The authors have no acknowledgements.

הערה: כל הנהלים בבעלי החיים בוצעו באישור הוועדה המוסדי הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) מאוניברסיטת סינסינטי ובהתאם למדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה מהמכון הלאומי לבריאות (NIH פרסום מס . 85-23, מתוקן 1996). 1. להרדים ולעקר את העכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בdropbox המכיל מינון supratheraputic של isoflurane ולאפשר לשאוף להשפעה. לאחר העכבר הוא מורדמים, להסיר מהתיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cervically לנקוע כאמצעי שני של המתת חסד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את פני השטח החיצוניים של העכבר על ידי ניקוי את החיה עם אתנול 70%. </li></ol> 2. זיהוי ובידוד של שלושה בסיס מיון שומן שונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות שומן חום בידוד (BAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהפרווה היא רטובה מטיהור האלכוהול כדי לסייע בחיתוך דרך Laye אפידרמיס ועוריrs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העכבר במצב שכיבה עם גב על השולחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס את העור ממש מתחת לסרעפת עם מלקחיים, מעלית ולחתוך עם מספריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך רוחבי סביב ההיקף של העכבר כדי לחשוף את הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את מחסן BAT בצורת פרפר על ידי degloving המחצית העליונה של העכבר. החזק את הנספחים והבטן התחתונים ביד אחת ומושך את העור כלפי מעלה, אל הראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את העכבר, כך שהוא נמצא בעמדה נוטה על השולחן. היזהר שלא לזהם את המחסן החשוף עם שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירים נקיים כירורגית ושינוי לזוג טרי של כפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את השכמות ומחסן מקביל. מוציא בזהירות את כל שומן לבן שטחי על גבי הפרפר ולאחר מכן לנתח את הפרפר של שומן חום interscapular. להיות זהיר, כדי למנוע את השריר קשור קשר הדוק עם שומן החום. הערה: השימוש במיקרוסקופ לנתיחה מומלצת להסרת wשומן היט, כמו גם בהפרדה של שומן החום מעצם השכמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר את שומן המחסן ולהעביר לצינור microcentrifuge 2 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של רקמה התת עורית שומן (SQ), רקמות שומן לבן דיפו (WAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים על זוג טרי של כפפות כדי לא לזהם צולב בין מחסני שומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את המפשעה, מחסני SQ משולשים על ידי דה-gloving המחצית התחתונה של העכבר. החזק את הנספחים ובית החזה העליונים ביד אחת ומושך את העור כלפי מטה לכיוון הרגליים ביד השנייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את העכבר במצב שכיבה בזמן נזהר שלא לזהם את המחסן החשוף עם שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> surgica הנקימכשירי l ושינוי לזוג טרי של כפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח המשולשים של שומן SQ. היזהר שלא לזהם את הדגימה עם שריר, שומן השכן, בלוטות החלב או על ידי חיתוך כל כלים ולזהם את דגימת דם. הערה: השימוש במיקרוסקופ לנתיחה מומלצת אם גבולות אינם מוגדרים באופן ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מחסני שומן ולהעביר עד 2 מיליליטר צינורות microcentrifuge. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מכתים, לתקן או להטביע באוקטובר אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של אשכי שומן קרבי שומן רקמות (מע&quot;מ) ולבן שומן רקמות (WAT) דיפו: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים על זוג טרי של כפפות כדי לא לזהם צולב בין מחסני שומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם מדעssors, לחתוך את הצפק רוחבי, ישירות מתחת לסרעפת. חותך את הצפק מהסרעפת לאמצע פי הטבעת coronally לחשוף אברי בטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את האשכים או שחלות ולזהות את רקמת שומן הלבנה המצורפת, הידועה בשם שומן epididymal בזכרים או שומן אשכים אצל נקבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירים נקיים כירורגית ושינוי לזוג כפפות חדש </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח שני מחסני שומן epididymal מהאשכים, epididymides, וdeferentia Vasa. או אם נקבה, לנתח בזהירות את שני רפידות שומן האשכים מהשחלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מחסני שומן ולהעביר אותם ל- 2 צינורות microcentrifuge מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מכתים, לתקן או להטביע באוקטובר אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). </li&gt; </ol></li></ol> 3. בידוד של רקמות שומן perivascular (PVAT) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של הלב: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר במצב שכיבה עם נספחים העליונים ותחתונים מורחבים כלפי חוץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נספחים מאובטחים באמצעות קלטת כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מיצוב העכבר כמפורט לעיל, ליצור מתח על ידי ההרמה על תהליך xiphoid עם מלקחיים. חותך אופקי דרך הסרעפת, חושף את החלק התחתון של חלל בית החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוך שמירה על מתח, על ידי ההרמה על תהליך xiphoid, לחתוך דרך בית החזה superiorly לכיוון הראש, רק לצד של עצם החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרים את כלוב הצלעות רק נחותה עצם הבריח, ולחתוך לאורכו הנחותים של עצם הבריח לעבר הבית השחי בשני הכיוונים. חלל בית החזה ובתכניו (לב, ריאות, וכו &#39;) צריכים עכשיו להיות ברור לעין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את חלל בית החזה של דם ונוזל זרים באמצעות ga סטריליuze לספוג את הנוזל. אם איברים או כלי איסוף הקפידו שופע (מידע נוסף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהאזור מנוקה של נוזל, לחתוך את כלי הסמפונות ומצרפים להסיר את הריאות, המאפשר חשיפה טובה יותר של הלב. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוקליזציה ורקמות כריתה של אבי העורקים perivascular השומן (PVAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את האיברים הבאים כלזהות טוב יותר את החלקים הנחותים של אב העורקים: כבד, קיבה, טחול, לבלב, מעי, ומעי גס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית תתחיל עם זיהוי של הקיבה והוושט. חותך את הוושט בצומת גסטרו-הוושט כדי לשחרר את הבטן מהגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, לזהות את המעיים ולפדר שמסביב. לחתוך באופן שטחי דרך לפדר, כפי שהוא נמצא קרוב מאוד לחלק הכליות של אב העורקים, ואז &quot;להפעיל את המעיים.&quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את המעי הגס לשחרר קרוב לפי הטבעת ככל האפשר. לפיכך, לשחרר את הקיבה, המעי ומעי גס מהעכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Reלהזיז את הקיבה, מעי, מעי גס, הלבלב וטחול על ידי חיתוך דרך לפדר המצרף וכלי דם. הלבלב והטחול צריך לבוא בחינם עם הקיבה, המעי ומעי גס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכבד על ידי חיתוך דרך ורידי הכבד ומצרף לפדר, להסיר את כל האונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את שכבת שומן הקרביים ומקיף את הכליות. השאר את הכליות מחוברים לאב העורקים בvivo לשמש כסמנים גיאוגרפיים למגזרים שונים של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את האזור עם סטרילי 1X PBS ולהסיר את כל הנוזל על ידי קליטה עם גזה סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרו המספריים ומיקרו-מלקחיים, להפריד את אב העורקים מזיקתו לגב עמוד השדרה והקובץ המצורף גחונו לוושט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את אב העורקים על ידי ביצוע וניתוק אב העורקים האורך של אב העורקים היורדים מהמוצא בלב להסתעפות באזור הכסל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות ולבודד את כלי subclavian. לבודד הכלים האלהמהצוואר ועד שורש אב העורקים לחשוף טוב יותר לצומת אב העורקים ושורש בלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את בלוטת התימוס ואז לחתוך את עורק brachiocephalic, עורק התרדמה המשותף שמאל, ועורק subclavian שמאל, המאפשר תנועה של הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסיוע מיקרוסקופ לנתיחה, להציג את שכבת perivascular רקמת שומן (PVAT) המקיפה את אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקיטת זהירות רבה שלא לצבוט או לסחוט PVAT, משוך בעדינות את דרך PVAT מאב העורקים עם מיקרו-מלקחיים. בעדינות לחתוך את הקובץ המצורף של PVAT לאב העורקים עם מיקרו המספריים החל משעת אזור בית החזה פשוט מעולה למקום שבי הסרעפת ממוקמת. הערה: מיקרוסקופ לנתיחה מומלץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה לכל האורך של אב העורקים, שסיים באזור אב העורקים infrarenal, הנמצא רק מעולה להסתעפות הכסל של כלי השיט של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם PVAT קשת אב העורקים הוא רצוי, השתמש באותה השיטה כדי להסיר את PVAT מג פחותיםurvature של הקשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח דגימות PVAT לתוך 2 מיליליטר צינור microcentrifuge (ים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). הערה: מחסני שומן נוספים לשקול אם מעוניין בניתוח מחסן שומן מקיף כוללת: retroperitoneal, mesenteric, omental, קרום הלב וpopliteal. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+in+the+United+States,+2009-2010.">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li><li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults,+1999-2010.">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li><li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+medical+care+costs+of+obesity:+an+instrumental+variables+approach.">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li><li>Marder, W., Chang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Childhood+Obesity:+Costs,+Treatment+Patterns,+Disparities+in+Care,+and+Prevalent+Medical+Conditions.">Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions.</a> Thomson Medstat Research Brief. , (2006).</li><li>Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-fat+diet+increases+IL-1,+IL-6,+and+TNF-&#945;+production+by+increasing+NF-&#954;B+and+attenuating+PPAR-&#947;+expression+in+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-&#945; production by increasing NF-&#954;B and attenuating PPAR-&#947; expression in bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTEN+loss+in+the+Myf5+lineage+redistributes+body+fat+and+reveals+subsets+of+white+adipocytes+that+arise+from+Myf5+precursors.">PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors.</a> Cell Metab. 16 (3), 348-362 (2012).</li><li>Sethi, J. K., Vidal-Puig, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thematic+review+series:+adipocyte+biology.+Adipose+tissue+function+and+plasticity+orchestrate+nutritional+adaptation.">Thematic review series: adipocyte biology. Adipose tissue function and plasticity orchestrate nutritional adaptation.</a> J Lipid Res. 48 (6), 1253-1262 (2007).</li><li>Aarsland, A., Chinkes, D., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+and+whole-body+fat+synthesis+in+humans+during+carbohydrate+overfeeding.">Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding.</a> Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).</li><li>Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+of+white,+beige+and+brown+adipocytes+derived+from+mesenchymal+stem+cells.">Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells.</a> World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and.">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and.</a> 150 (2), 366-376 (2012).</li><li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White,+brown,+beige/brite:+different+adipose+cells+for+different+functions.">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li><li>Casteilla, L., P&#233;nicaud, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).</li><li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity.">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests or other conflicts of interest.

