The authors would like to thank Drs. Roger Cone and Chao Zhang for their contributions to validating the application of this assay as previously published. This work was supported by NIH 1F32DK082167-01 (BJR).

참고 :이 프로토콜은 연구의 책임있는 행동에 대한 애리조나 오피스 대학의 지침을 다음과 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인 된 1. Zebrafish의 사육 및 배아 유지 보수 <ol><li> E3 배아 매체 (8)를 준비합니다. 60 배 원액을 확인하기 위해, 1.95 L ddiH 2 O에서 34.8 g의 염화나트륨, 1.6 G의 KCl, 5.8의 염화칼슘 2 ● 2H 2 O, 및 9.78 g의 MgCl 2 ● 6H 2 O를 용해 ddiH 2 O를 사용하여 2 L에 볼륨을 조정 수산화 나트륨과 염산을 사용하여 pH를 7.2로 조정 </li><li> 1 L ddiH20 16.5 ml의 60 배 주식을 희석 1X E3 배아 매체를 준비합니다. 100 μL 1 % 메틸렌 블루를 추가합니다. </li><li> 번식 <ol><li> 하우스 남성과 여성의 무리 스톡 (7 - 만 18 개월) 별도로 생산력을 극대화한다. </li><li> 계란이 요구하기 전에 날에 전에 2 시간 - 1 떨어져 불을 켭니다. C에서 - 설정 짝짓기 (2 여성 1 남성과 1)rossing 케이지는 이전에 9를 설명했다. 그들이 어른 물고기가 개최되는 탱크 삽입의 천공 기본을 통과 계란 포식을 탈출하는 교차 케이지 할 수 있습니다. </li><li> 옵션 :. 시간 제한 번식을 위해, (모르 폴리 노 주입과 관련된 연구에 필요한 것 등), 투명한 플라스틱 디바이더로 남성과 여성의 물고기를 분리, 계란과 수정의 시간 제한 누워 결과 아침에이를 제거합니다. 연구를 들어 모르 폴리 노, 처리 당 요구 어류 배아의 수를 평가하기 위해 전력 계산을 수행한다. 효과 나 변화의 크기를 추정하지 않고, 예비 시험은 n = 8로 실행할 수있다. </li></ol></li><li> (- 150 배아 / 10cm 페트리 접시 100) 페트리 접시에 교차 케이지에서 계란을 붓고. 계란 요리의 바닥에 정착 물을 부어하도록 허용합니다. 좋은 팁 일회용 전송 피펫을 사용하여 남아있는 물을 제거합니다. 단계 1.1에서 만든 E3 배아 매체를 다시 추가합니다. </li><li> AF 확인미래 계란과 생선 전송을위한 절름발이 광택 일회용 피펫. 가위를 사용하여 0.25 ㎖의 졸업식에서 졸업 일회용 전송 피펫을 잘라. 거친 가장자리, 불꽃 폴란드어 분젠 버너를 통해 절단 팁을 제거하십시오. </li><li> 제브라 피쉬 E3 배아 매체에서 배양 접시 28.5 ○ ℃에서 후 수정 10cm에서 (DPF) 사일에 배아 물고기를 유지 두 번 매일, 불꽃이 어떤 미 수정 계란 또는 죽은 배아 (불투명 한 흰색 외관)을 제거하기 위해 일회용 전송 피펫을 졸업 닦는 사용합니다. 각각 하루에 한 번, E3 배아 매체를 교체합니다. 좋은 팁 일회용 전송 피펫을 사용하여 남아있는 액체를 제거, E3 배아 매체를 붓고, 사전 예열 (28.5 ○ C) E3 배아 매체를 다시 추가합니다. </li></ol> 2. 분석 솔루션을 준비합니다 <ol><li> 0.22 μM 필터를 이용하여 표 1. 멸균 필터 분석 용액에 의한 분석 용액을 제조 하였다. 28.5 ○ C에서 멸균 분석 솔루션을 개시 분석 따뜻한 이전물 목욕. </li></ol><table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> 성분 </td><td> 전체의 % </td><td> 볼륨 (μL / 10 mL) 중 </td></tr><tr><td> 60 배 E3 배아 중간 </td><td> 1.667 </td><td> 166.7 </td></tr><tr><td> 두 번 탈 (DDI) H 2 0 </td><td> 96.233 </td><td> 9623.3 </td></tr><tr><td> 하는, Alamar 블루 </td><td> 1 </td><td> (100) </td></tr><tr><td> 400 밀리미터의 NaOH </td><td> 1 </td><td> (100) </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> 0.1 </td><td> (10) </td></tr></tbody></table> 표 1. 