Name: partial lobular hepatectomy: a surgical model for morphologic liver regeneration
Uploaded: 2018-05-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
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우리 감사 피 추 H & E와 조직학; C. 왕 및 유용한 토론에 대 한 A. 맥. 연구는 암 연구에 대 한 버지니아와 D. K. 루드비히 기금에서 자금을 통해 지원 되었다 국가 심 혼, 폐, 혈액 연구소 (R01HL058770 및 U01HL099999); 그리고 캘리포니아 연구소의 재생 의학 (RC1 00354) 보조금 I.W. 승 하는 인간 프론티어 과학 프로그램 경력 개발 상 (CDA00017), 독일 연구 재단 (RI 2787/1), Siebel 줄기 세포 연구소에 의해 지원 되었다 그리고 토마스 고 스테이 시 Siebel 재단 (1119368-104-GHBJI). J.M.T.는 새로운 미국인을 위한 NIH (T32GM007365), 국가 연구 봉사 상 (1F30DK108561), 그리고 바울과 데이지 소로 스 장학금에 의해 지원 되었다.

모든 동물 실험 평가 및 인증의 실험실 동물 케어 인터내셔널 (AAALAC) 및 스탠포드 대학 행정 패널 실험실 동물에 대 한 협회에 의해 명시 된 지침에 따라 실시 했다 케어 (APLAC), (프로토콜 번호 #10266) 미국, 또는 유럽 동물 복지 행위, 지침 2010/63/유럽에서. 프로토콜과 정부 바바리아, 독일의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 더 허가 받았다: 55.2-1-54-2532-150-2015.
1. 동물 준비
<ol><li>생리대에 적절 한 침구와 빈 케이지를 준비 합니다.</li>
	<li>장갑과 동물을 만지고, 전에 어머니의 침구는 장갑에 문질러.</li>
	<li>빈으로 그들의 어머니와 장소에서 모든 강아지를 제거 합니다. 어머니의 침구의 일부를 제거 하 고 강아지와 함께 빈 감 금 소에.</li>
	<li>외과 분야에서 별도 깨끗 하 고 건조 장에 어머니를 놓습니다.</li>
	<li>외과 분야 준비 전에 돈 새로운, 깨끗 한 멸 균 장갑.</li>
</ol>2. 외과 분야 준비
<ol><li>10 mL 피 펫을 사용 하 여, 10 cm 배양 접시를 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)의 10 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>10 cm 배양 접시에 betadine 또는 반 발효 솔루션의 2 개 mL 플라스틱</li>
	<li>외과 분야에 해 범위를 놓습니다. 해 부 범위 램프 켜고 외과 의사의 편안 함에 빛의 레벨을 조정. 강아지 해 범위 램프 아래 수술 필드에 배치할 수 있습니다. 강아지의 복 부 표면에 그림자의 부재에 의해 적절 한 빛을 확인할 수 있습니다.</li>
	<li>Isoflurane 마 취 챔버 준비 ( 재료의 표참조) 코 콘. 챔버는 소변 또는 대변의 증거 없이 청소 되어야 한다. 외과 분야에서 해 범위에서 코 콘과 연결 된 튜브를 놓습니다. 산소와 isoflurane 원뿔을 전적으로의 흐름을 전환 하 고</li>
	<li>약 37 ° c.에가 열 패드와 함께 수술 복구 영역 준비 수술 복구는 난방 패드 위에 거 즈의 4 조각으로 이루어져 있어야 한다. 만약에 가능 하다 면, 어머니의 침구, 대변, 및 소변 어머니의 향기를 보존 하기 위해 거 즈 패드를 문질러. 참고: 그것은 경솔한 열 램프를 사용 하 여 온도 제어 하기 어렵습니다. 높은 온도 신생아 쥐의 죽음에서 발생 합니다.</li>
	<li>준비 하 고 압력솥으로 모든 수술 기구를 소독. 필요한 도구를 포함: 마이크로 해 부가 위, 집게를 마이크로 해 부, 거 즈, hemostat, 및 어떤 6-0 monofilament 비 흡수 봉합 사. 수술 악기 모든 유리 구슬 소독 기를 resterilzed 될 수 있습니다.</li>
</ol>3. 부분 Lobular Hepatectomy
<ol><li>그것의 다시 그리고 부드럽게 녹화 장소에는 손과 발에 코 콘에 그것을 배치 하 여 강아지를 anesthetize. 강아지 산소 5 %isoflurane 받게 될 해야 합니다.<ol>
<li>발가락 꼬 집 음 시험에 의해 확인 될 수 있는 5 분 또는 때까지 적절 하 게 취, 앉아 강아지를 허용 합니다.</li>
		<li>절 개 전에 피하 carprofen의 5 mg/kg을 주사. 참고: 전체 수술이 해야한다 더 이상 보다 30 분 가난한 결과 신생아 30 분 이상 전신 마 취 아래에서 관찰 될 수 없습니다. 주의 필드에 철저 한 준비를 통해 수술의 길이 봉합 유발 피부 눈물을 최소화 하기 위해 폐쇄 전에 피부 젖 음을 최소화 하기 위해.</li>
