In Vitro Método de controle de concentrações de Gases halogenados em culturas de células epiteliais alveolares

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo de pesquisa de lesões pulmonares e reparos, como testar adjunta halogenada como potenciais terapias novas para síndrome de angústia respiratória aguda. A principal vantagem dessa técnica é que ela conta com um método muito simples para cultivar as células e expô-las a agentes halogenados, a fim de alcançar concentrações precisas e controladas. Para construir a câmara hermética, use uma caixa de polipropileno hermético com capacidade de 6,5 litros.

Faça um buraco de 2,5 centímetros de diâmetro na parte inferior da parede lateral da caixa. Em seguida, insira um tubo ondulado com uma marca verde que servirá como o tubo de entrada da mistura de ar a gás. E selá-lo com silicone.

Em seguida, faça um segundo furo com um diâmetro de 2,5 centímetros na parte superior da parede lateral oposta. Insira outro tubo ondulado com uma marca vermelha e conecte-o com um filtro de carvão que servirá como tubo de saída da mistura de ar a gás. Em seguida, sele-o com silicone.

Posteriormente, faça um furo apertado com um diâmetro de quatro milímetros no centro da parede. Insira a tubulação de infusão curta que está conectada em um coletor com uma trava de isca masculina rotativa. Conecte-o a um analisador de gás e sele-o com silicone.

Em seguida, coloque um termômetro digital dentro da câmara hermética. Sob uma capa extrator de laboratório, personalize um circuito de máquina anestésico para mudar a linha de gás óxido nitroso por dióxido de carbono. Insira um umidificador aquecido no tubo entre a máquina anestésica e a câmara hermética para aquecer a mistura de fluxo de gás a aproximadamente 37 graus Celsius.

Conecte a câmara hermética com o tubo de corrugado verde marcado no circuito da máquina anestésico personalizada. Em seguida, coloque a câmara hermética em uma placa quente definida para 37 graus Celsius. Coloque uma placa de seis poços contendo células epiteliais alveolares humanas na câmara hermética e sele a tampa.

Regular a taxa de fluxo de gás para obter rapidamente 5% de CO2. Em seguida, abra o evaporador do agente halógeno e ajuste a porcentagem desejada. Uma vez alcançados os valores-alvo, reduza a vazão de gás fresco para um litro por minuto.

A câmara hermética pode ser mantida com essa vazão de gás o tempo necessário para o experimento. Os cursos das concentrações de sevoflurano e isoflurano no meio foram semelhantes ao longo do tempo. Imediatamente após a concentração necessária de agente halogenado ser definida, as concentrações aumentaram ao longo da primeira hora.

Foi então alcançado um planalto que persistiu até que a administração do agente halogenado foi interrompida. Após a interrupção da administração, as concentrações diminuíram em uma hora. Aqui são mostradas as frações de agente halogenado ao longo do tempo na câmara hermética medida pelo analisador de gás.

Este procedimento é relativamente barato e muito fácil de adotar mesmo quando os pesquisadores nunca manipularam uma câmara hermética antes. Após esse procedimento, outros métodos como quantificação de proteínas e RNA, imunofluorescência, medição da permeabilidade proteica e transporte livre podem ser realizados a fim de responder a perguntas sobre os efeitos específicos dos agentes halogenados durante a lesão pulmonar epitelial e sua resolução. Após seu desenvolvimento, essa técnica pode abrir caminho para pesquisas no campo da síndrome do desconforto respiratório agudo para estudar melhor o mecanismo envolvido na lesão pulmonar epitelial durante a ARDS e testar novas terapias.