השמנת יתר יכול להוביל למארח גדול של תחלואות וההבנה המלאה של התפקיד שממלא שומן אינו מובן במלואו; מחקר לכן המשיך בתחום השומן הוא הכרחי. מודלים של בעלי חיים, במיוחד מודלים עכבריים הם אידיאליים למחקר ראשוני בהתקדמות של מחלות ובדיקות של טיפולי תרופות פוטנציאליים. בשימוש ?...

שומן היה חלש בולטת באור זרקורי התקשורת, כתוצאה מהעלייה הדרמטית של השמנת יתר במהלך העשורים האחרונים של המאה ה -20. השמנה כיום משפיעה על יותר משליש ממבוגרים ו -17% מילדים ובני הנוער בארצות הברית (ארה&quot;ב) 1. פורש את כל הקבוצות האתניות, מחקר סטטיסטי המקיף את מגיפת ההשמנה הראה שיש לי שחורים שאינו היספנים השיעור מותאם לגיל הגבוה ביותר של השמנת יתר (49.5%) בהשוואה לאמריקאים מקסיקניים (40.4%), כלל ההיספאנים (39.1%), ואי לבנים היספני (34.3%) 2. ההשפעה הכלכלית של השמנת יתר היא גם דאגה גוברת למערכת הבריאות. בשנת 2012, הוערך כי העלות השנתית של טיפול הרפואית לטיפול בהשמנה בארה&quot;ב בשנת 2005 הייתה $ 190,200,000,000, כמעט 21% מתקציב ההוצאות רפואיות הכללי. למרבה הצער, השמנה בילדות הייתה מוערך להיות אחראי על 14 מליארד דולרים בעלויות רפואיות ישירות לבד. מבחינה סטטיסטית, נקבע כי העלות הממוצעת של רפואיתאנשים עם השמנת יתר היו גבוה יותר 2741 $ בשנה מאשר אלו ללא תחלואה זה 3-5. השמנת יתר היא גורם סיכון עיקרי למגוון רחב של מצבים כגון: סוכרת מסוג 2, דיסליפידמיה, מחלות לב וכלי דם, סרטן, הפרעות שלד שרירים ודלקת כרונית. השמנה קשורה עמוק לפתוגנזה של תסמונת מטבולית ומחלות כרוניות אחרות 6-8. עם קשרי דרסטי ושליליים כגון בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר מדעי מיקד את תשומת לב כדי להבין את המגיפה הנוכחית ותפקידים המגוונים ומרכזיים שמילאו שומן טוב יותר. מבחינה הסטורית, רקמת שומן נחשבה חסרת חשיבות ונתפסה רק כרקמת מילוי פשוטה. נכון לעכשיו, שומן הוכח לשחק הרבה תפקידים חיוניים בתפקוד הגוף ב: חילוף חומרים, ויסות הורמון, דלקת, הגנה ובידוד 9. רקמת שומן מורכבת בעיקר מadipocytes אלא גם מכיל pericytes, תאי האנדותל, מונוציטים, מקרופאגים ותאי גזע pluripotent 8. רקמת שומן מופצת בכל הגוף בתחנות שונות. ניתן למצוא המחסנים העיקריים subdermally, תת-עורית, לשריר, ולעומק 10. מחסני שומן הוכחו לי פרופילי מחסן ספציפיים חילוף חומרים, אשר הראו רגישות ספציפית מחסן להשמנה והפרעות הקשורות 8. באופן מסורתי, רקמת שומן כבר מסווגת לשני סוגים עיקריים: רקמת שומן לבנה (WAT) ורקמת שומן חומה (BAT); למרות שהספרות האחרונה מציינת את הנוכחות של קבוצה שלישית הוטבלה שומן brite או בז &#39;11. רקמת שומן הוכח לי צבעים שונים, מורפולוגיות, פונקציות מטבוליות, תכונות ביוכימיות ודפוסים גנטיים ביטוי 10. יש לי adipocytes בWAT, טיפה אחת גדולה של שומנים וכמויות משתנות של המיטוכונדריה. WATנמצא דומיננטי ביישובים תת-עורי והקרביים של הגוף. פונקציות WAT כאתר של אחסון אנרגיה והגנה על איברים בעיקר. יש לי adipocytes בBAT מורפולוגיה multilocular והמיטוכונדריה בשפע. BAT ממוקם בעיקר בצוואר וכלי דם גדולים של בית החזה, כמו גם את השכמות 12. BAT פונקציות בעיקר בהתנהגויות משקיעה באנרגיה, המסדירות thermogenesis 7. שומן Brite או בז &#39;הוכח לשתף מורפולוגיה דומה וביטוי לBAT אבל כבר מצא להיות מקור מתאי שומן לבן 11. השיטה הניתוחית שתוארה בכתב היד הזה מספקת לחוקרים עם היכולת לנתח תופעות שונות שגורמים כגון: סביבה, תרופות, וגנטיקה, יש בשומן; כמו גם את תפקיד השומן מועיל או מזיק משחק במחלה ועל בריאות כללית. כמו כן, מספק דרך לזהות ולבודד סוגים שונים של רקמת שומן ללאפשר להבין טוב יותר של מערכות יחסים ביוכימיים והבדלים בין מחסנים. זה יכול לסייע בקביעת הקשר בין מיקום, פונקציה, וסוגים של שומן בגוף. שיטה מתוארת זה משיגה זאת על ידי מתן האמצעי להדמיה גולמית, ניתוח ביטוי גנים, ניתוח ביטוי חלבון, בדיקה היסטולוגית, ובידוד של שורות תאים עיקריות למחקרים במבחנה. נכון לעכשיו יש מאמרים רבים המספקים תובנה התנהגות חילוף חומרים של מחסנים שונים שומן, כמו גם במקומות אנטומיים שלהם; אבל לא מספק שיטה לעומק על איך למקם במיוחד, לזהות, ולבודד מחסנים אלה. שיטה ניתוחית זו מספקת טכניקה מדויקת שמאפשרת בידוד של מחסנים מרובים עם כמות מינימאלית של נתיחה וזיהום בהשוואה לאחרים שיטות שנועדו לבודד ממחסנים אחד או שתיים 13-14. המטרה של פרוטוקול זה היא לספקשיטה מדויקת לזיהוי ולבידוד סוגים שונים של מחסני שומן ממקומות אנטומיים רבים של.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Fisher</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>DMEF-12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D-6421</td><td>Warm in waterbath before putting on tissue.</td></tr><tr><td>2 ml Microcentrifuge tubes</td><td>Midsci</td><td>MCT-200-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr></tbody></table>

