Name: murine prostate micro-dissection and surgical castration
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
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Alcune delle figure in questo manoscritto sono stati generosamente fornito dal laboratorio di Bart O. Williams. Gli autori sono supportati dal National Cancer Institute concede U54CA143803, CA163124, CA093900, CA143055 E.

Questo protocollo incontra e segue le linee guida stabilite dal Comitato Istituzionale cura degli animali e Usa Johns Hopkins University. 1. Micro-dissezione una prostata mouse <ol><li> Eutanasia il mouse per asfissia anidride carbonica o un metodo approvato alternativo in conformità con le linee guida per la cura degli animali e uso istituzionale. </li><li> Pin il mouse nella posizione supina ad una tavola di dissezione mettendo un perno attraverso ciascuno dei quattro zampe. </li><li> Spruzzare la addome con etanolo al 70%. </li><li> Tenere la pelle del basso addome con una pinza, e usare le forbici per tagliare attraverso la pelle e peritoneo circa 1 cm anteriormente all&#39;apertura del pene, attenzione a non tagliare tutti gli organi. </li><li> Tagliare la pelle e del peritoneo dal basso addome, fino entrambi i lati dell&#39;addome alla gabbia toracica, esponendo la cavità peritoneale. </li><li> Identificare la vescica e del tratto urogenitale, ed esporli delicatamente spostando grassi e altri organi di lato. </li><li> Usiforcipe Ng, presa vasi deferenti alla base vicino l&#39;uretra, e strappare via. </li><li> Ripetere con il dotto deferente opposte. </li><li> Utilizzando pinze, accuratamente afferrare la vescica e tirarlo, mentre simultaneamente con le forbici per tagliare attraverso l&#39;uretra sotto la vescica e la prostata ventrale (circa 1 cm sotto la base della vescica). Nota: Poiché la vescica è tirato su, il (vescica contenente una sezione dell&#39;uretra, tutti i lobi della prostata e le vescicole seminali) intero tratto urogenitale verrà con esso. Ci può essere una certa resistenza. </li><li> Posizionare il tratto urogenitale (UGT) in un 60-100 mm piastra di Petri contenente circa 5-10 ml tampone fosfato salino (PBS). </li><li> Eseguire la parte restante del protocollo sotto un microscopio di dissezione. Utilizzare due pinza sottile, uno in ogni mano. Tenere le pinze &quot;come una matita&quot; e riposare gli avambracci sul banco in modo da stabilizzare loro. </li><li> Utilizzare una pinza sottile per posizionare la UGT in modo tale che la vescica èsopra, l&#39;uretra è puntato verso il basso, e le vescicole seminali sono posizionate su entrambi i lati della vescica. </li><li> Grip l&#39;uretra con una pinza ed estrarre delicatamente il grasso con gli altri pinze senza strappare via qualsiasi tessuto prostatico. Nota: Fat apparirà relativo &quot;lucido&quot; al tessuto circostante. </li><li> Una volta che il grasso viene rimosso, utilizzare pinze per strappare il tessuto connettivo tra i due lobi ventrali della prostata e separarli. </li><li> Per rimuovere uno dei lobi ventrali, usare una pinza per afferrare un unico lobo ventrale, vicino alla punta, e utilizzare le altre pinze per afferrare che lobo alla base il più vicino al uretra più possibile. Mentre ancora presa alla base del lobo, utilizzare le altre pinze per afferrare la uretra. Estrarre il lobo di distanza dall&#39;uretra con una ditta, movimento regolare. Assicurarsi che nessun tessuto prostatico rimane attaccato al uretra. Posizionare il lobo nel mezzo appropriata, a seconda del passo successivo sperimentale. <ol><li> Per risolvere il problema e di paraffina-incorporare le sampio per l&#39;analisi istologica, posizionare il lobo in formalina neutra tamponata al 10% (NBF) 8. </li><li> Posizionare il lobo di congelamento di media, come ad esempio Office, per la crioconservazione e sezionamento 8. </li><li> Posizionare il lobo in PBS freddo per l&#39;isolamento delle cellule unico per la cultura o citometria a flusso 9. </li></ol></li><li> Ripetere il passaggio 1.15 con l&#39;altro lobo ventrale. </li><li> Per rimuovere uno dei lobi frontali, usare il forcipe per tirare