분석 중간 3. 분석을 수행 <ol><li> 제브라 피쉬 배아를 멸균 여과 E3 배아 매체로 3 회 씻어. 비커에 클러치에서 모든 가능한 제브라 피쉬 배아를 결합합니다. 멸균 필터 75 ml의 E3 배아 매체. , 좋은 팁 일회용 전송 피펫을 다시 사용가능한 한 제브라 피쉬 배아에서 E3 배아 매체의 많은 이동합니다. 20 ㎖를 멸균 여과 E3 배아 매체를 다시 추가합니다. 제거하고 E3 배아 매체 3 회를 교체합니다. </li><li> 96 웰 블랙 93 우물의 각으로 플레이트 (1) 물고기는 분명 바닥 판을 양면. 불꽃이 플라스틱 일회용 전송 피펫을 졸업 닦는 내에서 개별적으로 (1.5 단계) 배아를 캡처하고 부드럽게 우물에 배출하여 판에 배아 물고기를 전송합니다. 3 빈 우물에 씻어서 물고기가 들어있는 비커에서 가져온 E3 배아 매체를 전송합니다. 이 빈 우물이 물고기가 들어있는 우물로 동일한 물에 노출되어 있는지 확인합니다. 물고기와 빈 우물을 포함 모두 우물이 단계의 결론에 (200 μL) 적어도 ½ 가득합니다. </li><li> 빈 우물을 포함하여 모든 96 우물에서 분석 솔루션 E3 배아 매체를 교체합니다. 이 단계는 96 웰 플레이트에서 12 열마다 한 번에 한 열을 수행한다. 좋은 팁을 사용하여 일회용 트랜스FER 피펫은, 플레이트 (8 우물)의 하나의 컬럼에있는 모든 우물에서 E3 배아 매체를 제거합니다. 제브라 피쉬 배아를 터치하지 않도록주의하십시오. 물이 제거 잘되는 각 분석 솔루션의 300 μl를 추가합니다. 판의 모든 12 열에 대한 분석 솔루션 E3 배아 매체 및 교체의 제거를 반복합니다. </li><li> 옵션 : 화합물에 대한 응답으로 신진 대사 속도의 변화를 테스트하려면, 100 배 (100 배) 원하는 치료 농도 인 솔루션을합니다. 참고로, 100 × 용액을 0.1 % 이하로 더욱 최종 DMSO 농도를 제한하기 위해 10 %의 DMSO를 초과하지 않는 것을 보장한다. 처리 웰 각각 100X 용액 3 μL를 추가한다. 주 : 치료 우물의 수를 평가하기 위해 전력 계산을 수행합니다. 그러나, 응답 또는 변화의 크기를 추정하지 않고, 예비 시험은 치료 8 화합물 및 물고기를 포함 8 차량 처리 제어 우물에서 실행할 수 있습니다. <ol><li> (제어 할 DRU를 차량 제어의 3 μl를 추가하지G 처리) 물고기를 포함 우물. 화합물에 형광 응답이 물고기 내 행동의 결과인지 확인하기 위해, 96 웰 플레이트에 3 빈 우물에 약물 및 차량 치료를 적용 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 590 nm에서 530 nm의 여기 파장과 방출 파장 형광 플레이트 리더에 물고기 충전 판을 읽어보십시오. </li><li> 가습 인큐베이터에 배치 할 판은 28.5 ○ C (분석 솔루션의 광표백을 방지하기 위해 분석을 통해 어둠 속에서 판을 유지)으로 설정. 분석은 1 시간에서 24 시간까지 다양 시간의 기간에 대해 실행할 수 있습니다. 시험 기간은 연구의 목적에 따라 달라진다. 짧은 기간이 가장 적합 할 수있는 속효성 비 안정적인 화합물에 대한 응답을 테스트하기 위해. 그러나, 안정한 화합물 시험 또는 유전 효과 시험을위한 시험 시간을 최대화 누적 신호와 관련된 장점을 활용하는 것이 바람직하다. </li><li> 미리 정해진 시점에서 (타이밍을 결정하는 데 도움이 3.6 단계 참조)단계 3.5과 동일한 설정으로 다시 물고기 가득한 판의 형광을 읽어 보시기 바랍니다. </li></ol> 4. 치료와 형광 연합의 상대적인 변화를 평가 <ol><li> 잘 연구의 결론에 형광에서 시간 0 형광을 빼서 각각의 형광의 변화를 계산합니다. 물고기 (공백)없이 웰스는 물고기를 포함 우물에서 멀리 값 이하로, 0 근처의 값을 가져야한다. 결론에 형광 = 형광의 변화 - 형광을 시간 0 </li><li> 대조군 웰은 다음 대조군 웰의 형광의 평균 변화에 의해 각 웰의 형광 변화를 나눔 형광의 상대적인 변화를 확인하기 위하여, 형광의 평균 변화를 계산한다. 참고로, 컨트롤은 차량 컨트롤이나 유전자 제어 될 수있다. <img alt="식 (1)" src="/files/ftp_upload/53297/53297eq1.jpg" /></li></ol>

