The authors have nothing to disclose.

すべての手順および行動試験は、実験動物の管理と使用のための動物ケアのガイドラインについては、カナダ人評議会に準拠しているプロトコル番号06-11-12、下マキュワン大学の動物実験倫理委員会によって承認された。 1.投与タンク、ソリューション、および投与スケジュールを準備<ol><li>動物は視覚刺激に時間やバイアスのいずれ交絡を避けるために、同じ環境で、一日の同じ時間の間に投与されるような投与スケジュールを準備します。 </li><li>グループサイズの数に対して必要な限り多くの同一、1.5 L、明確なポリプロピレン産卵タンクを入手します。魚の2つのグループを可能にし、タンクあたり8魚の使用グループは手順で後述日あたりテストされる（ ステップ3を参照）。 1保持タンクやグループごとに1つの投与タンク（グループの2倍合計数）を使用します。 <ol><li>すべての保持タンクに400μmの産卵インサートを置きます。 F病気生息水でタンクまたは温度魚と一致している（ゼブラフィッシュのため、25〜28℃）、正しい温度で逆浸透水は、通常に収容されている。 注：一部の薬剤および緩衝生息水の化学成分間の望ましくない化学的相互作用が存在し得る。この状況では、逆浸透薬物投与のための最小または全く水槽塩で緩衝水、ならびに対照群のために使用する。 </li><li>タンクは、投薬時に外部視覚刺激にコンディショニングの魚を避けるために、中立的な環境であることを確認します。 </li></ol></li><li>薬液を準備します。産卵タンクで生息地の水と適切な量の薬剤を混ぜる。水1497ミリリットルでハイグレードのエタノール（95％非変性エタノール）の3ミリリットルを組み合わせることにより、0.2％エタノール溶液を調製します。水1479ミリリットルとエタノール21ミリリットルを組み合わせることにより、1.4％エタノール溶液を調製します。 </li></ol> 2.ネッティング魚、そしてEthanol管理手順<ol><li>慎重にネット生息タンクから魚や産卵挿入物を含む適切な保持タンクに移す。理想的には、産卵中の家の魚は完全にネッティングを排除するために挿入します。 </li><li>それぞれの保持タンク内のすべての魚と、優しく保持タンクの外に挿入し、適切な薬液タンク（ 図1A）にそれを置いて産卵を持ち上げる。 <ol><li>必要に応じて、投与時間を記録します。ここで説明する手順のためのエタノール溶液に30分を使用してください。 </li><li>可能な場合、アシスタントは、正確な投薬時間を確保すると同時に薬液を全ての実験群の転送を支援している。代替的に、一度に1つのグループを転送し、個々のグループの投薬回数（ 図1A）を追跡する。 </li></ol></li><li>必要な投与期間の終わりに、慎重に産卵インサートを持ち上げることにより、エタノール溶液から魚を外す薬液のうち、背面保持タンクに優しく置く。 </li><li>優しくネット保持タンク内の魚や次回のスケジュール、投与時まで戻って自分の生息地にそれらを配置するか、産卵を配置ネッティングを排除するために戻って保持タンクに挿入します。 </li><li>動物の住宅設備機器、住宅貯蔵タンクとして使用されているものと同じタンクと産卵インサートにおける動物のパラメータの範囲内で以前に、可能な場合に述べたように。