The author is grateful for the assistance of Mrs. Sharon Spana (University of Sydney) in rodent monitoring, handling and experimentation. The authorwould like to thank Prof. Jonathan Stone and Dr. Dan Johnstone for the assistance in the preparation of this manuscript. PhD funding support has been provided by University of Sydney and Australian Center for Excellence in Vision.

倫理文は：プロトコルは、5657＃AECシドニー大学の動物ケアのガイドラインに従います。麻酔は、動物倫理委員会（シドニー大学、AEC＃5657）によって承認されました。 1.機器の準備<ol><li>リアルタイム皮膚温度トラッキングを使用してください。コンピュータ、およびデータ集録ハードウェアのスイッチをオンにします。 </li><li>オープン温度記録ソフトウェアと30〜35の間°Cと100ミリ秒毎にサンプリング周波数に温度設定を調整します。 </li><li>オプション：コア温度を確保するために挿入し、直腸温度計は37.5℃で安定しています。 </li></ol>手動血圧計の2キャリブレーション<ol><li> 250〜550グラムのラット用サイズ2カフをsphygmomanometer.Useする新生児腕カフを接続します。アダプタは、血圧計のカフチューブを接続する必要があるかもしれません。 </li><li>どちらかが大気開放弁を緩めるか、適応からカフチューブを切断することにより、カフを収縮または。は圧力いないことを確認し、チューブ内に残り、圧力計の針は楕円形/矩形の内側にゼロにかかっています。 </li><li>チューブ、圧力計とカフの間の圧力を確認してください。それは圧力計で100 mmHgのを読み取るまでインフレ電球の穏やかなポンプにカフを膨張させます。圧力が一定のままで確認してください。ゆっくりと空気放出値を開くことによって、カフを収縮させます。 </li></ol> 3.動物の準備注：光損傷を受けることがある動物は、リモート虚血前の晩暗い適応を必要とします。光損傷を受けた動物は、暗い飼育（：暗サイクル（5ルクス）12時間の明）が必要<ol><li>覚醒または麻酔げっ歯類のいずれかでリモート虚血を実行します。動物は健康な筋肉の緊張を持っていることを確認してください。十分な筋肉の存在があることを確認するために、上部の後肢をつまんで、これを確認してください。光損傷に対するRIPによって誘発される保護は、生後6ヶ月まで坐ったラットでテストされています。 </li><li> Rのための麻酔の準備IP <ol><li> 60ミリグラム/ kgのケタミンおよび5mg / kgのキシラジンの腹腔内注射でラットを注入します。足を拡張し、足の下の皮膚をつまんで麻酔の深さを確認してください。それが深く麻酔された場合、動物には反射を持っていません。麻酔下ながら角膜の乾燥を避けるために、人工涙液を適用します。 </li><li>熱パッドまたは37.5℃の一定の体温を維持するために、循環水加熱器チューブのいずれかに配置ラット。下肢「フットパッドを上に向けて腹臥位にラットを配置します。どちらの右または左肢は、リモート虚血を受け得ます。 </li></ol></li><li> RIPのための目を覚まし準備 注：動物実験AWAKE 2人が必要です。一人は動物を拘束し、二人目は、手動血圧計を運営しています。実験者は、拘束がハンドラの負傷のリスクを高めるような手順を実行するために自信を持っている必要があります。リモート虚血を受けたラットは、Tを調整されなければなりませんOマニュアル拘束。直感ガイドラインに応じて手動拘束は数週間にわたって5分の最大30秒から進行する必要があります。マニュアル拘束に順応しない臆病な動物が目を覚まし、実験から除外されるべきです。最後に、手動の拘束を正確にRIPの調査結果を解釈するために使用されなければならない動物へのストレス（および潜在的に研究に交絡を紹介）および偽コホート（炎症のないカフの配置）を引き起こす可能性があります。 <ol><li> 15cmのX 30〜50センチメートル片にタオルをカットし、後肢の上部に頭をカバーする、ラットの脊椎に垂直な短辺を配置します。 </li><li>ラットの胴体の下の短い辺をしっかりタックとタオルの残りの長辺でラットをラップし始めます。仰臥位で腕の下に包まれた動物を保護します。ラットを左腕の下に保持されている場合は、タオルから、ラットの右肢を解放します。 </li></ol></li></ol> 4.アプリケーションO皮膚温度プローブF <ol><li>虚血を受け、フットパッドの肌のプローブを配置することであるラットの足を拡張します。温度プローブと皮膚との接触を最大化するために、皮膚のプローブを配置します。しっかりとフットパッドにプローブを押して、紙テープでプローブを取り付けます。 </li><li>温度記録ソフトウェアで温度を追跡することによって、皮膚のプローブの配置を確認してください。皮膚温度は30-34℃の間であり、安定していることを確認してください。 