この研究は、厚生労働省の難病研究に対する厚生医療大学の助成金や厚生労働科学研究助成金によって支援されました。

実験議定書は、国防医科大学動物研究委員会(16058年)によって承認された。動物は標準的な実験室のチャウ(クレア日本株式会社、東京、日本)で維持された。実験動物は国立衛生研究所のガイドラインに従って治療された。
1. リンパ球の採取と分離
注:リンパ球は新鮮で保存できないため、実験ごとにラットから採取する必要があります。さらに、腸管-熱帯リンパ球は、それらが循環する胸部管から直接収集されなければならない。すべての手順は6時間以内に完了する予定で、すべての器具、手袋、表面はきれいです。動物を生理的に安定した状態に保つためには、実験で使用されるすべての生理食塩水および他の液体を暖かく保つべきである。
<ol><li>ヘパリン曲線(半径約5mm)のように、高温(約80~90°C)に浸漬した後、缶詰チューブ(直径1mm)を形成し、数時間前から粘着テープを使用してプラスチック製の板に固定します。</li>
	<li>ミダゾラム(2mg/kg)、ドミトール(0.15mg/kg)、ベトゥルファール(2.5mg/kg)の混合物を腹腔内注射で雄のウィスターラット(8-12週間)に麻酔し、ヘアクリッパーを使用して腹部の体毛を切断します。髪が腹腔に入らないように剃った後、しっかりと髪を取り除きます。</li>
	<li>つま先ピンチにより、手術に必要な安定した麻酔の深さが得られていることを確認した後、中線から左肋後部領域に水平に外科用ハサミで切開を行う。光の下で血管を見て頭頂腹の血管を損傷しないように注意してください。</li>
	<li>ぬれたガーゼで胃を包み、胃を体の右外側にやさしく動かして後腹膜器官を明らかにする。外科的はさみを使用して脊椎の勃起筋と脂肪組織の間にノッチを挿入し、指でぶっきらぼうに分離する。</li>
	<li>胸部管の周りの結合組織を慎重に取り除きます。過剰な結合組織は年齢とともに増加する。胸部管の長さが20mmになるまで、横隔膜の左の十字架のすぐ下から胸管を露出させます。胸部ダクトと大タオルの間の密着性を、精密なピンセットや湿った綿棒でそっと分離します。<ol>
<li>一部のラットは、リンパ叢(クモの巣のように広がる小さな胸部管)の高い位置のために、胸部管または短い胸管を横切る腹部動脈から分岐する動脈を持っているので、このプロセスを慎重に実行します。浮腫を誘発しないように、胸部管への不必要な接触を避けてください。</li>
	</ol>
</li>
	<li>横隔膜の左の十字架のすぐ下の胸管に弦(3-0シルク)で合字を適用します。尾柱胸管が歪んでしまいます。</li>
	<li>手術用ハサミの刃先を刺して腹壁に穴(直径5mm)を作り、ヘアピン湾曲したカヌルチューブを通過させ、一点で腸筋にチューブをリゲートします。10 U/mLヘパリンを含む通常の生理液で缶詰チューブを充填します。</li>
	<li>歪んだ胸部管の下にひも(3-0シルク)を置いた後、缶詰チューブの鋭く切断された端で胸部管を刺し、尾部に向かって約5mmに向かってカニューレートし、胸部管を固定用の缶詰管でリゲートします。</li>
	<li>脱水を防ぐために生理食塩水を供給するには、精密ピンセットを使用して胃のアントラムの前壁に穴(直径3mm)を作成し、シリコンチューブ(直径2mm)を幽門リングを通して十二指腸に渡します。傷を縫い上げ、ボルマンのケージで動物を維持した後、3 mL/hの流量でシリコンチューブから各ラットの十二指腸に糖を含んだ生理食動物を注入し始める。ケージ全体をペーパータオルで覆い、暖かく保ちます。</li>
	<li>6 U/mLヘパリン、10%のウシ胎児血清、RPMI 1640培地(pH 7.4;材料表を参照)を含む氷上の50mL円錐形チューブの蓋の中央の穴にcannulationチューブを固定し、氷の上に胸部管リンパ球(TDl)を収集します。チューブ内部のフィブリン血塊形成によるカニューレート管閉塞を防止するために、チューブの先端を円錐管の壁に接触しないように注意してください。約1.0 x 10 8〜109リンパ球を含むリンパ液(約20mL)は、6時間で得ることができる。完全麻酔下でリンパ球を得るために、麻酔の面が監視され、リンパ流が適切に観察される。同じ麻酔薬は、ラットがボールマンのケージに入れられた約3時間後に同じ用量で加え、6時間連続的に深部麻酔を得る。</li>
</ol>2. カルボキシフルオレセインジアセテート・スハクニミジルエステル(CFDSE)のリンパ球標識
<ol><li>ジメチルスルホキシド(DMSO)でCFDSE(材料表)を15.6mM(500 μgのCFDSEをDMSOの60 μLに溶解)に溶解します。</li>
	<li>インキュベートリンパ球(1 x 108〜109)をRPMI 1640の50mLで、CFDSE溶液50μLを37°Cで30分間用いた10を前述した。</li>
</ol>3. 微小血管研究の実験
<ol><li>ミダゾラム(2mg/kg)、ドミトール(0.15mg/kg)、ベトゥルファール(2.5mg/kg)の混合物を腹腔内注射でレシピエントラット(8-12週間)に麻酔し、つま先ピンチで麻酔の深さを確認します。毛髪の汚れを最小限に抑えるために、毛皮を手入れする前に腹部を濡らします。次に、正中線切開を介してレシピエントウィスターラットの腹部を開く。</li>
	<li>ガラススライド(24 x 50 mm)で覆われた中央の周りに長方形の穴を持つポータブルステンレス鋼板(約120 x 300ミリメートル)にラットを置きます。観察のためにPを含む、イレラルセグメントの約10cmを選択してください。</li>
	<li>腸をできるだけ暖かく保ち、リン酸緩衝生理食塩分(PBS)を37°Cに温めて湿ら。 PBSで小腸を覆うために使用されるガーゼを浸します。</li>