	</ol>
</li>
	<li>부드럽게 betadine와 젖은 작은 거 즈 패드와 후부 복 벽을 청소. 1 분 동안 건조 betadine 허용.</li>
	<li>마이크로 해 부가 위 집게와 바로 흉 곽 아래 왼쪽된 중간 clavicular 0.5 c m 절 개를 확인 합니다. 부드럽게 집게를 사용 하 여 피부를 분리 하 고 두 번째 깊은 절 개 복 막 구멍 (참조 그림 1 c, 왼쪽과 가운데)에</li>
	<li>부드럽게 복 막 구멍에서 왼쪽된 엽의 꼭대기를 강제로 뒤로, 마이크로 해 부가 위, 집게의 무뚝뚝한 끝을 사용 하 여 복 부의 양쪽에서 옆 압력을 적용. 왼쪽된 엽의 왼쪽된 꼭대기 해야 쉽게 시각된 (그림 1C, 오른쪽).</li>
	<li>
정점에서 절단 하 고 제거할 조직의 양을 무게.
	<ol>
<li>마이크로 해 부가 위를 사용 하 여 부드럽게 원하는 양의 왼쪽된 엽의 꼭대기에서 조직 절단.</li>
		<li>장소는 1.5 mL 튜브에 절단된 조직 PBS 가득합니다. 분석 균형을 사용 하 여 절단된 조직 무게 ( 재료의 표참조). 참고: 균형에서 거 즈 또는 종이의 조각을 놓고 그것을 포장. 그런 다음 절단된 조직 거 즈 또는 종이에 놓고 질량을 측정 합니다.</li>
		<li>드라이 아이스 냉동된 섹션 분석을 통해 최적의 절삭 온도 (10 월) 화합물에 1 시간 실 온에서 2 %paraformaldehyde 절단된 지역 및 장소를 수정. 모든 표준 cryostat를 사용 하 여 절단 7-10 µ m 섹션에서 얼어붙은 섹션을 분석 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>부드럽게 장착 사용 하 여 거 즈의 압 연된 조각, 복 막 구멍 왼쪽된 엽. 출혈이 중지까지 구멍에 거 즈를 둡니다.</li>
	<li>거 즈를 제거 하 고 젖은 외과 사이트와 주변 지역 PBS로 적셔 거 즈로.</li>
	<li>6-0 monofilament 외과 사이트, 실행 스티치와 비 흡수 봉합을 닫습니다. 복 막과 피부는 별도로 마감 한다. 참고: PBS로 적셔 거 즈로 피부를 부드럽게 일로 봉합 유도 눈물 최소화할 수 있습니다.</li>
	<li>부드럽게 하지만 철저 하 게 PBS와 젖은 거 즈로 강아지를 깨끗 하 고 아무 혈액 또는 betadine 남아 보장. 젖은 거 즈 패드를 롤 하 고 어떤 혈액 또는 betadine 청소 상처 기호에 부드럽게 문질러. 참고: 이것은 그들이 부적당 하 게 청소 하는 경우 어머니는 새끼를 빼어 수 있습니다 특히 중요입니다.</li>
	<li>코 콘에서 강아지를 제거 하 고 어머니의 대변과 소변에 노출 거 즈 패드를 포함 하는 복구 영역에 배치. 일단 강아지 복구, 어머니의 침구와 빈 감 금 소에 강아지를 교체 합니다. 참고: 열 램프를 사용 하지 마십시오. 열 램프를 사용 하 여 과열 신생아를 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>강아지의 원하는 수에 절차를 반복 합니다. 모든 강아지를 사용할 수 있지만 일반적으로 운영된 강아지 함께 교체에 운영 하지 않는 몇 가지 새끼를 두고 적당 하다.</li>
	<li>어머니의 감 금 소에 있는 그들의 어머니의 침구와 동시에 모든 새끼를 교체 합니다.</li>
</ol>4. 복구 및 분석
<ol><li>
후속 쥐에 매일.
	<ol>
<li>상처 폐쇄 남아 확인 하 고 있는 경우 모든 죽은 새끼를 제거.</li>
		<li>상처는 다시, 이전 기술, 및 반복 단계 3.8 3.12로 외과 사이트 및 복구 영역을 준비 합니다.</li>
		<li>Carpofen 피하 24 및 48 h 절차의 5 mg/kg을 주사.</li>
		<li>56 일 이상 새끼를 따릅니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>이산화탄소 (CO2) 노출 및 자 궁 경부 전위에 의해 원하는 양의 수술 일 후 동물을 안락사.<ol>
<li>유도에 마우스를 놓습니다 / 안락사 챔버와 마우스까지 CO2 차례 호흡을 중지.</li>
		<li>자 궁 경부 전위에 의해 안락사를 확인 합니다. 앞-손가락 및 엄지를 사용 하 여 마우스의 등 쪽 목에 밀어 하 고 꼬리에 다른 손을 사용 하 여, 풀 다운.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
전체 간 일괄적 으로 제거 하 고 그것의 무게.
	<ol>
<li>신중 하 게 각 엽 하 고 별도로 무게 합니다. 참고: 조심 해 부 횡 경 막과 키 모 포털 혈관의 여 간을 제거 합니다. 신중 하 게 각 엽 근 위 첨부 파일에서을 해 부하 여 서로 돌출부를 구분 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>전체 간의 질량에 절단된 왼쪽된 엽의 질량을 비교 하 여 중생의 범위를 결정 합니다. 손상 되지 않은 왼쪽된 엽 전체 간의 대략 30% 이다.</li>
</ol>