localization, identification, and excision of murine adipose depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.

זיהוי, ולוקליזציה של שומן תת-עורי מפשעתי, שומן חום interscapular, שומן קרביים epididymal (איור 1), כמו גם את שומן קשת אב העורקים perivascular, שומן אב העורקים החזי, שומן אב העורקים suprarenal ושומן אב העורקים infrarenal (איור 2) הושג בהצלחה באמצעות השיטה הניתוחית שתוארה. בדיקה היס?...

Watch this Scientific Journal Video about Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots at JoVE.com

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

בשל קשר דרסטי והשלילי בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר על תפקיד השומן משחק במחלה ועל בריאות כללית היא מוצדקת. אנו מציגים פרוטוקול לבידוד והכריתה של מחסני שומן ומאפשרים לחקר השומן באמצעות באתר ובשיטות חוץ גופית.

לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

localization-identification-and-excision-of-murine-adipose-depots

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

40.9K Views.  University of Cincinnati College of Medicine.  בשל קשר דרסטי והשלילי בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר על תפקיד השומן משחק במחלה ועל בריאות כללית היא מוצדקת. אנו מציגים פרוטוקול לבידוד והכריתה של מחסני שומן ומאפשרים לחקר השומן באמצעות באתר ובשיטות חוץ גופית. 

Video: Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells (ASCs)

The isolation of adipose-derived stem cells (ASCs) is an important method in the field of adipose tissue biology, adipogenesis, and extracellular matrix (ECM) remodeling. In vivo, ECM-rich environment consisting of fibrillar collagens provides a structural support to adipose tissues during the progression and regression of obesity. Physiological ECM remodeling mediated by matrix metalloproteinases (MMPs) plays a major role in regulating adipose tissue size and function1,2. The loss of physiological collagenolytic ECM remodeling may lead to excessive collagen accumulation (tissue fibrosis), macrophage infiltration, and ultimately, a loss of metabolic homeostasis including insulin resistance3,4. When a phenotypic change of the adipose tissue is observed in gene-targeted mouse models, isolating primary ASCs from fat depots for in vitro studies is an effective approach to define the role of the specific gene in regulating the function of ASCs. In the following, we define an immunomagnetic separation of Sca1high ASCs.