1-2分間皮膚温度を追跡します。温度が不安定になったり、30℃以下であれば、皮膚のプローブを調整します。 </li></ol> 5.リモート虚血<ol><li>カフを収縮し、空気圧バルブが閉じていることを確認します。足を伸ばして、ゆるく上側後肢にカフを取り囲みます。位置に緩めたカフを維持するために、脚と下位桁を拡張するために人差し指と親指を使用してください。 </li><li> 160 mmHgのに麻酔動物のカフ圧を上げ、目を覚​​まし動物increで180 mmHgでのカフ圧ASE。 注：ラットの麻酔血圧が120〜140 mmHgでの範囲であり、ときに意識し160 mmHgのに上昇します。適切な圧力に達すると、タイマフット温度記録を開始します。 注：足の温度が一定の圧力の5分後に2°Cでドロップする必要があります。 </li><li>虚血を通して、動物の「ひざ」は、上記カフの位置を維持します。カフ圧は、数分後に落下し始める、またはラットの手足が動いている場合。 </li><li>繰り返しポンプの所望のカフ圧の繰り返しショートバーストを維持するために、短いバーストのインフレ電球ポンプ</li><li>リモート虚血は5分間と15のために連続的に送達することができます。虚血再灌流プロトコルが介在する5分間の再灌流との5分間の虚血の2期間を含みます。 </li><li>空気圧バルブを緩めて、カフ圧を収縮。虚血プロの過程で温度変化を確認してくださいトコール。カフをリリース。 </li><li>傷害実験を続行します。麻酔の影響下に動物を加熱パッド上に配置する必要があります。歩行まで、動物を監視し続けます。動物は歩行まで、筐体に戻すことはできません。 </li></ol> 6.ライト傷害 - 網膜変性モデル<ol><li>暗い一晩（12-15時間）、動物を適応させます。すぐにリモート虚血コンディショニングまたは偽リモート虚血（動物拘束）は、次の食料と水でパースペックスハウジングに動物を配置します。 </li><li> 24時間午前9時パースペックスハウジングの上方に位置する蛍光灯（千ルクス）のスイッチをオンにします。露光に続いて、7日間の環状照明を暗くするために動物を返します。 </li></ol> 7.ポストリモート虚血手順<ol><li>電図（ERG）とビジョンの評価： 注：ERGセットアップとフラッシュプロトコルはBrandliストーン26に従いました。 <ol><li>暗い一晩（12-15時間）、動物を適応させます。下（それぞれ、60ミリグラム/ kgおよび5mg / kg）ケタミンとキシラジンの腹腔内注射によって動物を麻酔赤色照明を暗く。散瞳（硫酸アトロピン1.0％）、角膜麻酔（proxymetacaine 0.5％）。 </li><li>眼は角膜にすぐに低下し、角膜の水和（カルボマーポリマー）を適用します。角膜の水和を維持するために20分間隔でアイゲルを適用します。 </li><li>安定したERG記録を支援するために、眼球の周りにゆるく結ぶ糸を描画します。直腸プローブを用いて温度を監視し、37から37.5℃の動物の体温を維持します。 </li><li>全体野積分球内部のヘッドの位置を調整します。 注：全体野は、LEDからの目に均一な聖霊降臨祭の点滅を提供し、完全にプログラム可能な光刺激です。 </li><li>軽く角膜や口に挿入された直径2mmの銀/塩化銀ペレット電極に触れるカスタムメイド4ミリメートルのプラチナの正極を用いて、網膜電位を記録します。ステンレス製針の両方の電極を参照臀部に皮下に挿入。 </li><li> 2 kHzの取得速度と0.3-1,000ヘルツ（-3 dB）とのバンドパス設定で記録信号、（ADインスツルメンツ）。安定したERG記録が録音を開始する前に、被験者に10分の暗順応に動物を確立した後。 </li><li>以前Brandliストーン26で説明したように、フラッシュのプロトコルに従ってください。 <ol><li>フラッシュの持続時間をプログラム（我々が点滅し、持続時間が1〜2ミリ秒を使用）、および-4.4ログスコットcd.sm -2〜2.0にその強度を設定します。網膜機能を測定するために明るいフラッシュ（2.0ログスコットcd.sm -2、1ミリ秒）を使用します。本研究では、制御、光傷害およびRIPの光損傷との比較です。 </li></ol></li></ol></li></ol> 8. TUNELアッセイ<ol><li>フェノバルビタールの過剰投与（100mg / kg）の腹腔内注射によって動物を安楽死させます。目を摘出し、4％パラホルムアルデヒド中で固定します。 </li><li> cyroprotecting前にPBS中で目を洗ってください一晩スクロース30％（w / v）の中で目。 OCT化合物に目を埋め込み、クリオスタットを用いて20μmの矢状切片に切断。 </li><li> Maslim らのプロトコルに従ってDAPI染色で網膜切片のTUNELアッセイを実行します。27 </li><li>網膜のTUNELのカウントのために蛍光顕微鏡を使用してください。 TUNEL細胞は、外顆粒層（ONL）から記録しました。光受容体核を含んで網膜の最外層。本研究では、TUNEL数は、各処置群について5目で、それぞれの目のために三連で行いました。 </li><li>制御、光損傷および光傷害+ RIPラット群の平均を比較統計に一方向ANOVAを使用してください。 </li></ol>