<ol>
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저자 아무 공개 있다.

급성 간 상해는 전통적으로 화학 (아 세트 아미노 펜, 에탄올, 사염화 탄소), 또는 외과 모델 (70% 부분 hepatectomy)를 사용 하 여 연구 되었습니다. 재생 반응 후 70% 부분 hepatectomy 글로벌 hepatocyte 비 그리고 세포 분열4,5의 여러 라운드 특징 되었습니다. 그러나 출혈을 중지 하,이 모델은 제한으로 주요 혈관 재생에 대 한 비정상적인 환경을 떠나 출혈 해야 합?...

기관를 다시 생성 하거나 복원 하는 형태와 기능, 능력 주로 진화 시간이 지남에 손실 될 생각 되었다. 급성 화학 또는 물리적 손상 후 성인 포유류 간의 재생 잠재력 비 대의 파도 세포 분열, 작동 하지만에서 결과의 몇 라운드에서 발생 하는 모든 나머지 hepatocytes의 동원을 포함 발견 되었습니다. 구조적으로 다른 장기1,2,3,,45. 최근, 연구 특성화 생활6,,78의 첫 번째 주 내에서 부상 신생아 포유류 장기의 재생 반응 하기 시작 했다. 이러한 연구 신생아 개발 하는 동안 부상 때 특정 포유류 장기 보상 성장 또는 섬유 증7,8대신 형태학 중생과 반응으로 나타났습니다.
최근 연구 글로벌 구조와 기능 둘 다의 재생 초기 신생아 기간6,,78중 발생 하는 것으로 나타났습니다. 화학 상해 또는 에탄올9,,1011, 아 세트 아미노 펜12,,1314,15의 설립된 간 부상 프로토콜 포함 , 사염화 탄소16,,1718,19, 70% 부분 hepatectomy4,,2021또는 왼쪽의 제거 및 중간로 브입니다. 화학 관리 hepatocyte 세포 죽음에 이르게 되지만 종종 마이크로 및 매크로 구조 그대로. Morphologic 재생 이러한 맥락에서로 전체 간 건축은 말소 되지 쉽게 공부 될 수 없습니다. 70% 부분 hepatectomy 봉합 결 찰, 주요 혈관의 출혈을 멈추게 하는 데 필요한는 포함 되지만 맥 관 구조의 영구 중단 하면서 비 생리 환경. 또한,이 방법은 성인 설치류에만 사용 되 고 신생아의 응용 기술적으로 매우 어렵습니다. 이 염두에서에 두고, 우리 개발 왼쪽된 엽의 꼭대기의 20-30%는 신생아 P0 마우스에서 제거 하는 방법 (그림 1A-1B). 이 메서드와 보수적인 수술, 최소 침 습, 아니라 기술적으로 도전적인, 총 체 맥 관 구조, 발생 하는 재생을 위한 공간을 떠나 결 찰 하지 않고 형태학의 손실에 지도. 아래에서 설명 하는 결과 단계별 프로토콜 출생 후 생활의 초기 단계에서 포유류 신생아 재생을 공부 하기 위하여 부분 lobular hepatectomy 신생아 쥐에 수행 하기 위해 어떤 연구원에 대 한 수 있습니다. 이 방법은 또한 있다 재생 의학 및 줄기 세포 생물학, 비교 연구 분명 응용 프로그램으로 생활의 나중 단계 동안에 사용할 수 있습니다.
가장 일반적인 급성 간 상해 연구는 화학적으로 유도 된 손상, 성인 간 절단, 또는 70% 부분 hepatectomy. 화학 손상 자주 아 세트 아미노 펜, 사염화 탄소, 또는 에탄올, 정 맥, 복 또는 구두 관리를 포함 하 고 비교적 간단 하 고 비-침략 적 부상 모델 이다. 이전, 화학 손상 결과를 hepatocyte 세포 죽음, 하지만 종종 잎 기질 및 실질 구조 그대로, morphologic 중생에 대 한 주장을 하 고 어려운 논의 했다. 화학 손상 종종 간장 혈관에 센터 공부 사이트와 셀 관련 부상, 유용한 기술 하기가 하지만 또한 어려운가, 전체 기관 수준에서 다른 인구는 선박에서 놓일 수 고를 수 있습니다. 재생에 기여 한다. 이러한 제한에도 불구 하 고 화학 손상에 유용 하 고 매우 순수 관련 부상 모델 아직도 남아 있다.
성인 70% 부분 hepatectomy 결 찰 간 맥 관 구조에 따라 왼쪽과 중간 엽의 제거를 포함. 응답 hepatectomy로 잘 특징 되었습니다: 절단된 간 게시물 70% 부분 hepatectomy 나머지 오른쪽 고 꼬리가 돌출부의 hepatocytes로 원래 손상된 엽의 조잡 한 다른 아키텍처를 개발 하는 14 일 비 대 및 세포 분열4,5의 몇 라운드를 받 다. 이 분실 된 질량와 기능, 하지만 두 절단된 돌출부를 다시 생성 실패 하 고 따라서 총 형태를 대체 하지 않습니다. 그 결과, 70% 부분 hepatectomy 부상 응답 제한 재생으로 보상 성장 메커니즘 연구 유용 합니다.
여기, 우리는 완전히 신생아 부분 lobular hepatectomy에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 절차에는 적절 한 동물 선택 및 준비, 수술 필드 준비, 수술, 및 복구 포함 한다. 각이 단계 적응과 최적화 프로토콜의 다른 응용 프로그램에 대 한 필요할 수 있습니다.
그러나, 다른 세포 인구와 재생성의 메커니즘 연구, 우리 또한 사용 다양 한 Cre를 은닉 하는 쥐를 포함 하 여 다양 한 유전자 변형 동물, 우리는 광범위 하 게 수행 하 고 야생 유형 C57BL/6J 강아지 (잭 스 000664)에이 프로토콜을 최적화 하 고 CreERT2 transgenes 또는 노크 기능 (잭 스Axin2CreERT2 018867, 및 Sox9CreERT2 잭 스 018829) 무지개 및 mTmG 시스템 (R26VT2/GK3, 같은 형광 기자와 함께 R26 mT/mG) 22 , 23. 우리 발견 다른 마우스 변종에 대 한이 방법론을 변경할 필요가 없습니다 생존 결과 또는 재생 잠재력에 차이가 관찰 했다.
