Name: ileectomy-induced bile overaccumulation in mouse intestine
Uploaded: 2017-08-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
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이 연구는 톰 피터슨 재단에 의해 지원 되 고 NIH R01-HL119780 (자이나교, MK) 부여.

동물 프로토콜 검토 기관 동물 관리 및 사용 케이스 서쪽 예비 대학의과 대학에 위원회에 의해 승인 및 가이드는 국립 보건원 (NIH)에 따라 실시 했다는 관리 및 실험 동물의 사용 (제 8 판, 2011). 마우스는 미국 수의 의학 협회 (AVMA) 지침 준수 방법으로 동물의 안락사에 대 한 안락사 했다 (2013 판). C57BL/6J, 남성, 8-16 주 오래 된 마우스는이 프로토콜에 사용 되었다. 마우스는 12 h 다크/라이트 사이클 환경에서 지 내게 했다.
 1. 사전 요원 준비 <ol><li>깨끗 한 케이지 절차 전에 24 h를 이동 마우스. 동물 물에 자유 접근을 허용 합니다. 부드러운 음식 (젤 규정식 보충 교재)와 차 우 식품 대체 수술에 대 한 소장 내용을 줄이기 위해 수술 전에 4-6 h.</li>
	<li>모든 수술 기구를 소독 하 고 단일 사용 무 균 수술 재료를 준비 합니다. 깨끗 한 수술 영역 및 70% 에탄올과 마 취 코 콘.</li>
	<li>해 부 현미경, isoflurane 마 취 기화 기, 계기, 및 온도 제어 작은 동물성 수술 테이블 신체 온도 유지에 대 한 설정합니다. 악기, 봉합, 수술 하는 동안 무료 액세스에 대 한 위치에 주사기를 구성.</li>
	<li>외과 영역에 대 한 충분 한 빛을 제공 하는 광원 설정.</li>
	<li>살 균 0.9% 염 분 장 및 복 부 청소 5 mL 주사기에 준비.</li>
</ol> 2. Ileectomy 및 문 합 <ol><li>작은 동물 보육 실에서 isoflurane (2-3%)와 Anesthetize 쥐. 동물 isoflurane에 동안 발가락 핀치 기술을 사용 하 여 적절 한 anesthetization 결정.</li>
	<li>머리 제거 제품을 적용 하 여 복 부 머리를 제거 하 고 멀리 외과 스폰지를 사용 하 여 마 취를 유지 하면서 머리를 닦아. 37 ° C 유지 마 취와 isoflurane (1-2%)는 안 면을 통해에 온도 제어 작은 동물성 수술 테이블에 ( 그림 1 A) 체온을 유지 하기 위해 마우스를 놓습니다. 눈 연 고와 마우스 눈 치료.</li>
	<li>Povidone-요오드와 70% 알코올을 사용 하 여 피부를 깨끗 하 고 메 마른 외과 거 즈 ( 그림 1 B)와 복 부의 수술 영역을 커버.</li>
	<li>중간 복 부 절 개를 일단 마 취는 수술 메스를 사용 하 여 확인 합니다. 솜 밀고 주걱을 사용 하 여 보호 장과 풀 마우스 복 부 근육을 완전히 열고 복 부 구멍 ( 그림 1 C) 노출 브래킷으로와.</li>
	<li>맹을 찾습니다. 맹에서 시작 신중 하 게 이동 연결된 회장 및 공장 부분의 복 부 구멍 ( 그림 1 D). 
	참고: 맹 확인 될 수 있다 쉽게 그것의 큰 크기 때문에 금식 후에.</li>