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells ASCs

We present the techniques required to isolate the stromal vascular fraction (SVF) from mouse inguinal (subcutaneous) and perigonadal (visceral) adipose tissue depots to assess their gene expression and collagenolytic activity. This method includes the enrichment of Sca1high adipose-derived stem cells (ASCs) using immunomagnetic cell separation.

הפרדת immunomagnetic של שומן דיפו ספציפי Sca1<sup&gt; גבוה</sup&gt; בתאי גזע שמקורם שומן (ASCs)

The isolation of adipose-derived stem cells (ASCs) is an important method in the field of adipose tissue biology, adipogenesis, and extracellular matrix ...

Developmental Biology

Preparation, Administration, and Assessment of In Vivo Tissue-Specific Cellular Uptake of Fluorescent Dye-Labeled Liposomes

There is a growing interest in using liposomes to deliver compounds in vivo particularly for targeted treatment approaches. Depending on the liposome formulation, liposomes may be preferentially taken up by different cell types in the body. This may influence the efficacy of the therapeutic particle as progression of different diseases is tissue- and cell-type-specific. In this protocol, we present one method for synthesizing and fluorescently labeling liposomes using DSPC, cholesterol, and PEG-2000 DSPE and the lipid dye DiD as a fluorescent label. This protocol also presents an approach for delivering liposomes in vivo and assessing cell-specific uptake of liposomes using flow cytometry. This approach can be used to determine the types of cells that take up liposomes and quantify the distribution and proportion of liposome-uptake across cell types and tissues. While not mentioned in this protocol, additional assays such as immunofluorescence and single-cell fluorescence imaging on a cytometer will strengthen any findings or conclusions made as they permit assessment of intracellular staining. Protocols may also need to be adapted depending on the tissue(s) of interest.

The goal of this protocol is to synthesize fluorescently-labeled liposomes and use flow cytometry to identify in vivo localization of liposomes at a cellular level.

הכנה, מתן והערכה של ספיגה תאית ספציפית לרקמת in vivo של ליפוזומים בעלי תווית צבע פלואורסצנטי

There is a growing interest in using liposomes to deliver compounds in vivo particularly for targeted treatment approaches. Depending on the liposome ...

Bioengineering

Isolation of Adipogenic and Fibro-Inflammatory Stromal Cell Subpopulations from Murine Intra-Abdominal Adipose Depots

The stromal-vascular fraction (SVF) of white adipose tissue (WAT) is remarkably heterogeneous and consists of numerous cell types that contribute functionally to the expansion and remodeling of WAT in adulthood. A tremendous barrier to studying the implications of this cellular heterogeneity is the inability to readily isolate functionally distinct cell subpopulations from WAT SVF for in vitro and in vivo analyses. Single-cell sequencing technology has recently identified functionally distinct fibro-inflammatory and adipogenic PDGFR&#946;+ perivascular cell subpopulations in intra-abdominal WAT depots of adult mice. Fibro-inflammatory progenitors (termed, &#8220;FIPs&#8221;) are non-adipogenic collagen producing cells that can exert a pro-inflammatory phenotype. PDGFR&#946;+ adipocyte precursor cells (APCs) are highly adipogenic both in vitro and in vivo upon cell transplantation. Here, we describe multiple methods for the isolation of these stromal cell subpopulations from murine intra-abdominal WAT depots. FIPs and APCs can be isolated by fluorescence-activated cell sorting (FACS) or by taking advantage of biotinylated antibody-based immunomagnetic bead technology. Isolated cells can be used for molecular and functional analysis. Studying the functional properties of stromal cell subpopulation in isolation will expand our current knowledge of adipose tissue remodeling under physiological or pathological conditions on the cellular level.

This protocol describes the technical approach to isolate adipogenic and fibro-inflammatory stromal cell subpopulations from murine intra-abdominal white adipose tissue (WAT) depots by fluorescence-activated cell sorting or immunomagnetic bead separation.

בידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני שומן תוך-בטניים של מורין

The stromal-vascular fraction (SVF) of white adipose tissue (WAT) is remarkably heterogeneous and consists of numerous cell types that contribute ...