The author has nothing to disclose.

げっ歯類の後肢虚血が正常網膜の光受容体に神経保護を提供する手動血圧計カフで誘導しました。光損傷9,28からの光受容体の虚血性コンディショニング誘導される保護と一致して発見。 基本的に、リモート虚血は、組織への簡単な酸素欠乏を引き起こします。したがって、遠隔虚血プレコンディショニングは、虚血コンディショニングまたは代わりと呼ばれる?...

ほとんどの生存率は、おそらくすべて、代謝ストレスに直面した組織は、亜致死虚血1,2の周期で前コンディショニングによって改善することができます。実用的な面で虚血プレコンディショニング（IP）は、その後の虚血性発作のような組織の経験より深刻なストレッサー、前に、亜致死虚血に対する組織の暴露です。動物モデルでは、IPは、脳、網膜、心臓や肺3-6に印象的な保護を提供します。それに対応して、脳卒中患者における観察は、以前の一過性脳虚血発作、より良い臨床転帰7,8との間のリンクを示しました。 IPは、非虚血性傷害9から網膜の光受容体を保護します。 多様な組織および傷害におけるIPの有効性は、それが全ての組織に存在する細胞生存の生来の機構を活性化していることを示唆しています。心筋の虚血プレコンディショニングはアップレギュレーションを介して保護効果を有することが示唆されていますアデノシンの放出を介して、またはミトコンドリアATPカリウムチャネル10,11の開口部を介して多くの代謝経路を調節することが知られている低酸素誘導因子（HIF）、の。アデノシン放出およびATPカリウムチャネルは、脳虚血に関与しているですが、これまでの虚血性コンディショニングの神経保護機構の調査は、抗興奮毒性への変更、抗アポトーシスおよび抗炎症経路12,13に焦点が当てられてきました。全体的に、神経細胞を保護するための虚血性コンディショニングの分子過程の理解は限られています。 リモート虚血プレコンディショニングの試みは、重要度の低い組織における虚血を生成することにより、離れた非常に重要な器官（心臓、脳、肺）を調整します。後肢を用いて遠隔虚血プレコンディショニング（RIP）は、脳卒中14-17のげっ歯類モデルにおいて神経保護的であることが実証されています。我々が記載された方法は、簡単かつ信頼性のある非侵襲PROTを提供しますRIPを誘導するためのocol。 RIPプロトコルの大部分は、上部の後肢に位置大腿動脈の識別を容易にし、手術用クランプや止血帯のアプリケーションのためにアクセスすることができたためと思われる、後肢を伴います。脳と皮膚保護の研究のための侵襲性四肢虚血性の研究では、虚血は鼠径靭帯から大腿動脈を分離し、大腿動脈2,15,18をクランプすることにより誘導されます。 四肢cuffingまたは大腿動脈クランプのいずれかに起因する虚血は、パルスの損失、酸素の減少と皮膚温度の低下などの四肢での変化により確認されています。リモート虚血は、レーザードップラーまたは超音波ドップラー17-19を用いて、パルスの消失によって確認することができます。皮膚温度は関係が20,21非線形であるが、ドップラーの代替として使用することができます。正確な温度記録は、研究所や缶では一般的です簡単にリモート虚血性の研究に組み込むこと。 手術をクランプ大腿する代わりに、止血帯を使用して、虚血の誘導です。止血帯アプリケーションは、血管クランプを用いて達成されるものに匹敵する虚血を作り出します。 Kutchner ら 。非侵襲的な止血にクランプ侵襲大腿動脈を比較し、両方の方法が四肢への血流を停止し、皮膚フラップ虚血18の形成外科モデルにおける皮膚損傷を減少が見出さ。脚または腕のいずれかをCuffingと収縮期血圧上にカフ圧を上昇させることは、ブタおよびヒト17,19,22における虚血性損傷に対する保護であることが見出されています。 別の止血帯は、虚血性血圧カフ又は弾性バンド17,22,23の使用を含む、リモート誘導に近づきます。しかし、虚血を誘導する弾性バンドを使用することは、潜在的に圧力の無秩序な量を生じさせる、危険な方法であります500 mmHgの上の圧力上昇と手足は、ヒト24に記録されています。また、ゴムバンドを使用して、四肢虚血は、エバンスブルー色素、筋線維の透過性25 の in vivoマーカーによって評価されるように、バンド23の除去後のラットの筋肉の損傷につながります。対照的に、止血帯に制御された圧力の送達は、血圧計17,19,22,26に接続された血圧カフを用いて達成することができます。 本研究では、光受容体変性の光損傷モデルは、リモート虚血プレコンディショニングの神経保護効果を実証しました。リモート虚血は、光損傷の直前に誘導し、網膜の機能試験によって確認されるように、その後の光受容体の変性を防止することができました。付属のビデオでは、非侵襲的なリモート虚血のアプリケーションのデモンストレーションを行います。

<table><tbody><tr><td>Gold series DuraShock hand aneroid sphygmomanometer</td><td>Welch Allyn</td><td>DS56</td><td>Manual Sphygmomanometer</td></tr><tr><td>Neonate [size 2] 1 tube, 10 pack</td><td>Welch Allyn</td><td>5082-102-1</td><td>Limb blood pressure cuff</td></tr><tr><td>Luer lock adaptor</td><td>Welch Allyn</td><td>5082-178</td><td>Adaptor for neonatal cuff</td></tr><tr><td>Thermistor pod</td><td>AD Instruments</td><td>ML 309</td><td>skin tempertature unit</td></tr><tr><td>Skin temperture probe</td><td>AD Instruments</td><td>MLT 422/A</td><td></td></tr><tr><td>Powerlab, 4 channel acquistion hardware</td><td>AD Instruments</td><td>PL 35044</td><td></td></tr><tr><td>Homeothermic blanket system with flexible probe</td><td>Harvard Appartus</td><td>507222F</td><td></td></tr><tr><td>Towel</td><td></td><td></td><td>optional: awake remote ischemia</td></tr><tr><td>Isoflo - 100% Isoflurane (250 ml)</td><td>Abbot Animal Health</td><td>05260-05</td><td>optional: inhaltion anaesthetic remote ischemia</td></tr><tr><td>Ketamil - ketamine 100 mg/ml (50 ml)</td><td>Troy Laboratories Pty Ltd</td><td></td><td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td></tr><tr><td>Xylium - Xylazine 100 mg/ml (50 ml)</td><td>Troy Laboratories Pty Ltd</td><td></td><td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td></tr></tbody></table>

remote limb ischemic preconditioning:  a neuroprotective technique in rodents

致死量以下の虚血は、患部組織における内因性のメカニズムのアップレギュレーションを介して以降の、より重度の虚血に対して組織を保護します。亜致死虚血は、遠隔組織における防御機構をアップレギュレートすることが示されています。哺乳動物の後肢虚血の短い期間（5〜10分間）は、脳、肺、心臓および網膜の自己防御応答を誘導します。効果は、リモート虚血プレコンディショニング（RIP）として知られています。それは重要な臓器を保護するための治療に有望な方法であり、心臓や脳の損傷のための臨床試験の下に既にあります。ラットの特に後肢 - - 虚血性このマニュアルでは、手足を作るの制御された、低侵襲性の方法を示しています。ヒト新生児に使用するために開発された血圧カフは、手動血圧計に接続され、後肢の上部の周りに160 mmHgの圧力を適用するために使用されます。皮膚温度を検出するように設計されたプローブはischemiを確認するために使用され皮膚脚動脈の圧力誘起閉塞によって引き起こされる温度、及びカフの解除後の温度上昇の低下を記録することによって、。 RIPのこの方法は、明るい光誘起損傷および変性に対するラットの網膜に保護を与えます。

160 mmHgの上方に上昇した血圧カフは、 図1Bに明らかに見られるように、後肢への血流を停止します。組織酸素化の欠如は、虚血-再灌流プロトコル（ 図2）のために、動物の足の温度を低下させるが得られました。足の温度（33℃）は、コア温度よりも低くかつ確実にカフ圧の上昇（31°C）、カフが収縮したときに上昇（32℃）の間に減少しました。単一千ルクスの光損...

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Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

リモート虚血プレコンディショニング（RIP）が損傷ストレスに対するコンディショニング組織の方法です。我々は、5〜10分間血圧計用カフを膨張させることによって、下肢のリモート虚血の方法を確立しました。 RIPの神経保護機能は、げっ歯類における網膜変性のモデルで実証されています。

リモート四肢虚血プレコンディショニング：げっ歯類における神経保護技術

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

remote-limb-ischemic-preconditioning-neuroprotective-technique

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

11.0K ビュー.  University of Sydney. リモート虚血プレコンディショニング（RIP）が損傷ストレスに対するコンディショニング組織の方法です。我々は、5〜10分間血圧計用カフを膨張させることによって、下肢のリモート虚血の方法を確立しました。 RIPの神経保護機能は、げっ歯類における網膜変性のモデルで実証されています。 

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Strategies for Study of Neuroprotection from Cold-preconditioning

Neurological injury is a frequent cause of morbidity and mortality from general anesthesia and related surgical procedures that could be alleviated by development of effective, easy to administer and safe preconditioning treatments. We seek to define the neural immune signaling responsible for cold-preconditioning as means to identify novel targets for therapeutics development to protect brain before injury onset. Low-level pro-inflammatory mediator signaling changes over time are essential for cold-preconditioning neuroprotection. This signaling is consistent with the basic tenets of physiological conditioning hormesis, which require that irritative stimuli reach a threshold magnitude with sufficient time for adaptation to the stimuli for protection to become evident.
Accordingly, delineation of the immune signaling involved in cold-preconditioning neuroprotection requires that biological systems and experimental manipulations plus technical capacities are highly reproducible and sensitive. Our approach is to use hippocampal slice cultures as an in vitro model that closely reflects their in vivo counterparts with multi-synaptic neural networks influenced by mature and quiescent macroglia / microglia. This glial state is particularly important for microglia since they are the principal source of cytokines, which are operative in the femtomolar range. Also, slice cultures can be maintained in vitro for several weeks, which is sufficient time to evoke activating stimuli and assess adaptive responses. Finally, environmental conditions can be accurately controlled using slice cultures so that cytokine signaling of cold-preconditioning can be measured, mimicked, and modulated to dissect the critical node aspects. Cytokine signaling system analyses require the use of sensitive and reproducible multiplexed techniques. We use quantitative PCR for TNF-&alpha; to screen for microglial activation followed by quantitative real-time qPCR array screening to assess tissue-wide cytokine changes. The latter is a most sensitive and reproducible means to measure multiple cytokine system signaling changes simultaneously. Significant changes are confirmed with targeted qPCR and then protein detection. We probe for tissue-based cytokine protein changes using multiplexed microsphere flow cytometric assays using Luminex technology. Cell-specific cytokine production is determined with double-label immunohistochemistry. Taken together, this brain tissue preparation and style of use, coupled to the suggested investigative strategies, may be an optimal approach for identifying potential targets for the development of novel therapeutics that could mimic the advantages of cold-preconditioning.

We seek to define the neural immune signaling responsible for cold-preconditioning as means to identify novel targets for therapeutics development to protect brain before injury onset. We present strategies for such work that require biological systems, experimental manipulations plus technical capacities that are highly reproducible and sensitive.

コー​​ルド - プレコンディショニングによる神経保護の研究のための戦略

Neurological injury is a frequent cause of morbidity and mortality from general anesthesia and related surgical procedures that could be alleviated by ...

神経科学

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

局所脳虚血への早期虚血耐性を誘導するために適切な前処理刺激として二国間の総頚動脈閉塞

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

医学

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

後脚虚血症のマウスモデル

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

生物学

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Background 
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered advancements to decrease the occurrence this injury.&#160;The current model demonstrates reproducible lower&#160;extremity paralysis following thoracic aortic occlusion.
Methods 
Adult male C57BL6 mice were anesthetized with isoflurane. Through a cervicosternal incision the aorta was exposed. The descending thoracic aorta and left subclavian arteries were identified without entrance into pleural space. Skeletonization of these arteries was followed by immediate closure (Sham) or occlusion for 4 min (moderate ischemia) or 8 min (prolonged ischemia). The sternotomy and skin were closed and the mouse was transferred to warming bed for recovery.&#160; Following recovery, functional analysis was obtained at 12 hr intervals until 48 hr.
Results 
Mice that underwent sham surgery showed no observable hind&#160;limb deficit. Mice subjected to moderate ischemia for 4 min had minimal functional deficit at 12 hr followed by progression to complete paralysis at 48 hr. Mice subjected to prolonged ischemia had an immediate paralysis with no observable hind-limb movement at any point in the postoperative period. There was no observed intraoperative or post&#160;operative mortality.
Conclusion 
Reproducible lower extremity paralysis whether immediate or delayed can be achieved in a murine model. Additionally, by using a median sternotomy and careful dissection, high survival rates, and reproducibility can be achieved.

The lack of mechanistic understanding of spinal cord ischemia-reperfusion injury has hindered further adjuncts to prevent paraplegia following high risk aortic operations. Thus, the development of animal models is imperative. This manuscript demonstrates reproducible lower extremity paralysis following thoracic aortic occlusion in a murine model.

脊髄虚血再灌流のマウスモデルにおいて胸部大動脈閉塞によって再現可能対麻痺

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

Using the Electroretinogram to Assess Function in the Rodent Retina and the Protective Effects of Remote Limb Ischemic Preconditioning

The ERG is the sum of all retinal activity. The ERG is usually recorded from the cornea, which acts as an antenna that collects and sums signals from the retina. The ERG is a sensitive measure of changes in retinal function that are pan-retinal, but is less effective for detecting damage confined to a small area of retina. In the present work we describe how to record the &#8216;flash&#8217; ERG, which is the potential generated when the retina is exposed to a brief light flash. We describe methods of anaesthesia, mydriasis and corneal management during recording; how to keep the retina dark adapted; electrode materials and placement; the range and calibration of stimulus energy; recording parameters and the extraction of data. We also describe a method of inducing ischemia in one limb, and how to use the ERG to assess the effects of this remote-from-the-retina ischemia on retinal function after light damage. A two-flash protocol is described which allows isolation of the cone-driven component of the dark-adapted ERG, and thereby the separation of the rod and cone components. Because it can be recorded with techniques that are minimally invasive, the ERG has been widely used in studies of the physiology, pharmacology and toxicology of the retina. We describe one example of this usefulness, in which the ERG is used to assess the function of the light-damaged retina, with and without a neuroprotective intervention; preconditioning by remote ischemia.

The electroretinogram (ERG) is an electrical potential generated by the retina in response to light. This paper describes how to use the ERG to assess retinal function, in dark-adapted rats, and how it can be can be used to assess a neuroprotective intervention, in the present case remote ischemic preconditioning.

齧歯類網膜とリモート四肢虚血プレコンディショニングの保護効果に機能を評価するために電図を用いて、

The ERG is the sum of all retinal activity. The ERG is usually recorded from the cornea, which acts as an antenna that collects and sums signals from the ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week protocol for repetitive hypoxic preconditioning (RHP) induces long-term protection against central nervous system (CNS) injury in a mouse model of focal ischemic stroke. RHP consists of 9 stochastic exposures to hypoxia that vary in both duration (2 or 4 hr) and intensity (8% and 11% O2). RHP reduces infarct volumes, blood-brain barrier (BBB) disruption, and the post-stroke inflammatory response for weeks following the last exposure to hypoxia, suggesting a long-term induction of an endogenous CNS-protective phenotype. The methodology for the dual quantification of infarct volume and BBB disruption is effective in assessing neurovascular protection in mice with RHP or other putative neuroprotectants. Adult male Swiss Webster mice were preconditioned by RHP or duration-equivalent exposures to 21% O2 (i.e. room air). A 60 min transient middle cerebral artery occlusion (tMCAo) was induced 2 weeks following the last hypoxic exposure. Both the occlusion and reperfusion were confirmed by transcranial laser Doppler flowmetry. Twenty-two hr after reperfusion, Evans Blue (EB) was intravenously administered through a tail vein injection. 2 hr later, animals were sacrificed by isoflurane overdose and brain sections were stained with 2,3,5- triphenyltetrazolium chloride (TTC). Infarcts volumes were then quantified. Next, EB was extracted from the tissue over 48 hr to determine BBB disruption after tMCAo. In summary, RHP is a simple protocol that can be replicated, with minimal cost, to induce long-term endogenous neurovascular protection from stroke injury in mice, with the translational potential for other CNS-based and systemic pro-inflammatory disease states.

This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングと過渡中大脳動脈閉塞後に神経血管保護の定量

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for myocardial infarction and cardiac complications of thoracic surgery. The ability of certain drugs to precondition the myocardium against ischemia reperfusion injury has led to multiple clinical trials, with little success. The isolated heart model allows acute observation of the functional effects of ischemia reperfusion injury in real time, including the effects of various pharmacological interventions administered at any time-point before or within the ischemia-reperfusion injury window. Since brief periods of ischemia can precondition the heart against ischemic injury, in situ aortic cannulation is performed to allow for functional assessment of non-preconditioned myocardium. A saline filled balloon is placed into the left ventricle to allow for real-time measurement of pressure generation. Ischemic injury is simulated by the cessation of perfusion buffer flow, followed by reperfusion. The duration of both ischemia and reperfusion can be modulated to examine biochemical events at any given time-point. Although the Langendorff isolated heart model does not allow for the consideration of systemic events affecting ischemia and reperfusion, it is an excellent model for the examination of acute functional and biochemical events within the window of ischemia reperfusion injury as well as the effect of pharmacological intervention on cardiac pre- and postconditioning. The goal of this protocol is to demonstrate how to perform in situ aortic cannulation and heart excision followed by ischemia/reperfusion injury in the Langendorff model.

The isolated rat heart is an enduring model for ischemia reperfusion injury. Here, we describe the process of harvesting the beating heart from a rat via in situ aortic cannulation, Langendorff perfusion of the heart, simulated ischemia-reperfusion injury, and infarct staining to confirm the extent of ischemic insult.

ランゲンドルフ灌流ラット心臓における虚血再灌流傷害の誘導と評価

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably reproduce the human disease are necessary to develop new therapies for this disease. The mouse hindlimb ischemia model has been widely used for this purpose, but the standard practice of inducing acute limb ischemia by ligation of the femoral artery can result in substantial tissue necrosis, compromising investigators&#39; ability to study the vascular and skeletal muscle tissue responses to ischemia. An alternative approach to femoral artery ligation is the induction of gradual femoral artery occlusion through the use of ameroid constrictors. When placed around the femoral artery in the same or different locations as the sites of femoral artery ligation, these devices occlude the artery over 1 - 3 days, resulting in more gradual, subacute ischemia. This results in less substantial skeletal muscle tissue necrosis, which may more closely mimic the responses seen in human PAD. Because genetic background influences outcomes in both the acute and subacute ischemia models, consideration of the mouse strain being studied is important in choosing the best model. This paper describes the proper procedure and anatomical placement of ligatures or ameroid constrictors on the mouse femoral artery to induce subacute or acute hindlimb ischemia in the mouse.

Surgical induction of hindlimb ischemia in the mouse is useful to examine angiogenesis, however this is compromised in certain inbred mouse strains that display marked ischemia-induced tissue necrosis. Methods are described to induce subacute limb ischemia using ameroid constrictors to circumvent this problem through the induction of gradual arterial occlusion.

急性および亜急性ネズミ後肢虚血のための方法

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on postnatal day 1-3. A mouse litter, usually 4-10 pups born from one breeding pair, is gathered for one experiment, and spinal cords are collected individually from each mouse after euthanasia with isoflurane. The spinal column is dissected out and then the spinal cord is released from the column. The spinal cords are then minced to increase the surface area of delivery for an enzymatic protease that allows for the neurons and other cells to be released from the tissue. Trituration is then used to release the cells into solution. This solution is subsequently fractionated in a density gradient to separate the various cells in solution, allowing for neurons to be isolated. Approximately 1-2.5 x 106 neurons can be isolated from one litter group. The neurons are then seeded onto wells coated with adhesive factors that allow for proper growth and maturation. The neurons take approximately 7 days to reach maturity in the growth and culture medium and can be used thereafter for treatment and analysis.

This study presents a technique for the isolation of neurons from WT neonatal mice. It requires the careful dissection of the spinal cord from the neonatal mouse, followed by the separation of neurons from the spinal cord tissue through mechanical and enzymatic cleavage.

新生児マウスからの脊髄ニューロンの単離と培養

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for neuroprotection, postconditioning treatments have proven to be promising therapies against cerebral ischemia. However, complicated procedures and potential safety issues limit their clinical application. To overcome these disadvantages, we have developed acidic postconditioning (APC) as a therapy for experimental focal cerebral ischemia. APC refers to the mild acidosis treatment by inhaling CO2 during reperfusion following ischemia. Here we present two models to execute APC in vitro and in vivo, respectively. The oxygen-glucose deprivation (OGD) treatment of mice and the corticostriatal occlusion and middle cerebral artery occlusion (MCAO) of mice were employed to mimic cerebral ischemia. APC can be simply achieved by transferring brain slices to acidic buffer bubbled with 20% CO2, or by mice inhaling 20% CO2. APC showed significant protective effects against cerebral ischemia, as reflected by tissue viability and brain infarct volume.

Acidic postconditioning protects against cerebral ischemia. Here we present two models to execute APC. They are achieved respectively by transferring corticostriatal slices to acidic buffer after oxygen-glucose deprivation in vitro and by inhaling 20% CO2 after middle cerebral artery occlusion in vivo.

リモート四肢虚血プレコンディショニング：げっ歯類における神経保護技術

要約

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この動画の章

コールド - プレコンディショニングによる神経保護の研究のための戦略

局所脳虚血への早期虚血耐性を誘導するために適切な前処理刺激として二国間の総頚動脈閉塞

後脚虚血症のマウスモデル

脊髄虚血再灌流のマウスモデルにおいて胸部大動脈閉塞によって再現可能対麻痺

齧歯類網膜とリモート四肢虚血プレコンディショニングの保護効果に機能を評価するために電図を用いて、

マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングと過渡中大脳動脈閉塞後に神経血管保護の定量

ランゲンドルフ灌流ラット心臓における虚血再灌流傷害の誘導と評価

急性および亜急性ネズミ後肢虚血のための方法

新生児マウスからの脊髄ニューロンの単離と培養

脳虚血に対する酸性ポストコンディショニングの神経保護を研究するための実験モデル

リモート四肢虚血プレコンディショニング：げっ歯類における神経保護技術

要約

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コー​​ルド - プレコンディショニングによる神経保護の研究のための戦略

局所脳虚血への早期虚血耐性を誘導するために適切な前処理刺激として二国間の総頚動脈閉塞

後脚虚血症のマウスモデル

脊髄虚血再灌流のマウスモデルにおいて胸部大動脈閉塞によって再現可能対麻痺

齧歯類網膜とリモート四肢虚血プレコンディショニングの保護効果に機能を評価するために電図を用いて、

マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングと過渡中大脳動脈閉塞後に神経血管保護の定量

ランゲンドルフ灌流ラット心臓における虚血再灌流傷害の誘導と評価

急性および亜急性ネズミ後肢虚血のための方法

新生児マウスからの脊髄ニューロンの単離と培養

脳虚血に対する酸性ポストコンディショニングの神経保護を研究するための実験モデル

コールド - プレコンディショニングによる神経保護の研究のための戦略