	<li>선 가리고 excised 됩니다 ileal 세그먼트를 공급 하는 혈액을 7-0 비단 봉합 사로 우수한 mesenteric 동맥의 위 지점. Ileal 색 결 찰 후 어두운 자주색 분홍색에서 변경 됩니다. ( 그림 1 E-F).</li>
	<li>가 위를 사용 하 여 실험의 목적에 따라 소비 세 및 50% 또는 회장의 90% 제거. 
	참고: 가짜 수술에 대 한 우수한 mesenteric 동맥 결 찰을 수행 하지 마십시오와 회장을 제거 하지 마십시오.</li>
	<li>플러시 0.9% 식 염 수와 ileal 양쪽의 루멘. 
	참고: 나머지 그대로 회장 여전히 정상적인 혈액 공급을 받고으로 우수한 mesenteric 동맥에서 혈액의 작은 양의 플러시됩니다 밖으로 과정. 이것 또한 ileal 끝에 혈액 공급은 정상과 문 합 수술 ( 그림 1 G) 중 아무 허 혈을 보장 나타냅니다.</li>
	<li>Ileal 양쪽 측면에 mesenteries를 찾습니다. mesenteries 및 8-0 봉합 ( 그림 1 G-H)를 사용 하 여 함께 ileal 끝 봉합.</li>
	<li>유지는 회장을 회장의 contralateral 측면 anastomosed ( 그림 1 나) 자연적인 방식으로 봉합.</li>
	<li>철저 하 게 조인 두 ileal 끝 함께 ( 그림 1 J) 2 개의 원래 봉합 사이 위와 더 낮은 측면 봉합.</li>
	<li>확인 3 단계 suturing 절차를 마친 후 문 합 사이트에서 누설입니다 ( 그림 1 G-난). 맹 고 소장 복 부 구멍으로 원래 해 부 위치를 반환 합니다. 무뚝뚝한 바늘을 사용 하 여 따뜻한 0.9% 식 염 수로 수술 영역을 씻어. ( 그림 1 K).</li>
	<li>6-0 봉합과 복 부 근육 층의 절 개를 닫습니다. 집게를 사용 하 여 복 부 피부 절 개를 정렬 하 고 최적의 상처 치유 ( 그림 1 L) 촉진 하기 위하여 복 부 피부를 봉합.</li>
</ol> 3. 수술 치료 복구에 대 한 집중 치료 단위에 <ol><li>이전 수술 후 쥐. 수술 후 회복을 밤새 계속 온도 제어 난방 패드에서 종이 침구 장에 그들을 집. 일정 한 음식 및 물 부드러운 음식으로 마우스 공급.</li>
	<li>관리 buprenorphine (0.05-0.1 mg/kg) 피하 주사로 진통에 대 한 모든 8-12 h. 
	참고: 심각 하 게 아픈 경우 CO 2로 마우스를 안락사.</li>
	<li>는 끝점에서 마우스 필요에 따라 과다 isoflurane 및 수확 샘플을 사용 하 여 (제 4) 희생.</li>
</ol> 4. Ileectomy 유도 담 즙 Overaccumulation의 평가 <ol><li>무게 및 0% (가짜), 50%, 또는 회장의 90%의 절제 후에 1 일 쥐를 해 부.</li>
	<li>GI로 제거 하 고 그것의 무게. 담 즙 소금 흡수 장애 및 overaccumulation의 심각도 평가 하기 위해 몸 무게 비율 기 무게 계산.</li>
	<li>15 mL 원뿔 튜브로 기 책자를 전송 하 고가 위를 사용 하 여 짧은 세그먼트로 그들을 잘라. 절단 후, 10 분에 대 한 3000 x g에서 원심 전송 상쾌한 (담 즙 염을 포함 하는 유기 액체) 깨끗 한 튜브.</li>
	<li>총 볼륨 및 기 액체의 무게를 측정 하 고 GI로 중량 비에 더 기 관에 담 즙 overaccumulation 평가 유체 무게 계산.</li>
	<li>참조 8에 설명 된 대로 담 즙 산 분석 결과 여는 상쾌한에 총 담 즙 금액을 결정.</li>
</ol>