これは投与手順の間に完全にネッティングがなくなります。 </li></ol> 3.行動試験<ol><li>長い55センチメートルと白の防水床（ 図1B）との深い9.5センチメートル9.5センチ幅の明/暗アリーナを取得します。黒で覆われた白と半分に覆われたアリーナの半分で、マジックテープを使用して、アリーナの内壁に白と黒の防水無反射紙を貼る。 25-28℃の温度で、生息地の水で5cmの深さにアリーナを埋める。通販テスト全体でこの温度をAINの。 </li><li>アリーナ内に位置されるためには、白三面囲いを構築することにより、外部視覚刺激をMinimalize。テストエリアが水面上に反射を起こさない頭上の照明を拡散持って、まだ十分に運動追跡ソフトウェア、またはポストのために明るいあることを確認してくださいビデオ画像から-hoc手動定量。 </li><li>エンクロージャにアリーナを置き、行動追跡ソフトウェアの記録と運動解析パラメータを設定します。研究課題に応じて、5〜15分までの試用期間を設定します。 注：ここでは、5分を使用していました。 </li><li>魚の群が生息タンク内の研究領域にテスト​​される輸送し、アリーナエンクロージャの外に配置します。 10分間の魚を順応さ。 </li><li>明/暗アリーナの中央に該当するグループと場所から静かにネット魚は、AVOするアリーナの長軸に平行に配置されたとき、魚を解放することを確認され光や暗いゾーンに魚をバイアスするID。 </li><li>動物が解放された直後に記録動作を開始します。魚を追跡または魚のジャンプや凍結のための任意のソフトウェアの問題を監視します。被験者の半数に起因アリーナの端が筐体の開口端に向かって配向されているから生じる偏見にどんな交絡を防ぐためにテストされた後に、アリーナを180°回転させます。 </li><li>裁判の後、終了優しくネットと保持タンクや生息地のタンクにアリーナから魚を削除しています。 </li></ol> 4.分析<ol><li>ダークゾーンに対する光の中で費やされた時間を調べます。グループごとに、それぞれの魚、光と闇のゾーンで過ごした相対的な時間を得て、1 標本t -test使用して分析する（またはウィルコクソンをノンパラメトリックデータのための順位検定を締結し、総試行時間の（半分）150秒との違い）グループは大幅に他の上の1つの領域を好むかどうかを判断する。 </li><li>環境設定を比較するには、prefeを計算暗いゾーンで過ごした時間からの光帯に過ごし、群間の差を比較する時間を減算することによりrenceインデックス。 のt-試験は、2つのグループを比較するために使用され得る。 TukeyのHSDポストホックテスト、必要な場合（ノンパラメトリックデータ用またはクラスカル·ワリス検定Dunnの多重比較ポストホック付きテスト）を利用した一元配置分散分析で複数のグループを比較してください。 </li><li>速度、ゾーン遷移の数、蛇行、およびグループ間で不動の比較。 TukeyのHSDポストホック検定を用いた一元配置分散分析を使用して、必要に応じて（Dunnの多重比較、ノンパラメトリックデータのための事後検定又はクラスカル·ワリス検定）。 </li></ol>

