The authors have nothing to disclose.

모든 절차 및 행동 시험은 관리 및 실험 동물의 사용을 위해 동물 관리의 가이드 라인에 대한 캐나다 협의회 준수 프로토콜 번호 06-11-12, 아래 MacEwan 대학의 동물 연구 윤리위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 정량 주입 탱크, 솔루션 및 관리 일정을 준비 <ol><li> 동물은 동일한 환경에서 시각적 자극에 시간이나 편향 어떤 혼동을 피하기 위해 하루 중 같은 시간 동안 투여되도록 관리 스케줄을 준비한다. </li><li> 그룹 크기의 수를 필요한만큼 동일, 1.5 L, 명확한 폴리 프로필렌 산란 탱크를 얻습니다. 물고기의 2 그룹에 대한 수 탱크 당 8 물고기의 사용 그룹이 과정에서 나중에 하루에 테스트 할 (3 단계 참조). 하나의 저장 탱크 및 그룹 당 하나의 투여 탱크 (그룹의 2 배 총 수)를 사용합니다. <ol><li> 모든 저장 탱크에 400 μm의 산란 삽입을 놓습니다. F병 서식지 물이나 올바른 온도에서 삼투 물을 역으로 탱크 (제브라 피쉬를 들어, 25 ~ 28 ° C) 온도 생선과 일치 일반적으로 수용된다. 주 : 일부 약물과 버퍼 서식지 물의 화학 성분 사이의 바람직하지 않은 화학적 상호 작용이있을 수 있습니다. 이 상황에서, 역방향 약물 투여없이 또는 최소한의 수족관 염 버퍼링 삼투 물뿐만 아니라위한 대조군을 사용한다. </li><li> 탱크 투여하는 동안 외부의 시각적 자극에 대한 조절 물고기를 방지하기 위해 중립적 인 환경에 있는지 확인하십시오. </li></ol></li><li> 약물 솔루션을 준비합니다. 산란 탱크에 서식지 물과 약물의 적절한 양을 섞는다. 물 1497 ㎖로 높은 등급의 에탄올 (95 % 비 - 변성 에탄올) 3 ㎖를 조합하여 0.2 % 에탄올 용액을 준비한다. 물 1479 ml의 에탄올 21 ml에 결합하여 1.4 % 에탄올 용액을 준비합니다. </li></ol> 2. 그물 물고기와 잇한올 관리 절차 <ol><li> 조심스럽게 그물 서식지 탱크에서 물고기와 산란 삽입을 포함하는 적절한 보관 탱크에 전송. 이상적으로, 모두 그물 제거하기 위해 산란 삽입에 물고기를 집. </li><li> 각각의 물 탱크에있는 모든 물고기와 부드럽게 산란이 유지 탱크에서 삽입하고 적절한 약액 탱크 (그림 1A)에 배치 올립니다. <ol><li> 필요에 따라 투약 시간을 기록한다. 여기에 기재된 절차에 대한 에탄올 용액에 30 분을 사용한다. </li><li> 가능한 경우, 단말기는 정확한 투약 시간을 보장하기 위해 동시에 약액에 모든 실험군의 전달에 도움이있다. 이와 달리, 한 번에 하나의 그룹을 전송하고 각각의 그룹의 투여 시간 (도 1a)을 추적. </li></ol></li><li> 필요한 투여주기의 끝에서, 신중 산란 삽입물을 올려서 에탄올 용액으로부터 물고기를 제거약액 부드럽게 다시 보유 탱크로 배치 아웃. </li><li> 물 탱크에 물고기와 다음 예약 된 투약 시간까지 다시 서식지로 배치, 또는 산란이 그물을 제거하기 위해 다시 저장 탱크에 삽입 배치 조심스럽게 그물. </li><li> 동물 하우징 장비, 집 보유 탱크로 사용되는 탱크와 같은 산란 인서트 동물 매개 변수 내에서 이전에, 가능한 한 바와 같이. 이 관리 절차를 수행하는 동안 모두 그물 제거됩니다. </li></ol> 3. 