Immunology and Infection

Lymphatic and Blood Network Analysis During Obesity

Lymphatic collecting vessels and lymph nodes are inevitably embedded in adipose tissue. The physiological significance of this observation remains still not elucidated. However, obesity is characterized by impaired lymphatic function and increased vessel permeability. Inversely, lymphatic dysfunction induces obesity in mice, suggesting a significant interplay between lymphatic vessels and the adipose tissue. Therefore, understanding factors leading to lymphatic dysfunction might open new therapeutic windows to prevent obesity and associated comorbidities. The first step in this process requires a precise and detailed visualization of the lymphatic network in healthy and inflamed adipose tissue. Here, we describe a rapid, inexpensive, and efficient method that allows to label and analyze lymphatic and blood vessels. This approach takes advantage of the skin-draining brachial lymph node localization within the subcutaneous adipose tissue. The lymphatic arborization of this tissue can be revealed by injecting fluorochrome-conjugated lectins subcutaneously. Moreover, the in vivo labeling approach provides a way to evaluate lymphatic vessel density and functions. Coupled to blood vessel, adipocyte and immune cell staining, the protocol allows for high-resolution mapping of the subcutaneous adipose tissue by 3D imaging.

Obesity is a growing global public health issue. It has been previously associated with lymphatic dysfunction, suggesting a vital crosstalk between the adipose tissue and the lymphatic system. Here, we propose an accessible methodology allowing the distinct labeling of blood and lymphatic vasculatures within the subcutaneous adipose tissue.

Lymphatic collecting vessels and lymph nodes are inevitably embedded in adipose tissue. The physiological significance of this observation remains still ...

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, uncoupling of metabolism to generate heat, and secretion of adipokines to regulate whole-body homeostasis and immune responses. Emerging research is identifying important regional differences in the developmental, molecular, and functional profiles of adipocytes located in discrete depots throughout the body. Different properties of the depots are medically relevant since metabolic diseases often demonstrate depot-specific effects. This protocol will provide investigators with a detailed anatomic atlas and dissection guide for the reproducible and accurate identification and excision of diverse mouse adipose tissues. Standardized dissection of discrete adipose depots will allow detailed comparisons of their molecular and metabolic characteristics and contributions to local and systemic pathologic states under various nutritional and environmental conditions.

Adipocytes exist in discrete depots and have diverse roles within their unique microenvironments. As regional differences in adipocyte character and function are uncovered, standardized identification and isolation of depots is crucial for advancement of the field. Herein, we present a detailed protocol for the excision of various mouse adipose depots.

זיהוי וניתוח של מחסני עכבר מגוונים

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

Biology

Isolation and Identification of Vascular Endothelial Cells from Distinct Adipose Depots for Downstream Applications

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone regulation, barrier functions, and angiogenesis. Endothelial cell dysfunction is a hallmark predictor and major driver for the progression of severe cardiovascular diseases, yet the underlying mechanisms remain poorly understood. The ability to isolate and perform analyses on endothelial cells from various vascular beds in their native form will give insight into the processes of cardiovascular disease. This protocol presents the procedure for the dissection of mouse subcutaneous and mesenteric adipose tissues, followed by isolation of their respective arterial vasculature. The isolated arteries are then digested using a specific cocktail of digestive enzymes focused on liberating functionally viable endothelial cells. The digested tissue is assessed by flow cytometry analysis using CD31+/CD45&#8722; cells as markers for positive endothelial cell identification. Cells can be sorted for immediate downstream functional assays or used to generate primary cell lines. The technique of isolating and digesting arteries from different vascular beds will provide options for researchers to evaluate freshly isolated vascular cells&#160;from arteries of interest and allow them to perform a wide range of functional tests on specific cell types.

This protocol details a method for the dissection of mouse adipose depots and the isolation and digestion of respective arteries to liberate and then identify the endothelial cell population. Freshly isolated cells used in downstream applications will advance the understanding of vascular cell biology and the mechanisms of vascular dysfunction.

