The authors are funded by the Wellcome Trust through the Edinburgh Clinical Academic Track (C.J.C.J.) and Programme Grant (Y.H., and R.M.M.) and Fellowship (J.R.G) funding, the BBSRC (G.C.), the American Asthma Foundation (E.R., H.J.McS. and R.M.M.), Asthma UK (H.J.McS.) and the Rainin Foundation (D.J.S. and R.M.M.).

참고 :이 프로토콜의 모든 절차는 영국 홈 오피스 에딘버러 수의학 대학에서 정한 지침에 따라 수행된다. 위관 마우스 1. 감염 <ol><li> 6 개월까지 4 ° C에서 증류수에 보관 Heligmosomoides polygyrus L3 유충. </li><li> 사용 전에 증류수에 L3 유충을 세 번 세척 : 원심 분리기 (브레이크) 10 분 300 XG에, 물을 제외한 모든 500 μl를 제거 (방해 펠렛 L3 유충을 피하기 위해) 및 펠릿 때마다 재현 탁. </li><li> 세 번째 세척의 경우, 그 구멍을 넓혀 200 μL 팁 컷 정확한 볼륨 (일반적으로 40 ml) 및 흡인 20 μl를 물을 추가합니다. (모바일 및 최적의 해부 현미경으로 50 배 확대하여 봅니다 보통) 60mm 배양 접시의 표면에 두 개의 20 μL 샘플을 놓고 L3 유충을 계산합니다. concentratio 증류수에 최종 펠렛을 재현 탁1 ㎖ 당 2,000 L3 유충의 명. </li><li> 라이프 사이클 생산을위한, 400 H. 8 주 된 F1 (C57BL / 6xCBA) 쥐를 감염 구강 투여에 의한 증류수 200 μL에 polygyrus L3 유충 (목덜미에 의해 수직 위치에 마우스를 억제하고 부드럽게 위장으로 입과 식도를 통해 무딘 위관 바늘을 통과). 선동 각각의 감염 (유충은 물에 빨리 정착) 및 흡인 1 ML의 주사기에 200 μL에 철저하게 사전; 끝이 둥근로 전용 위관 바늘을 사용합니다. 젊은 쥐의 실험 감염 (구 6~8주), 또는 다른 근친 균주 (예 : C57BL / 6 BALBc)의 경우, 200 L3 유충 쥐를 감염. </li></ol> 2. 전파 및 H. 유지 보수 polygyrus <ol><li> 대형 플라스틱 욕조의 중심에 숯을 넣고 차가운 수돗물을 최소 30 분을 위해 그것을 통해 실행 할 수 있습니다 (씻지 않은 활성탄 L3 유충에 독성). 욕조에서 물을 배출하고 t에 숯을 배치완전히 건조 될 때까지, 실내 공기에 노출 떠나는 흡수지 층, WO. </li><li> 계란이 필요한 경우 (필요한 경우 가위), 최초의 집게로 결장 중 대변을 다 쳤어요. L3 유충의 다수가 필요한 경우, 와이어 그리드에 마우스를 위치시키고 며칠 동안 분변 펠렛을 수집한다. </li><li> 다만 종이 필터에 부착 할 정도로 감쇠 일관성을 달성하기 위해, 한 적어도 하나의 비율로 과립 숯 대변 섞는다. 페트리 접시에 일부 젖은 필터 종이의 중앙에 얇게 바르고 습기 상자에이 배치 12-14일의 어둠 속에서 (일부 젖은 종이 타월과 물 접시를 추가). </li><li> 이후 7 일에서 L3 유충을 제거하고 용지가 폐기되기 전에 적어도 2 번의 그들을 수집합니다. 애벌레는 여과지의 가장자리 주위에 고리를 형성하고; 페트리 접시에서 필터 종이를 들어 올려 50 ㎖ 튜브에 (펫 및 플레이트 당 멸균 물 5ml를 사용하여) 판으로 남아있는 유충을 씻어. </li><li> 승강기및 여과지 오프 나머지 유충 50 ㎖ 튜브에 증류수를 플레이트에 남아 수확. 10 분 동안 300 XG에 유출 물 용액을 원심 분리기. 증류수로 유충을 세 번 세척하고 필요한 때까지 증류수 50 ml를 4 ° C에 저장합니다. 주 : 유생 생존을 유지하고, 적어도 6 개월 이상 감염성. </li></ol> 성인 H. 3. 컬렉션 polygyrus 웜 <ol><li> 도 1에 도시 된 바와 같이 미리 변형 Baermann 준비 장치. </li><li> 십사일 감염 후 발췌 마우스. </li><li> 70 % 에탄올로 복부를 씻으십시오. 복부를 통해 피부를 잘라 전방 복벽을 공개 철수. 복강를 입력 정중선 절개를합니다. </li><li> (원위부 직장에 근위 십이지장에서) 전체 크고 작은 창자를 제거합니다. 건조 페트리 접시에 놓습니다. </li><li> 전체 길이를 따라 장을 직선화; 대변​​ 함유 대장을 절제; 나중에 계란 준비를위한 별도의 접시에이를 배치합니다. </li><li> 때문에 내 내강 벌레 십이지장 종종 붉은 모양의 비교적 두꺼운 벽에 의해 증명되는 어른 벌레가 포함되어 소장의 근위 20cm를 절제. 행크스 &#39;액 5 mL를 (100mm 직경) 페트리 접시에 놓고, 37 ° C (접시 당 두 개의 표본)로 가열. </li><li> 가위 (라운드 종료 가위이 가장 아르)와 종 방향 웜 가득 근위 창자 부분을 열고 웜을 제거하기 위해 두 개의 유리 슬라이드 라이닝 장 내부에 아래로 긁어. 그런 다음 깨끗한 창자 벽을 폐기합니다. </li><li> 작은 모슬린 가방에 팁 웜, 주식 폐쇄 및 유리 깔때기 (그림 1)의 가장자리 주위에 클립으로 고정합니다. </li><li> 행크스 &#39;솔루션으로 깔때기를 작성하고 각 깔때기에 웜의 약 4 페트리 접시를 추가합니다. </li><li> 1 ~ 2 시간 동안 37 ° C 배양기에 넣어 장치, 부드럽게 반까지 교반하면 빠지지모슬린 필터를 막다 수있는 장 준비에서 파편. 