행동 테스트 <ol><li> 길이 55cm 흰색 방수 바닥 (그림 1B)와 깊이 9.5 cm에서 9.5 cm 폭 빛 / 어둠 무대를 얻습니다. 경기장 흰색에 덮여와 반 검은 색으로 덮여의 절반, 벨크로를 사용하여 경기장의 내부 벽에 흰색과 검은 색 방수 비 반사 종이를 부착합니다. 25 ~ 28 ° C의 온도에서 서식지 물 5cm의 깊이로 무대를 채 웁니다. MAINT테스트를 통해 온도를 줄 알아. </li><li> 경기장에 위치해 위해 흰색 3면 인클로저를 구성하여 외부의 시각적 자극을 Minimalize. 시험 영역은 물 표면에 반사가 발생하지 않습니다 오버 헤드 조명을 확산이 아직 충분히 이동 추적 소프트웨어, 또는 게시물에 대한 밝은 확인 비디오 이미지에서 -hoc 설명서를 정량화. </li><li> 인클로저에 경기장을 배치하고 동작 추적 소프트웨어의 기록 및 운동 분석 매개 변수를 설정합니다. 연구 문제에 따라 5 ~ 15 분으로 시험 시간을 설정합니다. 참고 : 여기에, 우리는 5 분을 사용했다. </li><li> 물고기의 그룹이 서식지 탱크의 연구 영역으로 테스트 할 전송 및 경기장 인클로저의 외부에 배치합니다. 10 분 동안 물고기를 적응. </li><li> / 암 분야의 중심에 적절한 그룹과 장소에서 부드럽게 그물 물고기가 AVO하는 경기장의 장축에 평행하게 위치 할 때 어류를 해제해야 되밝거나 어두운 영역에 물고기를 바이어스 ID입니다. </li><li> 동물이 출시 직후 기록 동작을 시작합니다. 물고기를 추적하거나 점프 물고기 또는 동결에 대한 소프트웨어 문제에 대한 조심. 대상자의 절반 인해 경기장의 끝이 인클로저의 오픈 엔드를 지향하는로 인한 편견에 어떤 혼동을 방지하기 위해 테스트 한 후 무대를 180도 회전합니다. </li><li> 재판은, 부드럽게 그물 종료 및 저장 탱크 또는 서식지 탱크 경기장에서 물고기를 제거 후. </li></ol> 4. 분석 <ol><li> 어두운 영역에 비해 빛에 소요되는 시간을 검사합니다. 각 그룹 및 각 물고기의 경우, 빛과 어두운 영역에서 소비 된 상대 시간을 획득하고 하나의 샘플 T는 - 테스트를 사용하여 분석 (또는 윌 콕슨은 비모수 데이터 signed rank test를, 차이를 총 시험 시간 (하프) 150 초에서) 그룹이 크게 다른 이상 한 지역을 선호하는 경우 확인합니다. </li><li> prefe을 계산, 환경 설정을 비교하려면어두운 영역에서 소요 된 시간에서 광 영역에서 소요과 그룹 간의 차이를 비교하는 시간을 감산함으로써, 보험료 인덱스. T- 테스트는 두 그룹을 비교하는데 사용될 수있다. Tukey의 HSD 포스트 특별 시험을 활용하여 분산의 한 방법으로 분석을 여러 그룹을 비교하여 필요한 경우 (던의 다중 비교 비모수 데이터에 대한 사후 테스트 또는 크루스 칼 - 월리스 테스트). </li><li> 그룹간에 속도, 사행 영역 전환, 수, 부동 비교. Tukey의 HSD 포스트 혹 시험을 이용 일원 변량 분석을 사용하여 필요한 경우 (던의 다중 비교 비모수 데이터에 대한 사후 시험 또는 크루스 칼 - 월리스 시험). </li></ol>

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저자는 그림 1에 사용되는 그의 사진 장비의 사용 여호수아 갤럽을 인정합니다.이 작품은 (TJH에) 자연 과학 및 공학 연구위원회 (NSERC) 캐나다 디스커버리 보조금에 의해 지원되었다.