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</ol>

The authors have no competing financial interests to disclose.

세균이나 곰팡이에 오염은 크게이 분석의 응용 프로그램을 제한합니다. E3 배아 매체 메틸렌 블루는 진균의 오염의 가능성을 제한한다. 배아 동안은 치료를 두 번 매일 죽은 태아를 제거하기 위해 수행하는 것이 중요 양육. 또한, 철저히 분석 개시 당일 멸균 E3 배아 매체 배아 린스하는 것이 필수적이다. 이러한 2 단계의 배아 박테리아 오염에 대한 잠재 성을 제한한다. 단계 3.2에서 설명한 빈 우물...

마우스는 현재 비만 연구를위한 지배적 인 모델이다. 짧은 세대 간격과 마우스에서 사용할 수있는 유전 적 도구는 현재까지 타의 추종을 불허하고있다. 그러나, 제브라 피쉬는 짧은 세대 간격이 (3-4개월를) 및 유전자 조작 1, 2의 용이성에서도 마우스를 능가한다. 먼 유전자 의약품 스크린 (3)에 사용하고 잠재적 자손의 수에 마우스를 초과하면서 지브라 피쉬는 포유 동물 유전자의 약 90 %를 유지한다. 비만 연구를위한 모델 지브라 피쉬의 전위 수돗물, 분석은 에너지 소비를 포함하여 체중 조절을, 영향 요인을 조사하기 위해 개발되어야한다. 대사 물질이 β 산화 및 트리 카르 복실 산 사이클의 산소를 통해 처리 될 때 소모되므로 NADH 2가 생성된다. 따라서, NADH 2는 대사 경로 (대사 산화)를 통해 대사 플럭스의 직접적인 지표이다. poikil에서homeotherms 4에 비해 5 배 낮은 - otherms, H는 +, ATP 합성에서 NADH 2 산화를 분리됩니다 4 미토콘드리아 내막을 통해 누출. 따라서, 제브라 피쉬 NADH 2는 매우 밀접하게 산화 적 인산화를 통해 ATP 생산에 연결되어 있습니다. 여기서, 우리는 에너지 소비 5 프록시로 애벌레 제브라 피쉬에서 NADH 2 생산을 측정하는 분석에 대해 설명합니다. 산소 소비는 에너지 소비를 측정하기위한 금 표준이다. 그러나, 가장 제브라 피쉬의 높은 처리량 잠재력을 활용하기 위해, 에너지 소비의 분석은 높은 처리량 의무가 있어야합니다. 순환 시스템 밀폐 챔버에 의존 산소 소비 시스템은 6 가능한 챔버들의 수로 처리량 제한된다. 야외 O (2) 소비는 / CO 2 생산 분석은 제브라 피쉬 5,7에 적용되었습니다. 이러한 야외 96 웰 플레이트베이스D 시스템은 높은 처리량 의무가 있습니다. 불행하게도, 환경과 가스 교환이 분석의 감도를 제한한다. 최근 우리는 레 독스 표시기 5 알라 마르 블루를 사용한 NADH 2를 모니터링 분석의 어플리케이션을 출판. 이 분석은 처리량 및 지브라 피쉬의 산소 소비량의 분석에 공통 감도 한계를 극복한다. 제브라 피쉬는 몸 전체의 에너지 항상성의 연구에 점점 더 중요한 모델이되고있다. 부분적으로, 제브라 피쉬 때문에 앞으로 유전 화면과 약물 화면에서 사용하는 의무가 있습니다. 또한, 최저 및 녹아웃에 신속하게 적용 할 수 있습니다 포함하여, 유전자 조작을 대상으로. 우리는 이전에이 분석은 화합물의 대사 속도를 변경할 5 유전자를 동정하기 위해 약물 목욕 애플리케이션 유전자 녹다운 또는 녹아웃과 조합 될 수 있다는 것을 보여 주었다. 또한,이 분석은 제브라 피쉬에 내재 된 높은 처리량의 이점을 활용할 수 있도록 설계되었습니다. </P&gt;