	<li>2%のイソフルラン(材料表を参照)で連続麻酔を与えながら、顕微鏡のステージにスライドを置き、いくつかのHEVがセローザを通って走っているPPの微小循環の観察に適した領域を選択します。P のサイズの範囲;より大きな物はCLSMを用いた微小循環の観察に適している。小腸は場所でまっすぐではありません。長さ2cm以上の直線セグメントは、張力なしで観察に適しています。</li>
	<li>隣接する腸管セグメントと腸間腸をPBSで浸した吸収性綿で覆います。2つのロールコットンボールの間に腸セグメントを配置し、ラットの心拍と呼吸によって振動するのを防ぐために、ラットの体から可能な限り遠くに配置します。</li>
	<li>1 mL シリンジを使用して、CFSE 標識 TDL (1 x 108 細胞) をレシピエントラットの頸静脈にゆっくりと注入します。急速な静脈注射は、全身循環に影響を与える可能性があります。</li>
</ol>4. リンパ球の微小循環
<ol><li>CLSMを使用してPのマイクロバスキュアチュアのTDLを継続的に監視し、30 s間隔でタイムラプス写真を使用して3時間コンピュータに記録します。セローサからPPsのHEVまでの深さは約25μmで、30μmの深さまでストロマと毛細血管を観察することができます。</li>
	<li>テキサスレッドデキストラン(25mg/kg)を各レシピエントラットの頸静脈に注入して血流を染色し、Hoechest 33342(5mg/kg)を注入して細胞核を染色します。</li>
	<li>(オプション)リンパ球のダイナミクスを定量化するために、HEVに30秒以上付着するリンパ球を「接着性リンパ球」と定義し、HEVからストロマに移動するリンパ球を「リンパ球の移行」と定義する。次に、移動の平均割合(リンパ球/粘着リンパ球+移動リンパ球)を視野(約0.3mm2)で計算する。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Miura, S., Hokari, R., Tsuzuki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+immunity+in+gut+and+lymphoid+cell+trafficking.">Mucosal immunity in gut and lymphoid cell trafficking.</a> Annals of Vascular Diseases. 5, 275-281 (2012).</li><li>Stein, J. V., Nombela-Arrieta, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+control+of+lymphocyte+trafficking:+a+general+overview.">Chemokine control of lymphocyte trafficking: a general overview.</a> Immunology. 116, 1-12 (2005).</li><li>Yopp, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sphingosine-1-phosphate+receptors+regulate+chemokine-driven+transendothelial+migration+of+lymph+node+but+not+splenic+T+cells.">Sphingosine-1-phosphate receptors regulate chemokine-driven transendothelial migration of lymph node but not splenic T cells.</a> The Journal of Immunology. 175, 2913-2924 (2005).</li><li>Lucke, S., Levkau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+functions+of+sphingosine-1-phosphate.">Endothelial functions of sphingosine-1-phosphate.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 26, 87-96 (2010).</li><li>Bollman, J. L., Cain, J. C., Grindlay, J. 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M., Irina, B. M., Ulrich, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+Microscopy:+Visualizing+Immunity+in+Context.">Intravital Microscopy: Visualizing Immunity in Context.</a> Immunity. 21, 315-329 (2004).</li><li>Alex, Y. C. H., Hai, Q., Ronald, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+the+Landscape+of+In+Vivo+Immunity:+Insights+from+Dynamic+In+Situ+Imaging+of+Secondary+Lymphoid+Tissues.">Illuminating the Landscape of In Vivo Immunity: Insights from Dynamic In Situ Imaging of Secondary Lymphoid Tissues.</a> Immunity. 21, 331-339 (2004).</li></ol>

