Vitro Denetim konsantrasyonları kültürlü alveoler epitel hücrelerdeki halojenlenmiş gazların yöntemi

Bu yöntem, akut solunum sıkıntısı sendromu için potansiyel yeni tedaviler olarak halojenli yardımcı test gibi akciğer hasarı ve onarım araştırma alanında anahtar soruya cevap yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, hücreleri kültüre almak ve kesin ve kontrollü konsantrasyonlara ulaşmak için halojenli ajanlara maruz bırakmak için çok basit bir yönteme dayanmasın. Hava geçirmez oda inşa etmek için, 6,5 litre kapasiteli bir hermetik polipropilen kutu kullanın.

Kutunun yan duvarının alt tarafında 2,5 santimetre çapında bir delik açın. Sonra gaz hava karışımı giriş borusu olarak hizmet verecek yeşil bir işareti ile oluklu bir tüp takın. Ve silikonla mühürle.

Daha sonra, karşı lateral duvarın üst tarafında 2,5 santimetre çapında ikinci bir delik matkap. Kırmızı bir işaret ile başka bir oluklu tüp yerleştirin ve gaz hava karışımı çıkış borusu olarak hizmet verecek bir kömür filtresi ile bağlayın. Sonra silikon ile mühür.

Daha sonra duvarın merkezinde dört milimetre çapında sıkı bir delik matkap. Dönen bir erkek yem kilidi ile bir manifoldu bağlı kısa infüzyon boru ekleyin. Bir gaz analizörüne takın ve silikonla kapatın.

Daha sonra hava geçirmez odanın içine dijital bir termometre yerleştirin. Bir laboratuvar çıkarıcı başlık altında, karbondioksit ile azot oksit gaz hattı geçmek için bir anestezik makine devresi özelleştirin. Gaz akışı karışımını yaklaşık 37 santigrat dereceye ısıtmak için anestezi makinesi ile hava geçirmez oda arasındaki boruya ısıtılmış bir nemlendirici yerleştirin.

Hava geçirmez hazneyi yeşil işaretli oluklu tüple özelleştirilmiş anestezik makine devresine takın. Daha sonra, 37 santigrat dereceye ayarlanmış bir sıcak plaka üzerine hava geçirmez oda yerleştirin. Hava geçirmez haznesine insan alveolar epitel hücrelerini içeren altı kuyuluk plakası yerleştirin ve kapağı kapatın.

Co2'nin %5'ini hızlı bir şekilde elde etmek için gaz akış hızını düzenleyin. Sonra halojenli ajan evaporatör açın ve istenilen yüzdeyi ayarlayın. Hedef değerlere ulaşıldıktan sonra, taze gaz akış hızını dakikada bir litreye düşürün.

Hava geçirmez hazne, deney için gerekli olduğu sürece bu gaz akış hızı ile korunabilir. Orta daki sevofluran ve isofluran emzit konsantrasyonlarının dersleri zaman içinde benzerdi. Halojenli ajanın gerekli konsantrasyonu ayarlandıktan hemen sonra, konsantrasyonlar ilk saat içinde yükseldi.

Daha sonra halojenli ajanın yönetimi durdurulana kadar devam eden bir platoya ulaşıldı. Yönetim kesintisinden sonra konsantrasyonlar bir saat içinde azaldı. Burada gösterilen gaz analizörü tarafından ölçülen hava geçirmez odasında zaman içinde halojenli ajan fraksiyonları vardır.

Bu prosedür nispeten ucuz ve araştırmacılar daha önce hava geçirmez bir oda manipüle hiç olsa bile benimsenmesi çok kolay. Bu prosedürü takiben, epitel akciğer hasarı sırasında halojenli ajanların spesifik etkileri ve çözünürlüğü ile ilgili soruları yanıtlamak için protein ve RNA nicelliği, immünfloresans, protein geçirgenliği ölçümü ve serbest taşıma gibi diğer yöntemler de uygulanabilir. Bu teknik, gelişiminden sonra ARDS sırasında epitelyal akciğer hasarına neden olan mekanizmayı daha fazla incelemek ve yeni tedavileri test etmek için akut solunum sıkıntısı sendromu alanında araştırma yapmanın önünü açabilir.