다른 동물 긴장을 사용 하 여, 우리는 또한 4-hydroxy-tamoxifen 등 5-ethynyl-2-deoxyuridine (듀) 작은 분자 치료 신생아 쥐에 부분 lobular hepatectomies 수행. 옥수수 기름은 사망률의 중요 한 원인 발견으로 디 메 틸 sulfoxide (DMSO)와 에탄올 용 매로 사용 되었다. 우리는 그렇지 않으면 작은 분자의 복 관리 생존 또는 재생 결과 미치지 않았다 것을 발견. 우리는이 프로토콜 중생의 다양 한 측면이 다른 작은 분자와 함께 사용 하기 위해 적용할 것 이다 예측.
신생아 마우스 수술 기술적으로 도전적 일 수 있다 고 동물 처리 및 해 부 현미경에서 특별 한 전문성을 요구할 수 있습니다. 축산 전문 산 모 식인 풍습을 방지 해야 하는 수술 하 고 즉각적인 복구 기간 동안.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Animals&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mother with litter of day 0 neonatal pups (any strain)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surrogate mother and surrogate litter (optional)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Standard Reagents&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Serum (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Providine-iodine or equivalent antiseptic solution</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Surgical Equipment&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissecting microscope</td><td>Zeiss</td><td>ZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000</td><td></td></tr><tr><td>3mm straight spring micro scissors</td><td>Vannas</td><td>72932-01</td><td></td></tr><tr><td>5SF Forceps</td><td>Dumont</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Straight Kelly forceps</td><td>Grainger</td><td>17-050G</td><td></td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Sunbeam</td><td>000771-810-000</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Labs</td><td>0044-5260-05</td><td></td></tr><tr><td>Rodent Anesthesia System</td><td>Kent Scientific</td><td>1205S</td><td></td></tr><tr><td>Gauze, 10.16 x 10.16cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-761-52</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Standard Equipment&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5ml microcentrifuge tube</td><td>Eppendorf</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>6-0 monocryl sutures</td><td>Ethicon</td><td>MCP489G</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish</td><td>Fisher Scientific</td><td>S35839</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Aid, Plain, 110V</td><td>Drummond</td><td>4-000-110</td><td></td></tr><tr><td>Mettler Toledo NewClassic ME Analytical Balances</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-912-402</td><td></td></tr><tr><td>Low Cost Induction Chamber</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0730</td><td></td></tr></tbody></table>

