The authors have no acknowledgements.

注：すべての動物の手順はシンシナティ大学の施設内動物管理使用委員会（IACUC）の承認を得て、および国立衛生研究所から実験動物の管理と使用に関する指針に従って行った（NIH公開番号。85から23、）1996年改訂。 1.マウスを安楽死させると滅菌<ol><li>イソフルランのsupratheraputic投与量を含むドロップボックスにマウスを置き、効果に吸い込むことができます。マウスを安楽死された後、箱から取り出します。 </li><li> Cervically安楽死の第二の手段として脱臼。 </li><li> 70％エタノールで動物を洗浄することにより、マウスの外面を滅菌する。 </li></ol> 2.識別3つの異なる脂肪デポの単離<ol><li>褐色脂肪組織（BAT）単離： <ol><li>表皮と真皮のレーを切断を支援するために、アルコールクレンジングから毛皮が濡れていることを確認してくださいRS。 </li><li>テーブルに対するその背中に仰臥位でマウスを置きます。 </li><li>ちょうど鉗子、リフト付きダイアフラム下の皮膚をつかみ、ハサミで切開。 </li><li>腹膜を露出させ、マウスの周囲に横方向に切断。 </li><li>マウスの上半分をdeglovingことで蝶形のBATデポを明らかにする。片手で下の付属と腹部を押さえ、頭の方に肌を引き上げる。 </li><li>それはテーブルの上に発生しやすい位置するように、マウスの向き。髪で露光デポを汚染しないように注意してください。 </li><li>手術器具を清掃し、手袋の新鮮なペアに変更します。 </li><li>肩甲骨とそれに対応するデポの位置を確認します。慎重に蝶の上の任意の表面的な白色脂肪を削除してから間褐色脂肪の蝶を解剖。密接に褐色脂肪に関連した筋肉を避けるように注意してください。 注：解剖顕微鏡の使用は、Wの除去のために推奨されますハイト脂肪、ならびに肩甲骨から褐色脂肪の分離。 </li><li>脂肪デポを削除し、2ミリリットルのマイクロ遠心チューブに移す。 </li><li> RNA又はタンパク質が抽出される場合、-80℃の液体窒素とストアに浸漬することにより、組織を凍結する。劣化を防ぐために、一度にサンプルをフリーズします。培養の場合は、DMEF-12で組織をカバーし、すべてのサンプルが培養（補足情報）のために収集されてまで、氷上に設定してください。 </li></ol></li><li>皮下脂肪組織（SQ）の単離、白色脂肪組織デポ（WAT）： <ol><li>脂肪デポ間のクロス汚染しないよう手袋の新鮮なペアに置く。 </li><li>マウスの下半分をデglovingにより鼠径部、三角SQデポを明らかにした。片手で上部の付属と胸部を持ち、もう一方の手で足の方に肌をプルダウンする。 </li><li>髪で露光デポを汚染しないように注意しながら仰臥位でマウスを向けます。 </li><li>クリーンsurgicaLの楽器や手袋のフレッシュに変更します。 </li><li>慎重にSQ脂肪の三角形を解剖。すべての血管を切断することによって、脂肪、乳腺や隣国、筋肉試料を汚染し、血液試料を汚染しないように注意してください。 注：境界線が明確に定義されていない場合は、解剖顕微鏡の使用が推奨されます。 </li><li>脂肪デポを削除し、2ミリリットルのマイクロチューブに移す。 </li><li> RNA又はタンパク質が抽出される場合、-80℃の液体窒素とストアに浸漬することにより、組織を凍結する。劣化を防ぐために、一度にサンプルをフリーズします。 </li><li>染色のために、修正するか、OCTに埋め込む。培養の場合は、DMEF-12で組織をカバーし、すべてのサンプルが培養（補足情報）のために収集されてまで、氷上に設定してください。 </li></ol></li><li>生殖腺脂肪内臓脂肪組織（VAT）と白色脂肪組織（WAT）デポの単離： <ol><li>脂肪デポ間のクロス汚染しないよう手袋の新鮮なペアに置く。 </li><li>脊損ssors、直接横隔膜の下に、横方向に腹膜をカット。腹部の臓器を露出させるために直腸半ば冠状にダイアフラムから腹膜をカット。 </li><li>精巣や卵巣の位置を確認し、精巣上体、男性における脂肪または雌の生殖腺脂肪として知られている添付の白色脂肪組織を、特定する。 </li><li>手術器具を清掃し、手袋の新鮮なペアに変更する</li><li>慎重に精巣、精巣上体、およびヴァーサ輸精管から精巣上体の脂肪デポの両方を分析。女性の場合は、慎重に卵巣から両方の生殖腺脂肪パッドを解剖。 </li><li>脂肪デポを削除し、2ミリリットルマイクロチューブに転送。 </li><li> RNA又はタンパク質が抽出される場合、-80℃の液体窒素とストアに浸漬することにより、組織を凍結する。