delicatamente il lobo di distanza dal vescicole seminali, facendo attenzione a non forare la vescicole seminali. Una volta che il lobo è indipendente della vescicola seminale, rimuoverlo nello stesso modo come il lobo ventrale passo 1.15. </li><li> Ripetere il passaggio 1.17 con l&#39;altro lobo anteriore. </li><li> Vibrazione tratto urogenitale restante sopra tale che la prostata dorsale è visibile. </li><li> Per rimuovere uno dei lobi dorsolaterali, utilizzare pinze per strappare il tessuto connettivo tra i due lobi dorsolaterali e anche il tessuto connettivo tra i lobi e tegli posteriormente regione delle vescicole seminali. Rimuovere il lobo in modo simile come il lobo ventrale passo 1.15. </li><li> Ripetere il passaggio 1.20 con l&#39;altro lobo dorsolaterale. </li></ol> 2. castrazione chirurgica Nota: Si tratta di un intervento chirurgico di sopravvivenza, così asepsi, anestesia, e la gestione del dolore sono importanti per il completamento etica e di successo di questo protocollo. Seguire tutte le linee guida per la cura degli animali e uso istituzionale. Utilizzare una fonte di calore esterna, ad esempio una coperta di acqua ricircolo, durante la procedura chirurgica per prevenire l&#39;ipotermia. Non lasciare un animale incustodito fino a quando non ha ripreso conoscenza sufficiente a mantenere decubito sternale. Non restituire un animale che ha subito un intervento chirurgico per la compagnia di altri animali fino alla completa guarigione. Autoclavare tutti gli strumenti chirurgici prima dell&#39;uso in chirurgia. <ol><li> Su una superficie pulita e sterile anestetizzare il mouse utilizzando misure appropriate (ad esempio 2% isoflurano per via inalatoria) e posizionare il mOuse in posizione supina. Nota: Metodi anestesia alternativi, come la chetamina, possono anche essere utilizzati, a seconda del protocollo animali approvato. </li><li> Controllare i riflessi del topo pizzicando le dita dei piedi. Se il mouse non reagisce, passare alla fase successiva. Se non reagisce, aspettare 1-3 minuti e prova di nuovo. Radere l&#39;area chirurgica con un rasoio elettrico. </li><li> Asetticamente preparare l&#39;addome del mouse utilizzando alternati scrub di etanolo al 70% e iodio o procedure raccomandate dal personale veterinario istituzionale o IACUC. </li><li> Usando un bisturi sterile, praticare un&#39;incisione verticale 1 centimetro attraverso la pelle sulla linea mediana del basso addome, circa 1,5 cm anteriormente al pene. </li><li> Fai una piccola incisione (&lt;1 cm) attraverso il peritoneo, attenzione a non tagliare tutti gli organi. </li><li> Utilizzando pinze sterili, afferrare il bordo tagliato del peritoneo e sollevarlo leggermente in modo da poter vedere la cavità peritoneale sotto. </li><li> Utilizzando un altro pinza sterile, raggiungere in the cavità peritoneale e il grip sia il cuscinetto di grasso testicolare a sinistra oa destra, laterale alla vescica. Estrarre il cuscinetto adiposo attraverso l&#39;apertura nel peritoneo e pelle fino testicolo esce pure. Fare attenzione a non danneggiare altri tessuti o organi durante questa fase. </li><li> Usando una penna cauterizzazione, tagliare il cuscinetto adiposo che sta tenendo il testicolo. Tagliare lentamente attraverso l&#39;arteria testicolare con la penna cauterizzazione Nota: Se l&#39;arteria testicolare è tagliato troppo veloce, ci può essere troppo sanguinamento e il mouse possono avere per essere eutanasia. </li><li> Una volta che il cuscinetto di grasso e l&#39;arteria sono tagliati, rimuovere il pad testicoli e grassi. </li><li> Ripetere i passaggi 2,6-2,9 con l&#39;altro testicolo. Nota: Un metodo alternativo per la rimozione dei testicoli è quello di legare chirurgicamente l&#39;arteria testicolare, quindi tagliato nave con le forbici. </li><li> Sutura del peritoneo chiusa con suture assorbibili. </li><li> Staple la pelle chiusa con clip ferita chirurgica. </li><li> Somministrare un analgesico per gestire il dolore, e il luogoil mouse in una gabbia pulita su una gabbia caldo per 5-10 min. Monitorare il mouse per i segni di dolore o sanguinamento. </li></ol>