제브라 피쉬에서 약물 투여와 관련된 이전의 연구는 단순히 약물 솔루션 (12, 16)에 자신의 집 탱크에서 그들을 수송하는 물고기를 그물에 의존했다. 그물은 항상 일치하지 않습니다 종종 인해 상당한 약간의 차이가있는 제브라 피쉬의 탈출 응답하는 데 예상보다 시간이 오래 걸립니다. 기존의 전송 방법은, 유용하지만, 물고기가 물 이외의 총 소요 시간의 양을 감소뿐만 아니라 동물 간의 ...

제브라 피쉬 (다니오 레 리오 (rerio)는) 행동 1 및 의료 연구 2,3를위한 유용한 모델 생물 인도에서 발생하는 작은 경골 종입니다. 제브라 피쉬는 또한 일반적으로 거동에 미치는 영향을 특성화하기 위해 다양한 약리 물질의 시험에 사용된다. 다양한 투여 량 및 약물 투여 스케줄 같은 자극제 4, 5 및 항불안제 에탄올 6-8과 같은 화합물의 투여 후 지브라 피쉬의 거동을 조사하기 위해 사용되어왔다. 우리 연구소는 또한 일반적으로 scototaxic 분석이라 잘 검증 빛 / 어둠 분석 9, 20,에 제브라 피쉬의 불안과 운동에 에탄올 관리의 일정을 다른의 효과를 조사했다. 에탄올 투여 새로운 방법은 장기간 (이십일일) 6 위에 반복적 인 매일 투여 효율성을 높이기 위해 개발되었다 </s&gt;까지. 이전에 사용 된 방법은 그러나, 우리는 관련 시간 비용, 그물 감소 방법을 개발하고자, 물고기 많은 관심 약물의 동시 투여를 정확하게 타이밍 허용 실용적이었다. 기존의 연구를 사용하여 에탄올, 제브라 피쉬는 그물로하고 에탄올과 물을 10 ~ 12의 적절한 혼합물을 포함하는 다른 하나의 탱크에서 전송. 이 방법은 널리 알려진 방법이지만, 제브라 피쉬 그물 것은 도입 약액으로부터 물고기를 제거하는 데 걸리는 시간에 변동을 증가시킬 수있다. 따라서 관심의 화합물에 대한 정확한 노출을 반복 투여를 포함하는 실험의 과정을 통해 달라질 수 있습니다. 전송 시대에 변화에 따른 오류의 원인을 감소시키는 방법은, 따라서 바람직하다. 우리의 방법으로 우리는 각각의 물고기 동일 투여 시간의 결과로, 동시에 모든 물고기를 이동 할 수 있습니다. (여기에 설명 된)을 에탄올 노출 후, 제브라 피쉬 어떤 접점에서 시험 될 수있다불안을 평가하는 것을 포함하여 행동 분석의 R. 새로운 방법을 사용하여 물고기의 그룹을 투여하는 것은 정확하게 복제 및 물고기의 그룹 주제 사이에 걸쳐 투여를 표준화 할 수있는 기능을 넘어 실제적인 용도를 가지고있다. 연구자들은 실험에서 반복 가능성과 정확성을 보장하기 위해 우리의 방법을 이용하여 볼 수 있습니다 한 번에 여러 물고기의 추적을 허용 새로운 소프트웨어의 등장. 