Name: murine prostate micro-dissection and surgical castration
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
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この原稿の数値の一部は寛大バートO.ウィリアムスの研究室によって提供されました。著者は、国立癌研究所によってサポートされていU54CA143803、CA163124、CA093900、およびCA143055を付与します。

このプロトコルは、ジョンズ・ホプキンス大学施設内動物管理使用委員会によって設定されたガイドラインを満たし、次の。 1.マイクロ解剖マウス前立腺<ol><li>二酸化炭素窒息または施設の動物の管理と使用のガイドラインに従った代替承認の方法により、マウスを安楽死させます。 </li><li> 4足のそれぞれを通ってピンを置くことによって、解剖ボードに仰臥位でマウスをピン。 </li><li> 70％エタノールで腹部をスプレーします。 </li><li>鉗子で下腹部の皮膚を持ち、皮膚を介してカットし、ペニスの開口部に約1cmの前方を腹膜するはさみを使用して、任意の臓器を切らないように注意してください。 </li><li>腹腔を露出させ、アップ腹部の両側胸郭に、下腹部から皮膚及び腹膜を切り取ります。 </li><li>膀胱と尿生殖路を特定し、優しく側に脂肪および他の器官を動かすことによって、それらを公開。 </li><li> USIngの鉗子、グリップ尿道に近いベースでの輸精管を、そしてそれを離れて引き裂きます。 </li><li>反対輸精管で繰り返します。 </li><li>同時に膀胱下の尿道と腹側前立腺（膀胱のベース下の約1cm）を切断するはさみを使用しながら、慎重にグリップ、膀胱を鉗子を使用して、それを引き上げます。 注：膀胱がプルアップされているように、（膀胱、尿道のセクション、すべての前立腺葉、および精嚢を含む）全体の尿生殖路は、それが付属します。多少の抵抗があるかもしれません。 </li><li>約5〜10 mLのリン酸緩衝生理食塩水（PBS）を含む60〜100ミリメートルペトリ皿に尿生殖路（UGT）を配置します。 </li><li>解剖顕微鏡下でプロトコルの残りの部分を実行します。 2細かい鉗子、それぞれの手で1を使用してください。 「鉛筆のような」鉗子を持ち、それらを安定するように、作業台の上に腕を休ませます。 </li><li>膀胱があるようUGTを位置決めするために微細なピンセットを使用して上、尿道が下向きされ、精嚢は、膀胱のいずれかの側に配置されています。 </li><li>グリップ1鉗子、慎重に任意の前立腺組織を離れて引き裂くことなく、他の鉗子で脂肪を引き離すと尿道。注：脂肪は周囲の組織に比べて「ピカピカ」が表示されます。 </li><li>脂肪が除去されると、前立腺の2腹葉間結合組織を引き裂くとそれらを分離するために鉗子を使用しています。 </li><li> 、腹側ローブの1を削除グリップに先端付近の単一腹葉を1鉗子を使用し、可能な限り尿道に近いベースでそのローブグリップに他の鉗子を使用します。まだ葉の基部を把持しながら、グリップに尿道を他の鉗子を使用します。しっかりと、滑らかな動きで離れて尿道から葉を引き出します。何の前立腺組織は尿道に添付残っていないことを確認してください。次の実験段階に応じて、適切な培地に葉を置きます。 <ol><li> Sを固定し、パラフィンに埋め込むには組織学的分析のための十分な、10％中性緩衝ホルマリン（NBF）8に葉を配置します。 </li><li>凍結保存のために、このような10月のように、メディアを凍結し、8を区画に葉を置きます。 </li><li>培養のために単一細胞を単離するための冷PBSで葉を置くか9フローサイトメトリー。 </li></ol></li><li>他の腹葉と繰り返し手順1.15。 </li><li>必ず精嚢を穿刺しないようになって、静かに精嚢から葉を引っ張るために鉗子を使用して、前葉の1を削除します。ローブは精嚢から独立していると、ステップ1.15で腹葉と同じ方法でそれを削除します。 </li><li>他の前方ローブと繰り返し手順1.17。 </li><li>背側前立腺が表示されていることなどの上に残存尿生殖路を反転します。 </li><li> 2背外側ローブともローブとtとの結合組織の間の結合組織を引き裂くために鉗子を使用し、背外側ローブの1を削除するには彼は精嚢領域を後方。ステップ1.15で腹葉と同様の方法で葉を削除します。 </li><li>他の背外側葉と繰り返し手順1.20。 </li></ol> 2.去勢手術注：これは生存の手術なので、無菌状態、麻酔、および疼痛管理は、このプロトコルの倫理的、正常に完了することが重要です。すべての機関の動物の管理と使用のガイドラインに従ってください。低体温症を防ぐために、外科手術の際に、このような再循環水ブランケットとして、外部熱源を使用してください。それは胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまで無人の動物を放置しないでください。完全に回復するまで、他の動物の会社に手術を受けた動物を返さないでください。手術で使用する前に、すべての手術器具をオートクレーブ。 <ol><li>清潔、無菌の表面に適切な措置（ 例えば 2％吸入イソフルラン）を用いてマウスを麻酔し、メートルを配置仰臥位でウーズ。注：例えば、ケタミンのような代替的な麻酔法を、承認された動物プロトコルに応じて、また使用され得ます。 </li><li>つま先をつまんで、マウスの反射神経をチェックしてください。マウスが反応しない場合は、次のステップに進みます。それが反応しない場合は、1-3分待ってから再度確認してください。電気かみそりで手術領域を剃ります。 </li><li>無菌的に交互に70％エタノールおよびヨウ素のスクラブや制度獣医学のスタッフやIACUCによって推奨される手順を用いてマウスの腹部を準備します。 </li><li>滅菌メスを使用して、下腹部の正中線に皮膚を介して陰茎に約1.5センチ前方を1センチメートル縦切開を行います。 </li><li>腹膜を介して小切開（&lt;1センチ）ことを確認し、任意の臓器を切らないように注意してください。 </li><li>滅菌ピンセット、グリップ腹膜のカットエッジを使用し、下に腹膜腔を見ることができるように静かに持ち上げます。 </li><li>別の滅菌ピンセットを使用して、目に到達電子膀胱に対する横腹腔とグリップ左右いずれかの睾丸脂肪パッド、。精巣は、同様に出てくるまで、腹膜および皮膚内の開口部を介して脂肪パッドを引き出します。このステップの間に、他の組織や臓器を傷つけないように注意してください。 </li><li>焼灼ペンを使用して、精巣を保持している脂肪パッドを切断。焼灼ペンノートと精巣動脈を通ってゆっくりとカット：精巣動脈が速すぎてカットされている場合、そこにあまりにも多くの出血であってもよく、マウスを安楽死させなければならないことがあります。 </li><li>脂肪パッドと動脈が切断されると、精巣および脂肪パッドを削除します。 </li><li>繰り返して、他の精巣で2.6から2.9を繰り返します。注：精巣を除去するための別の方法は、はさみで血管を切断し、その後、精巣動脈を外科的に結紮することです。 </li><li>腹膜は、吸収性縫合糸で閉じ縫合糸。 </li><li>ステープル皮膚は、外科的創傷クリップで閉じました。 </li><li>痛みを管理するための鎮痛剤を投与し、そして場所5-10分間暖かいケージのクリーンケージにマウス。痛みや出血の兆候についてマウスを監視します。 </li></ol>