partial lobular hepatectomy: a surgical model for morphologic liver regeneration

형태학 기관 재생 급성 조직 손실 다음 낮은 척추 동물 중 일반적 이지만 거의 포유류 출생 후 생활에서 관찰 됩니다. 성인 간 재생 70% 부분 hepatectomy 후 남은 엽 대사 활동의 복원 하지만 부상된 엽의 형태와 건축의 영구 손실에 일부 복제 hepatocyte 비 결과. 여기, 우리는 생리 환경 재생에 도움이 되는 신생아에서 새로운 수술 방법 선발. 이 모델 왼쪽된 엽 정점 및 후속 보수적인 관리 처방의 절단을 포함 하 고 주요 간 선박 또는 생리 환경 재생 발생할 수 있습니다 떠나는 화학 상해의 결 찰에 대 한 필요성을 결여 된다. 우리는 자르고 있는 동안 부상된 간 전환 기관 재생에서 보상 성장에 비 대에 의해 청소년 (p 7-14) 쥐에 게이 프로토콜을 확장 합니다. 제시, 짧은 30 분 프로토콜 중생, 포유류에서 그것의 나이 관련 된 감소 및 상 상속 간 줄기 또는 창시자의 특성화의 메커니즘을 연구 하는 프레임 워크를 제공 합니다.

그림 1A ( 그림 1B에서 도식), 신생아 부분 lobular hepatectomy의 일반적인 타임 라인과 재생 관찰 될 때까지 대기 하는 시간의 예상된 길이 자세히 설명 합니다. 왼쪽된 엽의 미묘한 재생 관찰된 7-14 일 게시물 수술 수 있습니다. 전체 재생 56 일 게시물 수술 후에 종종 관찰 되었다. 마우스는 수술 후 생리 이상이의 흔적을 표시 합니다....

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Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

부분 Lobular Hepatectomy: Morphologic 간 재생에 대 한 수술 모델

여기, 우리 신생아 (0 일) 쥐에서 왼쪽된 간 엽의 부분 절제 하는 새로운 방법을 제시. 이 새로운 프로토콜은 급성 간 상해 및 신생아 속에서 상해 응답 공부 적합 합니다.

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...

partial-lobular-hepatectomy-surgical-model-for-morphologic-liver

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

12.0K 조회수.  Stanford University School of Medicine. 여기, 우리 신생아 (0 일) 쥐에서 왼쪽된 간 엽의 부분 절제 하는 새로운 방법을 제시. 이 새로운 프로토콜은 급성 간 상해 및 신생아 속에서 상해 응답 공부 적합 합니다.

비디오: Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

Deriving Retinal Pigment Epithelium (RPE) from Induced Pluripotent Stem (iPS) Cells by Different Sizes of Embryoid Bodies

Pluripotent stem cells possess the ability to proliferate indefinitely and to differentiate into almost any cell type. Additionally, the development of techniques to reprogram somatic cells into induced pluripotent stem (iPS) cells has generated interest and excitement towards the possibility of customized personal regenerative medicine. However, the efficiency of stem cell differentiation towards a desired lineage remains low. The purpose of this study is to describe a protocol to derive retinal pigment epithelium (RPE) from iPS cells (iPS-RPE) by applying a tissue engineering approach to generate homogenous populations of embryoid bodies (EBs), a common intermediate during in vitro differentiation. The protocol applies the formation of specific size of EBs using microwell plate technology. The methods for identifying protein and gene markers of RPE by immunocytochemistry and reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) are also explained. Finally, the efficiency of differentiation in different sizes of EBs monitored by fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis of RPE markers is described. These techniques will facilitate the differentiation of iPS cells into RPE for future applications.

Deriving Retinal Pigment Epithelium RPE from Induced Pluripotent Stem iPS Cells by Different Sizes of Embryoid Bodies

The objective of this report is to describe the protocols to derive the retinal pigment epithelium (RPE) from induced pluripotent stem (iPS) cells using different sizes of embryoid bodies.

배아의 몸의 다른 크기에 의해 유도 다 능성 줄기에서 망막 색소 상피 세포 (RPE)를 도출 (IPS) 세포

Pluripotent stem cells possess the ability to proliferate indefinitely and to differentiate into almost any cell type. Additionally, the development of ...

연구

발생학

Application of the En Bloc Concept Combined with Anatomic Resection in Laparoscopic Hepatectomy

Laparoscopic hepatectomy has been reported in many studies, and it is the mainstream method of liver resection. In some particular cases, such as when there are tumors adjacent to the cystic bed, surgeons cannot palpate the surgical margins through the laparoscopic approach, which leads to uncertainty about R0 resection. Conventionally, the gallbladder is resected first, and the hepatic lobes or segments are resected second. However, tumor tissues can be disseminated in the above cases. To address this issue, based on the recognition of the porta hepatis and intrahepatic anatomy, we propose a unique approach to hepatectomy combined with gallbladder resection by en bloc anatomic resection in situ. Firstly, after dissecting the cystic duct, without cutting the gallbladder primarily, the porta hepatis is pre-occluded by the single lumen ureter; secondly, the left hepatic pedicle is made free by the gap of the Laennec membrane and Hilar plate; thirdly, the assistant is asked to drag the fundus of the gallbladder, and the liver parenchyma tissue is resected using a harmonic scalpel along the ischemia line on the liver surface and intraoperative ultrasound. The whole middle hepatic vein (MHV) and its tributaries appear completely; lastly, the left hepatic vein (LHV) is disconnected, and the specimen is taken out from the abdominal cavity. The tumor, gallbladder, and other surrounding tissues are resected en bloc, which meets the tumor-free criterion, and a wide incisal margin and R0 resection are achieved. Therefore, the laparoscopic hepatectomy with the combination of the en bloc concept and anatomic resection is a safe, effective, and radical method with low postoperative recurrence and metastasis.

Numerous studies have demonstrated the advantages of anatomic resection. Nonetheless, whether anatomic resection can increase R0 resection rates remains controversial. Consequently, the present study describes an innovative procedure involving the en bloc concept combined with anatomic resection in laparoscopic hepatectomy, which can reduce postoperative recurrence and metastasis.

복강경 간 절제술에서 해부학적 절제술과 결합된 En Bloc 개념의 적용

Laparoscopic hepatectomy has been reported in many studies, and it is the mainstream method of liver resection. In some particular cases, such as when ...

암 연구학

<meta charset="utf8"></head><body>간 재생 연구를 위한 환자 유래 간암 세포 오가노이드

A Hepatocellular Cancer Patient&#45;Derived Organoid Xenograft Model to Investigate Impact of Liver Regeneration on Tumor Growth

Recurrence poses a notable challenge after hepatocellular carcinoma (HCC) treatment, impacting more than 70% of patients who undergo surgical resection. Recurrence stems from undetected micro-metastasis or de novo cancer, potentially triggered by postsurgical liver regeneration. Prior research employed HCC cell lines in orthotopic models to study the impact of liver regeneration, but their limited validity prompted the need for a more representative model. Here, we introduce a novel approach utilizing patient-derived HCC organoids to investigate the influence of liver regeneration on HCC.
Patient tumor tissues are processed to create tumor organoids, embedded in a three-dimensional basement membrane matrix, and cultured in a liver-specific medium. One million organoids are injected into the right superior lobe (RSL) of immunodeficient mice, confirming macroscopic tumor growth through sonography. The intervention group undergoes resection of the left lateral lobe (LLL) (30% of total liver volume) or additionally, the middle lobe (ML) (65% of total liver volume) to induce liver regeneration within the tumor site. The control group experiences re-laparotomy without liver tissue resection. After 2 weeks, both groups undergo tumor and normal tissue explantation.
In conclusion, this patient-derived HCC organoid model offers a robust platform to investigate the impact of liver regeneration post-cancer resection. Its multi-cellular composition, genetic diversity, and prolonged culture capabilities make it an invaluable tool for studying HCC recurrence mechanisms and potential interventions.