著者らは開示するものは何もない。

ここでは、ナイーブな腸管熱帯リンパ球を収集し、ラットPでの移動を観察するためのプロトコルについて説明しました。これらの手順は、リンパ球がPの微小血管構造でどのように動くかを明らかにし、正常または薬用状態下でそれらのダイナミクスを視覚的に比較することを可能にする。これらのダイナミクスの直接観察は、観察期間は数時間に制限されているが、いくつかの薬物による?...

ペイアーのパッチ(P)は、小腸の層状層の数百のリンパ卵胞で構成されています。PPは、卵胞、卵胞間領域、および卵胞の下部に位置する胚葉中心に分けられ、そこでリンパ球は抗原提示によって刺激される。不十分なリンパ管はなく、抗原は上皮細胞層を介して腸管腔から層状のプロプリアに侵入する。リンパ様卵胞を覆う上皮領域は、毛包関連上皮と呼ばれ、その中に特殊な散在するM細胞が粘膜抗原を取り込む。M細胞は、その後、高等内皮細胞(HEV)の内皮を介してPに流入する素朴なリンパ球に向かって提示される、発光側および抗原からの抗原を取り込む。PPは腸内免疫に重要な役割を果たし、炎症の初期段階に関連しています。多くの分子相互作用は、接着分子、ケモカイン2、3、およびスフィンゴシン-1リン酸4を含む、二次リンパ系器官(SLA)へのリンパ球の入り口を含む。したがって、多くの期待される治療標的がある。したがって、PP内のリンパ球ダイナミクスを観察することで、炎症の非常に初期の段階を垣間見ることができ、いくつかの有望な薬物の有用性を調べることができます。
この方法は、いくつかの手順(胸管5 へのカヌリン化および採取されたリンパ球への注射後のリンパ球および長期観察)を含む、PPにおけるリンパ球の移行に焦点を当てています。これらの手順は複雑で、これまでのレポートで各手順がどのように実行されたかを正確に確認することは困難であったため、ここで、観察を成功させるためのヒントをいくつか挙げた。例えば、胸部管への管のカヌレーションは非常に困難であり、そして、カヌリン化の最初の成功率は50%未満であった。しかし、我々は方法を改善し、80%を超える成功率を達成しました。我々は、いくつかの条件下でリンパ球の経経皮移動の定量的評価を可能にするために成功した観察に必要な他のいくつかのヒントをこの原稿で述べた。
これまでの報告では、インドのインクを静脈内注入してPP6の血管構造を染色する、または顕微鏡が単焦点7であるなど、時間の経過に伴う3次元的変化を理解することは困難であった。近年、Kaedeマウスのようないくつかの光変換可能な蛍光タンパク質トランスジェニック動物を用いた観察法が、生体内における系統的な細胞の動きを明らかにしている。もう一つの研究は、PPs9からのリンパ球出口のCD69独立したシャットダウンを明らかにした。分析能力が高いため、共焦点レーザー走査顕微鏡(CLSM)を使用しました。今では、高解像度の画像を簡単に取得し、リンパ球ダイナミクスを分析するためにそれらを使用することができます。
本報告では、PPにおけるリンパ球移動を評価するための一連の方法を示した。まず、リンパ球を採取する胸部管缶取の精製方法を示した。第2に、顕微鏡観察の下で可能な限り目的の器官を維持するために、いくつかの方法で観察方法を改善し、3時間の高品質な画像を得ることを可能にしました。第三に、リンパ球移動の細胞の動きを定量化し、いくつかの薬の効果を評価した。これらの改変されたプロトコルは、粘膜免疫学評価の開発に寄与する。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:913px;" width="913">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:316px;">A1R+</td>
			<td style="width:213px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:265px;">Comfocal Laser Scanning Microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">C1157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hoechest 33342</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td style="width:119px;">099-06571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td style="width:119px;">11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Texas Red&#8211;dextran</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">D1863</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microscopic observation of lymphocyte dynamics in rat peyer's patches