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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy.">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li><li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+of+prostate+cancer:+new+prospects+for+old+challenges.">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li></ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Prostate micro-dissezione consente di sperimentazione specifici lobi e analisi della prostata mouse (Figura 1). Nei modelli di topo geneticamente, fenotipi possono essere visti in un lobo che non si vede in altri. Inoltre, per l&#39;analisi istologica, questo protocollo assicura che la massima quantità di tessuto prostatico puro può essere sezionato e macchiato, senza altri tessuti del tratto urogenitale presenti nella sezione. Infine, per gli esperimenti a cella singola, questo protocollo permette pe...

La prostata è il sito più comune di cancro negli uomini negli Stati Uniti. Quasi 220.000 uomini ogni anno saranno con diagnosi di cancro alla prostata, e circa 27.000 uomini soccombere alla loro malattia 1. Gli uomini hanno un rischio 1 a 7 vita di una diagnosi di cancro alla prostata negli Stati Uniti 1. Iperplasia prostatica benigna (BPH), un noncancerous ingrandimento legata all&#39;età della prostata, è anche una condizione molto diffusa, che colpisce oltre l&#39;80% degli uomini oltre 80 2. In quanto tale, la prostata è al centro di molte ricerche. Modelli di topo sono stati utilizzati ampiamente per studiare le malattie della prostata 3. Nel complesso, la prostata mouse è un ottimo rappresentante della ghiandola umana 4, ma ci sono somiglianze e le differenze tra il mouse e anatomia della prostata umana e fisiologia 5. In entrambe le specie, la prostata si trova alla base della vescica, che circonda l&#39;uretra. La prostata di essere una sola loessere, diviso in quattro zone: centrale, di transizione, periferiche, e stroma fibromuscolare anteriore. Al contrario, la prostata mouse è suddiviso in tre lobi accoppiati a diverse posizioni intorno all&#39;uretra: anteriore, ventrale e dorsolateral. A livello cellulare, la differenza principale è che la cellula basale rapporto cellulare luminale nell&#39;uomo è di circa 1: 1, ma è 1: 4 in topi 6. Lo stroma murino è inoltre differente nei topi relativi agli esseri umani - esseri umani hanno più estesa muscolatura liscia, mentre lo strato muscolare è molto più sottile nella prostata murino. La corretta identificazione, la dissezione, e la manipolazione della prostata del mouse sono essenziali per la ricerca del mouse prostata. i livelli ormonali influenzano drasticamente lo sviluppo e l&#39;omeostasi della ghiandola prostatica in entrambi gli uomini e topi. Mentre gli estrogeni sembra giocare un ruolo nello sviluppo della prostata 7, l&#39;ormone più importante nella prostata è testosterone. Il testosterone è essenziale per uno sviluppo ghiandolared manutenzione. Dopo castrazione fisica o chimica, circa il 90% delle cellule luminali del Apoptose adulti prostata, e la ghiandola restringe. Se il testosterone viene reintrodotto ad un individuo in condizioni di castrazione, la prostata è in grado di rigenerarsi a piena capacità. Il testosterone sembra anche a guidare il cancro alla prostata, che è il motivo per cui la terapia di deprivazione androgenica è una strategia terapeutica di uso comune. Tuttavia, molti tumori della prostata diventano resistenti alla deprivazione androgenica. Inoltre, gli uomini sottoposti a terapia di deprivazione androgenica per il trattamento del cancro alla prostata sottoposti a cicli di condizioni castrati e rigenerati. Nel topo, la castrazione chirurgica, insieme con la rigenerazione ormonale della prostata reintroducendo il testosterone, è un importante strumento con cui studiare la resistenza castrazione e gli effetti del testosterone in bicicletta sulla prostata. In questo articolo, si discuterà e dimostrare le tecniche adeguate in base ai quali Locatee micro-sezionare una prostata mouse, nonché chirurgicamente castrare un mouse.