모슬린 가방 외부 이물질의 유출을 방지하기 위해주의 -이 최종 HES 제제의 오염의 원인이됩니다. 성인 웜 천천히 모슬린 천 통해 이주 및 유리 시험관의 하단에 정착한다. 조심스럽게 (이 시점에서 웜을 잃지 않도록주의하면서) 싱크를 통해 연결 고무 호스에서 테스트 튜브를 분리합니다. </li><li> 플라스틱 피펫을 사용하여, 50 ㎖ 튜브에 웜을 전송하고 씻어 여섯 번 행크스와 함께 &#39;솔루션 (웜 stripette와 미디어, 중력 침전 제거 할 수 있도록 허용, 추가 행크스의 40 ml의&#39;솔루션을 다섯 번 반복). 참고 : 웜 문화는 이후이 시점에서 멸균 보관해야합니다. <ol><li> 층류 후드로 이동 100 U / ml의 페니실린 및 100 ㎍ / ml의 스트렙토 마이신, 체외 문화에 대한 준비와 보충 멸균 행크스 &#39;솔루션에 다른 여섯 번 씻는다. </li></ol></li><li> 카운트그 구멍을 넓혀 노란색 팁 인하와 함께 찍은 20 μL의 두 샘플을 채취하여 복구 어른 벌레; 접종 유충의 양의 약 50 %를 기대합니다. </li></ol> 중간 준비, 성인 웜을 세척 4. HES에 대한 문화를 설정 <ol><li> RPMI의 약 10 ml의 3.11에서 벌레를 적시는 벌레가 완전히 덮여 수 있도록 각도로 튜브 휴식을 떠나, 20 분 동안 10 % 겐타 마이신으로 보충. </li><li> 층류 후드에서이 작업을 수행 행크스 &#39;솔루션 다시 여섯 번 씻어 (5 U 보충 / ㎖ 페니실린 및 5 ㎍ / ml의 스트렙토 마이신). </li><li> H. 준비 polygrus 미디어. </li><li> 11.1 ml의 45 % 글루코오스 (최종 농도 RPMI1640 0.2 % 글루코스를 포함 1.2 %), 100 × Peniclllin - 스트렙토 마이신 (최종 농도 5 U / ㎖ 페니실린 5 ㎖를 넣고 500 RPMI1640 ml의, 층류 후드에서 무균 유지 5 ㎍ / ml의 스트렙토 마이신), L 글루타민 5 ㎖ (2 mM의 최종 농도) 및겐타 마이신 5 ㎖ (최종 농도 1 %). FCS를 추가하지 마십시오. </li><li> 배출 T25 플라스크로 나누어지는 웜, 약. 15 ML의 H. 1,000 벌레 polygyrus 플라스크 당 미디어, 37 ° C 배양기 (5 % CO 2) 삼주에 대한 정직한 곳. </li></ol> HES 5. 준비 <ol><li> 문화의 24 시간 후 첫 컬렉션을 따로 설정, 두 번 일주일 이상 더 이상 간격으로 문화 문화 매체를 HES가 함유 수집 (때문에 LPS 오염 및 호스트 단백질의 높은 수준 - 개별적으로 처리하거나, 삭제할 수 있습니다). 별도의 명확 날짜 및 배치 번호가 표시 각각의 컬렉션을 유지합니다. H. 같은 부피로 교체 각 행사에 polygyrus 미디어. </li><li> 원심 5 분 동안 400 x g에서 미디어 HES가 함유. 이어서 50 ㎖ 튜브에 0.2 ㎛의 저 단백질 - 결합 필터를 통해 살균 필터. -20 ° C 냉장고에 보관 명확하게 HES (c)의 웜 수확의 날짜와 날짜 표시ollection. </li><li> 문화 HES 컬렉션 21 일 후, 벌레를 폐기합니다. </li><li> (보통 냉동 콘텐츠로부터, 상기 제 24 시간 컬렉션을 포함하지 않음), 및 질소 가압하에 한외 여과 장치에서의 필터 3000 MWCO를 통해 농축 HES 상청 500-1000 ml의 풀. 참고 : 필터 실행 건조 들어 가지 않도록주의해야합니다. <ol><li> 필터 장치를 설정 첫째 교반하면서 3 × 20 ​​분 동안 증류수 1 리터 비이커에 아래 3 kDa의 막 반짝이는면을 세척합니다. 필터 멤브레인 광택면을 위로하여 제조업체의 지침에 따라 한외 여과 장치를 조립합니다. 4 ° C에서 캐비닛의 장소 및 풀링 HES을 집중하기 시작하기 전에를 통해 증류수 50 ㎖를 전달합니다. </li><li> 볼륨이 2-5 ml의 농축 될 때까지 (하루에 100-140 ml)을 필요에 따라 여과 장치에 HES의 각 튜브를 추가합니다. </li></ol></li><li> 피라 50 ㎖를, HES - 함유 배지에서 오염물을 제거하기 위해서 추가PBS 및 여과 장치 및 ogen없는 한 다음 약 2 ㎖의 아래로 농축시킨다. 두 번이 단계 (총 PBS 150 ㎖)를 반복합니다. 층류 후드에서 15ml의 튜브 (0.2 μm의 필터) 필터 소독 HES로 옮기고, 분광 광도계 (10 E = 280) 또는 브래드 포드 분석법을 이용하여 단백질 농도를 측정한다. </li><li> 나누어지는, -80 ° C에서 배치 번호와 날짜, 동결 레이블. </li><li> 사용하기 전에 HES의 각 배치의 제조 업체의 프로토콜에 따라 발색 LAL 분석을 수행합니다. LPS 레벨은 1 μg의 단백질 당 1 U LPS보다 많은 경우, 생체 내 또는 시험 관내 실험 배양이 배치를 사용하는 것을 고려하지. </li><li> 별도로 동일하게 24 시간에 수집을 HES 방법; 적합하지 기능적 실험 그것이 모노클로 날 항체의 친 화성 정제에 의해 단리 될 수있다 개별 분자의 유용한 소스가있는 동안은, LPS 및 일부 숙주 단백질을 포함 할 것이다. </li></ol&gt;

The authors have no conflicts of interest.

