Zika ve Ebola virüsü gibi son salgınlarda yaşanan artış, küresel ölçekte daha koordineli ve çevik bir tepkiye duyulan ihtiyacı ortaya attı. Bunu başarmak için, bu tür salgınlar sırasında dünya çapında kaynak kısıtlı alanlarda kullanılmak üzere yenilikçi, ölçeklenebilir, iç modal laboratuvar ünitesi tasarladık. Burada iç-modal, genişletilebilir, mobil nakliye konteyner laboratuvarları satılmaktadır.
Aşağıdaki yazıda solunum yolu influenza virüsü tanısına BSL-2 ve BSL-3 yaklaşımımızı sıyoruz. RCT-PCR ile hızlı grip virüsü teşhisi. Kurulu laboratuvar ünitesine girmeye hazırlanmadan önce, tüm BSL-2 güvenlik gerekliliklerinin dikkate alınması gerektiğini unutmayın.
Buna uygun kişisel koruyucu ekipmanlarla giyinme, el yıkama, eldiven takma ve kullanmayı planladığınız çalışma alanlarını dezenfekte etmek dahildir. Unutmayın, çalışma alanı nızı ve malzemelerinizi dezenfekte etmek için çamaşır suyu kullanıyorsanız, çamaşır suyuna maruz kalan tüm alanları temizlemek için %70 etanol kullanmanız gerekir, çünkü çamaşır suyu zehirli dumanlar oluşturmak için çalışma alanındaki diğer kimyasallarla karışabilir. Tüm çamaşır suyu ürünlerini kendi belirlenmiş atık kutusuna atın.
Hastalardan numune örnekleri alındığında, tarla veya klinikten laboratuvar tesisine nakledilir ve geçiş penceresi üzerinden laboratuvar teknisyenine iletilir. Bu pencere her iki taraftan da açılamaz. BSL-2 geçiş penceresinde, numune içeren tüplerin dış yüzeyi tamamen çamaşır suyu ile dezenfekte edilmeli ve iki dakika boyunca tek başına bekletilmelidir.
Geçiş penceresini açın ve kaydedilecek örnekleri toplayın. Çamaşır suyu kalıntıları olan örnekleri silin ve geçiş penceresinin içini çamaşır suyuyla silin ve ardından %70 etanol çözeltisi. Her örnek tüpe barkod lar ve aliquots için belirlenmiş dört boş tüp ekleyin.
Örneklerinizi havalandırma kaputuna taşıyın. Her tüpteki barkodu tarayanın ve tablet tabanlı sistemde veya dizüstü bilgisayar ekranında uygun örnek tanımlama bilgilerinin göründüğünden emin olun. Kayıt işlemini tamamlayın.
Örnek aliquot. Test tüpleri etiketlendikten sonra, numunelerin aliquots almak için sertifikalı ve dekontamine sınıf II biyogüvenlik kabine kullanın. Aliquots çekerken her numune için taze steril veya tek kullanımlık pipetler kullandığınızdan emin olun ve çapraz kontaminasyonu önlemek için bunları biyolojik olarak tehlikeli atık kaplarına atın.
Her tüpün sıkıca kapatılmış ve kapalı olduğundan emin olun. Hemen ekstraksiyon için numune başına bir aliquot yararlanın. İleride kullanmak için dondurucuda başka herhangi bir aliquots saklayın.
İş istasyonuna geçmeden önce, tüm çalışma alanı yüzeylerini ve ekipmanları çamaşır suyu yla temizleyin ve ardından %70 etanol çözeltisi edin. Barkodlu PCR numuneleriniz aliquot yapıldıktan sonra bunları çıkarma için belirlenmiş bir iş istasyonuna taşıyın. Arabellek AVL taşıyıcı RNA karışımınızı lysis adımı için hazırlayın.
Örnek ve lysis tampon ana karışımı oda sıcaklığında tutulmalıdır. Etiket 1.5 mililitrelik santrifüj tüp. Pipet ucunu 560 mikrolitreye ayarlayın.
Temiz bir pipet ucu uygulayın. Her tüpe bir lysis tamponu ekleyin. Ucu atık kabına atın.