<ol>
	<li>McLeod, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+for+inflammatory+bowel+diseases.">Surgery for inflammatory bowel diseases.</a> Dig Dis. 21, 168-179 (2003).</li><li>Hancock, L., Windsor, A. C., Mortensen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+bowel+disease:+the+view+of+the+surgeon.">Inflammatory bowel disease: the view of the surgeon.</a> Colorectal Dis. 8, 10-14 (2006).</li><li>Polle, S. W., Bemelman, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+insight:+minimally+invasive+surgery+for+IBD.">Surgery insight: minimally invasive surgery for IBD.</a> Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol. 4, 324-335 (2007).</li><li>Fon Tacer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+resource:+Comprehensive+expression+atlas+of+the+fibroblast+growth+factor+system+in+adult+mouse.">Research resource: Comprehensive expression atlas of the fibroblast growth factor system in adult mouse.</a> Mol Endocrinol. 24, 2050-2064 (2010).</li><li>Pournaras, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+bile+after+Roux-en-Y+gastric+bypass+in+promoting+weight+loss+and+improving+glycaemic+control.">The role of bile after Roux-en-Y gastric bypass in promoting weight loss and improving glycaemic control.</a> Endocrinology. 153, 3613-3619 (2012).</li><li>Spreckley, E., Murphy, K. 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U., Scheppach, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+consequences+of+total+colectomy.">Metabolic consequences of total colectomy.</a> Scand J Gastroenterol Suppl. 222, 20-24 (1997).</li><li>Helmrath, M. A., VanderKolk, W. E., Can, G., Erwin, C. R., Warner, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+adaptation+following+massive+small+bowel+resection+in+the+mouse.">Intestinal adaptation following massive small bowel resection in the mouse.</a> J Am Coll Surg. 183, 441-449 (1996).</li><li>Tappenden, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+short+bowel+syndrome:+considerations+of+resected+and+residual+anatomy.">Pathophysiology of short bowel syndrome: considerations of resected and residual anatomy.</a> J Parenter Enteral Nutr. 38, 14-22 (2014).</li><li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+Acid+diarrhea:+prevalence,+pathogenesis,+and+therapy.">Bile Acid diarrhea: prevalence, pathogenesis, and therapy.</a> Gut Liver. 9, 332-339 (2015).</li><li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+understanding+of+bile+acid+diarrhea.">Advances in understanding of bile acid diarrhea.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 8, 49-61 (2014).</li><li>Mottacki, N., Simren, M., Bajor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+article:+bile+acid+diarrhoea+-+pathogenesis,+diagnosis+and+management.">Review article: bile acid diarrhoea - pathogenesis, diagnosis and management.</a> Aliment Pharmacol Ther. 43, 884-898 (2016).</li><li>Rao, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+organic+solute+transporter+alpha-beta,+Ostalpha-Ostbeta,+is+essential+for+intestinal+bile+acid+transport+and+homeostasis.">The organic solute transporter alpha-beta, Ostalpha-Ostbeta, is essential for intestinal bile acid transport and homeostasis.</a> Proc Natl Acad Sci. 105, 3891-3896 (2008).</li><li>Hofmann, A. 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저자는 공개 없다.