H.의 수명주기 안정적으로 일관된 방식으로 polygyrus 진행됩니다. 자연 섭취 또는 0 일에 L3 유충의 구강 투여 후, 낭종이 10 일에서 장 루멘으로 어른 벌레로 부상 한 후 유충의 moults로 진행하고, 5 일에 의해 십이지장 장막에서 형성되기 시작, 계란에서 대변에서 볼 수 있습니다 14 일 및 육아종 일 (21) 전술 (그림 6에 요약) 프로토콜에서 십이지장 장막 표면에 볼 수 있습니다 H.의 높은 처리량 생산 가능 미래의 실험 및 라이프 사이클 감염 가능한 L3 유충의 안정적인 복구에 추가 polygyrus의 배설-분비 제품 (HES). H.의 polygyrus 감염은 OVA 나 데르 P 1 (집 먼지 진드기 알레르기 항원) (14)에 따라 천식 모델에서 보호 될 것으로 나타났다. 또,기도 염증의 억제는 CD4 + CD25 +로 전송 될 수있다 </sup&gt; T 조절 세포는 14 또는 CD19 + CD23 하이 규제 B 세포로부터 24 H. 비 감응 polygyrus 쥐를 -infected. 자가 면역, H. 모델에서 polygyrus 감염은 다발성 경화증 (9)의 실험적인자가 면역성 뇌척수염 (EAE) 모델의 억제로 도시되었으며, 진압 감염된 마우스 (24)로부터 CD4 + T 세포 또는 CD19 + B 세포 중 하나와 함께 전송 될 수있다. 자극 (25) 수상 세포 반응성) 억제 CD4의 b) 유도 : Heligmosomoides polygyrus 배설-분비 제품 (HES)를 포함하여, 숙주 면역 반응을 조절하고 (도 7에서 설명하는) 다수의 메커니즘에 의해은 Th2 매개 염증 억제 + + Foxp3를 조절 T 세포 18. 및 c) IL-33의 생산 (20)의 봉쇄. 를 관리 할 때 HES가 보호 될 것으로 나타났다t 과민성 또는 도전 천식 (19)의 OVA-명반 모델 및 조기 IL-33 릴리스의 억제를 통해, 알터 추출물 알레르기 (20)와 비강 내 투여시. HES의 LPS 오염의 회피는 종종 미래의 면역 학적 실험의 성공을 위해 매우 중요합니다. 여기에 설명 된 프로토콜,이 달성의 중요한 단계는 (2.10 참조)과 문화의 첫 24 시간을 제외 ES 솔루션을 설정하는 최종 HES 준비를 입력하지 않는 Baermann 장치의 모슬린 가방에 포함 된 그 파편을 보장하는 (5.1 참조). 최근 몇 년 동안, HES는 철저하게 26, 27 확인 된 370 별개의 단백질과 단백체 수준에서 특징으로하고있다. 또한, 제 4 단째는 유충 ES 프로테옴 분석 (28)에 실시되었다. 3의 계속 강하게 면역 원성 공지 HES의 주요 글리 칸 성분을 특성화 포함하고, 마이크로 RN 분비그는 50 ~ 100 nm의 소포 또는 엑소 좀 (벅 등., 게시를 위해 제출)에 캡슐화되어있다. 이 높은 면역 기생충에서, 그리고 HES의 분자 구성 요소를 식별하는 광범위한 단백체 데이터와 ES의 수집에 대한 재현성 프로토콜의 설립으로, 무대는 이제 식별 및 H.에서 개별 분자의 치료 테스트 설정 호스트 면역 체계에 중요한 영향을 중재 할 수 polygyrus.

Heligmosomoides의 polygyrus 밀접 높은 널리 인간 선충 기생충 일에 관련되어 자연 쥐의 위장 기생충이다. 이러한 Nippostrongylus의 brasiliensis, H. 다른 선충 모델과는 대조적으로 polygyrus 일관는 숙주 면역 반응을 억제하는이 채용 여러 강력한 면역 조절 메커니즘의 직접적인 결과로 생쥐의 만성 감염을 확립한다. H.의 polygyrus은 직접 수명주기를 가지고 : 감염 L3 유충이 FECO 구강 전송 섭취 (또는 실험실 설정에서 구강 투여에 의해 관리), 그들은 같이 장 루멘으로 돌아 가기 전에 십이지장과 encyst의 장막 층으로 이주 그러자 약 팔일 초기 감염 후 성인 웜. 상대와 계란 생산은 10 일에 의해 발생하며 다에서 배설-분비 제품의 문화와 수집을위한 성인 벌레를 수확 할 수있다Y (14) 이후 3. H. polygyrus 또한 감염된 감염 마우스 4-6, 및 H.의 증가 수준에서 증가 유산균으로, 공생 미생물에 존재하는 상호 작용 유산균 6 마우스의 노출 다음 polygyrus 감염. H.와 활성 감염 polygyrus가 7-10 많은자가 면역 동물 모델에서 면역 병리에 대하여 보호하는 것으로 나타났다, 11, 12 및 알레르기 성 대장염 13-16. 결과적으로이 기생충의 아웃풋 - 분비 분자의 가능성에 큰 관심이있다 ( &quot;HES&quot;)는 생체 (17, 18)에서 병리학을 다운 조절합니다. 사실, 보호 효과는 이제 18, 20 확인되는 경로를 통해 HES 제품 (19)와 쥐의 치료 다음 볼 수 있습니다. 여기에서 우리는 그것의 분비 제품의 신뢰성 Heligmosomoides의 polygyrus의 생산 및 복구를 위해 프로토콜을 설명즉 추가의 생화학 적, 면역 기능의 조사 범위에 대해 사용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>Amicon concentrator</td><td>Millipore</td><td>5112</td><td>Model 8050 50 ml&lt;br/&gt; http://www.emdmillipore.com/INTL/en/product/Stirred-Cell-Model-8050,-50%C2%A0mL,MM&lt;br/&gt; _NF-5122</td></tr><tr><td>Hanks&amp;rsquo; buffered salt solution</td><td>Sigma</td><td>H9394</td><td>500 ml&lt;br/&gt; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/h9394?lang=en&amp;amp;region=GB</td></tr><tr><td>Penicillin streptomycin</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td>100 ml&lt;br/&gt; http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15070063</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Invitrogen</td><td>25030-081</td><td>200 MM 100ml&lt;br/&gt; https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081?ICID=search-25030081</td></tr><tr><td>Activated charcoal</td><td>Merck</td><td>1.09624.0500</td><td>18-35 mesh&lt;br/&gt; http://www.merckmillipore.com/GB/en/product/Charcoal-activated,MDA_CHEM-109624</td></tr><tr><td>Glucose solution</td><td>Sigma</td><td>G8769</td><td>100 ml 45% solution&lt;br/&gt; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g8769?lang=en&amp;amp;region=GB</td></tr><tr><td>Falcon tubes</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td>50 ml&lt;br/&gt; http://www.scribd.com/doc/124320105/Sarstedt-Falcon</td></tr><tr><td>T25 Flasks</td><td>Sigma</td><td>CLS430639&amp;nbsp;</td><td>25cm vented flask&lt;br/&gt; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/cls430639?lang=en&amp;amp;region=GB</td></tr><tr><td>Chromogenic LAL assay</td><td>Lonza</td><td>50-647U</td><td>QCL-1000 assay&lt;br/&gt; http://www.lonza.com/products-services/pharma-biotech/endotoxin-detection/endotoxin-detection-assays/endpoint-chromogenic-lal-assay.aspx</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Gibco</td><td>15710-049</td><td>100 ml&lt;br/&gt; http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15710072</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td>500 ml; without L-glutamine&lt;br/&gt; http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11875093</td></tr></tbody></table>