<meta charset="utf8"></head><body>간 재생이 종양 성장에 미치는 영향을 조사하기 위한 간세포 암 환자 유래 오가노이드 이종이식 모델

Organoids generated from patient tumors are orthotopically injected into the mouse liver. The resection of non-tumorous liver tissue leads to a regenerative environment in the liver tissue where the tumor is located.

간 재생이 종양 성장에 미치는 영향을 조사하기 위한 간세포 암 환자 유래 오가노이드 이종이식 모델

Recurrence poses a notable challenge after hepatocellular carcinoma (HCC) treatment, impacting more than 70% of patients who undergo surgical resection. ...

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver engineering, including in vivo organ decellularization followed by repopulation, has emerged as a promising approach over ex vivo liver engineering. However, postoperative survival was not achieved. The aim of this study is to develop a novel surgical technique of in vivo selective liver lobe perfusion in rats as a prerequisite for in vivo liver engineering. We generate a circuit bypass only through the left lateral lobe. Then, the left lateral lobe is perfused with heparinized saline. The experiment is performed with 4 groups (n = 3 rats per group) based on different perfusion times of 20 min, 2 h, 3 h, and 4 h. Survival, as well as the macroscopically visible change of color and the histologically determined absence of blood cells in the portal triad and the sinusoids, is taken as an indicator for a successful model establishment. After selective perfusion of the left lateral lobe, we observe that the left lateral lobe, indeed, turned from red to faint yellow. In a histological assessment, no blood cells are visible in the branch of the portal vein, the central vein, and the sinusoids. The left lateral lobe turns red after reopening the blocked vessels. 12/12 rats survived the procedure for more than one week. We are the first to report a surgical model for in vivo single liver lobe perfusion with a long survival period of more than one week. In contrast to the previously published report, the most important advantage of the technique presented here is that perfusion of 70% of the liver is maintained throughout the whole procedure. The establishment of this technique provides a foundation for in vivo partial liver engineering in rats, including decellularization and recellularization.

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

We establish a novel surgical technique for an in vivo single liver lobe perfusion model in rat as a prerequisite for further studying in vivo partial liver engineering in the future.

Vivo에서 부분 간 엔지니어링을에서 위한 쥐를 기초로 새로운 수술 기법

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver ...

생체공학

The Influence of Liver Resection on Intrahepatic Tumor Growth

The high incidence of tumor recurrence after resection of metastatic liver lesions remains an unsolved problem. Small tumor cell deposits, which are not detectable by routine clinical imaging, may be stimulated by hepatic regeneration factors after liver resection. It is not entirely clear, however, which factors are crucial for tumor recurrence.
The presented mouse model may be useful to explore the mechanisms that play a role in the development of recurrent malignant lesions after liver resection. The model combines the easy-to-perform and reproducible techniques of defined amounts of liver tissue removal and tumor induction (by injection) in mice. The animals were treated with either a single laparotomy, a 30% liver resection, or a 70% liver resection. All animals subsequently received a tumor cell injection into the remaining liver tissue. After two weeks of observation, the livers and tumors were evaluated for size and weight and examined by immunohistochemistry.
After a 70% liver resection, the tumor volume and weight were significantly increased compared to a laparotomy alone (p &#60;0.05). In addition, immunohistochemistry (Ki67) showed an increased tumor proliferation rate in the resection group (p &#60;0.05).
These findings demonstrate the influence of hepatic regeneration mechanisms on intrahepatic tumor growth. Combined with methods like histological workup or RNA analysis, the described mouse model could serve as foundation for a close examination of different factors involved in tumor growth and metastatic disease recurrence within the liver. A considerable number of variables like the length of postoperative observation, the cell line used for injection or the timing of injection and liver resection offer multiple angles when exploring a specific question in the context of post-hepatectomy metastases. The limitations of this procedure are the authorization to perform the procedure on animals, access to an appropriate animal testing facility and acquisition of certain equipment.

A high incidence of tumor recurrence after resection of liver metastases remains an unsolved problem. The illustrated mouse model may be useful to investigate the reasons for such recurrences. It combines a liver resection model with intrahepatic tumor cell injection for the first time.