생물 심리학위한 모델 생물로서 지브라 피쉬의 광범위한 사용을 고려하면,이 방법은 향후 약리 시험에서의 효율과 실용성을 증가시킬 것이다. 본 패러다임에서, 반복 투여 일정은 대략 인간 마시는 일정을 반영 것을 사용 하였다. 제어, 매일 중등도, 또는 매주-파티 : 생선은 무작위로 1 ~ 3의 그룹에 할당되었다. 투약 일정은 크게 기존의 연구 7 노출 시간을 초과했기 때문에 선택, 기간 21 일이었다. 제어 물고기는 제로 ALCO을 받았습니다HOL, 매일 적당한 물고기는 하루에 한 번 0.2 %의 알코올을 받고, 주간 - 파티 물고기는 일주일에 1.4 %의 알코올을 한 번 받았다. 빛 / 어둠 작업은 철수 2 일 후에 불안을 평가하기 위해 사용되었다. 이것은 한쪽 벽이 백색과 다른쪽에 9 어둡게되는 직사각형 경기장을 사용하는 관리하는 비교적 간단한 테스트이다. 성인 제브라 피쉬는 견고하게 제어 조건 6,9,13에서 경기장의 어두운면을 선호한다. 증가 불안은 작동에 어두운 영역에서 보낸 훨씬 더 많은 시간으로 정의하고, 물고기가 빛 영역에서 소비 상대적으로 더 많은 시간을 소비 할 때 불안을 가정 할 수 감소. 모션 추적 소프트웨어를 다른 정보 변수는 평균 속도, 부동, 사행 포함, 정량화 및 영역 (14)을 전환 할 수 있습니다. 우리 실험실에서 개발 된 투여 방법은 수용성 화합물은 하나 이상의 zebrafi에게 투여되는 임의의 연구에 적용 할 수있다SH. 이 방법론 혜택을 누릴 수있는 많은 다른 약리 에이전트는 현재 제브라 피쉬에서 테스트되고있다. 일반적으로 시험 화합물을 에탄올과 유사한 방식에 용해 니코틴 chlordiazepoxide, 부스 피론 및 스코 폴라 민을 포함한다; 물에 화학 물질의 적절한 양을 혼합함으로써. 따라서,이 절차의 일반적인 범위는 훨씬 더 넓은 및 에탄올에 제한되지 않는다. 또한, 여러 일에 대한 약물 투여 후, 빛 / 어둠 작업이 이용 될 수있는 많은 행동 검사 중 하나입니다. 약물 투여 후 또는 철회 동안 이용 될 수있는 다른 인기있는 분석은 새로운 탱크 다이빙 테스트 (15) 및 (16) 천수와 같은 사회적 행동의 테스트를 포함한다. 다음 절차를 반복 관심 약리 화합물을 함유 한 용액에 물고기 또는 물고기 개별 그룹을 전송하는 효율적인 방법을 개설 할 것이다. 또한, 빛 / 어둠 테스트와 시험 불안의 과정알코올 투여 긴 스케줄에 노출 된 후 철수에 물고기의 그룹으로 설명한다.