בידוד וזיהוי של תאי אנדותל וסקולריים ממחסני שומן נפרדים ליישומים במורד הזרם

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone ...

בידוד חצי אוטומטי של רקמת שומן לבנה מורין

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their mechanisms. Immortalized white preadipocyte cell lines are publicly available and widely used. However, the emergence of beige adipocytes in white adipose tissue in response to external cues is difficult to recapitulate to the full extent using publicly available white adipocyte cell lines. Isolation of the stromal vascular fraction (SVF) from murine adipose tissue is commonly executed to obtain primary preadipocytes and perform adipocyte differentiation. However, mincing and collagenase digestion of adipose tissue by hand can result in experimental variation and is prone to contamination. Here, we present a modified semi-automated protocol that utilizes a tissue dissociator for collagenase digestion to achieve easier isolation of the SVF, with the aim of reducing experimental variation, reducing contamination, and increasing reproducibility. The obtained preadipocytes and differentiated adipocytes can be used for functional and mechanistic analyses.

מחבר זרקור: בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה מרקמת שומן לבן מורין באמצעות דיסוציאטור רקמות  

This protocol describes the semi-automated isolation of the stromal vascular fraction (SVF) from murine adipose tissue to obtain preadipocytes and achieve adipocyte differentiation in vitro. Using a tissue dissociator for collagenase digestion reduces experimental variation and increases reproducibility.

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...

אפיון מורפולוגי ומולקולרי של scBAT בעכברים

Dissection, Histological Processing, and Gene Expression Analysis of Murine Supraclavicular Brown Adipose Tissue

Brown adipose tissue (BAT)-mediated thermogenesis plays an important role in the regulation of metabolism, and its morphology and function can be greatly impacted by environmental stimuli in mice and humans. Currently, murine interscapular BAT (iBAT), which is located between two scapulae in the upper dorsal flank of mice, is the main BAT depot used by research laboratories to study BAT function. Recently, a few previously unknown BAT depots were identified in mice, including one analogous to human supraclavicular brown adipose tissue. Unlike iBAT, murine supraclavicular brown adipose tissue (scBAT) is situated in the intermediate layer of the neck and thus cannot be accessed as readily.
To facilitate the study of newly identified mouse scBAT, presented herein is a protocol detailing the steps to dissect intact scBAT from postnatal and adult mice. Due to scBAT&#39;s small size relative to other adipose depots, procedures have been modified and optimized specifically for processing scBAT. Among these modifications is the use of a dissecting microscope during tissue collection to increase the precision and homogenization of frozen scBAT samples to raise the efficiency of subsequent qPCR analysis. With these optimizations, the identification of, morphological appearance of, and molecular characterization of the scBAT can be determined in mice.

מחבר זרקור: אופטימיזציה של מיצוי רקמת שומן חום Supraclavicular לניתוח גנטי

Here, we provide a practical procedure for dissecting and performing histological and gene expression analyses of murine supraclavicular brown adipose tissue.

דיסקציה, עיבוד היסטולוגי וניתוח ביטוי גנים של רקמת שומן חומה סופרקלאביקולרית מורין

Brown adipose tissue (BAT)-mediated thermogenesis plays an important role in the regulation of metabolism, and its morphology and function can be greatly ...

לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

הפרדת immunomagnetic של שומן דיפו ספציפי Sca1

הכנה, מתן והערכה של ספיגה תאית ספציפית לרקמת in vivo של ליפוזומים בעלי תווית צבע פלואורסצנטי

בידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני שומן תוך-בטניים של מורין

Lymphatic and Blood Network Analysis During Obesity

זיהוי וניתוח של מחסני עכבר מגוונים

בידוד וזיהוי של תאי אנדותל וסקולריים ממחסני שומן נפרדים ליישומים במורד הזרם

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

דיסקציה, עיבוד היסטולוגי וניתוח ביטוי גנים של רקמת שומן חומה סופרקלאביקולרית מורין