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	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li><li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia.">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li><li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+prostate+cancer.">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238 (2011).</li><li>Shappell, S. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy.">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li><li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+of+prostate+cancer:+new+prospects+for+old+challenges.">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li></ol>

著者は、彼らが競合する金融利害関係を持たないことを宣言します。

前立腺顕微解剖は、マウス前立腺（ 図1）の葉特有の実験および分析を可能にします。遺伝子操作マウスモデルにおいて、表現型は、他で見られないもので葉に見られます。また、組織学的分析のために、このプロトコルは、純粋な前立腺組織の最大量は節中に存在する他の尿生殖路組織せず、切片と染色することができることを保証します。最後に、単一細胞実験のために、こ...

前立腺は、米国における男性の癌の最も一般的な部位です。ほぼ22万男性毎年前立腺癌と診断され、約27,000人の男性は、自分の病気1に屈するます。男性は米国1における前立腺癌の診断の1 7の生涯リスクを持っています。良性前立腺肥大（BPH）、前立腺の年齢関連非癌性拡大は、80 2以上の男性の80％に影響を及ぼし、また広範な条件である。このように、前立腺はかなりの研究の焦点です。 マウスモデルは、前立腺3の疾患を研究するために広く用いられています。全体的に、マウスの前立腺は、ヒト腺4の優れた代表であるが、マウスとヒトの前立腺解剖学と生理学5の類似点と相違点があります。両種では、前立腺が尿道を取り囲む、膀胱の基部に位置しています。ヒト前立腺腺は、単一のLOです中央、トランジション、周辺機器、および前部線維筋間質：4つのゾーンに分け、こと。前側、腹、および背外側：これとは対照的に、マウスの前立腺は尿道の周りの異なる位置に3対になった葉で構成されています。 1、それは1：マウス6で4細胞レベルでは、主な違いは、ヒトにおける細胞比率を管腔する基底細胞が約1であることです。マウス間質は、ヒトへの相対的なマウスでも異なっている - 筋層は、マウス前立腺における非常に薄いですしながら、人間は、より広範な平滑筋を持っています。マウス前立腺の適切な識別、解剖、およびハンドリングは、マウスの前立腺研究に不可欠です。 ホルモンのレベルが大幅にヒトとマウスの両方で前立腺の開発と恒常性に影響を与えます。エストロゲンは、前立腺の発達7において役割を果たすと思われるが、前立腺における最も重要なホルモンはテストステロンです。テストステロンは腺開発ANのために不可欠ですDのメンテナンス。物理的または化学的のいずれかに続いて去勢、成人前立腺apoptose内腔側細胞の約90％、および腺が収縮します。テストステロンを去勢条件下で個体に再導入された場合、前立腺全容量に自分自身を再生することができます。テストステロンはまた、アンドロゲン除去療法が一般的に使用される治療戦略である理由である、前立腺癌を駆動するように思われます。しかし、多くの前立腺癌は、アンドロゲン除去に耐性になります。また、前立腺癌の治療のためのアンドロゲン枯渇療法を受けている男性は去勢、再生条件のサイクルを受けます。マウスでは、外科的去勢は、テストステロンを再導入することにより、前立腺のホルモン再生と共に、去勢抵抗性前立腺に対するテストステロンの循環の影響を研究すると重要なツールです。 この記事では、我々が議論し、locatすることにより、適切な技術のデモンストレーションを行いますeおよびマイクロ解剖マウスの前立腺を、同様にマウスを去勢外科的します。

<table><tbody><tr><td>Surgical tools</td><td>Roboz</td><td>Various</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Sigma</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>OCT medium</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>Must be placed on dry ice to freeze, and stored at -80 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Johns Hopkins</td><td></td><td>Also available from vendors online</td></tr><tr><td>Cautery Pen</td><td>Medline</td><td>ESCT002</td><td></td></tr><tr><td>Silk suture</td><td>AD Surgical</td><td>M-S330R19</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Wound Clips</td><td>Roboz</td><td>RS-9265</td><td></td></tr></tbody></table>

murine prostate micro-dissection and surgical castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

すべての6前立腺葉前立腺顕微解剖（ 図1）を介してマウスから除去しました。完全な尿生殖路（UGT）は、すべての前立腺葉、膀胱、精嚢、尿道（ 図1a）で構成されています。輸精管が尿道に付着するが、前立腺顕微解剖は不要であり、したがって、尿道（ 図1B-1C）を切断することによって、UGTの除去の前に取り外すことができま?...