<table><tbody><tr><td>Three shelf benchtop housing system</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/research-systems/z-hab-system/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>1.5 L Spawning tank w/400 &amp;mu;m baffle</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/consumables/tanks-lids-and-baffles/info/nursery-tank-and-baffles/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pure Grain Ethanol</td><td><a href="http://www.luxco.com/brands/vodka-neutral-spirits-neutral-spirits-everclear" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Luxco, INC</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethovision XT Motion tracking software</td><td><a href="http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Noldus Information Technology</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette</td><td><a href="http://eshop.eppendorf.ca/categories/1" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Eppendorf Canada</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Light/Dark Arena</td><td>Custom</td><td></td><td>Construct as per procedure description. 9.5 cm wide, 9.5 cm deep, 55 cm long.</td></tr></tbody></table>

a novel method of drug administration to multiple zebrafish (danio rerio) and the quantification of withdrawal

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely netted and transported between home aquaria and dosing tanks. In order to enhance the ease of compound administration, a novel method for transferring fish between tanks for drug administration was developed. Inserts that are designed for spawning were used to transfer groups of fish into the drug solution, allowing accurate dosing of all fish in the group. This increases the precision and efficiency of dosing, which becomes very important in long schedules of repeated drug administration. We implemented this procedure for use in a study examining the behavior of zebrafish in the light/dark test after administering ethanol with differing 21 day schedules. In fish exposed to daily-moderate amounts of alcohol there was a significant difference in location preference after 2 days of withdrawal when compared to the control group. However, a significant difference in location preference in a group exposed to weekly-binge administration was not observed. 
This protocol can be generalized for use with all types of compounds that are water-soluble and may be used in any situation when the behavior of fish during or after long schedules of drug administration is being examined. The light/dark test is also a valuable method of assessing withdrawal-induced changes in anxiety.

상기 한 바와 같이이 일관되고 정확하게 시간에 에탄올 관리의 지속 시간 중요하다 제브라 피쉬와 약리 연구의 정확성과 제어를 유지합니다. 우리의 절차는 절차 투여의 용이성 및 처리량을 증가시킬 수있다. 주간-파티 또는 매일 중등도 중 일정에 에탄올을 투여 대조군과 비교, 빛 / 어둠 테스트로 측정 변경된 불안 수준, 결과. 이틀 마지막 투여 후 시험 할 때, (어떤 술을받은,하지만 여전히 투?...

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A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal

A novel method for reducing variability when exposing fish to drugs is explained. Fish exposed to various patterns of ethanol exposure were found to have altered anxiety levels during withdrawal in a light/dark scototaxic assay.

여러 제브라 피쉬에의 약국 (FDA)의 새로운 방법 (<em&gt; 다니오의 레 리오 (rerio)</em&gt;)와 철수의 정량화

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely ...

a-novel-method-drug-administration-to-multiple-zebrafish-danio-rerio

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) and the Quantification of Withdrawal

12.1K 조회수.  MacEwan University. A novel method for reducing variability when exposing fish to drugs is explained. Fish exposed to various patterns of ethanol exposure were found to have altered anxiety levels during withdrawal in a light/dark scototaxic assay.

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Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of stress-related diseases and psychiatric disorders, yet further studies into the genetic and neuronal regulation of stress are still required to develop better therapeutics. The zebrafish provides a powerful genetic model to investigate the neural underpinnings of stress, as there exists a large collection of mutant and transgenic lines. Moreover, pharmacology can easily be applied to zebrafish, as most drugs can be added directly to water. We describe here the use of the 'novel tank test' as a method to study innate stress responses in zebrafish, and demonstrate how potential anxiolytic drugs can be validated using the assay. The method can easily be coupled with zebrafish lines harboring genetic mutations, or those in which transgenic approaches for manipulating precise neural circuits are used. The assay can also be used in other fish models. Together, the described protocol should facilitate the adoption of this simple assay to other laboratories.

This manuscript describes a simple method to measure stress behaviorally in adult zebrafish. The approach takes advantage of the innate tendency that zebrafish prefer the bottom half of a tank when in a stressful state. We also describe methods for coupling the assay with pharmacology.

제 브라 피시에서 선천적인 스트레스를 연구 하는 행동 접근법

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of ...

연구

행동분석학

Optimized Intravenous Injection in Adult Zebrafish

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in mammalian research models. However, its application in adult zebrafish for drug delivery, stem cell transplantation, and regenerative and cancer studies has been limited due to the challenges posed by their small body size and intricate blood vessels. To overcome these limitations, alternative injection techniques such as intracardiac and retro-orbital (RO) injection have been explored in the past for stem cell transplantation in adult zebrafish. However, these techniques have their drawbacks, including the need for meticulous injection techniques or increased risk of mortality.
In this study, we have developed a refined and optimized IV injection procedure specifically tailored to adult zebrafish, addressing the challenges associated with their unique anatomy. To demonstrate the effectiveness of this technique, we performed successful IV injections of whole kidney marrow cells from Tg(mpo: EGFP) fish and FITC-dextran dye into adult Casper fish. The subsequent visualization of injected cells and dyes using a fluorescence microscope confirmed their successful delivery and engraftment within the zebrafish. Furthermore, we demonstrated that compared with the intracardiac and RO injections, the IV injection resulted in improved survival rates and engraftment efficiency in treated zebrafish. This approach enables precise delivery and localization of substances and holds great potential for large-scale drug and chemical screening using adult zebrafish. Additionally, the ability to visually track the injected cells and dyes provides invaluable insights into their engraftment, migration, and interactions with host tissues, enabling a more comprehensive evaluation of therapeutic effects and biological processes in zebrafish models.