<table><tbody><tr><td>AlamarBlue</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-230-103</td><td>Manufactured by Thermo Scientific</td></tr><tr><td>Fine Tip DisposableTransfer Pipette</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-26</td><td>Manufactured by Thermo Scientific</td></tr><tr><td>Fisherbrand Graduated Disposable Transfer Pipette</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-771-9AM</td><td>Manufactured by Thermo Scientific</td></tr><tr><td>Black sided clear bottom 96-well plates</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-320-785</td><td>Manufactured by E&amp;amp;K Scientific Products Inc.</td></tr></tbody></table>

high throughput danio rerio energy expenditure assay

제브라 피쉬는 에너지 항상성 및 비만의 연구에 널리 적용 모델 만들 수있는 잠재력을 가지고 고유 이점 중요한 모델 생물이다. 배아에 대한 분석은 96 또는 384 웰 플레이트 형식으로 실시하는 제브라 피쉬의 작은 크기가 있습니다, 모르 폴리 노 및 CRISPR 기반 기술이 목욕 응용 프로그램에 의해 유전자 조작의 용이성 및 약물 치료를 촉진이 가능한 것입니다. 또한, 제브라 피쉬는 새로운 유전자 발견을 가능하게 앞으로 유전 화면에 이상적입니다. 비만 모델 지브라 피쉬의 상대적인 신규성을 고려할 때 이러한 장점을 충분히 활용 도구 개발하는 것이 필요하다. 여기서, 우리는 동시에 배아 지브라 피쉬 수천에서 에너지 소비를 측정하는 방법을 설명한다. 우리는 개별 물고기를 분리 96- 웰 플레이트를 사용하는 전체 동물 마이크로 플랫폼을 개발하고 우리는 시판되는 세포 배양 생존력 재를 사용하여 누적 NADH 2 생산을 평가에이전트 알라 마르 블루. poikilotherms 2에서 NADH의 생산 및 에너지 소비 간의 관계 단단히 연결되어있다. 이 에너지 소모 분석 급속 직접 에너지 소비를 변경 또는 응용 약물 (예, 인슐린 감작 제)에 대한 응답을 변경 또는 약리 유전 조작 화면까지의 전위를 생성한다.