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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+cortisol+response+of+zebrafish+to+acute+net+handling+stress.">Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress.</a> Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).</li><li>Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+to+bloom-like+concentrations+of+two+marine+Synechococcus+cyanobacteria+(strains+CC9311+and+CC9902)+differentially+alters+fish+behaviour.">Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour.</a> Conservation Physiology. 2 (1), (2014).</li></ol>

著者らは、図1に使用される彼の写真撮影装置の使用のためにジョシュアギャラップを認める。この作品は、（TJHに）自然科学と工学研究評議会（NSERC）カナダディスカバリーグラントによってサポートされていました。

ゼブラフィッシュにおける薬剤投与を伴う以前の研究では、単純に薬物溶液12,16に自宅タンクからそれらを輸送するために魚をネッティングに頼ってきた。ネッティングは常に一貫していないとしばしばかなりの個体差があるゼブラフィッシュの逃避応答に予想よりも時間がかかります。伝統的な転送方法は、有用ではあるが、魚が水の外に費やす合計時間を減少させるだけでなく、...

ゼブラフィッシュ（ ゼブラフィッシュ）は 、行動1および医学研究2,3ための有用なモデル生物であるインド発の小さな硬骨魚種である。ゼブラフィッシュは、一般に行動への影響を特徴付けるために、様々な薬理学的物質の試験において使用されている。薬物投与の様々な投与量およびスケジュールは、覚せい剤4、抗不安5およびエタノール6-8のような化合物の投与後のゼブラフィッシュの挙動を調査するために使用されてきた。 私たちの研究室はまた、一般scototaxicアッセイと呼ばれる、よく検証ダーク/ライトアッセイ9、20にゼブラフィッシュ不安や歩行にエタノール投与の異なるスケジュールの影響を調査しました。エタノール投与の新しい方法は、6時間の長い期間（21日間）にわたって反復、毎日の投与のための効率を高めるために開発された</s&gt;まで。以前に使用された方法は実用的であったが、我々は、その関連する時間コストは、ネッティングを低減する方法を開発しようと、魚の大量の目的とする薬物の同時、正確に時限投与を可能にした。エタノールを用いた従来の研究では、ゼブラフィッシュは、1つのタンクからエタノールと水10~12の適切な混合物を含む別に相殺され、転送される。この方法は広く受け入れられているが、ゼブラフィッシュを相殺すること導入し、薬物溶液から魚を除去するために要する時間のばらつきを増大させることができる。そのため、目的の化合物への正確な露出は反復投与を伴う実験の過程にわたって変化し得る。輸送時間の変動に起因する誤差の発生源を減少させる方法がが望ましい。私たちの方法では、我々はそれぞれの魚で同一の投与時間で、その結果、同時にすべての魚を移動することができます。 （ここで説明）エタノール曝露後、ゼブラフィッシュは、任意のnumbeにおいて試験することができる不安を評価するものも含めて行動アッセイ、のrを。新しいメソッドを使用して、魚のグループを投与すると、正確に被験者間や魚のグループ間での投与を複製し、標準化する能力を超え、実用用途があります。一度に複数の魚の追跡を可能にする新しいソフトウェアの出現は、研究者が実験に複製能と精度を確保するために、私たちの方法を利用することがあります。行動神経科学のためのモデル生物としてゼブラフィッシュの普及を考えると、この方法では、将来の薬理学的研究における効率性と実用性が向上します。 現在のパラダイムでは、反復投与スケジュールは、およそ人間の飲用スケジュールを反映していることを採用した。コントロール、毎日の中等度、または毎週-どんちゃん騒ぎ：魚を無作為に3つの群に割り当てた。投与スケジュールは、それが大幅に過去の研究7に露光時間を超えたため選ばれ、期間は21日であった。対照魚はゼロALCOを受けHOL、毎日の中等度の魚は1日1回、0.2％アルコールを受け、毎週-どんちゃん騒ぎの魚は、1週間に1回1.4％アルコールを受け取った。明/暗タスクが離脱の2日後に不安を評価した。これは、一方の側の壁が白色であり、他の側に9暗いする矩形アリーナを使用している管理するための比較的簡単な試験である。アダルトゼブラフィッシュは、ロバスト制御条件の下で6,9,13アリーナのダークサイドを好む。不安の増大は、運用上、暗いゾーンで過ごしたかなり多くの時間として定義され、魚が光ゾーンで過ごした、比較的多くの時間を費やしている時に不安を想定することができます減少する。モーショントラッキングソフトウェアを使用すると、他の有益な変数も平均速度、不動、蛇行を含め、定量することができる、そしてゾーンは14に移行します。 我々の研究室で開発された投与方法は、水溶性化合物は、1つ以上のzebrafiに投与される任意の研究に適用することができるSH。この方法論から利益を得ることができる他の多くの薬理学的薬剤は、現在、ゼブラフィッシュで検証されています。一般的に試験された化合物は、エタノールと同様の方法で溶解させ、ニコチン、クロルジアゼポキシド、ブスピロン、およびスコポラミンが挙げられる。水に化学物質の適切な量を混合することによって。したがって、この手順の一般的な範囲ははるかに広いとエタノールに限定されるものではない。さらに、複数の日のための薬物を投与した後、明/暗タスクを使用することができる多くの行動試験の1つにすぎません。薬物投与後、または引き抜きの間、利用できる他の一般的なアッセイは新しいタンクダイビングテスト15など16の浅水として社会的行動のテストが含まれています。次の手順を繰り返し、目的の薬理学的な化合物を含む溶液に魚や個々の魚のグループを転送する効率的な方法を概説します。さらに、明/暗テストとテスト不安のプロセスアルコール投与の長いスケジュールにさらさ​​れた後に撤退している魚のグループに説明する。