Here, we present an optimized and effective protocol for the intravenous injection of cells or pharmacological agents into adult zebrafish, resulting in enhanced cell engraftment and increased survival rates of the treated zebrafish.

성체 제브라피쉬에 최적화된 정맥 주사

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in ...

암 연구학

Oral Intubation of Adult Zebrafish: A Model for Evaluating Intestinal Uptake of Bioactive Compounds

Most pathogens invade organisms through their mucosa. This is particularly true in fish as they are continuously exposed to a microbial-rich water environment. Developing effective methods for oral delivery of immunostimulants or vaccines, which activate the immune system against infectious diseases, is highly desirable. In devising prophylactic tools, good experimental models are needed to test their performance. Here, we show a method for oral intubation of adult zebrafish and a set of procedures to dissect and prepare the intestine for cytometry, confocal microscopy and quantitative polymerase chain reaction (qPCR) analysis. With this protocol, we can precisely administer volumes up to 50 &#181;L to fish weighing approximately 1 g simply and quickly, without harming the animals. This method allows us to explore the direct in vivo uptake of fluorescently labelled compounds by the intestinal mucosa and the immunomodulatory capacity of such biologics at the local site after intubation. By combining downstream methods such as flow cytometry, histology, qPCR and confocal microscopy of the intestinal tissue, we can understand how immunostimulants or vaccines are able to cross the intestinal mucosal barriers, pass through the lamina propria, and reach the muscle, exerting an effect on the intestinal mucosal immune system. The model could be used to test candidate oral prophylactics and delivery systems or the local effect of any orally administered bioactive compound.

The protocol describes intubating adult zebrafish with a biologic; then dissecting and preparing the intestine for cytometry, confocal microscopy and qPCR. This method allows administration of bioactive compounds to monitor intestinal uptake and the local immune stimulus evoked. It&#160;is relevant for testing the intestinal dynamics of oral prophylactics.

성인 Zebrafish의 구강 삽 관 법: 생리 활성 화합물의 장의 이해를 평가 하기 위한 모델

Most pathogens invade organisms through their mucosa. This is particularly true in fish as they are continuously exposed to a microbial-rich water ...

면역학 및 감염병학

Gavaging Adult Zebrafish

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or agents in solutions for scientific research. Current methods for administering compounds orally to adult zebrafish are inaccurate due to variability in voluntary consumption by the fish. A gavage procedure was developed to deliver precise quantities of infectious agents to zebrafish for study in biomedical research. Adult zebrafish over 6 months of age were anesthetized with 150 mg/L of buffered MS-222 and gavaged with 5 &mu;l of solution using flexible catheter implantation tubing attached to a cut 22-G needle tip. The flexible tubing was lowered into the oral cavity of the zebrafish until the tip of the tubing extended past the gills (approximately 1 cm). The solution was then injected slowly into the intestinal tract. This method was effective 88% of the time, with fish recovering uneventfully. This procedure is also efficient as one person can gavage 20-30 fish in one hour. This method can be used to precisely administer agents for infectious diseases studies, or studies of other compounds in adult zebrafish.

The increasing use of zebrafish as an animal model requires the development of effective methods for the delivery of known quantities of compounds and solutions. The gavage procedure described below allows for the oral delivery of precise volumes of solution reliably, safely and efficiently to adult zebrafish.