劣化を防ぐために、一度にサンプルをフリーズします。 </li><li>染色のために、修正するか、OCTに埋め込む。培養の場合は、DMEF-12で組織をカバーし、すべてのサンプルが培養（補足情報）のために収集されてまで、氷上に設定してください。 </LI&gt; </ol></li></ol>血管周囲脂肪組織の3分離（PVAt系） <ol><li>ハートの単離： <ol><li>外側へ延長上下の付属と仰臥位でマウスをレイアウト。 </li><li>サージカルテープを使用してセキュアな付属。 </li><li>上記のようにマウスを配置した後、ピンセットで剣状突起上に持ち上げて緊張を作成します。胸腔の下部を露出させ、振動板を水平に切断した。 </li><li>剣状突起上に持ち上げて、テンションを維持しながら、ちょうど胸骨の側に、頭に向かって上方に胸郭を切断。 </li><li>鎖骨のすぐ下胸郭をピックアップし、両方向に腋窩に向かって鎖骨の劣る長さに沿って切り出した。胸腔とその内容（心臓、肺、 など ） が 、今はっきりと見えるはずです。 </li><li>無菌GAを使用して余分な血液や体液の胸腔を清掃してください流体を吸収するuze。収集臓器や血管が（補足情報）おびただしいしてください場合。 </li><li>領域は、流体のクリアされると、心のよりよい露出を可能にし、肺を除去して気管支および添付血管をカット。 </li></ol></li><li>ローカライズと切除大動脈の血管周囲脂肪組織（PVAt系）： <ol><li>肝臓、胃、脾臓、膵臓、腸、およびコロン：より良い大動脈の劣る部分を識別するように、以下の臓器を削除します。 </li><li>まず胃と食道の同定で始まる。身体から胃を解放するために胃食道接合部で食道をカット。 </li><li>次に、腸と周囲の腸間膜を識別します。それは大動脈の腎部分に非常に密接に位置するように腸間膜を通じて表面的にカットし、その後「腸を実行します。」 </li><li>できるだけ直腸の近くに無料のコロンをカット。このように、マウスから胃、小腸および結腸を解放。 </li><li>リ取付腸間膜と血管を切断することにより胃、小腸、大腸、膵臓、脾臓を移動します。膵臓、脾臓、胃、小腸および結腸に無料で来る必要があります。 </li><li>肝静脈を切断し、腸間膜を取り付けることによって、肝臓を削除し、すべてのローブを削除します。 </li><li>内臓層と脂肪サラウンド腎臓を切り取る。大動脈の異なるセグメントのための地理的なマーカーとして機能するように、in vivoで大動脈に添付腎臓のままにしておきます。 </li><li>無菌1X PBSでエリアをすすぎ、滅菌ガーゼで吸収して、すべての流体を除去。 </li><li>マイクロはさみとマイクロ鉗子を使用して、背骨にその背側アタッチメントと食道への腹側添付ファイルから大動脈を分離する。 </li><li>腸骨領域での分岐に心臓内の原点から下行大動脈の長さを以下の大動脈を取り外して大動脈を分離します。 </li><li>鎖骨下血管を同定し、単離。これらの血管を分離大動脈基部に首からより良い心臓大動脈ジャンクショ​​ンと根を露出させる。 </li><li>心臓の動きを可能にする、腕頭動脈、左総頚動脈、および左鎖骨下動脈を切断し、胸腺を除去する。 </li><li>解剖顕微鏡の助けを借りて、大動脈の周囲の血管周囲脂肪組織（PVAt系）層を表示します。 </li><li>マイクロピンセットで大動脈からPVAt系の道を引っ張る優しく、PVAt系を挟んだり、圧迫しないように細心の注意を取る。静かにダイアフラムが置かれている場所だけに優れた胸部から始まるマイクロハサミで大動脈にPVAt系の添付ファイルをカット。 注：解剖顕微鏡をお勧めします。 </li><li>大動脈血管の腸骨分岐の直前に優れ位置して大動脈大動脈地域、で仕上げ、このプロセスを大動脈の全長を繰り返します。 </li><li>大動脈弓PVAt系が望まれる場合、より低いCからのPVAt系を除去するために、同じ方法を使用アーチのurvature。 </li><li> 2ミリリットルのマイクロ遠心チューブ（S）にPVAt系サンプルを置きます。 </li><li> RNA又はタンパク質が抽出される場合、-80℃の液体窒素とストアに浸漬することにより、組織を凍結する。劣化を防ぐために、一度にサンプルをフリーズします。培養の場合は、DMEF-12で組織をカバーし、すべてのサンプルが培養（補足情報）のために収集されてまで、氷上に設定してください。 注：追加の脂肪デポ興味を持っている場合包括的な脂肪デポ分析する際に考慮すべきは、次のとおりです。後腹膜、腸間膜、大網、心膜と膝窩動脈を。 </li></ol></li></ol>