ナイーブリンパ球は、生理学的状態下で血液からリンパ組織に再循環し、腸免疫における重要な現象として一般的に認識されています。ペイヤーのパッチ(P)や腸間膜リンパ節などの二次リンパ器官の間質は、ナイーブリンパ球が抗原を感知する場所である。ナイーブリンパ球は、高い内皮小静脈、PPへの参入のポータルに到達するために血流を循環します。一部の免疫調節剤はリンパ球の移動に影響を与えると推定されるが、微小循環ダイナミクスの正確な評価は非常に困難であり、生体内でリンパ球の移動を観察する方法を確立することは、正確なメカニズムの解明に寄与することができる。リンパ管からリンパ球を採取し、ラットPの腸管-熱帯リンパ球の詳細なダイナミクスを観察する方法を改良した。生体内でラットPを観察する共焦点レーザー走査顕微鏡を選び、タイムラプス写真を用いて記録しました。リンパ球動態の解析に貢献できる鮮明な画像を得ることができるようになりました。

リンパ球からのリンパ球の採取 胸部管のカヌレーションのためにラットを準備するには、 図1 に示すように緊張した胸管に切開し、次に図 2に示すようにボルマンのケージにラットを維持する。
リンパ球が十分に採取されると、約107〜108/mLリンパ球を含む約20mL/6hのリンパ液を得ることができる。</su...

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Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches

ここでは、経胸管リンパ球を採取し、ラット・ペイアーのパッチ中の腸管リンパ球の移動をタイムラプス写真を用いて3時間観察するための正確な方法について述べた。この技術は、炎症性条件下でリンパ球の動態がどのように影響を受けるかを明らかにすることができる。

ラット・ペイアーのパッチにおけるリンパ球ダイナミクスの顕微鏡観察

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important ...

microscopic-observation-of-lymphocyte-dynamics-in-rat-peyer-s-patches

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

3.9K ビュー.  National Defense Medical College. ここでは、経胸管リンパ球を採取し、ラット・ペイアーのパッチ中の腸管リンパ球の移動をタイムラプス写真を用いて3時間観察するための正確な方法について述べた。この技術は、炎症性条件下でリンパ球の動態がどのように影響を受けるかを明らかにすることができる。

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Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell proliferation in the bone marrow cavity as well as for interaction of tumor and bone cells resulting in local bone destruction. Our aim was to develop a model of experimental bone metastasis that allows in vivo assessment of angiogenesis in skeletal lesions using non-invasive imaging techniques.
For this purpose, we injected 105 MDA-MB-231 human breast cancer cells into the superficial epigastric artery, which precludes the growth of metastases in body areas other than the respective hind leg1. Following 25-30 days after tumor cell inoculation, site-specific bone metastases develop, restricted to the distal femur, proximal tibia and proximal fibula1. Morphological and functional aspects of angiogenesis can be investigated longitudinally in bone metastases using magnetic resonance imaging (MRI), volumetric computed tomography (VCT) and ultrasound (US).
MRI displays morphologic information on the soft tissue part of bone metastases that is initially confined to the bone marrow cavity and subsequently exceeds cortical bone while progressing. Using dynamic contrast-enhanced MRI (DCE-MRI) functional data including regional blood volume, perfusion and vessel permeability can be obtained and quantified2-4. Bone destruction is captured in high resolution using morphological VCT imaging. Complementary to MRI findings, osteolytic lesions can be located adjacent to sites of intramedullary tumor growth. After contrast agent application, VCT angiography reveals the macrovessel architecture in bone metastases in high resolution, and DCE-VCT enables insight in the microcirculation of these lesions5,6. US is applicable to assess morphological and functional features from skeletal lesions due to local osteolysis of cortical bone. Using B-mode and Doppler techniques, structure and perfusion of the soft tissue metastases can be evaluated, respectively. DCE-US allows for real-time imaging of vascularization in bone metastases after injection of microbubbles7.
In conclusion, in a model of site-specific breast cancer bone metastases multi-modal imaging techniques including MRI, VCT and US offer complementary information on morphology and functional parameters of angiogenesis in these skeletal lesions.

