the magnetic puller pulled the polypropylene suture 20x. These groups were tested by light microscopy and breaking strength tests, and the effect of reconstruction was assessed. In the light microscopy test, the control group was less likely to be damaged (p &#60; 0.05) and the number of damaged points of the manual group and magnetic puller group were similar (p &#62; 0.05). The results of the breaking strength test were compared across groups and no significant difference was observed (p &#62; 0.05). The end-to-end anastomosis of the porcine iliac veins was successfully performed using this training system, and the reconstructed veins could undergo 2.0 kPa perfusion pressure. Using this training and testing system the trainee can practice manual vascular reconstruction in vitro individually with the aid of magnetic tractors and a magnetic suture puller, and the quality of the reconstruction can be tested.

Here we present a training and testing system where a trainee can complete manual vascular reconstruction in vitro individually using a magnetic anchoring technique. The system can also be used to test the quality of reconstruction.

نظام التدريب والاختبار لتنفيذ أعاده بناء الاوعيه الدموية في المختبر

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has ...

Occlusion of the Great and Small Saphenous Vein Using Copolymeric Glue Based on N-Butyl Cyanoacrylate and Methacryloxy Sulfolane

We present the preliminary results of a longitudinal observational study aimed at evaluating the effectiveness and safety at different short- and long-term follow-ups of vascular occlusion of the great saphenous vein (GSV) and small saphenous vein (SSV) affected by severe pathological reflux, using an innovative modified cyanoacrylate surgical glue composed of N-butyl cyanoacrylate and methacryloxy sulfolane (NBCA+MS). Ninety patients, prospectively recruited for 1 year, underwent the study with EcoColor-Doppler (ECD) to evaluate the maximum diameters of the GSV and SSV in the orthostatic position and the reflux time (RT). An RT greater than 0.5 s was considered pathologic. Clinical, etiology, anatomy, and pathophysiology (CEAP) assessment was used for the complete evaluation of each patient in the study. All the patients were treated by NBCA+MS glue to obtain vein occlusion and observed before treatment (baseline; T0), within 6 h after treatment (T1), 1 month after treatment (T2), 3 months after treatment (T3), 6 months after treatment (T4), and 1 year after treatment (T5). Chi-square (&#967;) analysis was performed to evaluate the effectiveness and safety of the treatment. All the patients participated in the entire duration of the study. Complete occlusion was maintained in 100% of patients at T1, 98.9% at T2 and T3, and 97.8% at T4 and T5 (p &lt; 0.001). None of the patients suffered from post-surgical thrombosis. No blue hyperpigmentation, or paresthesia was observed during the entire observation period. Immediately after treatment, 7.7% of patients needed painkillers; 1 week after treatment, 100% of patients returned to normal life. Vascular occlusion of the great or small saphenous vein using NBCA+MS glue is a safe procedure with persistent benefits after a 1 year follow-up. This procedure can be performed with local anesthesia, allowing a quick return to normal life. Thanks to its low invasiveness, the treatment is not painful.

Here, we present a protocol to treat the great saphenous vein (GSV) and the small saphenous vein (SSV) affected by severe pathological reflux, using an original sclerosing and embolizing cyanoacrylate-based glue composed of N-butyl cyanoacrylate and methacryloxy sulfolane (NBCA+MS).

ديسيلولاريزيشن ومنهجية ريسيلولاريزيشن للاوردة الصافن البشرية

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video