<table><tbody><tr><td>Surgical tools</td><td>Roboz</td><td>Various</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Sigma</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>OCT medium</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>Must be placed on dry ice to freeze, and stored at -80 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Johns Hopkins</td><td></td><td>Also available from vendors online</td></tr><tr><td>Cautery Pen</td><td>Medline</td><td>ESCT002</td><td></td></tr><tr><td>Silk suture</td><td>AD Surgical</td><td>M-S330R19</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Wound Clips</td><td>Roboz</td><td>RS-9265</td><td></td></tr></tbody></table>

murine prostate micro-dissection and surgical castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

Tutti i sei lobi della prostata sono stati rimossi da un mouse via prostata micro-dissezione (Figura 1). Il tratto urogenitale completa (UGT) è composta da tutti i lobi della prostata, della vescica, vescicole seminali, e l&#39;uretra (Figura 1A). I vasi deferenti attribuisce al uretra, ma non è necessaria per la prostata micro-dissezione, e possono quindi essere staccati prima della rimozione della UGT tagliando l&#39;uretra (Figura 1b-1c).</s...

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Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Questo manoscritto descrive i protocolli per la prostata micro-dissezione e la castrazione chirurgica nel topo di laboratorio. Noi raffiguriamo anche risultati rappresentativi prodotti da questi protocolli. Infine, si discute i vantaggi e l&#39;utilizzo di questi protocolli.

Murino della prostata Micro-dissezione e la castrazione chirurgica

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

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45.3K Views.  Johns Hopkins University.  Questo manoscritto descrive i protocolli per la prostata micro-dissezione e la castrazione chirurgica nel topo di laboratorio. Noi raffiguriamo anche risultati rappresentativi prodotti da questi protocolli. Infine, si discute i vantaggi e l'utilizzo di questi protocolli. 

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A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and transgenic genetically engineered mouse models. Unlike subcutaneous tumors, orthotopic tumors contain more clinically accurate vasculature, tumor microenvironment, and responses to multiple therapies. In contrast to genetically engineered mouse models, orthotopic models can be performed with lower cost and in less time, involve the use of highly complex and heterogeneous mouse or human cancer cell lines, rather that single genetic alterations, and these cell lines can be genetically modified, such as to express imaging agents. Here, we present a protocol to surgically injecting a luciferase- and mCherry-expressing murine prostate cancer cell line into the anterior prostate lobe of mice. These mice developed orthotopic tumors that were non-invasively monitored in vivo and further analyzed for tumor volume, weight, mouse survival, and immune infiltration. Further, orthotopic tumor-bearing mice were surgically castrated, leading to immediate tumor regression and subsequent recurrence, representing castration-resistant prostate cancer. Although technical skill is required to carry out this procedure, this syngeneic orthotopic model of both androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer is of great use to all investigators in the field.

The goal of this protocol is to demonstrate the intra-prostatic injection of prostate cancer cells, with subsequent castration. Orthotopic pre-clinical models of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer are critical to study the disease in the context of a clinically relevant tumor microenvironment and an immunocompetent host.