In the pathogenesis of bone metastasis, angiogenesis is a crucial process and therefore represents a target for imaging and therapy. Here, we present a rat model of site-specific breast cancer bone metastasis and describe strategies to non-invasively image angiogenesis in vivo using magnetic resonance imaging, volumetric computed tomography and ultrasound.

磁気共鳴イメージング、体積CT画像と超音波を用いた乳がんの骨転移のヌードラットモデルにおける血管新生のマルチモーダルイメージング

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

医学

Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening pulmonary manifestations. Ivacaftor (IVA) and ivacaftor-lumacaftor (LUMA) combination are two new breakthrough CF drugs that directly modulate the activity and trafficking of the defective CFTR-protein. However, there is still a dearth of understanding on pharmacokinetic/pharmacodynamic parameters and the pharmacology of ivacaftor and lumacaftor. The HPLC-MS technique for the simultaneous analysis of the concentrations of ivacaftor, hydroxymethyl-ivacaftor, ivacaftor-carboxylate, and lumacaftor in biological fluids in patients receiving standard ivacaftor or ivacaftor-lumacaftor combination therapy has previously been developed by our group and partially validated to FDA standards. However, to allow the high-throughput analysis of a larger number of patient samples, our group has optimized the reported method through the use of a smaller pore size reverse-phase chromatography column (2.6 &#181;m, C8 100 &#197;; 50 x 2.1 mm) and a gradient solvent system (0-1 min: 40% B; 1-2 min: 40-70% B; 2-2.7 min: held at 70% B; 2.7-2.8 min: 70-90% B; 2.8-4.0 min: 90% B washing; 4.0-4.1 min: 90-40% B; 4.1-6.0 min: held at 40% B) instead of an isocratic elution. The goal of this study was to reduce the HPLC-MS analysis time per sample dramatically from ~15 min to only 6 min per sample, which is essential for the analysis of a large amount of patient samples. This expedient method will be of considerable utility for studies into the exposure-response relationships of these breakthrough CF drugs.

Ivacaftor and ivacaftor-lumacaftor combination are two new CF drugs. However, there is still a dearth of understanding on their PK/PD and pharmacology. We present an optimized HPLC-MS technique for the simultaneous analysis of ivacaftor and its major metabolites, and lumacaftor.

Ivacaftor、主要な代謝産物および嚢胞性線維症患者の体液中の Lumacaftor の臨床サンプルの高スループット分析のための最適化された LC-MS/MS 法

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening ...

Implantation of hiPSC-derived Cardiac-muscle Patches after Myocardial Injury in a Guinea Pig Model

Due to the limited regeneration capacity of the heart in adult mammals, myocardial infarction results in an irreversible loss of cardiomyocytes. This loss of relevant amounts of heart muscle mass can lead to the heart failure. Besides heart transplantation, there is no curative treatment option for the end-stage heart failure. In times of organ donor shortage, organ independent treatment modalities are needed. Left-ventricular assist devices are a promising therapy option, however, especially as destination therapy, limited by its side-effects like stroke, infections and bleedings. In recent years, several cardiac repair strategies including stem cell injection, cardiac progenitors or myocardial tissue engineering have been investigated. Recent improvements in cell biology allow for the differentiation of large amounts of cardiomyocytes derived from human induced pluripotent stem cells (iPSC). One of the cardiac repair strategies currently under evaluation is to transplant artificial heart tissue. Engineered heart tissue (EHT) is a three-dimensional in vitro created cardiomyocyte network, with functional properties of native heart tissue. We have created EHT-patches from hiPSC derived cardiomyocytes. Here we present a protocol for the induction of left ventricular myocardial cryoinjury in a guinea pig, followed by implantation of hiPSC derived EHT on the left ventricular wall.