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Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

この原稿は、実験用マウスにおける前立腺顕微解剖や去勢手術のためのプロトコルについて説明します。また、これらのプロトコルによって生成される代表的な結果を示しています。最後に、我々は長所と、これらのプロトコルの利用を議論します。

マウス前立腺マイクロ解剖と外科的去勢

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

murine-prostate-micro-dissection-and-surgical-castration

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

45.3K ビュー.  Johns Hopkins University. この原稿は、実験用マウスにおける前立腺顕微解剖や去勢手術のためのプロトコルについて説明します。また、これらのプロトコルによって生成される代表的な結果を示しています。最後に、我々は長所と、これらのプロトコルの利用を議論します。 

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A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and transgenic genetically engineered mouse models. Unlike subcutaneous tumors, orthotopic tumors contain more clinically accurate vasculature, tumor microenvironment, and responses to multiple therapies. In contrast to genetically engineered mouse models, orthotopic models can be performed with lower cost and in less time, involve the use of highly complex and heterogeneous mouse or human cancer cell lines, rather that single genetic alterations, and these cell lines can be genetically modified, such as to express imaging agents. Here, we present a protocol to surgically injecting a luciferase- and mCherry-expressing murine prostate cancer cell line into the anterior prostate lobe of mice. These mice developed orthotopic tumors that were non-invasively monitored in vivo and further analyzed for tumor volume, weight, mouse survival, and immune infiltration. Further, orthotopic tumor-bearing mice were surgically castrated, leading to immediate tumor regression and subsequent recurrence, representing castration-resistant prostate cancer. Although technical skill is required to carry out this procedure, this syngeneic orthotopic model of both androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer is of great use to all investigators in the field.

The goal of this protocol is to demonstrate the intra-prostatic injection of prostate cancer cells, with subsequent castration. Orthotopic pre-clinical models of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer are critical to study the disease in the context of a clinically relevant tumor microenvironment and an immunocompetent host.

アンドロゲン依存性去勢抵抗性前立腺癌の生物発光と蛍光の同所性同種同系マウスモデル

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

がん研究

Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) for prostate cancer are hampered by tumor heterogeneity and its complex microevolution dynamics. Traditional prostate cancer mouse models include, amongst others, germline and conditional knockouts, transgenic expression of oncogenes, and xenograft models. Generation of de novo mutations in these models is complex, time-consuming, and costly. In addition, most of traditional models target the majority of the prostate epithelium, whereas human prostate cancer is well known to evolve as an isolated event in only a small subset of cells. Valuable models need to simulate not only prostate cancer initiation, but also progression to advanced disease.
Here we describe a method to target a few cells in the prostate epithelium by transducing cells by viral particles. The delivery of an engineered virus to the murine prostate allows alteration of gene expression in the prostate epithelia. Virus type and quantity will hereby define the number of targeted cells for gene alteration by transducing a few cells for cancer initiation and many cells for gene therapy. Through surgery-based injection in the anterior lobe, distal from the urinary track, the tumor in this model can expand without impairing the urinary function of the animal. Furthermore, by targeting only a subset of prostate epithelial cells the technique enables clonal expansion of the tumor, and therefore mimics human tumor initiation, progression, as well as invasion through the basal membrane.
This novel technique provides a powerful prostate cancer model with improved physiological relevance. Animal suffering is limited, and since no additional breeding is required, overall animal count is reduced. At the same time, analysis of new candidate genes and pathways is accelerated, which in turn is more cost efficient.

This protocol describes a newly established method for virus delivery to the murine prostate. Using either CRISPR/Cas9 technology, gene overexpression, or Cre recombinase delivery, the technique allows orthotopic alteration of gene expression and implements a novel mouse model for prostate cancer.

ウイルスの遺伝子改変マウスの前立腺に CRISPR ガイドの配信

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) ...

Identification, Histological Characterization, and Dissection of Mouse Prostate Lobes for In Vitro 3D Spheroid Culture Models

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate cancer (PCa). Understanding the anatomy and histology of the mouse prostate is important for the efficient use and proper characterization of such animal models. The mouse prostate has four distinct pairs of lobes, each with their own characteristics. This article demonstrates the proper method of dissection and identification of mouse prostate lobes for disease analysis. Post-dissection, the prostate cells can be further cultured in vitro for mechanistic understanding. Since mouse prostate primary cells tend to lose their normal characteristics when cultured in vitro, we outline here a method for isolating the cells and growing them as 3D spheroid cultures, which is effective for preserving the physiological characteristics of the cells. These 3D cultures can be used for analyzing cell morphology and behavior in near-physiological conditions, investigating altered levels and localizations of key proteins and pathways involved in the development and progression of a disease, and looking at responses to drug treatments.