성공적인 ileectomy를 수행 하기 위해 우수한 mesenteric 동맥 resecting 세그먼트에 혈액 공급을 차단 하도록 사전에 출혈 수 해야 합니다. 허 혈 성 ileal 세그먼트 결 찰 후 어두운 자주색을 돌 것 이다. Ileal 세그먼트 해야 합니다 다음 완전히 절제 수 있습니다. 정상적인 혈액 공급 유지 종료에 대 한 보장 되어야 합니다. 이 쉽게 봉합 후 원인 때문에 허 혈 성 괴 사 수술 실패 수 출혈 및 부적 절 한 제거를...

현대 생물 의학 연구에 유전자 조작된 동물 모델은 인간의 질병에 대 한 통찰력을 수집에 널리 활용 된다. 특히, 조직 또는 세포 특정 이득 및 손실 기능 유전자의 분자 규제 유도 생물학적 효과 공부 사용 되었습니다. 대상 유전자에서 vivo에서조작에 전진에도 불구 하 고 느린 한계가 있다. 처음, 많은 세포 또는 조직의 특정 삭제 여러 장기에 영향을 것입니다. 예를 들어 상피 유전자 삭제 여러 조직의 epithelia에 식을 제거 합니다. 또한, 삭제는 특정 조직에 제한 하는 경우에 공간 컨트롤은 거의 가능 합니다. 예를 들어 내장 같은 조직에서 고유한 세그먼트 vivo에서정밀 조작 될 수 없는 매우 특정 기능을 수행. 이러한 상황에서 유전자를 포함 하는 조직의 절제 조직 커뮤니케이션의 기계적이 고 기능적인 의미를 결정 하기 위해 보다 효율적인 공부 방법이 될 여겨진다.
Ileectomy는 크의 대부분에 사용된 환자 및 원심 회장 1,2,3를 포함 하는 염증 성 질환. 회장은 일반적으로 생산 하 고 여러 섬유 아 세포 성장 인자 15/19 같은 에너지 저장 호르몬 (FGF15/19), 펩 티 드 YY (PYY), 글 루카 곤 유사 펩 티 드 1/2 (GLP1/2); 이러한 호르몬 많은 생물학 기능4,,56에 중요 한 지역 및 내 분 비 역할을 재생합니다. 이들이 호르몬 중 FGF15는 간에 서 담 즙 산 합성의 강력한 내 분 비 억제제로 발견 되었습니다. 일단 ileal enterocytes로 재흡수, 담 즙 산 핵 수용 체 farnesoid X 수용 체 (FXR) Fgf15 식 자극을 연속적으로 간 담 즙 산 합성 7의 피드백 저해에 이르게 활성화 합니다. 최근 연구에서 우리는 ileal kruppel 같은 인자 15 (KLF15)를 공부 하기 위하여 마우스 ileectomy 모델을 도입-Fgf15 축 간 8circadian 담 즙 산 생산을 조절 하는 신호. 가장 중요 한 것은, 우리 소설 가족을, kruppel와 같은 요인, 특히 KLF15, 담 즙 산 생물학에 소개 했다. Ileectomy 수술을 포함 한 기능 연구를 바탕으로, 우리는 간접 키 모 비 메커니즘을 통해 그 KLF15 upregulates 담 즙 산 합성 결정. 마지막으로, ileal KLF15 Fgf15의 첫 번째 내 생 부정적인 레 귤 레이 터로도 식별 됩니다.
말 초 영역에 인접에서 내림차순 장 세그먼트 다른 영양소의 흡수에 대 한 책임이 있습니다. 회장은 주요 세그먼트 담 즙 산과 비타민 B12 (Vb 12) 흡수 9에 대 한 책임 이다. 이전 연구를 고용 짧은 창 자 증후군; 공부를 인접 창 자 절제술의 마우스 모델 다양 한 절제 길이, 다이어트, 및 봉합 사 종류는 최적의 수술 후 생존 율 10을 유지 하기 위해 제시 되었다. 또한, 최근 검토 ileal 절제 그 나머지로 11의 감소 적응 능력 때문에 다른 위장 (GI) 세그먼트 절제술 보다 더 심각한 질병에 일반적으로 결과 나타냅니다. 이 항목 복구 및 효과적인 치료 접근의 이해는 제한 하는 반면 기초 및 임상 연구 그룹의 집중적인 관심을 얻고 있다.
담 즙 산 설사 장 순환 12,13에서 담 즙 산 항상성 불균형에서 발생합니다. Ileal 절제술, 위장 질환, 또는 idiopathic 담 즙 산 흡수 장애의 결과의 결과 수 있습니다. 환자의 80% 이상이 14ileal 절제술 받은 후 설사와 함께 현재 발견 되었습니다. Ileectomy 담 즙 산 성 설사의 조사에 대 한 중요 한 수술 모델이 될 가능성이 있다. 본이 연구에서는 ileal 절제술의 시리즈 FGF15 결핍으로 장의 담 즙 소금 흡수 장애, overaccumulation, 그리고 독성 손상의 그라데이션 평가 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>Dissection microscope</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Animal temperature controller</td><td>Physitemp Instruments, Inc.</td><td>TCAT-2LV</td><td>For body temperature control</td></tr><tr><td>Isoflurane anesthetic vaporizer</td><td>VetEquip</td><td>&amp;nbsp;911104</td><td>For anesthesia</td></tr><tr><td>Dissection forceps</td><td>&amp;nbsp;Fine Science Tools, Inc.