Bu protokolde üç yöntem tanımlanmıştır: polen tuzaklarını kullanarak korbiküler polenlerin toplanması, polenlerin renge göre sıralanması ve asetoliz. Bu yöntemler, tozlaşma verimliliği, tozlayıcı yiyecek arama dinamikleri ve diyet kalitesi ve çeşitliliği gibi tozlayıcılarla ilgili çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Polen yakalama, bal arısı kolonilerinden toplu miktarda polen toplamanın kolay bir yoludur.
Polen peletlerini renge göre sıralamak, düşük uzmanlık gerektiren polenleri sınıflandırmak için uygun fiyatlı bir yöntemdir ve asetoliz, her pelet rengiyle ilişkili bitki taksonunu tanımlamaya izin verir. Prosedürü gösterenler, fakülte araştırma görevlisi Ellen Topitzhofer ve laboratuvarımdan lisansüstü araştırma asistanı Emily Carson olacak. Başlamak için, polenlerin istenen arı kovanı konumundan ne zaman yakalanacağını belirleyin ve polenleri yakalamak için en uygun bal arısı kolonilerini seçin.
İki dakika boyunca koloni girişine geri dönen avcı toplayıcıları sayarak koloni gücünü değerlendirin ve ardından en yüksek toplam geri dönen toplayıcı sayısına sahip kolonileri seçin. İyi durumda olan, tercihen ekstra girişler ve çarpık kapaklar olmadan ahşap eşyalı kovanları seçin. Daha az alternatif girişe sahip koloniler kullanın, çünkü bu tür kolonilere geri dönen toplayıcı arıların tuzak girişine yeniden yönlendirilme olasılığı daha yüksektir.
Mümkün olduğunca güneye bakan kovan girişlerini seçin. Kovanlar paletlenirse, toplayıcıların komşu kovan girişlerine sürüklenmesini önlemek için belirli bir palette aynı yöne bakan her koloniye polen tuzakları takın. İstenirse, larvaların varlığı için çerçeveleri inceleyerek koloninin yavru yuvasını değerlendirin ve nispeten büyük miktarda larva içeren kolonileri seçin.
Ardından, seçilen bal arısı kolonilerine polen tuzakları kurun. Öne monte tuzaklar için, tuzağı girişin önüne zımbalar, vidalar ve bantla takın veya tuzağı kovanın etrafına sarılmış bungee kablolarına bağlayın. Koloniye diğer tüm olası girişleri, lateks veya poliüretan köpük veya burgu delikleri için sekiz numaralı donanım bezi gibi yapışkan olmayan ve kalıplanabilir bir malzeme ile kapatın.
Küçük çatlaklar için yapışkan bant kullanın. Zemin seviyesindeki kovanlarda bulunan önden montajlı tuzaklar kullanıyorsanız, çiyden kaynaklanan nem hasarını önlemek için toplama sepeti ile çim arasına kauçuk paspas gibi bir bariyer yerleştirin. Polen tuzağının yakalama mekanizmasını, kurulumdan 24 saat sonra ve günün yiyecek arama uçuşu başlamadan önce çalıştırın.
Toplama tepsisinden korbiküler özel polenleri toplayın ve plastik torbalara veya santrifüj tüplerine yerleştirin, ardından buzlu bir soğutucuda saklayın. Temsili bir alt örnek olarak 10 gram polen çıkarmak için kepçeyi veya büyük bir kaşığı kullanın. Alt örneklemdeki tüm arı parçalarını ve kalıntılarını çıkarın, ardından gruplar arasında ayrım yapmak için hem polen rengini hem de dokuyu kullanarak 10 gramlık alt örneklemdeki her polen peletini bir renk grubuna ayırın.
Aşağı akış adımları için her renk grubunun en az 0,25 gramını sağlamak için, en az 0,25 gramlık bir renk grubu oluşturacak kadar bol olmayan peletleri çeşitli bir gruba yerleştirin. Pantone Renk Kılavuzu'nu kullanarak her bir renk grubunu ayrı ayrı adlandırın. Her renk grubundan 0,25 gram polen topağı tartın.
Uygun KKD'yi giyin. Daha sonra, 0.25 gram renk grubu polen içeren her bir mikrosantrifüj tüpüne yavaşça 500 mikrolitre buzul asidik asit ekleyin. Tüpü görsel olarak incelerken, poleni 10 ila 15 saniye boyunca temiz bir kürdan ile karıştırın.