Genetically engineered mice are useful models for investigating prostate cancer mechanisms. Here we present a protocol to identify and dissect prostate lobes from a mouse urogenital system, differentiate them based on histology, and isolate and culture the primary prostate cells in vitro as spheroids for downstream analyses.

培養 3 D 回転楕円体モデルでのマウス前立腺の葉の解剖組織学的特性及び

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate ...

Generation of Tumor Organoids from Genetically Engineered Mouse Models of Prostate Cancer

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) are a rigorous method for studying mammalian development and disease. Our laboratory has developed several GEMMs of prostate cancer (PCa) that lack expression of one or multiple tumor suppressor genes using the site-specific Cre-loxP recombinase system and a prostate-specific promoter. In this article, we describe our method for necropsy of these PCa GEMMs, primarily focusing on dissection of mouse prostate tumors. New methods developed over the last decade have facilitated the culture of epithelial-derived cells to model organ systems in vitro in three dimensions. We also detail a 3D cell culture method to generate tumor organoids from mouse PCa GEMMs. Pre-clinical cancer research has been dominated by 2D cell culture and cell line-derived or patient-derived xenograft models. These methods lack tumor microenvironment, a limitation of using these techniques in pre-clinical studies. GEMMs are more physiologically-relevant for understanding tumorigenesis and cancer progression. Tumor organoid culture is an in vitro model system that recapitulates tumor architecture and cell lineage characteristics. In addition, 3D cell culture methods allow for growth of normal cells for comparison to tumor cell cultures, rarely possible using 2D cell culture techniques. In combination, use of GEMMs and 3D cell culture in pre-clinical studies has the potential to improve our understanding of cancer biology.&#160;

We show a method for necropsy and dissection of mouse prostate cancer models, focusing on prostate tumor dissection. A step-by-step protocol for generation of mouse prostate tumor organoids is also presented.

前立腺癌の遺伝子組み換えマウスモデルからの腫瘍オルガノイドの生成

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) ...

遺伝学

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

ヒト前立腺癌転移の同所マウスモデル

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

医学

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only one-fourth of these patients achieving transplantation, there is a dire need for alternatives for those with failing organs. In order to decrease the harmful consequences of dialysis along with the overall healthcare costs it incurs, active investigation is ongoing in search of alternative solutions to organ transplantation. Implantable tissue-engineered renal cellular constructs are one such feasible approach to replacing lost renal functionality. Here, described for the first time, is the microdissection of murine kidneys for isolation of living corticomedullary renal segments. These segments are capable of rapid incorporation within scaffold-free endothelial-fibroblast constructs which may enable rapid connection with host vasculature once implanted. Adult mouse kidneys were procured from living donors, followed by stereoscope microdissection to obtain renal segments 200 - 300 &#181;m in diameter. Multiple renal constructs were fabricated using primary renal segments harvested from only one kidney. This method demonstrates a procedure which could salvage functional renal tissue from organs that would otherwise be discarded.

Tissue-engineered renal constructs provide a solution for the organ shortage and deleterious effects of dialysis. Here, we describe a protocol to micro dissect murine kidneys for isolation of cortico-medullary segments. These segments are implanted into scaffold-free cellular constructs, forming renal organoids.

腎組織のプライマリ セグメントと新規スキャフォールド フリー構造技術と定款の

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...

生物工学

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

ヒト前立腺癌の前臨床同所性マウスモデル

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Murine Orchiectomy and Ovariectomy to Reduce Sex Hormone Production

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative disease. The manipulation of sex hormone levels in the murine model system allows for the study of their impact on organs/tissues and within disease progression. Orchiectomy - the surgical removal of the testes - and ovariectomy - the surgical removal of the ovaries - provide a method to deplete the endogenous sex hormones so that the precise hormone levels can be provided through drug or other delivery methods. Here, we provide rapid and minimally invasive methods for both orchiectomy and ovariectomy in the murine model system for the reduction of sex hormones. This protocol details the surgical preparation and excision of the testes through the scrotal sac, and excision of the ovaries via two incisions in the right and left lateral dorsum.

