Questo protocollo fornisce una necessità dettagliata di sviluppare un modello di ratto di fibrillazione ventricolare a lungo termine utilizzando l'apparato di Langendorff. Riempie il divario della fibrillazione ventricolare a lungo termine nel modello di piccolo animale. Il tecnico è semplice, economico, ripetibile e stabile.
Questa tecnica può essere utilizzata nello studio dell'arresto della fibrillazione ventricolare sotto perfusione che viene eseguito in determinate situazioni cliniche nel campo delle sessioni e delle operazioni di cardiochirurgia. Per iniziare, preparare il tampone Krebs-Henseleit o KH aggiungendo 118 millimolari di cloruro di sodio, 4,7 millimolari di cloruro di potassio, 1,2 millimolare di cloruro di magnesio, 1,2 millimolare di sodio diidrogeno fosfato, 1,8 millimolare di cloruro di calcio, 25 millimolare di bicarbonato di sodio, 11,1 millimolare di glucosio e 0,5 millimolare EDTA in acqua distillata. Quindi preparare il sistema di perfusione Langendorff modificato.
Gassare continuamente il pallone contenente tampone KH con il 95% di ossigeno e il 5% di anidride carbonica ad una pressione di circa 80 millimetri di mercurio. Posizionare un'estremità del tubo di perfusione nel tampone KH, far passare il centro del tubo di perfusione attraverso il bagno d'acqua e collegare un ago smussato da 20 gauge all'altra estremità del tubo di perfusione. Dopo aver sospeso l'ago su un supporto di filo, regolare la temperatura del bagno d'acqua in modo che la temperatura del tampone KH dall'estremità del sistema di perfusione sia di 37 gradi Celsius.
Utilizzare un registratore di segnali fisiologico per digitalizzare e registrare tutti i segnali analogici. Utilizzare due elettrodi ad ago in acciaio inossidabile per registrare un elettrocardiogramma bipolare o ECG e due elettrodi ad ago in acciaio inossidabile per la stimolazione elettrica. Collegare un'estremità dei quattro elettrodi al registratore di segnali fisiologici e l'altra estremità vicino all'area in cui verrà posizionato il cuore dopo il collegamento all'apparecchio.
Quindi, utilizzare il software del laptop per riconoscere, regolare e registrare automaticamente i parametri ECG ed emodinamici bipolari. Impostare i parametri dello stimolatore elettrico su corrente alternata a 30 hertz con il gruppo di bassa tensione che riceve 2 volt e il gruppo ad alta tensione che riceve 6 volt. Con il ratto anestetizzato collegato a un ventilatore dopo la dissezione cervicale e l'intubazione tracheale, sollevare la pelle dal processo xifoideo con una pinza dentata e fare un'incisione trasversale di tre centimetri nella pelle con forbici di tessuto.
Estendi la pelle e le incisioni costali alle ascelle su entrambi i lati a forma di V. Utilizzare la dissezione smussata per separare il tronco brachiocefalico dal tessuto circostante. Quindi bloccare il tronco brachiocefalo con una pinza curva per facilitare la rimozione del cuore.
Immergere immediatamente il cuore in una capsula di Petri con tampone KH da 0 a 4 gradi Celsius per lavare e pompare fuori il sangue residuo. Trasferire il cuore in una seconda capsula di Petri. Tagliare il tessuto ridondante e identificare l'aorta.
Utilizzare due pinze oftalmiche per sollevare l'aorta e inserire l'aorta nell'ago smussato dell'apparato di Langendorff. Quindi, con l'aiuto di un assistente, legare un nodo con un filo di sutura 0. Accendere il regolatore di flusso di perfusione.
Spingere il palloncino attraverso la valvola mitrale nel ventricolo sinistro. Riempire il palloncino con acqua distillata per ottenere una pressione diastolica finale da 5 a 10 millimetri di mercurio. Collegare l'ECG e gli elettrodi di stimolazione elettrica al cuore.
Posizionare il cuore al centro della camera di vetro incamiciata mantenuta a 37 gradi Celsius. Lasciare che il cuore si equilibri per 20 minuti all'interno della camera. Quindi regolare la temperatura del bagno d'acqua per mantenere la temperatura all'interno della camera di vetro incamiciata a 30 gradi Celsius.
Dopo che la temperatura ha raggiunto il livello desiderato, attivare l'interruttore di stimolazione elettrica sul software del laptop. Se l'animale fa parte della fibrillazione ventricolare a lungo termine continuamente stimolata o del gruppo VF, consentire 90 minuti di stimolazione elettrica. Dopo 90 minuti di VF, utilizzare elettrodi per fornire 0,1 joule di defibrillazione a corrente continua.
Contemporaneamente, regolare la temperatura del bagno d'acqua per consentire alla temperatura di salire lentamente all'interno della camera di vetro incamiciata a 37 gradi Celsius per 10 minuti. Dopo la defibrillazione, lasciare battere il cuore per 60 minuti e poi interrompere il battito mediante perfusione lenta con cloruro di potassio al 10% a circa 37 gradi Celsius. Rimuovere il cuore per la creatina chinasi o il test CK-MB e l'analisi istologica.
I tassi di VF, il tasso di successo della defibrillazione e il tasso di successo del modello VF sono mostrati qui. Il Gruppo LC e il Gruppo HC hanno ricevuto una stimolazione elettrica continua e quindi la VF si è verificata con un tasso di successo del 100%. Ma il gruppo HC ha dimostrato tassi di successo più bassi per la defibrillazione.
Il gruppo LI e il gruppo HI in cui la stimolazione elettrica è stata disattivata dopo cinque minuti avevano tassi diversi di VF, ma il tasso di VF era più lento in entrambi i gruppi rispetto al gruppo LC e al gruppo HC. Sia il Gruppo LC che il Gruppo LI hanno avuto migliori tassi di successo della defibrillazione. Ma nel complesso, il Gruppo LC ha avuto il più alto tasso di successo del modello, mentre il Gruppo LI ha avuto un tasso di successo del modello inferiore. La frequenza cardiaca o FC, il flusso coronarico o FC e la differenza di pressione ventricolare sinistra o i tassi di recupero LVPD sono mostrati qui.
L'emodinamica del gruppo C è rimasta stabile durante l'esperimento e ha mostrato una leggera diminuzione di HR, FC e LVPD. I due gruppi con VF indotta a bassa tensione avevano prestazioni simili e un buon tasso di recupero. L'HR e LVPD non erano significativamente diversi in quei gruppi rispetto al Gruppo C.Ma il tasso di recupero della FC era significativamente migliore rispetto al Gruppo C.In al contrario, il tasso di recupero emodinamico dei due gruppi con alta tensione indotta a VF a lungo termine era scarso e il gruppo VF a lungo termine continuamente stimolato ad alta tensione mostrava il peggior tasso di recupero.
L'analisi dei fluidi di versamento coronarico ha mostrato che i livelli di CK-MB erano più alti in entrambi i gruppi ad alta tensione. Non sono state riscontrate differenze tra i due gruppi a bassa tensione e la colorazione del gruppo C.La colorazione con ematossilina ed eosina ha mostrato una regione di bruciatura dell'elettrodo nel gruppo HC. Questo protocollo è adatto per lo studio relativo all'arresto della fibrillazione ventricolare e alla perfusione in chirurgia cardiovascolare.