Here we present a protocol for the induction of left ventricular cryoinjury followed by the implantation of a cardiac muscle patch, derived from human iPS-cell cardiomyocytes in a guinea pig model.

モルモット モデルにおける心筋傷害の後 - 心筋パッチのこと由来の注入

Due to the limited regeneration capacity of the heart in adult mammals, myocardial infarction results in an irreversible loss of cardiomyocytes. This loss ...

A Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury with Periadventitial Therapeutic Application

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the luminal surface area in arteries thereby reducing adequate blood flow to organs and distal tissues. Clinically, revascularization procedures such as balloon angioplasty with or without stent placement aim to restore blood flow. Although these procedures reestablish blood flow by reducing plaque burden, they damage the vessel wall, which initiates the arterial healing response. The prolonged healing response causes arterial restenosis, or re-narrowing, ultimately limiting the long-term success of these revascularization procedures. Therefore, preclinical animal models are integral for analyzing the pathophysiological mechanisms driving restenosis, and provide the opportunity to test novel therapeutic strategies. Murine models are cheaper and easier to operate on than large animal models. Balloon or wire injury are the two commonly accepted injury modalities used in murine models. Balloon injury models in particular mimic the clinical angioplasty procedure and cause adequate damage to the artery for the development of restenosis. Herein we describe the surgical details for performing and histologically analyzing the modified, pressure-controlled rat carotid artery balloon injury model. Additionally, this protocol highlights how local periadventitial application of therapeutics can be used to inhibit neointimal hyperplasia. Lastly, we present light sheet fluorescence microscopy as a novel approach for imaging and visualizing the arterial injury in three-dimensions.

The rat carotid artery balloon injury mimics the clinical angioplasty procedure performed to restore blood flow in atherosclerotic vessels. This model induces the arterial injury response by distending the arterial wall, and denuding the intimal layer of endothelial cells, ultimately causing remodeling and an intimal hyperplastic response.

過期治療アプリケーションを用いてラット頸動脈圧制御区分バルーン損傷

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes methods for the fabrication of the high platform, establishes a rat model of asthma and measures changes in respiratory function using a noninvasive and real-time whole-body plethysmography (WBP) system.

喘息ラットモデルにおける鍼治療

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

Advanced Cardiac Rhythm Management by Applying Optogenetic Multi-Site Photostimulation in Murine Hearts

Ventricular tachyarrhythmias are a major cause of mortality and morbidity worldwide. Electrical defibrillation using high-energy electric shocks is currently the only treatment for life-threatening ventricular fibrillation. However, defibrillation may have side-effects, including intolerable pain, tissue damage, and worsening of prognosis, indicating a significant medical need for the development of more gentle cardiac rhythm management strategies. Besides energy-reducing electrical approaches, cardiac optogenetics was introduced as a powerful tool to influence cardiac activity using light-sensitive membrane ion channels and light pulses. In the present study, a robust and valid method for successful photostimulation of Langendorff perfused intact murine hearts will be described based on multi-site pacing applying a 3 x 3 array of micro light-emitting diodes (micro-LED). Simultaneous optical mapping of epicardial membrane voltage waves allows the investigation of the effects of region-specific stimulation and evaluates the newly induced cardiac activity directly on-site. The obtained results show that the efficacy of defibrillation is strongly dependent on the parameters chosen for photostimulation during a cardiac arrhythmia. It will be demonstrated that the illuminated area of the heart plays a crucial role for termination success as well as how the targeted control of cardiac activity during illumination for modifying arrhythmia patterns can be achieved. In summary, this technique provides a possibility to optimize the on-site mechanism manipulation on the way to real-time feedback control of cardiac rhythm and, regarding the region specificity, new approaches in reducing the potential harm to the cardiac system compared to the usage of non-specific electrical shock applications.