This manuscript describes a consistent way to quickly perform survival rodent orchiectomies and ovariectomies.

性ホルモン産生を減らすためのマウス精巣摘出術と卵巣摘出術

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative ...

Modeling Prostate Cancer in Genetically-engineered Mouse Models: A CRISPR/Cas9-mediated Localized Gene Editing Technique in Mouse Anterior Prostate Lobe Cells

Source: Riedel, M. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/57525" target="_blank">Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration.</a> J. Vis. Exp. (2018)
This video describes a method for editing specific genes in prostate gland cells using an adenovirus-based delivery system. The approach allows for orthotopic and localized alteration of gene expression utilizing CRISPR technology to develop novel mouse models for prostate cancer.

遺伝子改変マウスモデルにおける前立腺癌のモデリング:マウス前立腺葉細胞におけるCRISPR/Cas9媒介局所遺伝子編集技術

Source: Riedel, M. et al. Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration. J. Vis. Exp. (2018)
This video describes a method ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

前立腺がん

動物モデル研究

Intra-prostatic Injection of Cancer Cells: A Technique to Deliver Cancer Cells for Establishing Orthotopic Prostate Cancer Mouse Model

Source: Anker, J. F. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/57301" target="_blank">Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we demonstrate the procedure for administering intra-prostatic injection of prostate cancer cells into a mouse model. Orthotopic murine models can be used to study the disease origin and response to treatment therapies in a non-invasive and clinically relevant environment.

がん細胞の前立腺内注射:同所性前立腺がんモデルを確立するためのがん細胞送達技術

Source: Anker, J. F. et al. Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate ...

マウス前立腺マイクロ解剖と外科的去勢

要約

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この動画の章

アンドロゲン依存性去勢抵抗性前立腺癌の生物発光と蛍光の同所性同種同系マウスモデル

ウイルスの遺伝子改変マウスの前立腺に CRISPR ガイドの配信

培養 3 D 回転楕円体モデルでのマウス前立腺の葉の解剖組織学的特性及び

前立腺癌の遺伝子組み換えマウスモデルからの腫瘍オルガノイドの生成

ヒト前立腺癌転移の同所マウスモデル

腎組織のプライマリセグメントと新規スキャフォールドフリー構造技術と定款の

ヒト前立腺癌の前臨床同所性マウスモデル

性ホルモン産生を減らすためのマウス精巣摘出術と卵巣摘出術

遺伝子改変マウスモデルにおける前立腺癌のモデリング:マウス前立腺葉細胞におけるCRISPR/Cas9媒介局所遺伝子編集技術

がん細胞の前立腺内注射:同所性前立腺がんモデルを確立するためのがん細胞送達技術

マウス前立腺マイクロ解剖と外科的去勢

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アンドロゲン依存性去勢抵抗性前立腺癌の生物発光と蛍光の同所性同種同系マウスモデル

ウイルスの遺伝子改変マウスの前立腺に CRISPR ガイドの配信

培養 3 D 回転楕円体モデルでのマウス前立腺の葉の解剖組織学的特性及び

前立腺癌の遺伝子組み換えマウスモデルからの腫瘍オルガノイドの生成

ヒト前立腺癌転移の同所マウスモデル

腎組織のプライマリ セグメントと新規スキャフォールド フリー構造技術と定款の

ヒト前立腺癌の前臨床同所性マウスモデル

性ホルモン産生を減らすためのマウス精巣摘出術と卵巣摘出術

遺伝子改変マウスモデルにおける前立腺癌のモデリング:マウス前立腺葉細胞におけるCRISPR/Cas9媒介局所遺伝子編集技術

がん細胞の前立腺内注射:同所性前立腺がんモデルを確立するためのがん細胞送達技術

腎組織のプライマリセグメントと新規スキャフォールドフリー構造技術と定款の