<table><tbody><tr><td>Three shelf benchtop housing system</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/research-systems/z-hab-system/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>1.5 L Spawning tank w/400 &amp;mu;m baffle</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/consumables/tanks-lids-and-baffles/info/nursery-tank-and-baffles/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pure Grain Ethanol</td><td><a href="http://www.luxco.com/brands/vodka-neutral-spirits-neutral-spirits-everclear" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Luxco, INC</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethovision XT Motion tracking software</td><td><a href="http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Noldus Information Technology</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette</td><td><a href="http://eshop.eppendorf.ca/categories/1" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Eppendorf Canada</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Light/Dark Arena</td><td>Custom</td><td></td><td>Construct as per procedure description. 9.5 cm wide, 9.5 cm deep, 55 cm long.</td></tr></tbody></table>

a novel method of drug administration to multiple zebrafish (danio rerio) and the quantification of withdrawal

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely netted and transported between home aquaria and dosing tanks. In order to enhance the ease of compound administration, a novel method for transferring fish between tanks for drug administration was developed. Inserts that are designed for spawning were used to transfer groups of fish into the drug solution, allowing accurate dosing of all fish in the group. This increases the precision and efficiency of dosing, which becomes very important in long schedules of repeated drug administration. We implemented this procedure for use in a study examining the behavior of zebrafish in the light/dark test after administering ethanol with differing 21 day schedules. In fish exposed to daily-moderate amounts of alcohol there was a significant difference in location preference after 2 days of withdrawal when compared to the control group. However, a significant difference in location preference in a group exposed to weekly-binge administration was not observed. 
This protocol can be generalized for use with all types of compounds that are water-soluble and may be used in any situation when the behavior of fish during or after long schedules of drug administration is being examined. The light/dark test is also a valuable method of assessing withdrawal-induced changes in anxiety.

上記のようにゼブラフィッシュと薬理学的研究の精度および制御を維持するためには、一貫して正確にエタノール投与の持続時間が重要である。我々の手順では、投与手順の容易性とスループットを向上させることができる。毎週-過食や毎日の中等度のスケジュールのいずれかに対するエタノールの投与は、対照と比較して、明/暗テストで測定し、変化した不安レベルをもたらした。二日?...

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A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal

A novel method for reducing variability when exposing fish to drugs is explained. Fish exposed to various patterns of ethanol exposure were found to have altered anxiety levels during withdrawal in a light/dark scototaxic assay.

複数のゼブラフィッシュへの医薬品の新規方法（<em&gt;ゼブラフィッシュ</em&gt;）と撤退の定量

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) and the Quantification of Withdrawal

12.1K ビュー.  MacEwan University. A novel method for reducing variability when exposing fish to drugs is explained. Fish exposed to various patterns of ethanol exposure were found to have altered anxiety levels during withdrawal in a light/dark scototaxic assay.

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Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of stress-related diseases and psychiatric disorders, yet further studies into the genetic and neuronal regulation of stress are still required to develop better therapeutics. The zebrafish provides a powerful genetic model to investigate the neural underpinnings of stress, as there exists a large collection of mutant and transgenic lines. Moreover, pharmacology can easily be applied to zebrafish, as most drugs can be added directly to water. We describe here the use of the 'novel tank test' as a method to study innate stress responses in zebrafish, and demonstrate how potential anxiolytic drugs can be validated using the assay. The method can easily be coupled with zebrafish lines harboring genetic mutations, or those in which transgenic approaches for manipulating precise neural circuits are used. The assay can also be used in other fish models. Together, the described protocol should facilitate the adoption of this simple assay to other laboratories.

This manuscript describes a simple method to measure stress behaviorally in adult zebrafish. The approach takes advantage of the innate tendency that zebrafish prefer the bottom half of a tank when in a stressful state. We also describe methods for coupling the assay with pharmacology.

ゼブラフィッシュの先天性ストレスを研究する行動的アプローチ

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of ...