This work reports a method for controlling the cardiac rhythm of intact murine hearts of transgenic channelrhodopsin-2 (ChR2) mice using local photostimulation with a micro-LED array and simultaneous optical mapping of epicardial membrane potential.

マウス心臓における光遺伝学的マルチサイト光刺激の適用による高度な心調律管理

Ventricular tachyarrhythmias are a major cause of mortality and morbidity worldwide. Electrical defibrillation using high-energy electric shocks is ...

The Microscopic Transcanal Approach in Stapes Surgery Revisited

The microscopic transcanal (aka transmeatal) surgical approach was first described in the 60s, offering a minimally invasive means of reaching the external auditory canal, the middle ear, and epitympanon. Such an approach avoids a retroauricular or endaural skin incision; however, working through a narrow space needs angled microsurgical instruments and specific training in otologic surgery. The transcanal approach restricts the working space; however, it offers a binocular microscopic vision into the middle ear without extended skin incisions and thus, reducing post-operative pain and bleeding. In addition, this minimally invasive approach avoids scar tissue complications, hypoesthesia of the auricle, and potential protrusion of the pinna. Despite its numerous advantages, this method is still not routinely performed by otologic surgeons. Since this minimally invasive technique is more challenging, there is a need for extensive training in order for it to be widely adopted by otologic surgeons. This article provides step-by-step surgical instructions for stapes surgery and reports possible indications, pitfalls, and limitations using this microscopic transcanal technique.

This article describes the microscopic transcanal technique for stapes surgery, providing step-by-step surgical instructions for familiarizing surgeons with this approach.

ステープ手術における顕微鏡経管アプローチの再考

The microscopic transcanal (aka transmeatal) surgical approach was first described in the 60s, offering a minimally invasive means of reaching the ...

Microscopic Replantation of Penile Glans Amputation Due to Circumcision

Circumcision using a disposable stapler is becoming quite popular in China. However, improper surgical procedures also bring the risk of penile glans amputation, which is a very rare iatrogenic genital injury. Such complication is conventionally treated by simple hemostasis to achieve self-healing, early gross replantation, or delayed plastic surgery. However, these may lead to obvious unfavorable outcomes such as amputated glans loss, necrosis, malformation healing, or urethral orifice stenosis. In the present study, we adopted microscopic replantation as an emergency approach to achieve the precise anastomoses and anatomic reconstruction of penile glans. The goal of this protocol is to present a detailed emergency management strategy with meticulous surgical skills for the penile glans amputation. The postoperative results showed that the original shape of the glans was perfectly restored with satisfactory cosmetic appearance. The micturition function was completely restored to normal without any obvious complications. There was also no significant reduction in the sensation of amputated glans area. Hence, early meticulous microscopic replantation as soon as possible is an ideal emergency management strategy for the penile glans amputation due to circumcision.

The present protocol describes the emergency management of microscopic replantation of penile glans amputation due to circumcision.

割礼による陰茎腺切断の顕微鏡的再植林

Circumcision using a disposable stapler is becoming quite popular in China. However, improper surgical procedures also bring the risk of penile glans ...

Microscopic Cyst Resection for the Treatment of Patients Diagnosed with Epididymal Cyst

Epididymal cysts mostly occur in men aged 20-40 years old. Previous reports have covered concerns about postoperative complexes, including postoperative asoedema, hematoma, sustaining pain, and seminal tract obstruction in patients who have undertaken nonmicroscopic epididymal cyst resection or epididymal resection. Nonmicroscopic epididymal cyst surgery is suggested for patients with childbirth plans as a precaution. The treatment of male epididymal cysts via microtechnology is obviously a beneficial option; we took the lead in carrying out microscopic epididymal exploration and cyst resection surgery in China. From September 2017 to April 2021, 41 young and middle-aged male patients diagnosed with epididymal cysts underwent microtechnology treatment in a program titled &#34;microscopic epididymal exploration and cystectomy&#34;. The postoperative follow-up lasted for 3-50 months. The results confirmed that, as microscopic manipulation largely improved visualization of the subtle tissue structures of the epididymis, the cyst could be clearly dissected apart and completely removed intact under the microscope. Bleeding during the operation was significantly reduced (2-3 mL) and wound drainage was not required. According to follow-up data, microscopic treatment significantly reduced the incidence of postoperative scrotal hematoma, edema, and long-term postoperative pain, thereby promising a higher surgical success rate as well as recurrence prevention. Besides, preliminary experience and reflection suggest that microscopic epididymal exploration and cystectomy provide efficient preservation of the epididymal patency through refined treatment, while a better prognosis can be achieved. We recommend that surgery be carried out before the epididymal cyst develops to 0.8 cm in diameter, for fear that a larger epididymal cyst (&#62;0.9 cm in diameter) could cause the complete destruction of all tubules of the ipsilateral epididymis - a more severe case with damage to the testicular output network.