cultivation of heligmosomoides polygyrus: an immunomodulatory nematode parasite and its secreted products

Heligmosomoides의 polygyrus (이전 Nematospiroides의 dubius로 알려져 있으며, 또한 H. bakeri 일부에 의해 참조) 밀접하게 쥐에 만성 감염을 설정하는 여러 면역 메커니즘을 고용하고 위장 기생충이 널리 인간의 기생충 감염과 유사하다. H. polygyrus는 기생충 유래 면역 조절 분야에서 광범위하게 연구되었고, 강력하게 (활성 감염 및 격리 분비 제품 모두) 알레르기와자가 면역의 실험 모델을 억제하는 것으로 확인되었습니다. 이 문서에 설명 된 프로토콜은 H. 관리를 설명 자신의 배설-분비 제품 (HES)의 일관된 L3 유충의 생산, 성인 기생충의 복구 및 수집을위한 polygyrus 수명주기.

H. 감염에 대한 감수성 polygyrus는 마우스 균주 (표 1)의 유전 적 배경에 의해 고도로 제어되고; C57BL / 6 CBA 마우스는 21, 22, 매우 민감하다. 기생충의 라이프 사이클의 유지 관리를 위해,이 두 균주 사이의 F1 잡종 어느 모 균주에 비해 이환율 (과도한 장내 상피 손상)없이 훨씬 높은 웜 부담을 견딜 수있는 능력에 대해 선택되었다. 400 L3 유충의 구강 투여는 일반적으로 동형 접합 근친 균주의 실험 (예를 들어, C57BL / 6에 사용되는 200 L3 유충의 복용량 동안, (그림 2 성인 웜 부담의 결과로) F1 생쥐의 수명을 유지하는 데 사용됩니다 또는 BALBc). 그러나,이 용량은 장내 식물의 변화와 같은 동물 시설 사이에 다를 수 있습니다 환경 공동 요인에 따라 감소 될 필요가있다. HES의 일괄 재현 effi을 입증기능 분석에서 단백질 조성물 cacy; 배양의 각 연속 주에서 상등액 4 주 총까지 분석 한 결과 또한, 단백질 프로파일 (도 3) HES 농도는 브래드 포드 분석에 의해 측정 될 때. (5.5 참조) 매우 유사한 것으로 밝혀졌다, 총 단백질은 일반적으로 약 1 밀리그램 / ㎖ (그림 4)입니다. HES를 집중하는 다른 방법은 샘플 버퍼 염, 저 분자량 성분을 제거, 스윙 아웃 로터 원심 최대 4,000g에서 회전하는 원심 농축기 (예 VIVASPIN 3 kDa의 컷 - 오프 멤브레인)로된다. 원심 농도가 가장 작은 처리 볼륨 (1 ~ 10 ㎖)에 적합하고, 약 30 배의 최대 집중 계수로 제한됩니다. HES를 수집 할 때, 오염의 방지가 중요하다. 호스트 분자와 오염을 방지하기 위해, 우리는 HES-계속을 폐기마우스 소장에서 성인 웜 수확 후 첫 24 시간에서 문화 매체를 aining. 또한 발색성 LAL 분석 (5.7 참조​​) HES의 각 배치에 오염 LPS 레벨을 정량화. LPS의 1 U는 ~ 100 페이지 LPS 총점이 아래 수준은 23 무시할 간주됩니다. 우리의 손에, HES 대부분의 배치는이 한도가 크게, 0.23 U / μg의 인 HES의 LPS의 평균 농도 (그림 5)입니다. 병리학의 생체 내 모델에서 LPS의 효과는 (예를 들어 천식 반응의 억제) LPS (23)의 적어도 10 NG가 필요합니다. 따라서 100 페이지 LPS / μg의 HES와 배치에서 5 μg의 HES의 생체 관리 500 페이지의 LPS, 잘 아래 LPS가 문제가된다 유효 농도를 포함 할 것이다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig1highres.jpg" /> 그림 1 : Baermann 장치 배어성인 H.의 수집을위한 MANN기구 설치 polygyrus (2 절에서 설명). <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig2highres.jpg" /> 그림 2 : 14 일 400 L3 유충 평균 웜에 감염 후 평균 웜 부담은 14 일 400 L3 유충 감염 후 부담. 표시된 데이터 포인트는 C57BL / 6xCBA 마우스의 감염의 19 별도 라운드에서 있습니다. ± SEM이 표시 의미. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig3highres.jpg" /> 그림 3 : 문화의 주 연속 수집 HES 단백질의 문화 SDS-PAGE 프로필에 주 연속에서 HES의 단백질 프로파일. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig4highres.jpg" /> 그림 4 : </strong&gt; 500㎖의 ES-포함하는 배양 상층 액의 약 500 ml의에서 파생 된 11 가지 배치에서 HES 단백질의 미디어 수율에서 HES의 최종 수량. ± SEM이 표시 의미. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig5highres.jpg" /> 그림 5 : 리 물러의 ameobocyte 분석에 의해 측정 HES의 41 일괄 LPS 오염의 HES 수준의 LPS 오염. 중간 LPS 농도 = HES의 86 U 당 MG. <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig6highres.jpg" /> 그림 6 : H. 애니메이션 회로도 HES의 분리에 애벌레와 어른 벌레의 회복을 통해 L3 유충의 구강 투여에서 키 수명주기 단계의 polygyrus 수명주기 개요. 그림 7 : HES와 그 기능 HES에 포함 된 수용성 매개체와 엑소 좀의 주요 면역 효과를 애니메이션 회로도. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" fo:keep-together.within-page="always"><tbody><tr><td> 유전자형 (및 배경 균주) </td><td> 차 감염 표현형 </td><td> 참고 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 근친 균주 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> A / J, CBA, C3H </td><td> 매우 취약 </td><td> 22,29 </td></tr><tr><td> C57BL / 6와 C57BL / 10 </td><td> 감수성 </td><td> 22,30 </td></tr><tr><td> BALB / C, DBA / 2, 129 / J </td><td> 중간의 </td><td> 22,31 </td></tr><tr><td> NIH, SJL, SWR </TD&gt; <td> 낮은 감수성 </td><td> (22), (32) </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> 사이토 카인 또는 사이토 카인 수용체 형질 </td><td></td></tr><tr><td> IL-1β - / - </td><td> 더 취약 </td><td> (33) </td></tr><tr><td rowspan="2"> IL-1R - / - </td><td rowspan="2"> 덜 영향 (a); 더 감수성의 변화 없지만 증가 육아종 (B) </td><td> (33) </td></tr><tr><td> (b) 34 </td></tr><tr><td> IL-2Rβ 유전자 변형 (C57BL / 6) </td><td> 저항하는 </td><td> (35) </td></tr><tr><td> IL-4 - / - </td><td> 높은 생산력 </td><td> (36) </td></tr><tr><td> IL-4R - / - (C57BL / 6 또는 BALB / c) </td><td> 매우 취약 </td><td> (22) </td></tr><tr><td> IL-6 - / - (BALB / c 또는 C57BL / 6) </td><td> 고도의 내성 </td><td> (37) </td></tr><tr><td> IL-9 형질 전환(FVB) </td><td> 저항하는 </td><td> (38) </td></tr><tr><td> IL-21R - / - (C57BL / 6) </td><td> 결핍은 Th2, 육아종 gormation 감소 </td><td> (39, 40) </td></tr><tr><td> IL-25 - / - (BALB / c) </td><td> 더 취약 </td><td> (33) </td></tr><tr><td> IL-33R (T1 / ST2) - / - (BALB / c) </td><td> 감수성 변화 없음 </td><td> (33) </td></tr><tr><td> TGFβRIIdn (C57BL / 6) </td><td> 높은 TH1, 감수성을 증가 </td><td> 41, 42 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> T 세포 형질 전환 용 마커 </td><td></td></tr><tr><td> CD28 - / - (BALB / c) </td><td> 변두리에 더 높은 생산력 </td><td> (43) </td></tr><tr><td> CD86 (B7-2) - / - (BALB / c) </td><td> 높은 생산력 </td><td> (44) </td></tr><tr><td> OX40L - / - (BALB / c) </td><td> 높은 생산력 및# 160; </td><td> (45) </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> 선천성 면역 궤적을위한 형질 전환 </td><td></td></tr><tr><td> 타입 1 인터페론 수용체 (IFNAR) - / - (C57BL / 6) </td><td> 높은 생산력, 더 육아종 </td><td> (34) </td></tr><tr><td> 에서 MyD88 - / - (C57BL / 6) </td><td> 더 많은 저항, 더 육아종 </td><td> (34) </td></tr><tr><td> C-KitW / 웨스트 버지니아 (WBB6) </td><td> 더 취약 </td><td> (46, 47) </td></tr></tbody></table> 표 1 : H.와 차 감염 유 전적으로 다른과 유전자 타겟으로 마우스 균주에 polygyrus.