行動学

Optimized Intravenous Injection in Adult Zebrafish

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in mammalian research models. However, its application in adult zebrafish for drug delivery, stem cell transplantation, and regenerative and cancer studies has been limited due to the challenges posed by their small body size and intricate blood vessels. To overcome these limitations, alternative injection techniques such as intracardiac and retro-orbital (RO) injection have been explored in the past for stem cell transplantation in adult zebrafish. However, these techniques have their drawbacks, including the need for meticulous injection techniques or increased risk of mortality.
In this study, we have developed a refined and optimized IV injection procedure specifically tailored to adult zebrafish, addressing the challenges associated with their unique anatomy. To demonstrate the effectiveness of this technique, we performed successful IV injections of whole kidney marrow cells from Tg(mpo: EGFP) fish and FITC-dextran dye into adult Casper fish. The subsequent visualization of injected cells and dyes using a fluorescence microscope confirmed their successful delivery and engraftment within the zebrafish. Furthermore, we demonstrated that compared with the intracardiac and RO injections, the IV injection resulted in improved survival rates and engraftment efficiency in treated zebrafish. This approach enables precise delivery and localization of substances and holds great potential for large-scale drug and chemical screening using adult zebrafish. Additionally, the ability to visually track the injected cells and dyes provides invaluable insights into their engraftment, migration, and interactions with host tissues, enabling a more comprehensive evaluation of therapeutic effects and biological processes in zebrafish models.

Here, we present an optimized and effective protocol for the intravenous injection of cells or pharmacological agents into adult zebrafish, resulting in enhanced cell engraftment and increased survival rates of the treated zebrafish.

成体ゼブラフィッシュにおける静脈内注射の最適化

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in ...

がん研究

Oral Intubation of Adult Zebrafish: A Model for Evaluating Intestinal Uptake of Bioactive Compounds

Most pathogens invade organisms through their mucosa. This is particularly true in fish as they are continuously exposed to a microbial-rich water environment. Developing effective methods for oral delivery of immunostimulants or vaccines, which activate the immune system against infectious diseases, is highly desirable. In devising prophylactic tools, good experimental models are needed to test their performance. Here, we show a method for oral intubation of adult zebrafish and a set of procedures to dissect and prepare the intestine for cytometry, confocal microscopy and quantitative polymerase chain reaction (qPCR) analysis. With this protocol, we can precisely administer volumes up to 50 &#181;L to fish weighing approximately 1 g simply and quickly, without harming the animals. This method allows us to explore the direct in vivo uptake of fluorescently labelled compounds by the intestinal mucosa and the immunomodulatory capacity of such biologics at the local site after intubation. By combining downstream methods such as flow cytometry, histology, qPCR and confocal microscopy of the intestinal tissue, we can understand how immunostimulants or vaccines are able to cross the intestinal mucosal barriers, pass through the lamina propria, and reach the muscle, exerting an effect on the intestinal mucosal immune system. The model could be used to test candidate oral prophylactics and delivery systems or the local effect of any orally administered bioactive compound.

The protocol describes intubating adult zebrafish with a biologic; then dissecting and preparing the intestine for cytometry, confocal microscopy and qPCR. This method allows administration of bioactive compounds to monitor intestinal uptake and the local immune stimulus evoked. It&#160;is relevant for testing the intestinal dynamics of oral prophylactics.

大人のゼブラフィッシュの経口挿管: 生理活性化合物の腸管吸収の評価モデル

Most pathogens invade organisms through their mucosa. This is particularly true in fish as they are continuously exposed to a microbial-rich water ...

免疫・感染学

Gavaging Adult Zebrafish

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or agents in solutions for scientific research. Current methods for administering compounds orally to adult zebrafish are inaccurate due to variability in voluntary consumption by the fish. A gavage procedure was developed to deliver precise quantities of infectious agents to zebrafish for study in biomedical research. Adult zebrafish over 6 months of age were anesthetized with 150 mg/L of buffered MS-222 and gavaged with 5 &mu;l of solution using flexible catheter implantation tubing attached to a cut 22-G needle tip. The flexible tubing was lowered into the oral cavity of the zebrafish until the tip of the tubing extended past the gills (approximately 1 cm). The solution was then injected slowly into the intestinal tract. This method was effective 88% of the time, with fish recovering uneventfully. This procedure is also efficient as one person can gavage 20-30 fish in one hour. This method can be used to precisely administer agents for infectious diseases studies, or studies of other compounds in adult zebrafish.

The increasing use of zebrafish as an animal model requires the development of effective methods for the delivery of known quantities of compounds and solutions. The gavage procedure described below allows for the oral delivery of precise volumes of solution reliably, safely and efficiently to adult zebrafish.