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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults,+1999-2010.">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li><li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+medical+care+costs+of+obesity:+an+instrumental+variables+approach.">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li><li>Marder, W., Chang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Childhood+Obesity:+Costs,+Treatment+Patterns,+Disparities+in+Care,+and+Prevalent+Medical+Conditions.">Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions.</a> Thomson Medstat Research Brief. , (2006).</li><li>Cortez, M., Carmo, L. 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Biol. 456, 23-38 (2008).</li><li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity.">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests or other conflicts of interest.

肥満は罹患率の大ホストと脂肪が完全に理解されていないが果たす役割の完全な理解につながることができます。脂肪の分野において、したがって継続的な研究が必要である。動物モデルは、特にマウスモデルは、病気や潜在的な製薬治療のテストの進行に初期の研究に最適です。これらのモデルを使用して、脂肪デポの正確な分離および切除は、脂肪の影響を受ける疾患の病理の研究にお?...

脂肪は、20世紀の最後の数十年の間、肥満の劇的な増加に起因するメディアのスポットライトで注目すべきな外観を作った。肥満は現在、成人の三分の一以上と米国の小児および青年の17％（米国）1に影響を与えます。すべての民族グループにまたがる、肥満のまん延を取り巻く統計調査は、メキシコ系アメリカ人（40.4％）、すべてのヒスパニック（39.1％）、及び非と比較して非ヒスパニック系黒人は肥満（49.5％）の最高年齢調整率を持っていることが示されているヒスパニック系白人（34.3％）2。肥満の経済効果も医療制度への高まる懸念である。 2012年では、2005年の米国における肥満のためのケアの年間医療費は1902億ドル、全体の医療費の予算の約21％と推定された。悲しいことに、小児肥満は単独で、直接医療費140億ドルの原因であると推定された。統計的に、それは、平均医療費が決定された肥満を持つ個人は、この罹患率3-5ないものより年間2741ドル高かった。 2型糖尿病、脂質異常症、心血管疾患、癌、筋骨格障害および慢性炎症：肥満のような、様々な条件のための主要な危険因子である。肥満は深くメタボリックシンドロームと他の慢性疾患6-8の病因に関連付けられています。肥満や他の併存疾患との間のこのような抜本的なと負の接続では、科学的研究は、より良い現在の流行と脂肪で演奏多様で重要な役割を理解するために注意を集中している。 歴史的に、脂肪組織は取るに足らないと考えられていたとシンプルな充填組織としてのみ観察した。代謝、ホルモン調節、炎症、保護絶縁9：現在、脂肪は、身体の機能の多くの重要な役割を果たしていることが示されている。脂肪組織は、主に構成されている脂肪細胞だけでなく、周皮細胞、内皮細胞、単球、マクロファージおよび多能性幹細胞8が含まれています。脂肪組織は、個別のデポで体全体に分布している。主なデポは皮下、筋肉内、皮下発見し、直感的に10することができます。脂肪デポは、肥満症および関連障害8にデポ特定の感受性を示したデポ特定の代謝プロファイルを有することが示されている。 伝統的に、脂肪組織は、2つの主要なタイプに分類された：白色脂肪組織（WAT）および褐色脂肪組織（BAT）。最近の文献が示すものの、第3グループのプレゼンスは、ブライトまたはベージュ脂肪11洗礼 。脂肪組織は、異なる色、形態、代謝機能、生化学的特徴および表現10の遺伝的パターンを有することが示されている。 WATでの脂肪細胞は、単一の大きな脂肪滴とミトコンドリアの可変量を持っている。 WAT支配的身体の皮下および内臓の地域に含まれています。主に、エネルギー貯蔵および器官保護の部位としてWAT機能する。 BATでの脂肪細胞は多房形態と豊富なミトコンドリアを持っている。 BATは、胸部の首および大血管、ならびに肩甲骨12に主に位置している。熱発生7を制御するエネルギー消費する行動のBATは主に機能している。ブライトまたはベージュ脂肪は、BATと類似の形態および表現を共有することが示されているが、白色脂肪細胞11から発信されることが見出されている。 この原稿で説明した外科的方法は、以下のような要因に、異なる効果を分析する能力と研究者を提供します。環境、医薬品、遺伝学は、脂肪に持っている。だけでなく、有益なまたは有害な役割の脂肪は、病気と全体的な健康状態で再生されます。また、への脂肪組織の異なる種類を同定および単離するための方法を提供より良いデポ間の生化学的関係との違いの理解を可能にします。これは、場所、機能、および身体内の脂肪のタイプ間の関係を決定するのを助けることができる。この記載の方法は、総視覚化、遺伝子発現解析、タンパク質発現解析、組織学的検査、およびin vitro試験のための主要な細胞株を単離するための手段を提供することによって、これを達成する。現在、別の脂肪デポ、並びにそれらの解剖学的位置の代謝挙動への洞察を提供する多くの記事があります。しかし具体的には、ローカライズ特定し、これらのデポを分離する方法についての詳細な方法を提供しない。この外科的方法は、1つまたは2つのデポ13~14の単離物のために設計され、他の方法と比較して切開および汚染の最小量を有する複数のデポの単離を可能にする正確な技術を提供する。 このプロトコルの目的は、提供することである複数の解剖学的位置から貯蔵脂肪の異なるタイプの同定および単離のための正確な方法。