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Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products

Heligmosomoides의 polygyrus 밀접 높은 널리 인간의 기생충 감염의 것과 유사 강력한 면역 조절 기능이있는 쥐의 선충이다. 여기에서는 H.의 장기적인 유지 관리 프로토콜을 기술 polygyrus 라이프 사이클.

재배<em&gt; Heligmosomoides Polygyrus :</em&gt; 면역 선충 기생충과 은닉하는 제품

Heligmosomoides polygyrus (formerly known as Nematospiroides dubius, and also referred to by some as H. bakeri) is a gastrointestinal helminth that ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products

18.3K 조회수.  University of Edinburgh.  Heligmosomoides의 polygyrus 밀접 높은 널리 인간의 기생충 감염의 것과 유사 강력한 면역 조절 기능이있는 쥐의 선충이다. 여기에서는 H.의 장기적인 유지 관리 프로토콜을 기술 polygyrus 라이프 사이클. 

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Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Rhipicephalus microplus &#8211; the cattle tick &#8211; is the most significant ectoparasite in terms of economic impact on livestock as a vector of several pathogens. Efforts have been dedicated to the cattle tick control to diminish its deleterious effects, with focus on the discovery of vaccine candidates, such as BM86, located on the surface of the tick gut epithelial cells. Current research focuses upon the utilization of cDNA and genomic libraries, to screen for other vaccine candidates. The isolation of tick gut cells constitutes an important advantage in investigating the composition of surface proteins upon the tick gut cells membrane. This paper constitutes a novel and feasible method for the isolation of epithelial cells, from the tick gut contents of semi-engorged R. microplus. This protocol utilizes TCEP and EDTA to release the epithelial cells from the subepithelial support tissues and a discontinuous density centrifugation gradient to separate epithelial cells from other cell types. Cell surface proteins were biotinylated and isolated from the tick gut epithelial cells, using streptavidin-linked magnetic beads allowing for downstream applications in FACS or LC-MS/MS-analysis.

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

A modified density centrifugation gradient-based methodology was utilized to isolate epithelial cells from Rhipicephalus microplus gut tissue. Surface-bound proteins were biotinylated and purified through streptavidin magnetic beads for utilization in downstream applications.

Biotinylated 세포 표면 단백질의 정제<em&gt; Rhipicephalus microplus</em&gt; 상피 직감 세포

Rhipicephalus microplus &#8211; the cattle tick &#8211; is the most significant ectoparasite in terms of economic impact on livestock as a vector of ...

