Le protocole propose d’utiliser le ver du tabac comme système modèle d’insecte pour les études précliniques sur les cannabinoïdes. Ce système permet aux chercheurs d’étudier facilement les réponses aiguës et à long terme aux cannabinoïdes. Le système de modèle d’insecte permet aux chercheurs d’étudier les effets thérapeutiques des cannabinoïdes dans une grande population en trois à quatre semaines avec moins de main-d’œuvre et de coûts que les autres systèmes animaux.
Obtenez 150 à 200 œufs M.sexta viables et des régimes artificiels à base de germe de blé. Placez les œufs de vers cornos dans une boîte de Petri en polystyrène avec une couche de régime artificiel à base de germe de blé et transférez les œufs dans une chambre d’élevage d’insectes maintenue à 25 degrés Celsius avec une humidité relative de 40 à 60%. Laissez les œufs éclore pendant un à trois jours à l’intérieur de la chambre d’élevage d’insectes.
Pour préparer une solution mère de cannabidiol de 200 millimolaires, ajoutez 1,26 gramme d’isolat de cannabidiol d’une pureté supérieure à 98% dans 20 millilitres d’éthanol ou d’huile de triglycérides à chaîne moyenne à 100%. Ajouter cinq millilitres et 10 millilitres de la solution mère de cannabidiol de 200 millimolaires aux 1 000 grammes d’un régime artificiel pour un millimolaire et deux millimolaires de cannabidiol, respectivement. Distribuer 20 grammes de véhicule de contrôle et de milieu contenant du cannabidiol au fond du tube de 50 millilitres.
Répartissez au hasard individuellement les larves du premier stade d’environ deux millimètres de long dans un tube à essai de 50 millilitres et recouvrez d’un couvercle perforé ou d’une étamine. Cultivez-les à l’intérieur d’une chambre d’élevage d’insectes maintenue à 25 degrés Celsius avec un cycle lumière-obscurité de 12 heures. Pour mesurer la croissance larvaire, enregistrez la masse et la taille initiales de chaque groupe avec une balance analytique et une règle, respectivement, et introduisez les larves dans leur régime alimentaire respectif.
Soustrayez la masse des larves à chaque mesure à des intervalles de deux jours de la masse initiale pour déterminer les gains de masse entre les stades de développement des larves. De plus, notez le nombre de jours entre les stades de développement de l’enfant pour comprendre les différences dans la période de développement jusqu’à la nymphose. Pour mesurer la consommation de régime, enregistrez les grammes initiaux de régime au début de l’expérience et soustrayez-le de la quantité restante de régime alimentaire lorsque les larves sont entrées dans la phase complète de nymphose.
Pour la mesure de la mobilité larvaire, laissez l’insecte soumis s’acclimater à la chambre de conditionnement de la peur pendant au moins cinq minutes et suivez les distances parcourues par les trois groupes d’insectes du cinquième stade pendant cinq minutes. Ensuite, exécutez le logiciel de détection de mouvement pour analyser la réponse de mobilité. Les insectes élevés sur un régime artificiel ont montré les meilleures performances de croissance.
Le contrôle du véhicule qui a utilisé de l’huile de triglycérides à chaîne moyenne à 0,1% comme agent dissolvant pour l’isolat de CBD a également montré une croissance normale sans aucun effet néfaste. Cependant, une forte dose de CBD de deux millimètres a induit une perte de poids et a conduit à un taux de mortalité plus élevé que les groupes témoins et les groupes de véhicules. Les larves de M.sexta élevées sous AD avec un millimètre de CBD ont consommé au moins 3,1 fois plus de régime alimentaire que celles élevées avec un régime à l’éthanol ajouté.
Cependant, la consommation alimentaire des insectes élevés sur deux milieux millimolaires ajoutés au CBD n’était pas significativement différente de celle des larves élevées avec des régimes à base d’éthanol uniquement. L’indice mobile de la larve de M.sexta élevée dans différentes conditions montre que 1% d’éthanol et une larve millimolaire traitée au CBD n’ont pas affecté la mobilité. Les traitements à l’éthanol à 2% se sont avérés mortels.
L’ajout d’une forte dose de CBD dans la MA contenant 2% d’éthanol a restauré une faible mobilité. Une fois que le CBD est ajouté aux régimes, homogénéisez complètement le mélange de CBD diététique et cultivez des insectes dans la chambre d’élevage d’insectes maintenue à 25 degrés Celsius avec 40 à 60% d’humidité pour éviter une épidémie fongique. Les réponses électrophysiologiques peuvent également être surveillées avec les ganglions de la chaîne ventrale disséqués de Manduca sexta pour déterminer si le CBD affecte le système nerveux central du ver du tabac.
Le système de modèle d’insectes permettra aux chercheurs d’explorer les rôles pharmaceutiques d’autres cannabinoïdes majeurs et mineurs en effectuant des tests sur plusieurs générations, ce qui permettra une conception expérimentale chez les mammifères supérieurs.
