이 프로토콜은 Langendorff 장치를 사용하여 장기 심실 세동 쥐 모델을 개발하기 위한 자세한 요구 사항을 제공합니다. 그것은 작은 동물 모델에서 장기 심실 세동의 간격을 채 웁니다. 기술은 간단하고 경제적이며 반복 가능하고 안정적입니다.
이 기술은 심장 수술 세션 및 수술 분야의 특정 임상 상황에서 수행되는 관류 하의 심실 세동 정지 연구에 사용될 수 있습니다. 시작하려면 증류수에 118 밀리몰 염화나트륨, 4.7 밀리몰 염화칼륨, 1.2 밀리몰 염화마그네슘, 1.2 밀리몰 인산이수소나트륨, 1.8 밀리몰 염화칼슘, 25 밀리몰 중탄산나트륨, 11.1 밀리몰 포도당 및 0.5 밀리몰 EDTA를 증류수에 첨가하여 Krebs-Henseleit 또는 KH 완충액을 준비합니다. 그런 다음 수정된 Langendorff 관류 시스템을 준비합니다.
약 80mm의 수은 압력에서 95% 산소 및 5% 이산화탄소로 KH 완충액이 들어 있는 플라스크에 지속적으로 가스를 공급합니다. 관류 튜브의 한쪽 끝을 KH 버퍼에 넣고 관류 튜브의 중간을 수조에 통과시킨 다음 관류 튜브의 다른 쪽 끝에 뭉툭한 20게이지 바늘을 부착합니다. 와이어 스탠드에 바늘을 매달아 놓은 후 관류 시스템 끝에서 KH 버퍼의 온도가 섭씨 37도가되도록 수조의 온도를 조정합니다.
생리학적 신호 레코더를 사용하여 모든 아날로그 신호를 디지털화하고 기록할 수 있습니다. 두 개의 스테인리스 스틸 바늘 전극을 사용하여 양극성 심전도 또는 ECG를 기록하고 전기 자극을 위해 두 개의 스테인리스 스틸 바늘 전극을 사용합니다. 4개의 전극 중 한쪽 끝을 생리적 신호 기록기에 연결하고 다른 쪽 끝을 장치에 부착한 후 심장이 위치할 영역에 가깝게 연결합니다.
그런 다음 랩톱 소프트웨어를 사용하여 양극성 ECG 및 혈역학적 매개변수를 자동으로 인식, 조정 및 기록합니다. 전기 자극기 매개변수를 저전압 그룹이 30볼트를 수신하고 고전압 그룹이 2볼트를 수신하는 6Hz 교류로 설정합니다. 자궁 경부 절제술과 기관 삽관 후 인공 호흡기에 연결된 마취 된 쥐를 가지고 톱니 겸자로 xiphoid 과정에서 피부를 들어 올리고 조직 가위로 피부에 3 센티미터의 가로 절개를합니다.
피부와 갈비뼈 절개 부위를 V자 모양으로 양쪽 겨드랑이까지 확장합니다. 무딘 절개를 사용하여 상완 간부 줄기를 주변 조직에서 분리하십시오. 그런 다음 심장의 제거를 용이하게하기 위해 구부러진 집게로 상완 뇌 줄기를 고정하십시오.
즉시 섭씨 0도에서 4도까지 KH 완충액이 든 페트리 접시에 심장을 담그고 잔류 혈액을 씻어내고 펌핑합니다. 심장을 두 번째 페트리 접시로 옮깁니다. 중복 조직을 잘라내고 대동맥을 확인하십시오.
두 개의 안과용 집게를 사용하여 대동맥을 들어 올리고 대동맥을 Langendorff 장치의 무딘 바늘에 삽입합니다. 그런 다음 조수의 도움을 받아 0 봉합사로 매듭을 묶습니다. 관류 유량 조절기를 켭니다.
승모판을 통해 풍선을 좌심실로 밀어 넣습니다. 풍선을 증류수로 채워 이완기 말 수은압을 5-10mm로 만듭니다. ECG와 전기 자극 전극을 심장에 연결합니다.
섭씨 37도로 유지되는 재킷 유리 챔버의 중앙에 심장을 놓습니다. 챔버 내부에서 심장이 20분 동안 평형을 이루도록 합니다. 그런 다음 수조 온도를 조정하여 재킷 유리 챔버 내의 온도를 섭씨 30도로 유지합니다.
온도가 원하는 수준에 도달하면 랩톱 소프트웨어의 전기 자극 스위치를 활성화하십시오. 동물이 지속적으로 자극되는 장기 심실 세동 또는 VF 그룹의 일부인 경우 90 분 동안 전기 자극을 허용하십시오. VF 90분 후 전극을 사용하여 0.1줄의 직류 제세동을 제공합니다.
동시에, 수조 온도를 조절하여 재킷 유리 챔버 내의 온도가 섭씨 37도까지 10분 동안 천천히 상승할 수 있도록 합니다. 제세동 후 심장이 60분 동안 뛰도록 한 다음 약 섭씨 37도에서 10% 염화칼륨으로 천천히 관류하여 박동을 멈춥니다. 크레아틴 키나아제 또는 CK-MB 분석 및 조직학적 분석을 위해 심장을 제거합니다.
VF의 비율, 제세동의 성공률 및 VF 모델의 성공률이 여기에 표시됩니다. Group LC와 Group HC는 지속적인 전기 자극을 받아 VF가 100% 성공률로 발생했습니다. 그러나 그룹 HC는 제세동 성공률이 낮았습니다.
5분 후에 전기자극을 끈 LI군과 HI군은 VF 비율이 달랐으나 LC군과 HC군에 비해 두 그룹 모두 VF 비율이 더 느렸다. 그룹 LC와 그룹 LI 모두 제세동 성공률이 더 높았습니다. 그러나 전반적으로 그룹 LC는 모델 성공률이 가장 높았고 그룹 LI는 모델 성공률이 낮았습니다. 심박수 또는 HR, 관상 동맥 흐름 또는 CF, 좌심실 압력 차이 또는 LVPD 회복률이 여기에 표시됩니다.
그룹 C의 혈역학은 실험 동안 안정적으로 유지되었으며 HR, CF 및 LVPD에서 약간의 감소를 보였습니다. 저전압 유도 VF를 가진 두 그룹은 유사한 성능과 우수한 회복률을 보였습니다. HR과 LVPD는 그룹 C에 비해 이들 그룹에서 유의한 차이가 없었지만 CF의 회복률은 그룹 C.In 보다 유의하게 우수했으며, 고전압으로 유도된 두 그룹의 혈역학적 회복률은 장기 VF로 유도되지 않았고 고전압 연속 자극 장기 VF 그룹은 최악의 회복률을 보였다.
관상동맥 삼출액의 분석은 CK-MB 수준이 두 고전압 그룹 모두에서 더 높은 것으로 나타났습니다. 두 저전압 그룹 사이에는 차이가 발견되지 않았으며, 그룹 C.헤마톡실린 및 에오신 염색은 그룹 HC에서 전극 연소 영역을 나타냈다. 이 프로토콜은 심실 세동 정지 및 심혈관 수술의 관류와 관련된 연구에 적합합니다.