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Fisher</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>DMEF-12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D-6421</td><td>Warm in waterbath before putting on tissue.</td></tr><tr><td>2 ml Microcentrifuge tubes</td><td>Midsci</td><td>MCT-200-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr></tbody></table>

localization, identification, and excision of murine adipose depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.

識別、および鼠径部皮下脂肪、肩甲骨間褐色脂肪、内臓副睾丸脂肪（ 図1）と同様に、大動脈弓の血管周囲脂肪、胸部大動脈脂肪、副腎大動脈脂肪と大動脈大動脈脂肪のローカライズ（ 図2）を使用して成功裏に達成された記載され手術方法。 BAT及びWAT試料間の組織学的検査および分化を陽性に染色（ 図3）をヘマトキシリンおよびエオシン（H＆E）を用?...

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Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

原因肥満や他の併存疾患の間で抜本的なと負の接続に、ロールの脂肪の研究は、病気で再生し、全体的な健康が保証されています。私たちは、 その場で、そしてインビトロ方法で使用して脂肪の研究を可能に脂肪デポの単離および切除するためのプロトコルを提示する。

マウス脂肪デポのローカライズ、識別、および切除

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

localization-identification-and-excision-of-murine-adipose-depots

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

40.9K ビュー.  University of Cincinnati College of Medicine. 原因肥満や他の併存疾患の間で抜本的なと負の接続に、ロールの脂肪の研究は、病気で再生し、全体的な健康が保証されています。私たちは、 その場で、そしてインビトロ方法で使用して脂肪の研究を可能に脂肪デポの単離および切除するためのプロトコルを提示する。 

ビデオ: Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells (ASCs)

The isolation of adipose-derived stem cells (ASCs) is an important method in the field of adipose tissue biology, adipogenesis, and extracellular matrix (ECM) remodeling. In vivo, ECM-rich environment consisting of fibrillar collagens provides a structural support to adipose tissues during the progression and regression of obesity. Physiological ECM remodeling mediated by matrix metalloproteinases (MMPs) plays a major role in regulating adipose tissue size and function1,2. The loss of physiological collagenolytic ECM remodeling may lead to excessive collagen accumulation (tissue fibrosis), macrophage infiltration, and ultimately, a loss of metabolic homeostasis including insulin resistance3,4. When a phenotypic change of the adipose tissue is observed in gene-targeted mouse models, isolating primary ASCs from fat depots for in vitro studies is an effective approach to define the role of the specific gene in regulating the function of ASCs. In the following, we define an immunomagnetic separation of Sca1high ASCs.