Un modello murino Syngeneic Orthotopic bioluminescenti e fluorescente di carcinoma della prostata androgeno-dipendente e castrazione-resistente

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) for prostate cancer are hampered by tumor heterogeneity and its complex microevolution dynamics. Traditional prostate cancer mouse models include, amongst others, germline and conditional knockouts, transgenic expression of oncogenes, and xenograft models. Generation of de novo mutations in these models is complex, time-consuming, and costly. In addition, most of traditional models target the majority of the prostate epithelium, whereas human prostate cancer is well known to evolve as an isolated event in only a small subset of cells. Valuable models need to simulate not only prostate cancer initiation, but also progression to advanced disease.
Here we describe a method to target a few cells in the prostate epithelium by transducing cells by viral particles. The delivery of an engineered virus to the murine prostate allows alteration of gene expression in the prostate epithelia. Virus type and quantity will hereby define the number of targeted cells for gene alteration by transducing a few cells for cancer initiation and many cells for gene therapy. Through surgery-based injection in the anterior lobe, distal from the urinary track, the tumor in this model can expand without impairing the urinary function of the animal. Furthermore, by targeting only a subset of prostate epithelial cells the technique enables clonal expansion of the tumor, and therefore mimics human tumor initiation, progression, as well as invasion through the basal membrane.
This novel technique provides a powerful prostate cancer model with improved physiological relevance. Animal suffering is limited, and since no additional breeding is required, overall animal count is reduced. At the same time, analysis of new candidate genes and pathways is accelerated, which in turn is more cost efficient.

This protocol describes a newly established method for virus delivery to the murine prostate. Using either CRISPR/Cas9 technology, gene overexpression, or Cre recombinase delivery, the technique allows orthotopic alteration of gene expression and implements a novel mouse model for prostate cancer.

Consegna di virus di CRISPR guide alla prostata per alterazione del Gene murina

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) ...

Identification, Histological Characterization, and Dissection of Mouse Prostate Lobes for In Vitro 3D Spheroid Culture Models

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate cancer (PCa). Understanding the anatomy and histology of the mouse prostate is important for the efficient use and proper characterization of such animal models. The mouse prostate has four distinct pairs of lobes, each with their own characteristics. This article demonstrates the proper method of dissection and identification of mouse prostate lobes for disease analysis. Post-dissection, the prostate cells can be further cultured in vitro for mechanistic understanding. Since mouse prostate primary cells tend to lose their normal characteristics when cultured in vitro, we outline here a method for isolating the cells and growing them as 3D spheroid cultures, which is effective for preserving the physiological characteristics of the cells. These 3D cultures can be used for analyzing cell morphology and behavior in near-physiological conditions, investigating altered levels and localizations of key proteins and pathways involved in the development and progression of a disease, and looking at responses to drug treatments.

Genetically engineered mice are useful models for investigating prostate cancer mechanisms. Here we present a protocol to identify and dissect prostate lobes from a mouse urogenital system, differentiate them based on histology, and isolate and culture the primary prostate cells in vitro as spheroids for downstream analyses.

Identificazione, caratterizzazione istologica e dissezione dei lobi della prostata Mouse per In Vitro sferoide 3D modelli di coltura

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate ...

Generation of Tumor Organoids from Genetically Engineered Mouse Models of Prostate Cancer

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) are a rigorous method for studying mammalian development and disease. Our laboratory has developed several GEMMs of prostate cancer (PCa) that lack expression of one or multiple tumor suppressor genes using the site-specific Cre-loxP recombinase system and a prostate-specific promoter. In this article, we describe our method for necropsy of these PCa GEMMs, primarily focusing on dissection of mouse prostate tumors. New methods developed over the last decade have facilitated the culture of epithelial-derived cells to model organ systems in vitro in three dimensions. We also detail a 3D cell culture method to generate tumor organoids from mouse PCa GEMMs. Pre-clinical cancer research has been dominated by 2D cell culture and cell line-derived or patient-derived xenograft models. These methods lack tumor microenvironment, a limitation of using these techniques in pre-clinical studies. GEMMs are more physiologically-relevant for understanding tumorigenesis and cancer progression. Tumor organoid culture is an in vitro model system that recapitulates tumor architecture and cell lineage characteristics. In addition, 3D cell culture methods allow for growth of normal cells for comparison to tumor cell cultures, rarely possible using 2D cell culture techniques. In combination, use of GEMMs and 3D cell culture in pre-clinical studies has the potential to improve our understanding of cancer biology.&#160;

We show a method for necropsy and dissection of mouse prostate cancer models, focusing on prostate tumor dissection. A step-by-step protocol for generation of mouse prostate tumor organoids is also presented.