</td><td>11274-20</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Scissors</td><td>&amp;nbsp;Fine Science Tools, Inc.</td><td>14084-08</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>&amp;nbsp;Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-7882</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Micro knives-needle blade</td><td>Fisher Scientific</td><td>10318-14</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>6-0 monofilament suture</td><td>Ethicon</td><td>1698G</td><td>For abdominal skin closure</td></tr><tr><td>7-0 silk suture</td><td>Ethicon</td><td>766G</td><td>For ligation</td></tr><tr><td>8-0 monofilament suture</td><td>Ethicon</td><td>1714G</td><td>For anastomosis</td></tr><tr><td>Surgical sponges</td><td>Dynarex Corp.</td><td>3333</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Small cotton-tipped applicators&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-118</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare Limited</td><td>66794-013-25</td><td>For anasthesia</td></tr><tr><td>Buprenorphine hydrochloride</td><td>Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals</td><td>12496-0757-1</td><td>For analgesia</td></tr><tr><td>0.9% sodium chloride Injection</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>0264-7800-10</td><td>For washing/injection</td></tr><tr><td>Povidone iodine prep solution</td><td>Dynarex Corp.</td><td>1413</td><td>For skin preparation</td></tr><tr><td>Puralube vet ointment</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>17033-211-38</td><td>For eye pretection</td></tr><tr><td>Hair remover lotion</td><td>Church &amp;amp; Dwight Co., Inc.</td><td></td><td>For skin preparation</td></tr><tr><td>Intensive care unit</td><td>ThermoCare</td><td>FW-1</td><td>For post-surgery recovery</td></tr><tr><td>DietGel recovery</td><td>ClearH2O</td><td>72-06-5022</td><td>For post-surgery recovery</td></tr><tr><td>Aurum total RNA fatty and fibrous tissue kit</td><td>Bio-Rad</td><td>7326830</td><td>For RNA isolation</td></tr><tr><td>iScript reverse transcription supermix for RT-qPCR</td><td>Bio-Rad</td><td>1708841</td><td>For reverse transcription assay</td></tr><tr><td>TaqMan fast advanced master mix</td><td>Applied Biosystems/Life Technologies</td><td>4444965</td><td>For QPCR analysis</td></tr><tr><td>Total bile acid assay kit</td><td>Genzyme Diagnostic</td><td>DZ042A-K01</td><td>For bile acid assay</td></tr><tr><td>C57BL/6J&amp;nbsp;</td><td>The Jackson Laboratory</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ileectomy-induced bile overaccumulation in mouse intestine