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells ASCs

We present the techniques required to isolate the stromal vascular fraction (SVF) from mouse inguinal (subcutaneous) and perigonadal (visceral) adipose tissue depots to assess their gene expression and collagenolytic activity. This method includes the enrichment of Sca1high adipose-derived stem cells (ASCs) using immunomagnetic cell separation.

脂肪デポ固有のSca1の免疫磁気分離<sup&gt;高</sup&gt;脂肪由来幹細胞（ASCに）

The isolation of adipose-derived stem cells (ASCs) is an important method in the field of adipose tissue biology, adipogenesis, and extracellular matrix ...

発生生物学

Preparation, Administration, and Assessment of In Vivo Tissue-Specific Cellular Uptake of Fluorescent Dye-Labeled Liposomes

There is a growing interest in using liposomes to deliver compounds in vivo particularly for targeted treatment approaches. Depending on the liposome formulation, liposomes may be preferentially taken up by different cell types in the body. This may influence the efficacy of the therapeutic particle as progression of different diseases is tissue- and cell-type-specific. In this protocol, we present one method for synthesizing and fluorescently labeling liposomes using DSPC, cholesterol, and PEG-2000 DSPE and the lipid dye DiD as a fluorescent label. This protocol also presents an approach for delivering liposomes in vivo and assessing cell-specific uptake of liposomes using flow cytometry. This approach can be used to determine the types of cells that take up liposomes and quantify the distribution and proportion of liposome-uptake across cell types and tissues. While not mentioned in this protocol, additional assays such as immunofluorescence and single-cell fluorescence imaging on a cytometer will strengthen any findings or conclusions made as they permit assessment of intracellular staining. Protocols may also need to be adapted depending on the tissue(s) of interest.

The goal of this protocol is to synthesize fluorescently-labeled liposomes and use flow cytometry to identify in vivo localization of liposomes at a cellular level.

蛍光色素標識リポソームのin vivo組織特異的細胞取り込みの調製、投与、および評価

There is a growing interest in using liposomes to deliver compounds in vivo particularly for targeted treatment approaches. Depending on the liposome ...

生物工学

Isolation of Adipogenic and Fibro-Inflammatory Stromal Cell Subpopulations from Murine Intra-Abdominal Adipose Depots

The stromal-vascular fraction (SVF) of white adipose tissue (WAT) is remarkably heterogeneous and consists of numerous cell types that contribute functionally to the expansion and remodeling of WAT in adulthood. A tremendous barrier to studying the implications of this cellular heterogeneity is the inability to readily isolate functionally distinct cell subpopulations from WAT SVF for in vitro and in vivo analyses. Single-cell sequencing technology has recently identified functionally distinct fibro-inflammatory and adipogenic PDGFR&#946;+ perivascular cell subpopulations in intra-abdominal WAT depots of adult mice. Fibro-inflammatory progenitors (termed, &#8220;FIPs&#8221;) are non-adipogenic collagen producing cells that can exert a pro-inflammatory phenotype. PDGFR&#946;+ adipocyte precursor cells (APCs) are highly adipogenic both in vitro and in vivo upon cell transplantation. Here, we describe multiple methods for the isolation of these stromal cell subpopulations from murine intra-abdominal WAT depots. FIPs and APCs can be isolated by fluorescence-activated cell sorting (FACS) or by taking advantage of biotinylated antibody-based immunomagnetic bead technology. Isolated cells can be used for molecular and functional analysis. Studying the functional properties of stromal cell subpopulation in isolation will expand our current knowledge of adipose tissue remodeling under physiological or pathological conditions on the cellular level.