간내 종양 성장에 대한 간 절제술의 영향

The high incidence of tumor recurrence after resection of metastatic liver lesions remains an unsolved problem. Small tumor cell deposits, which are not ...

의학

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

연결 간 파티션과 무대 Hepatectomy (ALPPS) 절차에 대 한 포털 정 맥 결 찰의 쥐 모델

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological conditions. Partial hepatectomy also facilitates the increased engraftment and proliferation of transplanted cells by accelerating neovascularization and cell migration towards the liver. Here, we describe a simple protocol for performing 30% hepatectomy and transplantation of cells in the spleen of a non-obese diabetic/severe combined immunodeficient NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mouse. 
In this procedure, two small incisions are made. The first incision is to expose and resect the left lobe of the liver, and another small incision is made to expose the spleen for the intrasplenic transplantation of cells. This procedure does not require any specialized surgical skills, and it can be completed in 5-7 minutes with less stress and pain, faster recovery, and better survival. We have demonstrated the transplantation of hepatocytes isolated from a green fluorescent protein (GFP) expressing mouse (Transgenic C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), as well as hepatocyte like cells of human origin (NeoHep) in partially hepatectomized NOD.SCID mice.

We have described a protocol for performing partial hepatectomy (PHx) and cell transplantation via spleen in NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mice. In this protocol, an incision is made to expose and resect the left lobe of the liver followed by another incision for the intrasplenic transplantation of cells.

끄 덕 임에서 부분 Hepatectomy 후 Hepatocytes의 intrasplenic 이식 SCID 마우스

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

Isolation of Regenerating Hepatocytes after Partial Hepatectomy in Mice

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream single-cell applications is challenging. A marked accumulation of lipids within regenerating hepatocytes is observed during the first 2 days of normal liver regeneration in mice. This so-called transient regeneration-associated steatosis (TRAS) is temporary but partially overlaps the major proliferative phase. Density-gradient purification is the backbone of most existing protocols for the isolation of primary hepatocytes. As gradient purification relies on the density and size of cells, it separates non-steatotic from steatotic hepatocyte populations. Therefore, fatty hepatocytes often are lost, yielding non-representative hepatocyte fractions. 
The presented protocol describes an easy and reliable method for the in vivo isolation of regenerating hepatocytes regardless of their lipid content. Hepatocytes from male C57BL/6 mice are isolated 24-48 h after hepatectomy by a classic two-step collagenase perfusion approach. A standard peristaltic pump drives the warmed solutions via the catheterized inferior vena cava into the remnant, using a retrograde perfusion technique with outflow through the portal vein. Hepatocytes are dissociated by collagenase for their release from the Glisson's capsule. After washing and careful centrifugation, the hepatocytes can be used for any downstream analyses. In conclusion, this paper describes a straightforward and reproducible technique for the isolation of a representative population of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice. The method may also aid the study of fatty liver disease.

Lipid-laden hepatocytes are inherent to liver regeneration but are usually lost upon density-gradient centrifugation. Here, we present an optimized cell isolation protocol that retains steatotic hepatocytes, yielding representative populations of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice.

생쥐의 부분 간 절제술 후 재생 간세포의 분리

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream ...

부분 Lobular Hepatectomy: Morphologic 간 재생에 대 한 수술 모델

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배아의 몸의 다른 크기에 의해 유도 다 능성 줄기에서 망막 색소 상피 세포 (RPE)를 도출 (IPS) 세포

복강경 간 절제술에서 해부학적 절제술과 결합된 En Bloc 개념의 적용

간 재생이 종양 성장에 미치는 영향을 조사하기 위한 간세포 암 환자 유래 오가노이드 이종이식 모델

간 재생이 종양 성장에 미치는 영향을 조사하기 위한 간세포 암 환자 유래 오가노이드 이종이식 모델

간 재생이 종양 성장에 미치는 영향을 조사하기 위한 간세포 암 환자 유래 오가노이드 이종이식 모델

Vivo에서 부분 간 엔지니어링을에서 위한 쥐를 기초로 새로운 수술 기법

간내 종양 성장에 대한 간 절제술의 영향

연결 간 파티션과 무대 Hepatectomy (ALPPS) 절차에 대 한 포털 정 맥 결 찰의 쥐 모델

끄 덕 임에서 부분 Hepatectomy 후 Hepatocytes의 intrasplenic 이식 SCID 마우스

생쥐의 부분 간 절제술 후 재생 간세포의 분리