Ardından, PCR aliquot örneğini alın. Aliquot bir için belirlenen hazırlanmış lysis tampon tüpü içine yerleştirin ve herhangi bir ek örnekler için bu tekrarlayın. Eski pipet ucunu atın ve temiz bir pipet ucu uygulayın.
Temiz bir pipet ucu uygulayın. Kontrol tüpüne 140 mikrolitre tampon ekleyin. Her tüpü güvenli bir şekilde kapatın.
15 saniyelik nabız girdabı. Ek aliquots veya örnekler ile tekrarlayın. Her numuneyi beş saniye liğine mikrosantrifüj edin.
10 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya yatırın. 10 dakika sonra kısa bir süre her tüp kapağının içinden herhangi bir damla kaldırmak için tüpler santrifüj. Örnek bir etanol 560 mikrolitre ekleyin.
Pipet ucunu değiştir. Kalan veya ek örneklerle tekrarlayın. Her numune tüpünü güvenli bir şekilde kapatın.
Her numunede 15 saniye boyunca nabız girdabı. Numuneleri beş saniye liğine mikrosantrifüj edin. Temiz bir iki mililitrelik toplama tüpü elde edin.
Döndürme sütunlarını ekleyin. Örneklerinizi eşleşecek şekilde etiketleyin. Buna göre sütun maç için örnek 630 mikrolitre aktarın.
Kapaklarınızı emniyete ala. Santrifüje geç. Numunelerinizi santrifüjde eşit olarak dağıtın.
Bir dakika için 6000 g's centrifuge lysis tampon kaldırmak için. İş istasyonuna geri dönün. Toplama tüplerinizi değiştirin.
Kalan lysis arabelleği ekleyin ve santrifüj adımını tekrarlayın. Orijinal aliquot örnek tüplerinizi atın, bundan sonra, eluate atın ve tampon AW1 ile spin sütununu yıkayın. Bu yordamı her örnek veya ek numuneyle tekrarlayın.
Her numunenin kapaklarını ve santrifüjleri altı g'da sabitleyin. 20 g's ikinci yıkama tampon AW2 ile tekrarlayın. Son olarak, 1.5 mililitrelik temiz bir tüp içine sütun yerleştirin.
Sütunu açın ve 60 mikrolitre tampon AVE ekleyin. Örnek artık PCR analizi için hazırdır.
BSL-3 koşullarında deneysel protokol aynı kalacaktır, ancak güvenlik önlemleri her şeyden önce emsal teşkil edecektir. BSL-3 laboratuarına girmeden önce, torpido gözünde negatif basınç oluşturulduktan emin olmak için şeffaf pencereden bakın. Duvardaki top görünür olduğunda negatif basınç oluşturulduğunda açıkça ortaya çıkacaktır.
Negatif basınç oluşturulduktan sonra kapıyı açın ve üniteye girin. Hemen ellerinizi yıkayın ve sonra PPE kontrol listenize devam edin. Aşağıdaki sırayla PPE koyarak devam edin: eldiven altında, önlük, ayakkabı kapakları, maske, yüz kalkanı, eldiven ikinci çifti.
Makineyi açın ve torpido daki basıncın dengelenmesine izin verin. Torpido glovebox içinde ve dışında kullanmayı planladığınız tüm alanları ve malzemeleri dezenfekte etmek için bir çamaşır suyu spreyi çözeltisi kullanın. Herhangi bir çamaşır suyu atık ürünlerini sadece çamaşır suyu kabına atın.
Çamaşır suyu kullanılan tüm alanları temizlemek için %70 etanol çözeltisi kullanın. Örneklerinizi geçiş penceresinden aktarın. Numuneler çamaşır suyu çözeltisi ile püskürtülmeli ve BSL-3 ünitesinin içine girmeden önce geçişte en az bir dakika yalnız bırakılmalıdır.
Daha sonra, bsl-3 ünitesi içinde örnekleri almak ve kayıt ve etiketleme adımı devam etmeden önce iyice temizleyin. Numuneler kaydedildikten ve tüpler etiketlendikten sonra, numuneleri hava kilidi tepsisi aracılığıyla torpido glovebox'a yerleştirin. Her iki kapıyı da aynı anda açmayın.