창 자 절제술은 비만 같은 인간의 질병, 염증 성 장 질환, 크 론 병, 및 종종 결과 심한 짧은 창 자 증후군 같은 부작용 등 담 즙 산 성 설사, 대 장 암에 대 한 일반적인 치료 방법 탈수, 전해질 장애, 고 영양 흡수 장애입니다. 여기 ileectomy, 조직 커뮤니케이션 및 조직의 항상성 유지 되 나 murine ileal 절제 모델을 소개 합니다. Ileal 절제 후 혈액 순환 영구적으로 없는 상태입니다 회장 관련 내 분 비 호르몬 섬유 아 세포 성장 인자 15 (FGF15), 간에 서 담 즙 산 합성의 endocrinal 그것의 금지를 해제. 생산 증가는 회장을 제거 후 담 즙 산의 폐지 재흡수와 함께, 수술 마우스 소장와 관련 된 설사, 사망률, 및 사망률에서 담 즙 소금 overaccumulation에서 고통. 이 연구에 도입 된 수술 모델의 비 발한 사용 생리학과 질병에 조직 대사 규제의 ileal 제어에 대 한 기계적이 고 기능적인 통찰력을 제공할 수 있습니다.

Ileectomy에 대 한 절차는 그림 1에 표시 됩니다. 첫 번째 단계 마우스 복 부 피부를 준비 하 고, 복 부 절 개를 하 고 견인 기를 사용 하 여 창 (그림 1A-C)를 완전히 노출 하는 합니다. 다음, 마우스 맹 위치 했다 (그림 1D); 주어진 그것의 크기와 모양이 그것을 쉽게 식별할 수 있는 랜드?...

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Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

소장-종속 담 즙 산 재흡수 및 간 담 즙 산 합성의 피드백 저해 조직의 항상성 및 건강에 대 한 중요 하다. 이 연구에서 우리는 ileal 절제술 ileectomy 유도 담 즙 흡수 장애, overaccumulation, 그리고 마우스 소장에서 독성 평가를 위한 마우스 모델을 설명 합니다.

Ileectomy 유도 담 즙 Overaccumulation 마우스 소장에서

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

ileectomy-induced-bile-overaccumulation-in-mouse-intestine

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

9.4K 조회수.  Case Western Reserve University. 소장-종속 담 즙 산 재흡수 및 간 담 즙 산 합성의 피드백 저해 조직의 항상성 및 건강에 대 한 중요 하다. 이 연구에서 우리는 ileal 절제술 ileectomy 유도 담 즙 흡수 장애, overaccumulation, 그리고 마우스 소장에서 독성 평가를 위한 마우스 모델을 설명 합니다.

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Determining Bile Duct Density in the Mouse Liver

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques are used, including serum chemistry, histological analysis, and immunostaining for specific markers. Although these techniques can provide important information about the biliary system, they often do not present a full picture of bile duct (BD) developmental defects across the whole liver. This is in part due to the robust ability of the mouse liver to drain the bile even in animals with significant impairment in biliary development. Here we present a simple method to calculate the average number of BDs associated with each portal vein (PV) in sections covering all lobes of mutant/transgenic mice. In this method, livers are mounted and sectioned in a stereotypic manner to facilitate comparison among various genotypes and experimental conditions. BDs are identified via light microscopy of cytokeratin-stained cholangiocytes, and then counted and divided by the total number of PVs present in liver section. As an example, we show how this method can clearly distinguish between wild-type mice and a mouse model of Alagille syndrome. The method presented here cannot substitute for techniques that visualize the three-dimensional structure of the biliary tree. However, it offers an easy and direct way to quantitatively assess BD development and the degree of ductular reaction formation in mice.

We present a rather simple and sensitive method for accurate quantification of bile duct density in the mouse liver. This method can aid in determining the effects of genetic and environmental modifiers and the effectiveness of potential therapies in mouse models of biliary diseases.

마우스 간에서 담관 밀도 결정

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques ...

연구

발생학

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer being two common examples. Despite the frequency of these procedures, a significant knowledge gap remains in describing the inherent effects of intestinal resection on host physiology and disease pathophysiology. This article provides detailed instructions for an ileocolic resection with primary end-to-end anastomosis in mice, as well as essential aspects of peri-operative care to maximize post-operative success. When followed closely, this procedure yields a 95% long-term survival rate, no failure to thrive, and minimizes post-operative complications of bowel obstruction and anastomotic leak. The technical challenges of performing the procedure in mice are a barrier to its wide spread use in research. The skills described in this article can be acquired without previous surgical experience. Once mastered, the murine ileocolic resection procedure will provide a reproducible tool for studying the effects of intestinal resection in models of human disease.

Ileocolic resection is commonly performed in several human diseases; however, little is known regarding the impact of intestinal resection on surgical illnesses. This article provides instruction on executing the procedure in mice with high success, providing a means to study the effects of ileocolic resection in models of disease.