Here, we present a protocol to treat patients diagnosed with an epididymal cyst using microscopic cyst resection. Based on microscopic manipulation, a largely improved visualization of the subtle tissue structures of the epididymis was obtained, so the cyst could be clearly dissected apart and completely removed intact.

精巣上体嚢胞と診断された患者の治療のための顕微鏡嚢胞切除術

Epididymal cysts mostly occur in men aged 20-40 years old. Previous reports have covered concerns about postoperative complexes, including postoperative ...

Rat Model of Normothermic Ex-Situ Perfused Heterotopic Heart Transplantation

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the number of heart failure patients waiting for transplantation is still increasing. The normothermic ex situ preservation technique has been established as a comparable method to the conventional static cold storage technique. The main advantage of this technique is that donor hearts can be preserved for up to 12 h in a physiologic condition. Moreover, this technique allows resuscitation of the donor hearts after circulatory death and applies required pharmacologic interventions to improve donor function after implantation. Numerous animal models have been established to improve normothermic ex situ preservation techniques and eliminate preservation-related complications. Although large animal models are easy to handle compared to small animal models, it is costly and challenging. We present a rat model of normothermic ex situ donor heart preservation followed by heterotopic abdominal transplantation. This model is relatively cheap and can be accomplished by a single experimenter.

Here, we present an assessment protocol of a heterotopically implanted heart after normothermic ex situ preservation in the rat model.

ノルマザーミックEx-situ灌流異所性心臓移植のラットモデル

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the ...

ラット・ペイアーのパッチにおけるリンパ球ダイナミクスの顕微鏡観察

要約

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磁気共鳴イメージング、体積CT画像と超音波を用いた乳がんの骨転移のヌードラットモデルにおける血管新生のマルチモーダルイメージング

Ivacaftor、主要な代謝産物および嚢胞性線維症患者の体液中の Lumacaftor の臨床サンプルの高スループット分析のための最適化された LC-MS/MS 法

モルモットモデルにおける心筋傷害の後 - 心筋パッチのこと由来の注入

過期治療アプリケーションを用いてラット頸動脈圧制御区分バルーン損傷

喘息ラットモデルにおける鍼治療

マウス心臓における光遺伝学的マルチサイト光刺激の適用による高度な心調律管理

ステープ手術における顕微鏡経管アプローチの再考

割礼による陰茎腺切断の顕微鏡的再植林

精巣上体嚢胞と診断された患者の治療のための顕微鏡嚢胞切除術

ノルマザーミックEx-situ灌流異所性心臓移植のラットモデル

ラット・ペイアーのパッチにおけるリンパ球ダイナミクスの顕微鏡観察

要約

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磁気共鳴イメージング、体積CT画像と超音波を用いた乳がんの骨転移のヌードラットモデルにおける血管新生のマルチモーダルイメージング

Ivacaftor、主要な代謝産物および嚢胞性線維症患者の体液中の Lumacaftor の臨床サンプルの高スループット分析のための最適化された LC-MS/MS 法

モルモット モデルにおける心筋傷害の後 - 心筋パッチのこと由来の注入

過期治療アプリケーションを用いてラット頸動脈圧制御区分バルーン損傷

喘息ラットモデルにおける鍼治療

マウス心臓における光遺伝学的マルチサイト光刺激の適用による高度な心調律管理

ステープ手術における顕微鏡経管アプローチの再考

割礼による陰茎腺切断の顕微鏡的再植林

精巣上体嚢胞と診断された患者の治療のための顕微鏡嚢胞切除術

ノルマザーミックEx-situ灌流異所性心臓移植のラットモデル

モルモットモデルにおける心筋傷害の後 - 心筋パッチのこと由来の注入