분석 액 어류 배아 (도 1)의 부재 하에서 형광을 증가시키지 않는다. 그러나, 분석은 잘 내 신진 대사 속도의 작은 변화에 매우 민감하다. 잘 내에서 하나의 물고기는 1 시간 (P &lt;0.0001) 내 빈 우물에서 유의 한 차이 신호를 생성한다. (2) 배양 24 시간 후 배아 물고기에 의해 생성 된 신호의 시각적 표현을 제공한다 그림. 이 사진의 목적을 위해 투명한 양면 웰을 ...

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High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

Zebrafish are an important model organism for the study of energy homeostasis. By utilizing a NADH2 sensitive redox indicator, alamar Blue, we have developed an assay that measures the metabolic rate of zebrafish larvae in a 96 well plate format and can be applied to drug or gene discovery.

높은 처리량<em&gt; 다니오 레 리오 (rerio)</em&gt; 에너지 지출 분석

Zebrafish are an important model organism with inherent advantages that have the potential to make zebrafish a widely applied model for the study of ...

high-throughput-danio-rerio-energy-expenditure-assay

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

12.6K 조회수.  Vanderbilt University Medical Center. Zebrafish are an important model organism for the study of energy homeostasis. By utilizing a NADH2 sensitive redox indicator, alamar Blue, we have developed an assay that measures the metabolic rate of zebrafish larvae in a 96 well plate format and can be applied to drug or gene discovery. 

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High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

Heart disease is the number one cause of human death worldwide. Numerous studies have shown strong connections between obesity and cardiac malfunction in humans, but more tools and research efforts are needed to better elucidate the mechanisms involved. For over a century, the genetically highly tractable model of Drosophila has been instrumental in the discovery of key genes and molecular pathways that proved to be highly conserved across species. Many biological processes and disease mechanisms are functionally conserved in the fly, such as development (e.g., body plan, heart), cancer, and neurodegenerative disease. Recently, the study of obesity and secondary pathologies, such as heart disease in model organisms, has played a highly critical role in the identification of key regulators involved in metabolic syndrome in humans.
Here, we propose to use this model organism as an efficient tool to induce obesity, i.e., excessive fat accumulation, and develop an efficient protocol to monitor fat content in the form of TAGs accumulation. In addition to the highly conserved, but less complex genome, the fly also has a short lifespan for rapid experimentation, combined with cost-effectiveness. This paper provides a detailed protocol for High Fat Diet (HFD) feeding in Drosophila to induce obesity and a high throughput triacylglyceride (TAG) assay for measuring the associated increase in fat content, with the aim to be highly reproducible and efficient for large-scale genetic or chemical screening. These protocols offer new opportunities to efficiently investigate regulatory mechanisms involved in obesity, as well as provide a standardized platform for drug discovery research for rapid testing of the effect of drug candidates on the development or prevention of obesity, diabetes and related metabolic diseases.

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

This is a high fat diet feeding protocol to induce obesity in Drosophila, a model for understanding fundamental molecular mechanisms implicated in lipotoxicity. It also provides a high throughput triacylglyceride assay for measuring fat accumulation in Drosophila and potentially other (insect) models under various dietary, environmental, genetic or physiological conditions.

높은 지방 다이어트 먹이 초파리 Melanogaster 의 높은 처리량 Triacylglyceride 분석 결과

Heart disease is the number one cause of human death worldwide. Numerous studies have shown strong connections between obesity and cardiac malfunction in ...