Gavagingアダルトゼブラフィッシュ

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

生物学

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has transparent embryos and rapid external development. Zebrafish embryos can, therefore, also be used for the rapid evaluation of toxicity of the drugs that are precious and available in small quantities. In the present article, a method for the efficient screening of the toxicity of chemical compounds using 1-5-day post fertilization embryos is described. The embryos are monitored by stereomicroscope to investigate the phenotypic defects caused by the exposure to different concentrations of compounds. Half-maximal lethal concentrations (LC50) of the compounds are also determined. The present study required 3-6 mg of an inhibitor compound, and the whole experiment takes about 8-10 h to be completed by an individual in a laboratory having basic facilities. The current protocol is suitable for testing any compound to identify intolerable toxic or off-target effects of the compound in the early phase of drug discovery and to detect subtle toxic effects that may be missed in the cell culture or other animal models. The method reduces procedural delays and costs of drug development.

Zebrafish embryos are used for evaluating the toxicity of chemical compounds. They develop externally and are sensitive to chemicals, allowing detection of subtle phenotypic changes. The experiment only requires a small amount of compound, which is directly added to the plate containing embryos, making the testing system efficient and cost-effective.

ゼブラフィッシュ胚を用いる化学化合物の毒性の迅速評価

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...

医学

High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

Zebrafish are an important model organism with inherent advantages that have the potential to make zebrafish a widely applied model for the study of energy homeostasis and obesity. The small size of zebrafish allows for assays on embryos to be conducted in a 96- or 384-well plate format, Morpholino and CRISPR based technologies promote ease of genetic manipulation, and drug treatment by bath application is viable. Moreover, zebrafish are ideal for forward genetic screens allowing for novel gene discovery. Given the relative novelty of zebrafish as a model for obesity, it is necessary to develop tools that fully exploit these benefits. Herein, we describe a method to measure energy expenditure in thousands of embryonic zebrafish simultaneously. We have developed a whole animal microplate platform in which we use 96-well plates to isolate individual fish and we assess cumulative NADH2 production using the commercially available cell culture viability reagent alamarBlue. In poikilotherms the relationship between NADH2 production and energy expenditure is tightly linked. This energy expenditure assay creates the potential to rapidly screen pharmacological or genetic manipulations that directly alter energy expenditure or alter the response to an applied drug (e.g. insulin sensitizers).

High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

Zebrafish are an important model organism for the study of energy homeostasis. By utilizing a NADH2 sensitive redox indicator, alamar Blue, we have developed an assay that measures the metabolic rate of zebrafish larvae in a 96 well plate format and can be applied to drug or gene discovery.

高スループット<em&gt;ゼブラフィッシュ</em&gt;エネルギー消費アッセイ

Zebrafish are an important model organism with inherent advantages that have the potential to make zebrafish a widely applied model for the study of ...

成体ゼブラフィッシュの神経毒性影響を評価するための行動試験バッテリー

Neurotoxicity Assessment in Adult Danio rerio using a Battery of Behavioral Tests in a Single Tank

The presence of neuropathological effects proved to be, for many years, the main endpoint for assessing the neurotoxicity of a chemical substance. However, in the last 50 years, the effects of chemicals on the behavior of model species have been actively investigated. Progressively, behavioral endpoints were incorporated into neurotoxicological screening protocols, and these functional outcomes are now routinely used to identify and determine the potential neurotoxicity of chemicals. Behavioral assays in adult zebrafish provide a standardized and reliable means to study a wide range of behaviors, including anxiety, social interaction, learning, memory, and addiction. Behavioral assays in adult zebrafish typically involve placing the fish in an experimental arena and recording and analyzing their behavior using video tracking software. Fish can be exposed to various stimuli, and their behavior can be quantified using a variety of metrics. The novel tank test is one of the most accepted and widely used tests to study anxiety-like behavior in fish. The shoaling and social preference tests are useful in studying the social behavior of zebrafish. This assay is particularly interesting since the behavior of the entire shoal is studied. These assays have proven to be highly reproducible and sensitive to pharmacological and genetic manipulations, making them valuable tools for studying the neural circuits and molecular mechanisms underlying behavior. Additionally, these assays can be used in drug screening to identify compounds that may be potential modulators of behavior.
We will show in this work how to apply behavioral tools in fish neurotoxicology, analyzing the effect of methamphetamine, a recreational drug, and glyphosate, an environmental pollutant. The results demonstrate the significant contribution of behavioral assays in adult zebrafish to the understanding of the neurotoxicological effects of environmental pollutants and drugs, in addition to providing insights into the molecular mechanisms that may alter neuronal function.

