Protokol, tütün boynuz kurdunun kannabinoid preklinik çalışmalar için bir böcek modeli sistemi olarak kullanılmasını önermektedir. Bu sistem, araştırmacıların kannabinoidlere akut ve uzun vadeli yanıtları kolayca araştırmalarını sağlar. Böcek modeli sistemi, araştırmacıların diğer hayvan sistemlerinden daha az işçilik ve maliyetle üç ila dört hafta içinde büyük bir popülasyondaki kannabinoid terapötik etkilerini araştırmalarını sağlar.
150 ila 200 canlı M.sexta yumurtası ve buğday tohumu bazlı yapay diyetler elde edin. Boynuz kurdu yumurtalarını buğday tohumu bazlı yapay diyet tabakasına sahip bir polistiren Petri kabına yerleştirin ve yumurtaları% 40 ila 60 bağıl nem ile 25 santigrat derecede tutulan bir böcek yetiştirme odasına aktarın. Yumurtaların böcek yetiştirme odasında bir ila üç gün boyunca yumurtadan çıkmasına izin verin.
200 milimoler cannabidiol stok çözeltisi hazırlamak için, 20 mililitre etanol veya% 100 orta zincir trigliserit yağına% 98 saflıkta cannabidiol izolesinden 1.26 gram daha fazla ekleyin. Sırasıyla bir milimoler ve iki milimoler kannabidiol için yapay bir diyetin 1.000 gramı için 200 milimoler kannabidiol stok çözeltisinin beş mililitresini ve 10 mililitresini ekleyin. 20 gram kontrol aracı ve kannabidiol içeren medyayı 50 mililitrelik tüpün dibine dağıtın.
Yaklaşık iki milimetre uzunluğundaki ilk instar larvaları 50 mililitrelik bir test tüpünde tek tek rastgele dağıtın ve delikli bir kapak veya cheesecloth ile örtün. Onları 12 saatlik açık-karanlık bir döngü ile 25 santigrat derecede tutulan bir böcek yetiştirme odasının içinde yetiştirin. Larva büyümesini ölçmek için, her grubun ilk kütlesini ve boyutunu sırasıyla analitik bir denge ve cetvelle kaydedin ve larvaları kendi diyetleriyle tanıştırın.
Larva gelişim aşamaları arasındaki kütle kazanımlarını belirlemek için larvaların kütlesini ilk kütleden iki günlük aralıklarla her ölçümde çıkarın. Ayrıca, yavruya kadar gelişimsel zaman dilimindeki farklılıkları anlamak için başlangıç geliştirme aşamaları arasındaki gün sayısını kaydedin. Diyet tüketimini ölçmek için, başlangıçtaki ilk diyet gramını deneyde kaydedin ve larvalar tam yavru aşamasına girdiğinde kalan diyet miktarından çıkarın.
Larva hareketliliği ölçümü için, tabi tutulan böceğin korku şartlandırma odasına en az beş dakika alışmasına izin verin ve beşinci başlangıç böceklerinin üç grubunun beş dakika boyunca kat ettiği mesafeleri izleyin. Ardından, mobilite yanıtını analiz etmek için hareket algılama yazılımını çalıştırın. Yapay bir diyette yetiştirilen böcekler en iyi büyüme performansını gösterdi.
CBD izole için çözünen bir ajan olarak% 0.1 orta zincir trigliserit yağı kullanan araç kontrolü de herhangi bir zararlı etki olmadan normal büyüme gösterdi. Bununla birlikte, iki milimetre indüklenen kilo kaybı yüksek dozda CBD ve kontrol ve araç gruplarından daha yüksek ölüm oranına yol açtı. M.sexta larvaları, bir milimetre CBD ile AD'de yetiştirilen, etanol eklenmiş bir diyette yetiştirilenlerden en az 3.1 kat daha fazla diyet tüketti.
Bununla birlikte, iki milimolar CBD eklenmiş ortamda yetiştirilen böceklerin diyet tüketimi, sadece etanol diyetlerinde yetiştirilen larvalardan önemli ölçüde farklı değildi. Farklı koşullarda yetiştirilen M.sexta larvalarının mobil indeksi,% 1 etanol ve bir milimoler CBD ile tedavi edilen larvaların hareketliliği etkilemediğini göstermektedir. %2'lik etanol tedavilerinin ölümcül olduğu ortaya çıktı.
AD'ye %2 etanol içeren yüksek dozda CBD eklenmesi düşük hareket kabiliyetini geri kazandırdı. CBD diyetlere eklendikten sonra, diyet CBD karışımını tamamen homojenize edin ve mantar salgınını önlemek için 25 santigrat derecede tutulan böcek yetiştirme odasında% 40 ila 60 nem ile böcek yetiştirin. Elektrofizyolojik yanıtlar, CBD'nin tütün boynuz kurdunun merkezi sinir sistemini etkileyip etkilemediğini belirlemek için Manduca sexta'dan incelenen ventral zincir gangliyon ile de izlenebilir.
Böcek modeli sistemi, araştırmacıların birden fazla nesil üzerinde test yaparak diğer büyük ve küçük kannabinoidlerin farmasötik rollerini keşfetmelerini sağlayacak ve daha yüksek memelilerde deneysel bir tasarıma izin verecektir.