연구

유전학

An Affordable and Efficient "Homemade" Platform for Drosophila Behavioral Studies, and an Accompanying Protocol for Larval Mitochondrial Respirometry

The usefulness of Drosophila as a model organism for the study of human diseases, behaviors and basic biology is unquestionable. Although practical, Drosophila research lacks popularity in developing countries, possibly due to the misinformed idea that establishing a lab and performing relevant experiments with such tiny insects is difficult and requires expensive, specialized apparatuses. Here, we describe how to build an affordable flylab to quantitatively analyze a myriad of behavioral parameters in D. melanogaster, by 3D-printing many of the necessary pieces of equipment. We provide protocols to build in-house vial racks, courtship arenas, apparatuses for locomotor assays, etc., to be used for general fly maintenance and to perform behavioral experiments using adult flies and larvae. We also provide protocols on how to use more sophisticated systems, such as a high resolution oxygraph, to measure mitochondrial oxygen consumption in larval samples, and show its association with behavioral changes in the larvae upon the xenotopic expression of the mitochondrial alternative oxidase (AOX). AOX increases larval activity and mitochondrial leak respiration, and accelerates development at low temperatures, which is consistent with a thermogenic role for the enzyme. We hope these protocols will inspire researchers, especially from developing countries, to use Drosophila to easily combine behavior and mitochondrial metabolism data, which may lead to information on genes and/or environmental conditions that may also regulate human physiology and disease states.

<meta charset="utf8"></head><body>초파리 행동 연구를 위한 저렴하고 효율적인 "홈메이드" 플랫폼과 유충 미토콘드리아 호흡 측정을 위한 동반 프로토콜

We provide protocols for anyone with a "maker culture" mind to start building a flylab for quantitative analysis of a myriad of behavioral parameters in Drosophila melanogaster, by 3D-printing many of the necessary pieces of equipment. We also describe a high resolution respirometry protocol using larvae to combine behavioral and mitochondrial metabolism data.

초파리 행동 연구를 위한 저렴하고 효율적인 "홈메이드" 플랫폼과 유충 미토콘드리아 호흡 측정을 위한 동반 프로토콜

The usefulness of Drosophila as a model organism for the study of human diseases, behaviors and basic biology is unquestionable. Although practical, ...

행동분석학

A High Throughput Microplate Feeder Assay for Quantification of Consumption in Drosophila

Quantifying food intake in Drosophila is used to study the genetic and physiological underpinnings of consumption-associated traits, their environmental factors, and the toxicological and pharmacological effects of numerous substances. Few methods currently implemented are amenable to high throughput measurement. The Microplate Feeder Assay (MFA) was developed for quantifying the consumption of liquid food for individual flies using absorbance. In this assay, flies consume liquid food medium from select wells of a 1536-well microplate. By incorporating a dilute tracer dye into the liquid food medium and loading a known volume into each well, absorbance measurements of the well acquired before and after consumption reflect the resulting change in volume (i.e., volume consumed). To enable high throughput analysis with this method, a 3D-printed coupler was designed that allows flies to be sorted individually into 96-well microplates. This device precisely orients 96- and 1536-well microplates to give each fly access to up to 4 wells for consumption, thus enabling food preference quantification in addition to regular consumption. Furthermore, the device has barrier strips that toggle between open and closed positions to allow for controlled containment and release of a column of samples at a time. This method enables high throughput measurements of consumption of aqueous solutions by many flies simultaneously. It also has the potential to be adapted to other insects and to screen consumption of nutrients, toxins, or pharmaceuticals.

A High Throughput Microplate Feeder Assay for Quantification of Consumption in Drosophila

The microplate feeder assay offers an economical, high throughput method for quantifying liquid food consumption in Drosophila. A 3D-printed device connects a 96-well microplate in which flies are housed to a 1536-well microplate from which flies consume a feeding solution with a tracer dye. The solution volume decline is measured spectrophotometrically.

드로소필라에서 소비의 정량화를 위한 높은 처리량 마이크로 플레이트 피더 분석

Quantifying food intake in Drosophila is used to study the genetic and physiological underpinnings of consumption-associated traits, their environmental ...