著者スポットライト:成体ゼブラフィッシュにおける環境および薬物誘発性行動変化の評価 

Here, we present a comprehensive behavioral test battery, including the novel tank, Shoaling, and social preference tests, to effectively determine the potential neurotoxic effects of chemicals (e.g., methamphetamine and glyphosate) on adult zebrafish using a single tank. This method is relevant to neurotoxicity and environmental research.

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダ ニオ・レリオ の神経毒性評価

The presence of neuropathological effects proved to be, for many years, the main endpoint for assessing the neurotoxicity of a chemical substance. ...

神経科学

High-throughput Measurement of Gut Transit Time Using Larval Zebrafish

Zebrafish are used as alternative model organisms for drug safety testing. The gastrointestinal (GI) tract of zebrafish has genetic, neuronal, and pharmacological similarities to that of the mammals. GI intolerance during clinical testing of drug candidates is common and may pose a serious threat to human health. Testing for GI toxicity in preclinical mammalian models can be expensive in terms of time, test compound, and labor. The high-throughput method presented here may be used to predict GI safety issues. Compared to mammalian models, this method allows for more expedient assessment of test compound effects on GI transit while using low quantities of compound. In this method, larval zebrafish (7 days post fertilization) are fed food containing a fluorescent label. After feeding, each larval fish is placed into a well of a 96-conical-bottom-well plate and dosed with test compound (dissolved in water) or the vehicle. As gut transit occurs, fecal matter accumulates on the bottom of the wells, and the rate at which this happens is monitored by measuring fluorescence from the bottom of the well repeatedly over time using a plate spectrophotometer. The fluorescence from larvae in a given treatment group are averaged and these values are graphed along with standard error, for each measurement time, yielding a curve representing average transit of food over time. Effects on gut transit time are identified by comparing the area under the curve for each treatment group to that of the vehicle-treated group. This method detected changes in zebrafish GI transit time induced by drugs with known clinical GI effects; it can be employed to interrogate dozens of treatments for GI effects per day. As such, safer compounds can be quickly prioritized for mammalian testing, which expedites discovery and proffers 3Rs advancement.

The goal of this protocol is to measure the transit time of fluorescently labeled food through the gut of larval zebrafish in a high throughput fashion.

複数のゼブラフィッシュへの医薬品の新規方法（

要約

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ゼブラフィッシュの先天性ストレスを研究する行動的アプローチ

成体ゼブラフィッシュにおける静脈内注射の最適化

大人のゼブラフィッシュの経口挿管: 生理活性化合物の腸管吸収の評価モデル

Gavagingアダルトゼブラフィッシュ

ゼブラフィッシュ胚を用いる化学化合物の毒性の迅速評価

高スループット

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダニオ・レリオの神経毒性評価

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダニオ・レリオの神経毒性評価

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダニオ・レリオの神経毒性評価

ゼブラフィッシュ稚魚を用いた消化管通過時間の高スループット測定

複数のゼブラフィッシュへの医薬品の新規方法（

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ゼブラフィッシュの先天性ストレスを研究する行動的アプローチ

成体ゼブラフィッシュにおける静脈内注射の最適化

大人のゼブラフィッシュの経口挿管: 生理活性化合物の腸管吸収の評価モデル

Gavagingアダルトゼブラフィッシュ

ゼブラフィッシュ胚を用いる化学化合物の毒性の迅速評価

高スループット

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダ ニオ・レリオ の神経毒性評価

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダ ニオ・レリオ の神経毒性評価

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダ ニオ・レリオ の神経毒性評価

ゼブラフィッシュ稚魚を用いた消化管通過時間の高スループット測定

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダニオ・レリオの神経毒性評価

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダニオ・レリオの神経毒性評価

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダニオ・レリオの神経毒性評価