Güvenlik önlemleri için her kapıyı iki farklı adımda açın ve kapatın. Numuneler güvenli bir şekilde torpido glovebox'ın iç lerine taşındıktan sonra, torpido kutusunda örnek aliquotoluşturmak için daha önce açıklandığı gibi aynı adımları izleyin. Numuneler aliquot edildikten sonra numuneleri hava geçirmez konteynerin içine taşıyın.
Tüpleri ve diğer tüm yüzeyleri dezenfekte etmek için eldiven kutusu içinde sprey çamaşır suyu çözeltisi. Beş dakika bekleyin ve sonra çamaşır suyu yıkamak için% 70 etanol çözeltisi uygulayın. Kapsamlı dekontaminasyondan sonra sadece PCR analizi için gereken numuneler eldiven kutusuna geri adım atın.
Torpido durumda sadece çıkarma işleminin lysis basamağa uygulayın. Hücreler lysed sonra, sıkıca her örnek kapakları mühür ve basınçlı hava kilidi geçit içine yerleştirin. Glovebox'ı tekrar çamaşır suyu ve ardından %70 etanol çözeltisi ile dezenfekte edin.
Örnekleri torpido glovebox'tan çıkarıp çıkarma işleminin kalan adımları için iş istasyonuna aktarın. Çıkarma işleminden sonra numunelerinizi PCR analizi için geçiş penceresine aktarın. Numuneler alınıp aktarıldıktan sonra, laboratuvar çalışma alanınızı torpido glovebox'ın dışına dekontamine edin.
PPE'nizi çıkarmadan önce, PPE'nizi çıkarmaya başlamadan önce birimdeki hava sirkülasyonunun uygun sayıda filtreleme döngüsüne güvenli bir şekilde ulaşmasını bekleyin. PpE atık kabına tüm PPE'yi çıkardıktan ve attıktan hemen sonra, üniteden çıkmadan önce laboratuvar lavabosunda ellerinizi sabun ve suyla yıkamaya devam edin. PCR amplifikasyon ve algılama.
Çıkarılan RNA örneklerini geçiş penceresinden çıkarın. Su, astar ve problar, saldırı karışımı ve 2X tampon: her hedefli tsay için aşağıdaki bileşenleri ile 1,5 mililitrelik bir tüp içinde bir ana karışımı hazırlayın. Girdap ve ana karışımı spin, sonra, şerit tüplerher içine ana karışımı aliquot.
PcR kitini, ana karışım hazırlandıktan sonra önerilen sıcaklıklarda depolamaya geri döndürün. Her şerit tüpü arasında ayrı bir ipucu kullanarak şerit tüplerin her örnekleri ekleyin. Numuneleri 1, 500 rpm'de bir dakika döndürün ve ardından numuneler gerçek zamanlı PCR ünitesine yüklenmeye hazırdır.
Numuneler PCR cihazına yüklendikten sonra, bir çalıştırmanın tamamlanması yaklaşık 90 dakika sürer. Gerçek zamanlı PCR testi virüsün sağlam tespiti için hassas bir yöntemdir. Bu tabloetiketli görülebilir:PCR Analiz Sonuçları.
Sonuçlarınızı toplamadan ve laboratuvardan ayrılmadan önce PPE'yi çıkarın ve bir sonraki tanı testine hazırlanmak için her iş istasyonunu yeterli şekilde dezenfekte edin. Temsili sonuçlar. Laboratuvar iş akışı, kişisel korumayı vurgulayan diyagramda temsil edilir.
Grip hızlı tanı testi RT-PCR analizi ile gerçekleştirilir. Yordam dört ana adımdan oluşur ve protokolün her aşaması için ayrı çalışma alanları atanır. Bu projenin amacı, modüler hızla konuşlandırılabilen yeni bir laboratuvar tesisini doğrulamak ve bunu başarıyla yapmakta ve salgın lar ve salgınlar sırasında düşük kaynak lı ortamlarda çalışan laboratuvar personeli için eğitim programları geliştirmektir.
