O protocolo propõe o uso de múmbriga de tabaco como um sistema modelo de insetos para estudos pré-clínicos canabinoides. Esse sistema permite que os pesquisadores investiguem prontamente respostas agudas e de longo prazo aos canabinoides. O sistema de modelo de insetos permite que os pesquisadores investiguem efeitos terapêuticos canabinoides em uma grande população dentro de três a quatro semanas com menos mão de obra e custos do que outros sistemas animais.
Obtenha 150 a 200 ovos M.sexta viáveis e dietas artificiais à base de germes de trigo. Coloque os ovos de minhoca em uma placa de Petri de poliestireno com uma camada de dieta artificial baseada em germes de trigo e transfira os ovos para uma câmara de criação de insetos mantida a 25 graus Celsius com 40 a 60% de umidade relativa. Deixe os ovos chocarem por um a três dias dentro da câmara de criação de insetos.
Para preparar uma solução de estoque de canabidiol de 200 milimoslar, adicione 1,26 gramas de canabidiol de maior de 98% de pureza isolada em 20 mililitros de etanol ou óleo de triglicerídeo de cadeia média de 100%. Adicione cinco mililitros e 10 mililitros da solução de caldo de canabidiol de 200 milimoslares aos 1.000 gramas de uma dieta artificial para um mililitro e dois milimilitos de canabidiol, respectivamente. Dispense 20 gramas de veículo de controle e mídia contendo canabidiol na parte inferior do tubo de 50 mililitros.
Distribua aleatoriamente aproximadamente dois milímetros de comprimento primeiras larvas instar individualmente em um tubo de ensaio de 50 mililitros e cubra com uma tampa perfurada ou pano de queijo. Cresça-os dentro de uma câmara de criação de insetos mantida a 25 graus Celsius com um ciclo claro-escuro de 12 horas. Para medir o crescimento larval, registe a massa e o tamanho iniciais de cada grupo com um equilíbrio analítico e régua, respectivamente, e introduza as larvas às suas respectivas dietas.
Subtraia a massa das larvas em cada medição em intervalos de dois dias da massa inicial para determinar ganhos de massa entre os estágios de desenvolvimento das larvas. Além disso, registo o número de dias entre as etapas instar de desenvolvimento para entender as diferenças no prazo de desenvolvimento até a pupação. Para medir o consumo da dieta, registre os gramas iniciais da dieta no início do experimento e subtraia-o da quantidade restante de dieta quando as larvas entrassem na fase completa de pupação.
Para a medição da mobilidade larval, permita que o inseto submetido se aclimata à câmara de condicionamento do medo por pelo menos cinco minutos e rastreie as distâncias que os três grupos de instar insetos viajaram por cinco minutos. Em seguida, execute o software de detecção de movimento para analisar a resposta de mobilidade. Os insetos criados em uma dieta artificial apresentaram o melhor desempenho de crescimento.
O controle do veículo que utilizou óleo de triglicerídeo de cadeia média de 0,1% como agente dissolvido para o isolante CBD também mostrou crescimento normal sem efeitos prejudiciais. No entanto, uma alta dose de CBD de dois milímetros induziu perda de peso e levou a uma taxa de mortalidade maior do que o controle e grupos de veículos. M.sexta larvas criadas em AD com um milímetro de CBD consumiu pelo menos uma dieta 3,1 vezes maior do que aquelas criadas em uma dieta adicionada de etanol.
No entanto, o consumo alimentar dos insetos criados em dois meios de comunicação milimólares adicionados ao CBD não foi significativamente diferente das larvas criadas em dietas somente de etanol. O índice móvel da larva M.sexta criado em diferentes condições mostra que 1% de etanol e uma larvas tratadas com CBD milimôlares não afetaram a mobilidade. Os tratamentos de 2% do etanol acabaram por ser letais.
Adicionar uma alta dose de CBD em AD contendo 2% de etanol restaurou a baixa mobilidade. Uma vez que o CBD é adicionado às dietas, homogeneize completamente a mistura de CBD diet e cresça insetos na câmara de criação de insetos mantidos a 25 graus Celsius com 40 a 60% de umidade para evitar um surto fúngico. As respostas eletrofisiológicas também podem ser monitoradas com a cadeia ventral dissecada de Manduca sexta para determinar se o CBD afeta o sistema nervoso central do verme do tabaco.
O sistema de modelos de insetos permitirá que os pesquisadores explorem os papéis farmacêuticos de outros canabinoides maiores e menores testando ao longo de várias gerações, permitindo um design experimental em mamíferos mais altos.