Generazione di organidi tumorali da modelli murini geneticamente ingegnerizzati del cancro alla prostata

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) ...

Genetica

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

Un ortotopico Modello murino di Human Prostate Cancer Metastasi

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Medicina

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only one-fourth of these patients achieving transplantation, there is a dire need for alternatives for those with failing organs. In order to decrease the harmful consequences of dialysis along with the overall healthcare costs it incurs, active investigation is ongoing in search of alternative solutions to organ transplantation. Implantable tissue-engineered renal cellular constructs are one such feasible approach to replacing lost renal functionality. Here, described for the first time, is the microdissection of murine kidneys for isolation of living corticomedullary renal segments. These segments are capable of rapid incorporation within scaffold-free endothelial-fibroblast constructs which may enable rapid connection with host vasculature once implanted. Adult mouse kidneys were procured from living donors, followed by stereoscope microdissection to obtain renal segments 200 - 300 &#181;m in diameter. Multiple renal constructs were fabricated using primary renal segments harvested from only one kidney. This method demonstrates a procedure which could salvage functional renal tissue from organs that would otherwise be discarded.

Tissue-engineered renal constructs provide a solution for the organ shortage and deleterious effects of dialysis. Here, we describe a protocol to micro dissect murine kidneys for isolation of cortico-medullary segments. These segments are implanted into scaffold-free cellular constructs, forming renal organoids.

Microdissection di segmenti di tessuto renale primario e incorporazione con tecnologia romanzo costrutto senza impalcatura

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...

Bioingegneria

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

Pre-clinica ortotopico Modello murino di Human cancro alla prostata

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Murine Orchiectomy and Ovariectomy to Reduce Sex Hormone Production

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative disease. The manipulation of sex hormone levels in the murine model system allows for the study of their impact on organs/tissues and within disease progression. Orchiectomy - the surgical removal of the testes - and ovariectomy - the surgical removal of the ovaries - provide a method to deplete the endogenous sex hormones so that the precise hormone levels can be provided through drug or other delivery methods. Here, we provide rapid and minimally invasive methods for both orchiectomy and ovariectomy in the murine model system for the reduction of sex hormones. This protocol details the surgical preparation and excision of the testes through the scrotal sac, and excision of the ovaries via two incisions in the right and left lateral dorsum.

This manuscript describes a consistent way to quickly perform survival rodent orchiectomies and ovariectomies.

Orchiectomia murina e ovariectomia per ridurre la produzione di ormoni sessuali

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative ...

Modeling Prostate Cancer in Genetically-engineered Mouse Models: A CRISPR/Cas9-mediated Localized Gene Editing Technique in Mouse Anterior Prostate Lobe Cells

Source: Riedel, M. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/57525" target="_blank">Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration.</a> J. Vis. Exp. (2018)
This video describes a method for editing specific genes in prostate gland cells using an adenovirus-based delivery system. The approach allows for orthotopic and localized alteration of gene expression utilizing CRISPR technology to develop novel mouse models for prostate cancer.

Modellazione del cancro alla prostata in modelli murini geneticamente modificati: una tecnica di editing genico localizzato mediata da CRISPR/Cas9 nelle cellule del lobo prostatico anteriore del topo

Source: Riedel, M. et al. Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration. J. Vis. Exp. (2018)
This video describes a method ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Prostate Cancer

Animal model studies

Intra-prostatic Injection of Cancer Cells: A Technique to Deliver Cancer Cells for Establishing Orthotopic Prostate Cancer Mouse Model

Source: Anker, J. F. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/57301" target="_blank">Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we demonstrate the procedure for administering intra-prostatic injection of prostate cancer cells into a mouse model. Orthotopic murine models can be used to study the disease origin and response to treatment therapies in a non-invasive and clinically relevant environment.

Iniezione intraprostatica di cellule tumorali: una tecnica per fornire cellule tumorali per stabilire un modello murino di cancro alla prostata ortotopico

Source: Anker, J. F. et al. Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate ...