The author is grateful for the assistance of Mrs. Sharon Spana (University of Sydney) in rodent monitoring, handling and experimentation. The authorwould like to thank Prof. Jonathan Stone and Dr. Dan Johnstone for the assistance in the preparation of this manuscript. PhD funding support has been provided by University of Sydney and Australian Center for Excellence in Vision.

倫理文は：プロトコルは、5657＃AECシドニー大学の動物ケアのガイドラインに従います。麻酔は、動物倫理委員会（シドニー大学、AEC＃5657）によって承認されました。 1.機器の準備<ol><li>リアルタイム皮膚温度トラッキングを使用してください。コンピュータ、およびデータ集録ハードウェアのスイッチをオンにします。 </li><li>オープン温度記録ソフトウェアと30〜35の間°Cと100ミリ秒毎にサンプリング周波数に温度設定を調整します。 </li><li>オプション：コア温度を確保するために挿入し、直腸温度計は37.5℃で安定しています。 </li></ol>手動血圧計の2キャリブレーション<ol><li> 250〜550グラムのラット用サイズ2カフをsphygmomanometer.Useする新生児腕カフを接続します。アダプタは、血圧計のカフチューブを接続する必要があるかもしれません。 </li><li>どちらかが大気開放弁を緩めるか、適応からカフチューブを切断することにより、カフを収縮または。は圧力いないことを確認し、チューブ内に残り、圧力計の針は楕円形/矩形の内側にゼロにかかっています。 </li><li>チューブ、圧力計とカフの間の圧力を確認してください。それは圧力計で100 mmHgのを読み取るまでインフレ電球の穏やかなポンプにカフを膨張させます。圧力が一定のままで確認してください。ゆっくりと空気放出値を開くことによって、カフを収縮させます。 </li></ol> 3.動物の準備注：光損傷を受けることがある動物は、リモート虚血前の晩暗い適応を必要とします。光損傷を受けた動物は、暗い飼育（：暗サイクル（5ルクス）12時間の明）が必要<ol><li>覚醒または麻酔げっ歯類のいずれかでリモート虚血を実行します。動物は健康な筋肉の緊張を持っていることを確認してください。十分な筋肉の存在があることを確認するために、上部の後肢をつまんで、これを確認してください。光損傷に対するRIPによって誘発される保護は、生後6ヶ月まで坐ったラットでテストされています。 </li><li> Rのための麻酔の準備IP <ol><li> 60ミリグラム/ kgのケタミンおよび5mg / kgのキシラジンの腹腔内注射でラットを注入します。足を拡張し、足の下の皮膚をつまんで麻酔の深さを確認してください。それが深く麻酔された場合、動物には反射を持っていません。麻酔下ながら角膜の乾燥を避けるために、人工涙液を適用します。 </li><li>熱パッドまたは37.5℃の一定の体温を維持するために、循環水加熱器チューブのいずれかに配置ラット。下肢「フットパッドを上に向けて腹臥位にラットを配置します。どちらの右または左肢は、リモート虚血を受け得ます。 </li></ol></li><li> RIPのための目を覚まし準備 注：動物実験AWAKE 2人が必要です。一人は動物を拘束し、二人目は、手動血圧計を運営しています。実験者は、拘束がハンドラの負傷のリスクを高めるような手順を実行するために自信を持っている必要があります。リモート虚血を受けたラットは、Tを調整されなければなりませんOマニュアル拘束。直感ガイドラインに応じて手動拘束は数週間にわたって5分の最大30秒から進行する必要があります。マニュアル拘束に順応しない臆病な動物が目を覚まし、実験から除外されるべきです。最後に、手動の拘束を正確にRIPの調査結果を解釈するために使用されなければならない動物へのストレス（および潜在的に研究に交絡を紹介）および偽コホート（炎症のないカフの配置）を引き起こす可能性があります。 <ol><li> 15cmのX 30〜50センチメートル片にタオルをカットし、後肢の上部に頭をカバーする、ラットの脊椎に垂直な短辺を配置します。 </li><li>ラットの胴体の下の短い辺をしっかりタックとタオルの残りの長辺でラットをラップし始めます。仰臥位で腕の下に包まれた動物を保護します。ラットを左腕の下に保持されている場合は、タオルから、ラットの右肢を解放します。 </li></ol></li></ol> 4.アプリケーションO皮膚温度プローブF <ol><li>虚血を受け、フットパッドの肌のプローブを配置することであるラットの足を拡張します。温度プローブと皮膚との接触を最大化するために、皮膚のプローブを配置します。しっかりとフットパッドにプローブを押して、紙テープでプローブを取り付けます。 </li><li>温度記録ソフトウェアで温度を追跡することによって、皮膚のプローブの配置を確認してください。皮膚温度は30-34℃の間であり、安定していることを確認してください。 1-2分間皮膚温度を追跡します。温度が不安定になったり、30℃以下であれば、皮膚のプローブを調整します。 </li></ol> 5.リモート虚血<ol><li>カフを収縮し、空気圧バルブが閉じていることを確認します。足を伸ばして、ゆるく上側後肢にカフを取り囲みます。位置に緩めたカフを維持するために、脚と下位桁を拡張するために人差し指と親指を使用してください。 </li><li> 160 mmHgのに麻酔動物のカフ圧を上げ、目を覚​​まし動物increで180 mmHgでのカフ圧ASE。 注：ラットの麻酔血圧が120〜140 mmHgでの範囲であり、ときに意識し160 mmHgのに上昇します。適切な圧力に達すると、タイマフット温度記録を開始します。 注：足の温度が一定の圧力の5分後に2°Cでドロップする必要があります。 </li><li>虚血を通して、動物の「ひざ」は、上記カフの位置を維持します。カフ圧は、数分後に落下し始める、またはラットの手足が動いている場合。 </li><li>繰り返しポンプの所望のカフ圧の繰り返しショートバーストを維持するために、短いバーストのインフレ電球ポンプ</li><li>リモート虚血は5分間と15のために連続的に送達することができます。虚血再灌流プロトコルが介在する5分間の再灌流との5分間の虚血の2期間を含みます。 </li><li>空気圧バルブを緩めて、カフ圧を収縮。虚血プロの過程で温度変化を確認してくださいトコール。カフをリリース。 </li><li>傷害実験を続行します。麻酔の影響下に動物を加熱パッド上に配置する必要があります。歩行まで、動物を監視し続けます。動物は歩行まで、筐体に戻すことはできません。 </li></ol> 6.ライト傷害 - 網膜変性モデル<ol><li>暗い一晩（12-15時間）、動物を適応させます。すぐにリモート虚血コンディショニングまたは偽リモート虚血（動物拘束）は、次の食料と水でパースペックスハウジングに動物を配置します。 </li><li> 24時間午前9時パースペックスハウジングの上方に位置する蛍光灯（千ルクス）のスイッチをオンにします。露光に続いて、7日間の環状照明を暗くするために動物を返します。 </li></ol> 7.ポストリモート虚血手順<ol><li>電図（ERG）とビジョンの評価： 注：ERGセットアップとフラッシュプロトコルはBrandliストーン26に従いました。 <ol><li>暗い一晩（12-15時間）、動物を適応させます。下（それぞれ、60ミリグラム/ kgおよび5mg / kg）ケタミンとキシラジンの腹腔内注射によって動物を麻酔赤色照明を暗く。散瞳（硫酸アトロピン1.0％）、角膜麻酔（proxymetacaine 0.5％）。 </li><li>眼は角膜にすぐに低下し、角膜の水和（カルボマーポリマー）を適用します。角膜の水和を維持するために20分間隔でアイゲルを適用します。 </li><li>安定したERG記録を支援するために、眼球の周りにゆるく結ぶ糸を描画します。直腸プローブを用いて温度を監視し、37から37.5℃の動物の体温を維持します。 </li><li>全体野積分球内部のヘッドの位置を調整します。 注：全体野は、LEDからの目に均一な聖霊降臨祭の点滅を提供し、完全にプログラム可能な光刺激です。 </li><li>軽く角膜や口に挿入された直径2mmの銀/塩化銀ペレット電極に触れるカスタムメイド4ミリメートルのプラチナの正極を用いて、網膜電位を記録します。ステンレス製針の両方の電極を参照臀部に皮下に挿入。 </li><li> 2 kHzの取得速度と0.3-1,000ヘルツ（-3 dB）とのバンドパス設定で記録信号、（ADインスツルメンツ）。安定したERG記録が録音を開始する前に、被験者に10分の暗順応に動物を確立した後。 </li><li>以前Brandliストーン26で説明したように、フラッシュのプロトコルに従ってください。 <ol><li>フラッシュの持続時間をプログラム（我々が点滅し、持続時間が1〜2ミリ秒を使用）、および-4.4ログスコットcd.sm -2〜2.0にその強度を設定します。網膜機能を測定するために明るいフラッシュ（2.0ログスコットcd.sm -2、1ミリ秒）を使用します。本研究では、制御、光傷害およびRIPの光損傷との比較です。 </li></ol></li></ol></li></ol> 8. TUNELアッセイ<ol><li>フェノバルビタールの過剰投与（100mg / kg）の腹腔内注射によって動物を安楽死させます。目を摘出し、4％パラホルムアルデヒド中で固定します。 </li><li> cyroprotecting前にPBS中で目を洗ってください一晩スクロース30％（w / v）の中で目。 OCT化合物に目を埋め込み、クリオスタットを用いて20μmの矢状切片に切断。 </li><li> Maslim らのプロトコルに従ってDAPI染色で網膜切片のTUNELアッセイを実行します。27 </li><li>網膜のTUNELのカウントのために蛍光顕微鏡を使用してください。 TUNEL細胞は、外顆粒層（ONL）から記録しました。光受容体核を含んで網膜の最外層。本研究では、TUNEL数は、各処置群について5目で、それぞれの目のために三連で行いました。 </li><li>制御、光損傷および光傷害+ RIPラット群の平均を比較統計に一方向ANOVAを使用してください。 </li></ol>

The author has nothing to disclose.

げっ歯類の後肢虚血が正常網膜の光受容体に神経保護を提供する手動血圧計カフで誘導しました。光損傷9,28からの光受容体の虚血性コンディショニング誘導される保護と一致して発見。 基本的に、リモート虚血は、組織への簡単な酸素欠乏を引き起こします。したがって、遠隔虚血プレコンディショニングは、虚血コンディショニングまたは代わりと呼ばれる?...

ほとんどの生存率は、おそらくすべて、代謝ストレスに直面した組織は、亜致死虚血1,2の周期で前コンディショニングによって改善することができます。実用的な面で虚血プレコンディショニング（IP）は、その後の虚血性発作のような組織の経験より深刻なストレッサー、前に、亜致死虚血に対する組織の暴露です。動物モデルでは、IPは、脳、網膜、心臓や肺3-6に印象的な保護を提供します。それに対応して、脳卒中患者における観察は、以前の一過性脳虚血発作、より良い臨床転帰7,8との間のリンクを示しました。 IPは、非虚血性傷害9から網膜の光受容体を保護します。 多様な組織および傷害におけるIPの有効性は、それが全ての組織に存在する細胞生存の生来の機構を活性化していることを示唆しています。心筋の虚血プレコンディショニングはアップレギュレーションを介して保護効果を有することが示唆されていますアデノシンの放出を介して、またはミトコンドリアATPカリウムチャネル10,11の開口部を介して多くの代謝経路を調節することが知られている低酸素誘導因子（HIF）、の。アデノシン放出およびATPカリウムチャネルは、脳虚血に関与しているですが、これまでの虚血性コンディショニングの神経保護機構の調査は、抗興奮毒性への変更、抗アポトーシスおよび抗炎症経路12,13に焦点が当てられてきました。全体的に、神経細胞を保護するための虚血性コンディショニングの分子過程の理解は限られています。 リモート虚血プレコンディショニングの試みは、重要度の低い組織における虚血を生成することにより、離れた非常に重要な器官（心臓、脳、肺）を調整します。後肢を用いて遠隔虚血プレコンディショニング（RIP）は、脳卒中14-17のげっ歯類モデルにおいて神経保護的であることが実証されています。我々が記載された方法は、簡単かつ信頼性のある非侵襲PROTを提供しますRIPを誘導するためのocol。 RIPプロトコルの大部分は、上部の後肢に位置大腿動脈の識別を容易にし、手術用クランプや止血帯のアプリケーションのためにアクセスすることができたためと思われる、後肢を伴います。脳と皮膚保護の研究のための侵襲性四肢虚血性の研究では、虚血は鼠径靭帯から大腿動脈を分離し、大腿動脈2,15,18をクランプすることにより誘導されます。 四肢cuffingまたは大腿動脈クランプのいずれかに起因する虚血は、パルスの損失、酸素の減少と皮膚温度の低下などの四肢での変化により確認されています。リモート虚血は、レーザードップラーまたは超音波ドップラー17-19を用いて、パルスの消失によって確認することができます。皮膚温度は関係が20,21非線形であるが、ドップラーの代替として使用することができます。正確な温度記録は、研究所や缶では一般的です簡単にリモート虚血性の研究に組み込むこと。 手術をクランプ大腿する代わりに、止血帯を使用して、虚血の誘導です。止血帯アプリケーションは、血管クランプを用いて達成されるものに匹敵する虚血を作り出します。 Kutchner ら 。非侵襲的な止血にクランプ侵襲大腿動脈を比較し、両方の方法が四肢への血流を停止し、皮膚フラップ虚血18の形成外科モデルにおける皮膚損傷を減少が見出さ。脚または腕のいずれかをCuffingと収縮期血圧上にカフ圧を上昇させることは、ブタおよびヒト17,19,22における虚血性損傷に対する保護であることが見出されています。 別の止血帯は、虚血性血圧カフ又は弾性バンド17,22,23の使用を含む、リモート誘導に近づきます。しかし、虚血を誘導する弾性バンドを使用することは、潜在的に圧力の無秩序な量を生じさせる、危険な方法であります500 mmHgの上の圧力上昇と手足は、ヒト24に記録されています。また、ゴムバンドを使用して、四肢虚血は、エバンスブルー色素、筋線維の透過性25 の in vivoマーカーによって評価されるように、バンド23の除去後のラットの筋肉の損傷につながります。対照的に、止血帯に制御された圧力の送達は、血圧計17,19,22,26に接続された血圧カフを用いて達成することができます。 本研究では、光受容体変性の光損傷モデルは、リモート虚血プレコンディショニングの神経保護効果を実証しました。リモート虚血は、光損傷の直前に誘導し、網膜の機能試験によって確認されるように、その後の光受容体の変性を防止することができました。付属のビデオでは、非侵襲的なリモート虚血のアプリケーションのデモンストレーションを行います。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gold series DuraShock Hand Aneroid Sphygmomanometer</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>DS56</td>
			<td>Manual Sphygmomanometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonate [size 2] 1 Tube, 10 Pack</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-102-1&#160;</td>
			<td>Limb blood pressure cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer lock adaptor</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-178</td>
			<td>Adaptor for neonatal cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermistor pod</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>ML 309</td>
			<td>skin tempertature unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin temperture probe</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT 422/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab, 4 channel acquistion hardware</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>PL 35044</td>
			<td>Skin temperature recorder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic blanket system with flexible probe</td>
			<td>Harvard Appartus</td>
			<td>507222F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Towel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>optional: awake remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflo - 100% Isoflurane -250 ml</td>
			<td>Abbot Animal Health</td>
			<td>05260-05</td>
			<td>optional: inhaltion anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamil - ketamine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylium - Xylazine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote limb ischemic preconditioning:  a neuroprotective technique in rodents

致死量以下の虚血は、患部組織における内因性のメカニズムのアップレギュレーションを介して以降の、より重度の虚血に対して組織を保護します。亜致死虚血は、遠隔組織における防御機構をアップレギュレートすることが示されています。哺乳動物の後肢虚血の短い期間（5〜10分間）は、脳、肺、心臓および網膜の自己防御応答を誘導します。効果は、リモート虚血プレコンディショニング（RIP）として知られています。それは重要な臓器を保護するための治療に有望な方法であり、心臓や脳の損傷のための臨床試験の下に既にあります。ラットの特に後肢 - - 虚血性このマニュアルでは、手足を作るの制御された、低侵襲性の方法を示しています。ヒト新生児に使用するために開発された血圧カフは、手動血圧計に接続され、後肢の上部の周りに160 mmHgの圧力を適用するために使用されます。皮膚温度を検出するように設計されたプローブはischemiを確認するために使用され皮膚脚動脈の圧力誘起閉塞によって引き起こされる温度、及びカフの解除後の温度上昇の低下を記録することによって、。 RIPのこの方法は、明るい光誘起損傷および変性に対するラットの網膜に保護を与えます。

160 mmHgの上方に上昇した血圧カフは、 図1Bに明らかに見られるように、後肢への血流を停止します。組織酸素化の欠如は、虚血-再灌流プロトコル（ 図2）のために、動物の足の温度を低下させるが得られました。足の温度（33℃）は、コア温度よりも低くかつ確実にカフ圧の上昇（31°C）、カフが収縮したときに上昇（32℃）の間に減少しました。単一千ルクスの光損...

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Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

リモート虚血プレコンディショニング（RIP）が損傷ストレスに対するコンディショニング組織の方法です。我々は、5〜10分間血圧計用カフを膨張させることによって、下肢のリモート虚血の方法を確立しました。 RIPの神経保護機能は、げっ歯類における網膜変性のモデルで実証されています。

リモート四肢虚血プレコンディショニング：げっ歯類における神経保護技術

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

11.0K ビュー.  University of Sydney. リモート虚血プレコンディショニング（RIP）が損傷ストレスに対するコンディショニング組織の方法です。我々は、5〜10分間血圧計用カフを膨張させることによって、下肢のリモート虚血の方法を確立しました。 RIPの神経保護機能は、げっ歯類における網膜変性のモデルで実証されています。 

ビデオ: Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

前臨床モデルにおける虚血性心不全のための遺伝子導入

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

医学

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work well in non-ischemic wounds may not work in human diabetic wounds because vasculopathy is one major factor that hinders healing of these wounds. We published an article in 2007 describing a rabbit ear ischemic wound model created by a minimally invasive surgical technique. Since then, we have further simplified the procedure for easier operation. On one ear, three small skin incisions were made on the vascular pedicles, 1-2 cm from the ear base. The central artery was ligated and cut along with the nerve. The whole cranial bundle was cut and ligated, leaving only the caudal branch intact. A circumferential subcutaneous tunnel was made through the incisions, to cut subcutaneous tissues, muscles, nerves, and small vessels. The other ear was used as a non-ischemic control. Four wounds were made on the ventral side of each ear. This technique produces 4 ischemic wounds and 4 non-ischemic wounds in one animal for paired comparisons. After surgery, the ischemic ear was cool and cyanotic, and showed reduced movement and a lack of pulse in the ear artery. Skin temperature of the ischemic ear was 1-10 &deg;C lower than that on the normal ear and this difference was maintained for more than one month. Ear tissue high-energy phosphate contents were lower in the ischemic ear than the control ear. Wound healing times were longer in the ischemic ear than in the non-ischemic ear when the same treatment was used. The technique has now been used on more than 80 rabbits in which 23 were diabetic (diabetes time ranging from 2 weeks to 2 years). No single rabbit has developed any surgical complications such as bleeding, infection, or rupture in the skin incisions. The model has many advantages, such as little skin disruption, longer ischemic time, and higher success rate, when compared to many other models. It can be safely used in animals with reduced resistance, and can also be modified to meet different testing requirements.

We have developed a minimally invasive technique to create a rabbit ischemic ear wound model by dividing the central artery and nerve and the cranial neurovascular bundle. A subcutaneous tunnel then cuts all subcutaneous tissues. This procedure causes minimal skin disruption and can be safely used in diabetic animals.

虚血性創傷モデルを作製するための簡略化手法

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

The lower urinary tract (LUT) functions as a dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a convenient time. While storing urine, however, the bladder is exposed for prolonged periods to waste products. By acting as a tight barrier, the epithelial lining of the LUT, the urothelium, avoids re-absorption of harmful substances. Moreover, noxious chemicals stimulate the bladder's nociceptive innervation and initiate voiding contractions that expel the bladder's contents. Interestingly, the bladder's sensitivity to noxious chemicals has been used successfully in clinical practice, by intravesically infusing the TRPV1 agonist capsaicin to treat neurogenic bladder overactivity1. This underscores the advantage of viewing the bladder as a chemosensory organ and prompts for further clinical research. However, ethical issues severely limit the possibilities to perform, in human subjects, the invasive measurements that are necessary to unravel the molecular bases of LUT clinical pharmacology. A way to overcome this limitation is the use of several animal models2. Here we describe the implementation of cystometry in mice and rats, a technique that allows measuring the intravesical pressure in conditions of controlled bladder perfusion.
	After laparotomy, a catheter is implanted in the bladder dome and tunneled subcutaneously to the interscapular region. Then the bladder can be filled at a controlled rate, while the urethra is left free for micturition. During the repetitive cycles of filling and voiding, intravesical pressure can be measured via the implanted catheter. As such, the pressure changes can be quantified and analyzed. Moreover, simultaneous measurement of the voided volume allows distinguishing voiding contractions from non-voiding contractions3.
	Importantly, due to the differences in micturition control between rodents and humans, cystometric measurements in these animals have only limited translational value4. Nevertheless, they are quite instrumental in the study of bladder pathophysiology and pharmacology in experimental pre-clinical settings. Recent research using this technique has revealed the key role of novel molecular players in the mechano- and chemo-sensory properties of the bladder.

Cystometry is an efficient technique to measure bladder function of small animals in vivo. The bladder is continuously infused at rates controlled through an intravesical catheter, whereas the urethra is left free for micturition. This allows for repetitive filling and emptying of the bladder, while intravesical pressure and voided volume are recorded.

小型げっ歯類における膀胱内圧測定の使用：膀胱Chemosensationの研究

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

局所脳虚血への早期虚血耐性を誘導するために適切な前処理刺激として二国間の総頚動脈閉塞

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

The adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that responds to a need for enhanced lung perfusion and shows robust neovascularization. Pulmonary vascular ischemia induced by pulmonary artery obstruction has been shown to result in rapid systemic arterial angiogenesis in man as well as in several animal models. Although the histologic assessment of the time course of bronchial artery proliferation in rats was carefully described by Weibel 1, mechanisms responsible for this organized growth of new vessels are not clear. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia in the rat that leads to bronchial neovascularization. Quantification of the extent of angiogenesis presents an additional challenge due to the presence of the two vascular beds within the lung. Methods to determine functional angiogenesis based on labeled microsphere injections are provided.

The lung is perfused by both the systemic bronchial artery and pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that shows robust neovascularization. Cessation of pulmonary blood flow promotes brisk bronchial angiogenesis. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia that promotes bronchial neovascularization.

虚血ラットの肺の血管新生

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

懸濁液中の網膜色素上皮細胞を送達するげっ歯類における網膜下注射の実行

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

新生児低酸素性虚血性脳症の子豚モデル

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

マウスで同所後肢移植

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. It has become important to measure a person's activities in daily life, and not just measure their capacity for activity in the structured environment of a clinic or laboratory. A wearable sensor that is now enabling measurement of daily movement is the accelerometer. Accelerometers are commercially-available devices resembling large wrist watches that can be worn throughout the day. Data from accelerometers can quantify how the limbs are engaged to perform activities in peoples' homes and communities. This report describes a methodology to collect accelerometry data and turn it into clinically-relevant information. First, data are collected by having the participant wear two accelerometers (one on each wrist) for 24 h or longer. The accelerometry data are then downloaded and processed to produce four different variables that describe key aspects of upper limb activity in daily life: hours of use, use ratio, magnitude ratio, and the bilateral magnitude. Density plots can be constructed that visually represent the data from the 24 h wearing period. The variables and their resultant density plots are highly consistent in neurologically-intact, community-dwelling adults. This striking consistency makes them a useful tool for determining if upper limb daily performance is different from normal. This methodology is appropriate for research studies investigating upper limb dysfunction and interventions designed to improve upper limb performance in daily life in people with stroke and other patient populations. Because of its relative simplicity, it may not be long before it is also incorporated in clinical neurorehabilitation practice.

This protocol describes a method to quantify upper limb performance in daily life using wrist-worn accelerometers.

加速度計を使用して日常生活に上肢のパフォーマンスを定量化する方法

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular disease is the development of ischemia. In severe cases, patients can develop critical limb ischemia in which they experience constant pain and an increased risk of limb amputation. Current therapies for peripheral ischemia include bypass surgery or percutaneous interventions such as angioplasty with stenting or atherectomy to restore blood flow. However, these treatments often fail to the continued progression of vascular disease or restenosis or are contraindicated due to the overall poor health of the patient. A promising potential approach to treat peripheral ischemia involves the induction of therapeutic neovascularization to allow the patient to develop collateral vasculature. This newly formed network alleviates peripheral ischemia by restoring perfusion to the affected area. The most frequently employed preclinical model for peripheral ischemia utilizes the creation of hind limb ischemia in healthy rabbits through femoral artery ligation. In the past, however, there has been a strong disconnect between the success of preclinical studies and the failure of clinical trials regarding treatments for peripheral ischemia. Healthy animals typically have robust vascular regeneration in response to surgically induced ischemia, in contrast to the reduced vascularity and regeneration in patients with chronic peripheral ischemia. Here, we describe an optimized animal model for peripheral ischemia in rabbits that includes hyperlipidemia and diabetes. This model has reduced collateral formation and blood pressure recovery in comparison to a model with a higher cholesterol diet. Thus, the model may provide better correlation with human patients with compromised angiogenesis from the common co-morbidities that accompany peripheral vascular disease.

We describe a surgical procedure used to induce peripheral ischemia in rabbits with hyperlipidemia and diabetes. This surgery acts as a preclinical model for conditions experienced in peripheral artery disease in patients. Angiography is also described as a means to measure the extent of introduced ischemia and recovery of perfusion.

糖尿病性ウサギにおける後肢虚血の前臨床モデル

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...