연구

생화학

Transient Transduction of the Strobilated Forms of Echinococcus granulosus

Cystic echinococcosis or hydatid disease is one of the most important zoonotic parasitic diseases caused by Echinococcus granulosus, a small tapeworm harbored in the intestine of canines. There is an urgent need for applied genetic research to understand the mechanisms of pathogenesis and disease control and prevention. However, the lack of an effective gene evaluation system impedes direct interpretation of the functional genetics of cestode parasites, including the Echinococcus species. The present study demonstrates the potential of lentiviral gene transient transduction in the metacestode and strobilated forms of E. granulosus. Protoscoleces (PSCs) were isolated from hydatid cysts and transferred to specific biphasic culture media to develop into strobilated worms. The worms were transfected with harvested third-generation lentivirus, along with HEK293T cells as a transduction process control. A pronounced fluorescence was detected in the strobilated worms over 24 h and 48 h, indicating transient lentiviral transduction in E. granulosus. This work presents the first attempt at lentivirus-based transient transduction in tapeworms and demonstrates the promising outcomes with potential implications in experimental studies on flatworm biology.

Transient Transduction of the Strobilated Forms of Echinococcus granulosus

We describe a rapid transient transduction technique in different developmental stages of Echinococcus granulosus using third-generation lentiviral vectors.

Echinococcus granulosus의 스트로빌화 된 형태의 일시적인 형질 도입

Cystic echinococcosis or hydatid disease is one of the most important zoonotic parasitic diseases caused by Echinococcus granulosus, a small tapeworm ...

유전학

High Resolution Electron Microscopy of the Helicobacter pylori Cag Type IV Secretion System Pili Produced in Varying Conditions of Iron Availability

Helicobacter pylori is a helical-shaped, gram negative bacterium that colonizes the human gastric niche of half of the human population1,2. H. pylori is the primary cause of gastric cancer, the second leading cause of cancer-related deaths worldwide3. One virulence factor that has been associated with increased risk of gastric disease is the Cag-pathogenicity island, a 40-kb region within the chromosome of H. pylori that encodes a type IV secretion system and the cognate effector molecule, CagA4,5. The Cag-T4SS is responsible for translocating CagA and peptidoglycan into host epithelial cells5,6. The activity of the Cag-T4SS results in numerous changes in host cell biology including upregulation of cytokine expression, activation of proinflammatory pathways, cytoskeletal remodeling, and induction of oncogenic cell-signaling networks5-8. The Cag-T4SS is a macromolecular machine comprised of sub-assembly components spanning the inner and outer membrane and extending outward from the cell into the extracellular space. The extracellular portion of the Cag-T4SS is referred to as the &#8220;pilus&#8221;5. Numerous studies have demonstrated that the Cag-T4SS pili are formed at the host-pathogen interface9,10. However, the environmental features that regulate the biogenesis of this important organelle remain largely obscure. Recently, we reported that conditions of low iron availability increased the Cag-T4SS activity and pilus biogenesis. Here we present an optimized protocol to grow H. pylori in varying conditions of iron availability prior to co-culture with human gastric epithelial cells. Further, we present the comprehensive protocol for visualization of the hyper-piliated phenotype exhibited in iron restricted conditions by high resolution scanning electron microscopy analyses.

High Resolution Electron Microscopy of the Helicobacter pylori Cag Type IV Secretion System Pili Produced in Varying Conditions of Iron Availability

Here we describe a method to visualize the oncogenic bacterial organelle known as the Cag Type IV Secretion System (Cag-T4SS). We find that the Cag-T4SS is differentially produced on the surface of H. pylori in response to varying conditions of iron availability.

고해상도 전자 현미경<em&gt; 헬리코박터 파이로리</em철 가용성의 다양한 조건에서 생산&gt; CAG 유형 IV 분비 시스템 필리

Helicobacter pylori is a helical-shaped, gram negative bacterium that colonizes the human gastric niche of half of the human population1,2.  H. pylori is ...

면역학 및 감염병학

Organoids as Model for Infectious Diseases: Culture of Human and Murine Stomach Organoids and Microinjection of Helicobacter Pylori

Recently infection biologists have employed stem cell derived cultures to answer the need for new and better models to study host-pathogen interactions. Three cellular sources have been used: Embryonic stem cells (ESC), induced pluripotent stem cells (iPSC) or adult stem cells. Here, culture of mouse and human gastric organoids derived from adult stem cells is described and used for infection with the gastric pathogen Helicobacter pylori. Human gastric glands are isolated from resection material, seeded in a basement matrix and embedded in medium containing growth factors epidermal growth factor (EGF), R-spondin, Noggin, Wnt, fibroblast growth factor (FGF) 10, gastrin and transforming growth factor (TGF) beta inhibitor. In these conditions, gastric glands grow into 3-dimensional organoids containing 4 lineages of the stomach. The organoids expand indefinitely and can be frozen and thawed similarly as cell lines. For infection studies, bacteria are microinjected into the lumen of the organoids. Infected organoids are processed for imaging. The described methods can be adapted to other organoids and infections with other bacteria, viruses or parasites. This allows the study of infection-induced changes in primary cells.

Stem cell derived cultures harbor tremendous potential to model infectious diseases. Here, the culture of mouse and human gastric organoids derived from adult stem cells is described. The organoids are microinjected with the gastric pathogen Helicobacter pylori.

감염증에 대한 모델로 Organoids : 헬리코박터 파이로리의 인간의 문화와 쥐 위장 Organoids 및 미세 주입

Recently infection biologists have employed stem cell derived cultures to answer the need for new and better models to study host-pathogen interactions. ...

Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro (Protozoa Culture) and in vivo (Microinjection into Termite Hindgut)

We are developing a novel approach to subterranean termite control that would lead to reduced reliance on the use of chemical pesticides. Subterranean termites are dependent on protozoa in the hindguts of workers to efficiently digest wood. Lytic peptides have been shown to kill a variety of protozoan parasites (Mutwiri et al. 2000) and also protozoa in the gut of the Formosan subterranean termite, Coptotermes formosanus (Husseneder and Collier 2009). Lytic peptides are part of the nonspecific immune system of eukaryotes, and destroy the membranes of microorganisms (Leuschner and Hansel 2004). Most lytic peptides are not likely to harm higher eukaryotes, because they do not affect the electrically neutral cholesterol-containing cell membranes of higher eukaryotes (Javadpour et al. 1996). Lytic peptide action can be targeted to specific cell types by the addition of a ligand. For example, Hansel et al. (2007) reported that lytic peptides conjugated with cancer cell membrane receptor ligands could be used to destroy breast cancer cells, while lytic peptides alone or conjugated with non-specific peptides were not effective. Lytic peptides also have been conjugated to human hormones that bind to receptors on tumor cells for targeted destruction of prostate and testicular cancer cells (Leuschner and Hansel 2004).
In this article we present techniques used to demonstrate the protozoacidal activity of a lytic peptide (Hecate) coupled to a heptapeptide ligand that binds to the surface membrane of protozoa from the gut of the Formosan subterranean termite. These techniques include extirpation of the gut from termite workers, anaerobic culture of gut protozoa (Pseudotrichonympha grassii, Holomastigotoides hartmanni, Spirotrichonympha leidyi), microscopic confirmation that the ligand marked with a fluorescent dye binds to the termite gut protozoa and other free-living protozoa but not to bacteria or gut tissue. We also demonstrate that the same ligand coupled to a lytic peptide efficiently kills termite gut protozoa in vitro (protozoa culture) and in vivo (microinjection into hindgut of workers), but is less bacteriacidal than the lytic peptide alone. The loss of protozoa leads to the death of the termites in less than two weeks.
In the future, we will genetically engineer microorganisms that can survive in the termite hindgut and spread through a termite colony as "Trojan Horses" to express ligand-lytic peptides that would kill the protozoa in the termite gut and subsequently kill the termites in the colony. Ligand-lytic peptides also could be useful for drug development against protozoan parasites.

Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro Protozoa Culture and in vivo Microinjection into Termite Hindgut

We present procedures for demonstrating that ligands bind to the surface membrane of the cellulose-digesting protozoa in the gut of Formosan subterranean termites using fluorescent microscopy and that ligands coupled with lytic peptides kill these protozoa in vitro (anaerobic protozoa culture) and in vivo (injection into the termite hindgut).

원생 동물문 테미트 굿 반대 리간드 - lytic 펩티드의 Protozoacidal 활동 테스트 체외에서 (원생 동물문 문화) 및 생체내에 (테미트 Hindgut에 Microinjection)

We are developing a novel approach to subterranean termite control that would lead to reduced reliance on the use of chemical pesticides. Subterranean ...

생물학

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Helicobacter pylori is a gastric pathogen that is present in half of the global population and is a significant cause of morbidity and mortality in humans. Several mouse models of gastric Helicobacter infection have been developed to study the molecular and cellular mechanisms whereby H. pylori bacteria colonize the stomach of human hosts and cause disease. Herein, we describe protocols to: 1) prepare bacterial suspensions for the in vivo infection of mice via intragastric gavage; 2) determine bacterial colonization levels in mouse gastric tissues, by polymerase chain reaction (PCR) and viable counting; and 3) assess pathological changes, by histology. To establish Helicobacter infection in mice, specific pathogen-free (SPF) animals are first inoculated with suspensions (containing &#8805;105 colony-forming units, CFUs) of mouse-colonizing strains of either Helicobacter pylori or other gastric Helicobacter spp. from animals, such as Helicobacter felis. At the appropriate time-points post-infection, stomachs are excised and dissected sagittally into two equal tissue fragments, each comprising the antrum and body regions. One of these fragments is then used for either viable counting or DNA extraction, while the other is subjected to histological processing. Bacterial colonization and histopathological changes in the stomach may be assessed routinely in gastric tissue sections stained with Warthin-Starry, Giemsa or Haematoxylin and Eosin (H&#38;E) stains, as appropriate. Additional immunological analyses may also be undertaken by immunohistochemistry or immunofluorescence on mouse gastric tissue sections. The protocols described below are specifically designed to enable the assessment in mice of gastric pathologies resembling those in human-related H. pylori diseases, including inflammation, gland atrophy and lymphoid follicle formation. The inoculum preparation and intragastric gavage protocols may also be adapted to study the pathogenesis of other enteric human pathogens that colonize mice, such as Salmonella Typhimurium or Citrobacter rodentium.

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Mice represent an invaluable in vivo model to study infection and diseases caused by gastrointestinal microorganisms. Here, we describe the methods used to study bacterial colonization and histopathological changes in mouse models of Helicobacter pylori-related disease.

Helicobacter pylori is a gastric pathogen that is present in half of the global population and is a significant cause of morbidity and mortality in ...

Culturing and Genetically Manipulating Entomopathogenic Nematodes

Entomopathogenic nematodes in the genera Heterorhabditis and Steinernema are obligate parasites of insects that live in the soil. The main characteristic of their life cycle is the mutualistic association with the bacteria Photorhabdus and Xenorhabdus, respectively. The nematode parasites are able to locate and enter suitable insect hosts, subvert the insect immune response, and multiply efficiently to produce the next generation that will actively hunt new insect prey to infect. Due to the properties of their life cycle, entomopathogenic nematodes are popular biological control agents, which are used in combination with insecticides to control destructive agricultural insect pests. Simultaneously, these parasitic nematodes represent a research tool to analyze nematode pathogenicity and host anti-nematode responses. This research is aided by the recent development of genetic techniques and transcriptomic approaches for understanding the role of nematode secreted molecules during infection. Here, a detailed protocol on maintaining entomopathogenic nematodes and using a gene knockdown procedure is provided. These methodologies further promote the functional characterization of entomopathogenic nematode infection factors.

Entomopathogenic nematodes live in symbiosis with bacteria and together they successfully infect insects by undermining their innate immune system. To promote research on the genetic basis of nematode infection, methods for maintaining and genetically manipulating entomopathogenic nematodes are described.

Entomopathogenic Nematodes 배양 및 유전자 조작

Entomopathogenic nematodes in the genera Heterorhabditis and Steinernema are obligate parasites of insects that live in the soil. The main characteristic ...

A Strategy for the Study of IL-9-Producing Lymphoid Cells in the Nippostrongylus brasiliensis Infection Model

IL-9 is a pleiotropic cytokine associated with various processes, including antitumor immunity, induction of allergic pathologies, and the immune response against helminth infections, where it plays an important role in the expulsion of the parasite. In a murine model of Nippostrongylus brasiliensis infection, IL-9 is produced mainly by CD4+ T lymphocytes and innate lymphoid cells found in the lung, small intestine, and draining lymph nodes. Given the technical difficulties involved in the intracellular staining of IL-9, as well as the complexity of isolating hematopoietic cells from the small intestine upon infection, there is a pressing need for a comprehensive but straightforward protocol to analyze the expression of IL-9 in different lymphoid and non-lymphoid tissues in this model. The protocol described here outlines the kinetics of IL-9 produced by CD4+ T cells and innate lymphoid cells in the lung and small intestine, the main organs targeted by N. brasiliensis, as well as in the mediastinal and mesenteric lymph nodes, throughout the infection. In addition, it details the number of larvae needed for infection, depending on the cell type and organ of interest. This protocol aims to assist in the standardization of assays to save time and resources by offering the opportunity to focus on the specific cells, organs, and disease stages of interest in the N. brasiliensis infection model.

A Strategy for the Study of IL-9-Producing Lymphoid Cells in the Nippostrongylus brasiliensis Infection Model

IL-9-expressing T and ILC2 cells are induced during N. brasiliensis infection, yet their characterization has been largely overlooked in the infected intestine due to their low frequency and differential kinetics. This protocol describes the isolation of these cells from different target organs and confirmation of their identity via flow cytometry at different infection stages.

Nippostrongylus brasiliensis 감염 모델에서 IL-9 생성 림프 세포 연구를 위한 전략

IL-9 is a pleiotropic cytokine associated with various processes, including antitumor immunity, induction of allergic pathologies, and the immune response ...

Isolation And Dendritic Cell-Uptake of Small Extracellular Vesicles from Echinococcus granulosus

The secretion of extracellular vesicles by cestodes is crucial for enabling cellular communication not only among parasites but also with host tissues. In particular, small extracellular vesicles (sEVs) act as nano-carriers transferring natural antigens, which are critical in host immunomodulation and parasite survival. This article presents a step-by-step protocol to isolate sEVs from larval stage cultures of Echinococcus granulosus and analyzes their uptake by dendritic cells obtained from murine bone marrow, which acquire adhesion and antigen presentation capacity during their maturation after one week of in vitro culture. This article provides comprehensive information for generating, purifying, and quantifying sEVs using ultracentrifugation alongside parallel analyses of dynamic light scattering and transmission electron microscopy. Additionally, a detailed experimental protocol is outlined for isolating and cultivating mouse bone marrow cells and driving their differentiation into dendritic cells using Flt3L. These dendritic cells can present antigens to na&#239;ve T cells, thereby modulating the type of immune response in vivo. Thus, alternative protocols, including confocal microscopy and flow cytometry analysis, are proposed to check the acquired maturational phenotype of dendritic cells previously exposed to parasitic sEVs. Finally, it is worth noting that the described protocol can be applied as a whole or in individual parts to carry out parasite in vitro culture, isolate extracellular vesicles, generate bone marrow-derived dendritic cell cultures, and perform uptake assays with these cells.

Here, we describe in vitro culture conditions, isolation, and increased generation of extracellular vesicles (EVs) from Echinococcus granulosus. The small EVs were characterized by dynamic light scattering and transmission electron microscopy. The uptake by bone marrow-derived dendritic cells and their phenotypic modulation were studied using confocal microscopy and flow cytometry.

Isolation And Dendritic Cell-Uptake of Small Extracellular Vesicles from Echinococcus granulosus(Echinococcus granulosus에서 작은 세포외 소포의 분리 및 수지상 세포 흡수)

The secretion of extracellular vesicles by cestodes is crucial for enabling cellular communication not only among parasites but also with host tissues. In ...

Establishing Stable Binary Cultures of Symbiotic Saccharibacteria from the Oral Cavity

Many bacterial species cannot be cultured in the laboratory using standard methods, posing a significant barrier to studying the majority of microbial diversity on earth. Novel approaches are required to culture these uncultured bacteria so that investigators can effectively study their physiology and lifestyle using the powerful tools available in the laboratory. The Candidate Phyla Radiation (CPR) is one of the largest groups of uncultivated bacteria, comprising ~15% of the living diversity on earth. The first isolate of this group was a member of the Saccharibacteria phylum, 'Nanosynbacter lyticus' strain TM7x. TM7x is an unusually small bacterium that lives as a symbiont in direct contact with a bacterial host, Schaalia odontolytica, strain XH001. Taking advantage of the unusually small cell size and its lifestyle as a symbiotic organism, we developed a protocol to rapidly culture Saccharibacteria from dental plaque. This protocol will show how to filter a suspension of dental plaque through a 0.2 &#181;m filter, then concentrate the collected Saccharibacteria cells and infect a culture of host organisms. The resulting coculture can be passaged as any normal bacterial culture and infection is confirmed by PCR. The resulting binary culture can be maintained in the laboratory and used for future experiments. While contamination is a possibility, the binary culture can be purified by either further filtering and reinfection of host, or by plating the binary culture and screening for infected colonies. We hope this protocol can be expanded to other sample types and environments, leading to the cultivation of many more species in the CPR.

We demonstrate a method for isolating difficult-to-grow members of the novel bacterial phylum, Saccharibacteria, by filtering dental plaque and co-culturing with host bacteria.

구강에서 공생 사카리박테리아의 안정적인 이진 문화 구축

Many bacterial species cannot be cultured in the laboratory using standard methods, posing a significant barrier to studying the majority of microbial ...

재배

요약

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원생 동물문 테미트 굿 반대 리간드 - lytic 펩티드의 Protozoacidal 활동 테스트 체외에서 (원생 동물문 문화) 및 생체내에 (테미트 Hindgut에 Microinjection)

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Entomopathogenic Nematodes 배양 및 유전자 조작

Nippostrongylus brasiliensis 감염 모델에서 IL-9 생성 림프 세포 연구를 위한 전략

Isolation And Dendritic Cell-Uptake of Small Extracellular Vesicles from Echinococcus granulosus(Echinococcus granulosus에서 작은 세포외 소포의 분리 및 수지상 세포 흡수)

구강에서 공생 사카리박테리아의 안정적인 이진 문화 구축