차 문합와 쥐의 Ileocolic 대장 절제술

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

의학

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

마우스의 담관 결찰 : 폐쇄성 담즙에 의한 염증성 간 손상과 섬유화의 유도

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Murine 원심 인공, C57BL/6 마우스에 전환 Colitis의 새로운 모델

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

만성 대장염 관련 대장암의 뮤린 충수 절제술 모델은 Caecal 패치의 정확한 국소화에 의해

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

<meta charset="utf8"></head><body>장 조작을 통한 수술 후 장폐색(Postoperative Ileus)을 연구하기 위한 쥐 모델(Murine Model for Study Postative Ileus through Intestinal Manipulation)

Postoperative Ileus Murine Model

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI is a consequence of mechanical damage during surgery, resulting in disruption of motility in the gastrointestinal tract. The mechanisms of POI are related to aberrant neuronal sensitivity, impaired epithelial barrier function, and increased local inflammation. However, the details remain enigmatic. Therefore, experimental murine models are crucial for elucidating the pathophysiology and mechanism of POI injury and for the development of novel therapies.
Here, we introduce a murine model of POI generated via intestinal manipulation (IM) that is similar to clinical surgery; this is achieved by mechanical damage to the small intestine by massaging the abdomen 1-3 times with a cotton swab. IM delayed gastrointestinal transit 24 h after surgery, as assessed by FITC-dextran gavage and fluorescence detection of the segmental digestive tract. Moreover, tissue swelling of the submucosa and immune cell infiltration were investigated by hematoxylin and eosin staining and flow cytometry. Proper pressure of the IM and a hyperemic effect on the intestine are critical for the procedure. This murine model of POI can be utilized to study the mechanisms of intestinal damage and recovery after abdominal surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>수술 후 장폐색 쥐 모델

We describe a murine model of postoperative ileus generated via intestinal manipulation. Gastrointestinal transit function, pathologic changes, and immune cell activation were assessed 24 h after surgery.

수술 후 장폐색 쥐 모델

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

면역학 및 감염병학

Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes mellitus, dyslipidemia, non-alcoholic steatohepatitis, cardiovascular events, and cancers) through restrictive and malabsorptive mechanisms. Understanding the mechanisms by which these procedures allow such improvements often require their transposition into animals, especially in mice, because of the ease of generating genetically modified animals. Recently, the single-anastomosis duodeno-ileal bypass with sleeve gastrectomy (SADI-S) has emerged as a procedure that uses both restrictive and malabsorptive effects, which is being used as an alternative to gastric bypass in case of major obesity. Thus far, this procedure has been associated with strong metabolic improvements, which has led to a marked increase in its use in daily clinical practice. However, the mechanisms underlying these metabolic effects have been poorly studied as a result of a lack of animal models. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice, with a special focus on perioperative management. The description and use of this new rodent model will be helpful for the scientific community to better understand the molecular, metabolic, and structural changes induced by the SADI-S and to better define the surgical indications for clinical practice.

Single-anastomosis duodeno-ileal bypass (SADI-S) is an emerging bariatric procedure with important metabolic effects. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice.

생쥐의 단일 문합 십이지장-회장 우회술(Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice)

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes ...

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile duct proliferation. However, long-term experiments can lead to increased morbidity and mortality. In select mouse strains with underlying liver disease, meaningful comparisons can be made even with ligation of a single lobe of the liver, which can reduce animal losses and expenses. Here, we describe partial bile duct ligation (pBDL) in the mouse, in which only the left hepatic bile duct is ligated, causing biliary obstruction in the left lobe but not the remaining lobes. With careful microsurgical technique, pBDL experiments can be cost-effective, since the unligated lobe serves as an internal control to the ligated lobes, when subjected to the same conditions in the same animal. Unlike cBDL, a separate sham-operated control group is not necessary. pBDL is highly useful to directly compare localized versus systemic effects of cholestasis and other retained bile components. pBDL can also be repurposed as a novel method to investigate mechanisms related to medications and cell migration.

Here, we present partial bile duct ligation as a surgical model of liver injury and regeneration in rodents.

마우스에 부분적 담 관 결 찰: 지역화 된 폐쇄성 Cholestasis의 제어 모델

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...

Ileectomy 유도 담 즙 Overaccumulation 마우스 소장에서

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마우스 간에서 담관 밀도 결정

차 문합와 쥐의 Ileocolic 대장 절제술

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수술 후 장폐색 쥐 모델

수술 후 장폐색 쥐 모델

수술 후 장폐색 쥐 모델

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마우스에 부분적 담 관 결 찰: 지역화 된 폐쇄성 Cholestasis의 제어 모델