This protocol describes the technical approach to isolate adipogenic and fibro-inflammatory stromal cell subpopulations from murine intra-abdominal white adipose tissue (WAT) depots by fluorescence-activated cell sorting or immunomagnetic bead separation.

マウス腹腔内脂肪貯蔵所からの脂肪形成性および線維炎症性間質細胞亜集団の単離

The stromal-vascular fraction (SVF) of white adipose tissue (WAT) is remarkably heterogeneous and consists of numerous cell types that contribute ...

免疫・感染学

Lymphatic and Blood Network Analysis During Obesity

Lymphatic collecting vessels and lymph nodes are inevitably embedded in adipose tissue. The physiological significance of this observation remains still not elucidated. However, obesity is characterized by impaired lymphatic function and increased vessel permeability. Inversely, lymphatic dysfunction induces obesity in mice, suggesting a significant interplay between lymphatic vessels and the adipose tissue. Therefore, understanding factors leading to lymphatic dysfunction might open new therapeutic windows to prevent obesity and associated comorbidities. The first step in this process requires a precise and detailed visualization of the lymphatic network in healthy and inflamed adipose tissue. Here, we describe a rapid, inexpensive, and efficient method that allows to label and analyze lymphatic and blood vessels. This approach takes advantage of the skin-draining brachial lymph node localization within the subcutaneous adipose tissue. The lymphatic arborization of this tissue can be revealed by injecting fluorochrome-conjugated lectins subcutaneously. Moreover, the in vivo labeling approach provides a way to evaluate lymphatic vessel density and functions. Coupled to blood vessel, adipocyte and immune cell staining, the protocol allows for high-resolution mapping of the subcutaneous adipose tissue by 3D imaging.

Obesity is a growing global public health issue. It has been previously associated with lymphatic dysfunction, suggesting a vital crosstalk between the adipose tissue and the lymphatic system. Here, we propose an accessible methodology allowing the distinct labeling of blood and lymphatic vasculatures within the subcutaneous adipose tissue.

Lymphatic collecting vessels and lymph nodes are inevitably embedded in adipose tissue. The physiological significance of this observation remains still ...

医学

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, uncoupling of metabolism to generate heat, and secretion of adipokines to regulate whole-body homeostasis and immune responses. Emerging research is identifying important regional differences in the developmental, molecular, and functional profiles of adipocytes located in discrete depots throughout the body. Different properties of the depots are medically relevant since metabolic diseases often demonstrate depot-specific effects. This protocol will provide investigators with a detailed anatomic atlas and dissection guide for the reproducible and accurate identification and excision of diverse mouse adipose tissues. Standardized dissection of discrete adipose depots will allow detailed comparisons of their molecular and metabolic characteristics and contributions to local and systemic pathologic states under various nutritional and environmental conditions.

Adipocytes exist in discrete depots and have diverse roles within their unique microenvironments. As regional differences in adipocyte character and function are uncovered, standardized identification and isolation of depots is crucial for advancement of the field. Herein, we present a detailed protocol for the excision of various mouse adipose depots.

多様なマウス脂肪デポの同定と解剖

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

生物学

Isolation and Identification of Vascular Endothelial Cells from Distinct Adipose Depots for Downstream Applications

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone regulation, barrier functions, and angiogenesis. Endothelial cell dysfunction is a hallmark predictor and major driver for the progression of severe cardiovascular diseases, yet the underlying mechanisms remain poorly understood. The ability to isolate and perform analyses on endothelial cells from various vascular beds in their native form will give insight into the processes of cardiovascular disease. This protocol presents the procedure for the dissection of mouse subcutaneous and mesenteric adipose tissues, followed by isolation of their respective arterial vasculature. The isolated arteries are then digested using a specific cocktail of digestive enzymes focused on liberating functionally viable endothelial cells. The digested tissue is assessed by flow cytometry analysis using CD31+/CD45&#8722; cells as markers for positive endothelial cell identification. Cells can be sorted for immediate downstream functional assays or used to generate primary cell lines. The technique of isolating and digesting arteries from different vascular beds will provide options for researchers to evaluate freshly isolated vascular cells&#160;from arteries of interest and allow them to perform a wide range of functional tests on specific cell types.