Numuneyi 1.100 kez G'de üç dakika boyunca santrifüj edin, ardından süpernatantı asit atık kabına boşaltın. Asetoliz karışımını hazırlamak için, asetoliz karışımı etiketli behere 10.8 mililitre buzul asidik asit ekleyin. Daha sonra, stok çözeltisinden yavaşça 1.200 mikrolitre konsantre sülfürik asit ekleyin.
Her tüpe yavaşça 1.000 mikrolitre asetoliz karışımı ekleyin ve 10 ila 15 saniye boyunca temiz bir kürdan ile karıştırın. Numuneleri 80 santigrat dereceye kadar önceden ısıtılmış bir ısı bloğuna yerleştirin. Tüpleri beş dakika boyunca inkübe edin, her tüpü inkübasyonun yarısına kadar temiz bir kürdan ile iyice karıştırın.
Kuluçkadan sonra, her tüpe yavaşça 500 mikrolitre buzul asetik asit ekleyin ve 10 ila 15 saniye boyunca temiz bir kürdan ile karıştırın. Numuneleri santrifüj edin, ardından her tüpteki süpernatantı asit atık kabına boşaltın. Her tüpe 1.000 mikrolitre damıtılmış su ekleyerek ve temiz bir kürdan ile karıştırarak her numuneyi üç kez suyla durulayın.
Numuneleri santrifüj edin ve süpernatantı tüplerden sodyum bikarbonat kabına boşaltın. Ardından, su durulamalarını iki kez daha tekrarlayın. Her tüpe etanol kabından 1.000 mikrolitre% 95 etanol ekleyin ve temiz bir kürdan ile karıştırın.
Daha sonra, numuneleri santrifüj edin ve süpernatantı tüplerden etanol atık kabına boşaltın. Safranin-O leke suyu çözeltisini karıştırın ve her tüpe 5 ila 10 damla ekleyin. Bir kürdan ile 10 ila 15 saniye karıştırın ve kürdanı tüpün içinde bırakın.
Her tüpe etanol kabından 1.000 mikrolitre% 95 etanol ekleyin ve karıştırın. Numuneleri santrifüj ettikten sonra, süpernatantı etanol atık kabına boşaltın. Her tüpe 10 ila 15 damla gliserin ekleyin ve içeriği 10 ila 15 saniye karıştırın.
Etanolün ortam oda sıcaklığında en az iki saat buharlaştırılması için tüpleri duman davlumbazında açık bırakın. Polen tanımlaması için etiket mikroskobu slaytları. Bir tüp içinde bir damla polen kalıntısını çıkarın ve etiketli mikroskop slaytının ortasına yerleştirin ve damlanın hafifçe yayılmasına izin verin.
Slayttaki damlanın üzerine temiz bir kapak kayması yerleştirin ve kapak kaymasını şeffaf oje ile slayda kapatın. Tarif edilen yöntemler kullanılarak, korbiküler polenler toplandı, renge göre sıralandı ve polen çeşitliliğini değerlendirmek için her pelet renk grubunun bitki kaynakları belirlendi. Her polen toplama örneğinin birden fazla ayırt edilebilir renk grubu vardı.
Bazı örneklerde, polen renk grupları dört ila beş pelet kadar az içeriyordu. Bununla birlikte, çoğu grup önemli ölçüde daha fazlasına sahipti ve asetoliz için kendi etiketli renk grubu olarak görev yaptı. Asetolizden sonra, her bir renk grubunu, her çalışma alanını çevreleyen alandan toplanan kupon örneklerinin morfolojik özelliklerini doğrulayarak, mümkün olan en düşük taksonomik derecesine etkili bir şekilde tanımlamak için parlak alan ışık mikroskobu kullanıldı.
Badem mahsulü bölgelerinden toplanan polenler, diğer mahsullerden toplanan polenlerden nispeten daha düşük polen çeşitliliğine sahipti, saha başına 3.2 bitki taksonunda ortalama üç pelet rengine sahipti Sıralanmış polen, bal arısı yem bitkilerinde bulunan zirai kimyasalları aydınlatmak için pestisitler için test edilebilir veya bal arılarına besin değerini belirlemek için kimyasal bileşim için analiz edilebilir. Bu araştırmanın sonuçları, koloniler tarafından toplanan polenlerde gözlemlenen tür çeşitliliği hakkında değerli bilgiler sağladı ve badem kırpma sistemlerinde toplanan polenlerin önemli ölçüde düşük çeşitliliğini vurguladı.