성인 Zebrafish의를 Gavaging

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

생물학

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has transparent embryos and rapid external development. Zebrafish embryos can, therefore, also be used for the rapid evaluation of toxicity of the drugs that are precious and available in small quantities. In the present article, a method for the efficient screening of the toxicity of chemical compounds using 1-5-day post fertilization embryos is described. The embryos are monitored by stereomicroscope to investigate the phenotypic defects caused by the exposure to different concentrations of compounds. Half-maximal lethal concentrations (LC50) of the compounds are also determined. The present study required 3-6 mg of an inhibitor compound, and the whole experiment takes about 8-10 h to be completed by an individual in a laboratory having basic facilities. The current protocol is suitable for testing any compound to identify intolerable toxic or off-target effects of the compound in the early phase of drug discovery and to detect subtle toxic effects that may be missed in the cell culture or other animal models. The method reduces procedural delays and costs of drug development.

Zebrafish embryos are used for evaluating the toxicity of chemical compounds. They develop externally and are sensitive to chemicals, allowing detection of subtle phenotypic changes. The experiment only requires a small amount of compound, which is directly added to the plate containing embryos, making the testing system efficient and cost-effective.

Zebrafish 배아를 이용한 화학 화합물의 독성에 대한 신속한 평가

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...

의학

High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

Zebrafish are an important model organism with inherent advantages that have the potential to make zebrafish a widely applied model for the study of energy homeostasis and obesity. The small size of zebrafish allows for assays on embryos to be conducted in a 96- or 384-well plate format, Morpholino and CRISPR based technologies promote ease of genetic manipulation, and drug treatment by bath application is viable. Moreover, zebrafish are ideal for forward genetic screens allowing for novel gene discovery. Given the relative novelty of zebrafish as a model for obesity, it is necessary to develop tools that fully exploit these benefits. Herein, we describe a method to measure energy expenditure in thousands of embryonic zebrafish simultaneously. We have developed a whole animal microplate platform in which we use 96-well plates to isolate individual fish and we assess cumulative NADH2 production using the commercially available cell culture viability reagent alamarBlue. In poikilotherms the relationship between NADH2 production and energy expenditure is tightly linked. This energy expenditure assay creates the potential to rapidly screen pharmacological or genetic manipulations that directly alter energy expenditure or alter the response to an applied drug (e.g. insulin sensitizers).

High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

Zebrafish are an important model organism for the study of energy homeostasis. By utilizing a NADH2 sensitive redox indicator, alamar Blue, we have developed an assay that measures the metabolic rate of zebrafish larvae in a 96 well plate format and can be applied to drug or gene discovery.

높은 처리량<em&gt; 다니오 레 리오 (rerio)</em&gt; 에너지 지출 분석

Zebrafish are an important model organism with inherent advantages that have the potential to make zebrafish a widely applied model for the study of ...

성인 제브라피쉬의 신경 독성 효과를 평가하기 위한 행동 테스트 배터리

Neurotoxicity Assessment in Adult Danio rerio using a Battery of Behavioral Tests in a Single Tank

The presence of neuropathological effects proved to be, for many years, the main endpoint for assessing the neurotoxicity of a chemical substance. However, in the last 50 years, the effects of chemicals on the behavior of model species have been actively investigated. Progressively, behavioral endpoints were incorporated into neurotoxicological screening protocols, and these functional outcomes are now routinely used to identify and determine the potential neurotoxicity of chemicals. Behavioral assays in adult zebrafish provide a standardized and reliable means to study a wide range of behaviors, including anxiety, social interaction, learning, memory, and addiction. Behavioral assays in adult zebrafish typically involve placing the fish in an experimental arena and recording and analyzing their behavior using video tracking software. Fish can be exposed to various stimuli, and their behavior can be quantified using a variety of metrics. The novel tank test is one of the most accepted and widely used tests to study anxiety-like behavior in fish. The shoaling and social preference tests are useful in studying the social behavior of zebrafish. This assay is particularly interesting since the behavior of the entire shoal is studied. These assays have proven to be highly reproducible and sensitive to pharmacological and genetic manipulations, making them valuable tools for studying the neural circuits and molecular mechanisms underlying behavior. Additionally, these assays can be used in drug screening to identify compounds that may be potential modulators of behavior.
We will show in this work how to apply behavioral tools in fish neurotoxicology, analyzing the effect of methamphetamine, a recreational drug, and glyphosate, an environmental pollutant. The results demonstrate the significant contribution of behavioral assays in adult zebrafish to the understanding of the neurotoxicological effects of environmental pollutants and drugs, in addition to providing insights into the molecular mechanisms that may alter neuronal function.