This protocol details a method for the dissection of mouse adipose depots and the isolation and digestion of respective arteries to liberate and then identify the endothelial cell population. Freshly isolated cells used in downstream applications will advance the understanding of vascular cell biology and the mechanisms of vascular dysfunction.

下流アプリケーションのための異なる脂肪デポからの血管内皮細胞の分離と同定(英語)

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone ...

マウス白脂肪組織の半自動単離

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their mechanisms. Immortalized white preadipocyte cell lines are publicly available and widely used. However, the emergence of beige adipocytes in white adipose tissue in response to external cues is difficult to recapitulate to the full extent using publicly available white adipocyte cell lines. Isolation of the stromal vascular fraction (SVF) from murine adipose tissue is commonly executed to obtain primary preadipocytes and perform adipocyte differentiation. However, mincing and collagenase digestion of adipose tissue by hand can result in experimental variation and is prone to contamination. Here, we present a modified semi-automated protocol that utilizes a tissue dissociator for collagenase digestion to achieve easier isolation of the SVF, with the aim of reducing experimental variation, reducing contamination, and increasing reproducibility. The obtained preadipocytes and differentiated adipocytes can be used for functional and mechanistic analyses.

著者スポットライト:組織解離器を使用したマウス白脂肪組織からの間質血管画分の半自動分離  

This protocol describes the semi-automated isolation of the stromal vascular fraction (SVF) from murine adipose tissue to obtain preadipocytes and achieve adipocyte differentiation in vitro. Using a tissue dissociator for collagenase digestion reduces experimental variation and increases reproducibility.

組織解離剤を用いたマウス白色脂肪組織からの間質血管画分の半自動単離(英語)

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...

マウスにおけるscBATの形態学的および分子的特性評価

Dissection, Histological Processing, and Gene Expression Analysis of Murine Supraclavicular Brown Adipose Tissue

Brown adipose tissue (BAT)-mediated thermogenesis plays an important role in the regulation of metabolism, and its morphology and function can be greatly impacted by environmental stimuli in mice and humans. Currently, murine interscapular BAT (iBAT), which is located between two scapulae in the upper dorsal flank of mice, is the main BAT depot used by research laboratories to study BAT function. Recently, a few previously unknown BAT depots were identified in mice, including one analogous to human supraclavicular brown adipose tissue. Unlike iBAT, murine supraclavicular brown adipose tissue (scBAT) is situated in the intermediate layer of the neck and thus cannot be accessed as readily.
To facilitate the study of newly identified mouse scBAT, presented herein is a protocol detailing the steps to dissect intact scBAT from postnatal and adult mice. Due to scBAT&#39;s small size relative to other adipose depots, procedures have been modified and optimized specifically for processing scBAT. Among these modifications is the use of a dissecting microscope during tissue collection to increase the precision and homogenization of frozen scBAT samples to raise the efficiency of subsequent qPCR analysis. With these optimizations, the identification of, morphological appearance of, and molecular characterization of the scBAT can be determined in mice.

著者スポットライト:遺伝子解析のための鎖骨上褐色脂肪組織抽出の最適化

Here, we provide a practical procedure for dissecting and performing histological and gene expression analyses of murine supraclavicular brown adipose tissue.

マウス鎖骨上褐色脂肪組織の解剖、組織学的処理、遺伝子発現解析

Brown adipose tissue (BAT)-mediated thermogenesis plays an important role in the regulation of metabolism, and its morphology and function can be greatly ...

マウス脂肪デポのローカライズ、識別、および切除

要約

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脂肪デポ固有のSca1の免疫磁気分離

蛍光色素標識リポソームのin vivo組織特異的細胞取り込みの調製、投与、および評価

マウス腹腔内脂肪貯蔵所からの脂肪形成性および線維炎症性間質細胞亜集団の単離

Lymphatic and Blood Network Analysis During Obesity

多様なマウス脂肪デポの同定と解剖

下流アプリケーションのための異なる脂肪デポからの血管内皮細胞の分離と同定(英語)

組織解離剤を用いたマウス白色脂肪組織からの間質血管画分の半自動単離(英語)

組織解離剤を用いたマウス白色脂肪組織からの間質血管画分の半自動単離(英語)

組織解離剤を用いたマウス白色脂肪組織からの間質血管画分の半自動単離(英語)

マウス鎖骨上褐色脂肪組織の解剖、組織学的処理、遺伝子発現解析