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. When selecting sites to deposit their eggs, female flies are capable of ranking the relative attractiveness of their options and choosing the &#34;greater of two goods.&#34; However, most egg-laying preference assays are not practical if one wants to take a systematic genetic screening approach to search for the circuit basis underlying this simple decision-making process, as they are population-based and laborious to set up. To increase the throughput of studying of egg-laying preferences of single females, we developed custom chambers that each can simultaneously assay egg-laying preferences of up to thirty individual flies as well as a protocol that ensures each female has a high egg-laying rate (so that their preference is readily discernable and more convincing). Our approach is simple to execute and produces very consistent results. Additionally, these chambers can be equipped with different attachments to allow video recording the egg-laying animals and to deliver light for optogenetics studies. This article provides the blueprints for fabricating these chambers and the procedure for preparing the flies to be assayed in these chambers.

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

This protocol describes a high throughput assay for testing egg-laying preferences of Drosophila melanogaster at single-animal resolution. This assay provides a simple, efficient, and scalable platform to identify genes and circuit components that control a simple decision-making process.

높은 처리량 분석은 개인의 알을 낳는 환경 설정을 검사합니다<em&gt; 노랑 초파리</em

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

신경과학

<meta charset="utf8"></head><body>브러시 도마뱀 간 미토콘드리아의 미토콘드리아 기능 평가

Assessment of Mitochondrial Oxygen Consumption Using a Plate Reader-based Fluorescent Assay

Mitochondria serve many important functions, including cellular respiration, ATP production, controlling apoptosis, and acting as a central hub of metabolic pathways. Therefore, experimentally assessing mitochondrial functionality can provide insight into variations among different populations or disease states. Additionally, it is valuable to assess whether isolated mitochondria are healthy enough to proceed with experiments. One characteristic often used to compare mitochondrial function in different samples is the rate of oxygen consumption. Oxygen consumption and subsequent calculation of the respiratory control ratio in either intact cells or mitochondria isolated from tissue can serve all three purposes. Using mitochondria isolated from the livers of brush lizards in conjunction with a phosphorescent probe that is sensitive to the fluctuations in oxygen concentration of a solution, we measured oxygen consumption using a fluorescent plate reader. This method is not only quick and efficient but also can be conducted with a small amount of mitochondria and without the need for specialized equipment. The step-by-step protocol described here increases the accessibility of mitochondrial functional assessment to researchers.

<meta charset="utf8"></head><body>Assessment of Mitochondrial oxygen consumption using a plate reader-based fluorescent assay(플레이트 리더 기반 형광 분석을 사용한 미토콘드리아 산소 소비량 평가)

Assessment of oxygen consumption provides integral information about mitochondrial function. Using a phosphorescent probe with a fluorescent plate reader, accurate and reproducible data can be obtained easily without specialized equipment. This assay enables any lab to measure the oxygen consumption of isolated mitochondria and calculate respiratory control ratios.

Assessment of Mitochondrial oxygen consumption using a plate reader-based fluorescent assay(플레이트 리더 기반 형광 분석을 사용한 미토콘드리아 산소 소비량 평가)

Mitochondria serve many important functions, including cellular respiration, ATP production, controlling apoptosis, and acting as a central hub of ...