저자 스포트라이트: 성체 제브라피시의 환경 및 약물 유발 행동 변화 평가 

Here, we present a comprehensive behavioral test battery, including the novel tank, Shoaling, and social preference tests, to effectively determine the potential neurotoxic effects of chemicals (e.g., methamphetamine and glyphosate) on adult zebrafish using a single tank. This method is relevant to neurotoxicity and environmental research.

단일 탱크에서 행동 테스트 배터리를 사용한 성인 Danio rerio 의 신경 독성 평가

The presence of neuropathological effects proved to be, for many years, the main endpoint for assessing the neurotoxicity of a chemical substance. ...

신경과학

High-throughput Measurement of Gut Transit Time Using Larval Zebrafish

Zebrafish are used as alternative model organisms for drug safety testing. The gastrointestinal (GI) tract of zebrafish has genetic, neuronal, and pharmacological similarities to that of the mammals. GI intolerance during clinical testing of drug candidates is common and may pose a serious threat to human health. Testing for GI toxicity in preclinical mammalian models can be expensive in terms of time, test compound, and labor. The high-throughput method presented here may be used to predict GI safety issues. Compared to mammalian models, this method allows for more expedient assessment of test compound effects on GI transit while using low quantities of compound. In this method, larval zebrafish (7 days post fertilization) are fed food containing a fluorescent label. After feeding, each larval fish is placed into a well of a 96-conical-bottom-well plate and dosed with test compound (dissolved in water) or the vehicle. As gut transit occurs, fecal matter accumulates on the bottom of the wells, and the rate at which this happens is monitored by measuring fluorescence from the bottom of the well repeatedly over time using a plate spectrophotometer. The fluorescence from larvae in a given treatment group are averaged and these values are graphed along with standard error, for each measurement time, yielding a curve representing average transit of food over time. Effects on gut transit time are identified by comparing the area under the curve for each treatment group to that of the vehicle-treated group. This method detected changes in zebrafish GI transit time induced by drugs with known clinical GI effects; it can be employed to interrogate dozens of treatments for GI effects per day. As such, safer compounds can be quickly prioritized for mammalian testing, which expedites discovery and proffers 3Rs advancement.

The goal of this protocol is to measure the transit time of fluorescently labeled food through the gut of larval zebrafish in a high throughput fashion.

여러 제브라 피쉬에의 약국 (FDA)의 새로운 방법 (

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제 브라 피시에서 선천적인 스트레스를 연구 하는 행동 접근법

성체 제브라피쉬에 최적화된 정맥 주사

성인 Zebrafish의 구강 삽 관 법: 생리 활성 화합물의 장의 이해를 평가 하기 위한 모델

성인 Zebrafish의를 Gavaging

Zebrafish 배아를 이용한 화학 화합물의 독성에 대한 신속한 평가

높은 처리량

단일 탱크에서 행동 테스트 배터리를 사용한 성인 Danio rerio 의 신경 독성 평가

단일 탱크에서 행동 테스트 배터리를 사용한 성인 Danio rerio 의 신경 독성 평가

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애벌레 Zebrafish를 사용 하 여 창 자 환승 시간의 높은 처리량 측정