생화학

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

This protocol describes a method for measuring the metabolism in Drosophila melanogaster larval and adult brains. Quantifying metabolism in whole organs provides a tissue-level understanding of energy utilization that cannot be captured when analyzing primary cells and cell lines. While this analysis is ex vivo, it allows for the measurement from a number of specialized cells working together to perform a function in one tissue and more closely models the in vivo organ. Metabolic reprogramming has been observed in many neurological diseases, including neoplasia, and neurodegenerative diseases. This protocol was developed to assist the D. melanogaster community&#39;s investigation of metabolism in neurological disease models using a commercially available metabolic analyzer. Measuring metabolism of whole brains in the metabolic analyzer is challenging due to the geometry of the brain. This analyzer requires samples to remain at the bottom of a 96-well plate. Cell samples and tissue punches can adhere to the surface of the cell plate or utilize spheroid plates, respectively. However, the spherical, three-dimensional shape of D. melanogaster brains prevents the tissue from adhering to the plate. This protocol requires a specially designed and manufactured micro-tissue restraint that circumvents this problem by preventing any movement of the brain while still allowing metabolic measurements from the analyzer&#39;s two solid-state sensor probes. Oxygen consumption and extracellular acidification rates are reproducible and sensitive to a treatment with metabolic inhibitors. With a minor optimization, this protocol can be adapted for use with any whole tissue and/or model system, provided that the sample size does not exceed the chamber generated by the restraint. While basal metabolic measurements and an analysis after a treatment with mitochondrial inhibitors are described within this protocol, countless experimental conditions, such as energy source preference and rearing environment, could be interrogated.

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

We present a protocol for measuring oxygen consumption and extracellular acidification in Drosophila melanogaster larval and adult brains. A metabolic analyzer is utilized with an adapted and optimized protocol. Micro-tissue restraints are a critical component of this protocol and were designed and created specifically for their use in this analysis.

초파리 melanogaster Larval 및 성인 두뇌의 변화 분석

This protocol describes a method for measuring the metabolism in Drosophila melanogaster larval and adult brains. Quantifying metabolism in whole organs ...

Metabolic Profile Analysis of Zebrafish Embryos

A growing goal in the field of metabolism is to determine the impact of genetics on different aspects of mitochondrial function. Understanding these relationships will help to understand the underlying etiology for a range of diseases linked with mitochondrial dysfunction, such as diabetes and obesity. Recent advances in instrumentation, has enabled the monitoring of distinct parameters of mitochondrial function in cell lines or tissue explants. Here we present a method for a rapid and sensitive analysis of mitochondrial function parameters in vivo during zebrafish embryonic development using the Seahorse bioscience XF 24 extracellular flux analyser. This protocol utilizes the Islet Capture microplates where a single embryo is placed in each well, allowing measurement of bioenergetics, including: (i) basal respiration; (ii) basal mitochondrial respiration (iii) mitochondrial respiration due to ATP turnover; (iv) mitochondrial uncoupled respiration or proton leak and (iv) maximum respiration. Using this approach embryonic zebrafish respiration parameters can be compared between wild type and genetically altered embryos (mutant, gene over-expression or gene knockdown) or those manipulated pharmacologically. It is anticipated that dissemination of this protocol will provide researchers with new tools to analyse the genetic basis of metabolic disorders in vivo in this relevant vertebrate animal model.

Zebrafish represent a powerful vertebrate model that has been under-utilised for metabolic studies. Here we describe a rapid way to measure the in vivo metabolic profile of developing zebrafish that allows the comparison of different mitochondrial function parameters between genetically or pharmacologically manipulated embryos, thereby increasing the applicability of this organism.

Zebrafish 태아의 대사 프로필 분석

A growing goal in the field of metabolism is to determine the impact of genetics on different aspects of mitochondrial function. Understanding these ...

높은 처리량

요약

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높은 지방 다이어트 먹이 초파리 Melanogaster 의 높은 처리량 Triacylglyceride 분석 결과

초파리 행동 연구를 위한 저렴하고 효율적인 "홈메이드" 플랫폼과 유충 미토콘드리아 호흡 측정을 위한 동반 프로토콜

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드로소필라에서 소비의 정량화를 위한 높은 처리량 마이크로 플레이트 피더 분석

높은 처리량 분석은 개인의 알을 낳는 환경 설정을 검사합니다

Assessment of Mitochondrial oxygen consumption using a plate reader-based fluorescent assay(플레이트 리더 기반 형광 분석을 사용한 미토콘드리아 산소 소비량 평가)

Assessment of Mitochondrial oxygen consumption using a plate reader-based fluorescent assay(플레이트 리더 기반 형광 분석을 사용한 미토콘드리아 산소 소비량 평가)

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