作者は感謝して、米国森林局森林健康保護の評価の監視と発展を支えてきた特殊な技術開発プログラム、強く、ブナカイガラムシの影響を受けやすい木を識別するために、ここで説明されたプロトコルの変更やアプリケーションからの資金調達を認める。また、当社のアメリカブナ抵抗スクリーニングプログラムの彼らの継続的なパートナーシップとサポートのため、オハイオ州カートランド、ホールデン樹木園に感謝しています。

1植物材料：熟フィールド木、鉢植え苗、または鉢植え移植片<ol><li>フィールドテストでは、可能な抵抗のためのテストのためのスケールの侵入や病気の兆候を示さない、成熟した健康的なアメリカのブナの木を選択します。目に見えて影響を受けやすい木はまた、対照（ 図1）として使用されるように識別される必要があろう。 </li><li>鉢植えの苗や移植片をテストするための、収集·コッホ＆キャリー、2004またはキャリーら 、2013に記載されたグラフト穂に記載されているようにbeechnuts発芽。 </li><li> 47グラムの微量栄養素​​、477グラム徐放性肥料15N-3.9P-9.9K、700グラムの粗パーライトと2.8立方あたり75グラムの硫酸アルミニウムを改正ポッティング土壌ミックスの苗や移植片を育てる。フィートバッグ。生育期の後半で必要に応じて、200 ppmの窒素において、可溶性17N-1.3P-14.1K毎週植物を肥やす。 </li><li>生育期間中は、日陰​​の家の中で植物を保つ。植物は前にそれらを移動する秋に休眠外に行くことを許可する制御された温度貯蔵施設（〜4℃）に11月から4月を通して。 </li></ol>ブナスケール卵の2。コレクション<ol><li> BBDが出没するスタンドでは、八月中旬まで月中旬から通常豊富な卵の存在を確認するために手虫眼鏡で（簡単に「白い」外観、 図1Aで識別される）に大きくはびこっ木を検査します。 </li><li>プラスチック密封可能な1ガロンの収集袋（ 図1B）に、ゆっくりと大人のカイガラムシ、卵やその他の破片の白いワックス状の塊を磨くために絵筆を使用しています。少なくとも12メートル離れて三つの異なる木の最小値から収集します。 </li><li>必要に応じて、4℃で2週間まで密封された収集袋に卵を保管乾燥から卵を防ぐために、バッグの内側に湿らせたポリエチレンフォームのテープの小片（2.5cm角）。 </li><li>大人（0.60ミリメートル）とdebriからスケールの卵（0.15×0.25ミリメートル）を分離するS、2 &#39;塩ビ管の短い部分と250ミクロンのナイロンメッシュの正方形の一枚（ 図2）をサポートするカップリングを使用してふるいを構築する。 </li><li>ふるい上に収集袋から大人、ワックス、卵、破片の混合物を空にして静かに以下のガラスシャーレにメッシュを通過するように卵を奨励するために、小さなペイントブラシを使用しています。彼らはそれが困難に卵を移動すること、より多くの静電気を保持するため、プラスチック製ペトリ皿は避けるべきである。卵の前と後の篩い分けを図3に示す。 </li><li>精製された卵は、少なくとも1週間、4℃でペトリ皿に格納することができる。乾燥から卵を防ぐために、蓋に泡の湿った部分をテープで固定し、パラフィルムで密封する。 </li></ol> 3。卵生存率アッセイ<ol><li>卵の生存率を評価するために、ガラスを60mmペトリ皿（ 図4Aの底部の周囲にワセリンの薄いリングを適用するために10ccのシリンジを使用し</strongの&gt;）。 </li><li> 、リングの中心に、約100の卵を移すシャーレにふたを置いて、パラフィルムで密封する。卵は事前のアッセイ開始まで4℃で保存した場合に密封されたペトリ皿で​​2週間、3週間、室温で邪魔されずに残ることができます。 </li><li>孵化し幼虫は、石油ゼリー中のスタックになり、簡単にカウントすることができ、空の卵は簡単に自分の色や光沢（ 図4B）で孵化していない卵から区別されます。空の卵を加え、残りのフル卵の合計によって幼虫の数を割ることによって実行可能性を計算する。良好な生存率は75％〜90％の孵化した卵の範囲であるべきである。 </li></ol>分野における大規模な熟ぶなの4。スケール抵抗上映<ol><li>定量試験のため、解剖顕微鏡を使用して、小さなへらを使って500の卵を数える優しくポリエチレンフォームのpredampened、オープンセル10×15×1.3センチメートルの長方形の中心を横断して振りかける。へ泡を減衰させる、できるだけ多くの水を絞り出す、それを濡らす。定性試験では、500卵カウントアウトすることができ、小さなガラスバイアルに、約500卵の追加のバッチを測定するために使用することができる描か「充填」の行に配置された。 </li><li>樹皮に対向する卵の側にテストツリー上にフォームパッドを配置します。ロープ、ひも、より糸、プラスチックコーティングされたハードワイヤーで所定の位置にパッドを保持する。プラスチックや金属系材料ではなく、より容易に野生動物により除去された天然繊維材料よりも使用する必要があります。 </li><li>アセテート系シリコーン接着剤に沿って蒸気透過性防水ハウスラップの上部とプレカットの側面プリント23 x 30 cm片と泡試験パッド上に置きます。防水シールを作成するために木にハウスラップの端を押してください。しばらく接着剤セット（ 図5）所定の位置に保持するために、木とハウスラップの周りにナイロンひもやプラスチックコーティングされたハードワイヤーを配置します。 </li><li> 2の最小値を置き好ましくは木の幹の両側の各テストツリー上のテスト·パッド、。各サイトで、対照として（明白な自然のスケールの侵入で）少なくとも2の影響を受けやすい木にテストパッドを配置。対照木にテストパッドを配置する前に、会社を使用して、任意の天然に存在するカイガラムシや卵を取り除くには、ブラシを毛先。 注：卵フォームパッドが蔓延レベルが低い地域では特に役立ちますスケールの卵を、飼育する目的のために木にも配置することができます。 </li></ol>鉢植えの苗や移植片の5。スケール抵抗上映<ol><li>テストのために、それらの上に配置された少なくとも2つの別々のテストパッドを持っているのに十分な高、1センチメートル（5センチメートル土壌線の上キャリパー）の最小径と鉢植えの木を選択します。必要なときにテストパッド用のスペースを確保するために、小さな側枝を剪定。 </li><li> 150卵を数え、プレカットの上にそれらを散乱させる解剖顕微鏡を使用し、2.5×7.6 X 1.3センチメートル気泡ポリエチを湿らレンのフォームパッド。 </li><li>プラスチック被覆ワイヤーを使用して、樹皮に対する卵の側に苗ためにフォームパッドを貼付。ちょうど泡の上に苗の周りのハウスラップの小さな正方形をラップした（ 図6Aを参照）アセテート系シリコーンでそれを封印。 </li><li>コントロールとして苗家族や移植片の影響を受けやすい知ら含まれています。 </li></ol> 6。データ収集注：約52から57週の試験木にフォームパッドと卵を置いた後、データを収集することができる。なお、これは大人が再生する能力を決定することができるように、卵を産み始めた後まで行われないことが重要である。いくつかの耐性の木にそれは成人の数が少ないが、全く再生が発生していないとの確立を参照することも珍しくありません。 <ol><li>慎重にフォームパッドを取り外し、手レンズや拡大鏡（10倍）を使用して、樹皮上に確立大人のカイガラムシの数を数える。 </li><li>フォームパッドが除去されると、それはuのではないいくつかの大人と泡と木の外に引っ張られる最も卵のクラスタ用ncommonます（ 図7を参照）。解剖顕微鏡を使用して、フォームパッドに付着し残っている卵のクラスタと大人を数える。 </li></ol>

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	<li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+to+artificially+infest+beech+bark+with+the+scale,+Cryptococcus+fagisuga+(Lindinger).">A technique to artificially infest beech bark with the scale, Cryptococcus fagisuga (Lindinger).</a> U.S. Forest Service. , (1982).</li><li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+beech+resistance+to+Cryptococcus+fagisuga.">American beech resistance to Cryptococcus fagisuga.</a> Proceeding, IUFRO beech bark disease working party conference. , 38-42 (1983).</li><li>Ehrlich, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+beech+bark+disease:+a+nectria+disease+of+Fagus,+following+Cryptococcus+fagi.">The beech bark disease: a nectria disease of Fagus, following Cryptococcus fagi.</a> 10, 593-692 (1934).</li><li>Papaik, M. J., Canham, C. D., Latty, E. F., Woods, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+an+introduced+pathogen+on+resistance+to+natural+disturbance:+beech+bark+disease+and+withdrow.">Effects of an introduced pathogen on resistance to natural disturbance: beech bark disease and withdrow.</a> 35, 1832-1843 (2005).</li><li>Miller-Weeks, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+beech+bark+disease+in+New+England+and+New+York.">Current status of beech bark disease in New England and New York.</a> Proceeding, IUFRO beech bark disease working party conference. , 21-23 (1983).</li><li>Houston, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beech+bark+disease:+The+aftermath+forests+are+structured+for+a+new+outbreak.">Beech bark disease: The aftermath forests are structured for a new outbreak.</a> J. For. 73, 660-663 (1975).</li><li>Twery, M. J., Patterson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+beech+bark+disease+and+its+effects+on+species+composition+and+structure+of+northern+hardwood+stands+in+central+New.">Variations in beech bark disease and its effects on species composition and structure of northern hardwood stands in central New.</a> 14, 565-574 (1984).</li><li>Jakubus, W. J., McLaughlin, C. R., Jensen, P. G., McNulty, S. A., Evans, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternate+year+beechnut+production+and+its+influence+on+bear+and+marten+populations.">Alternate year beechnut production and its influence on bear and marten populations.</a> Beech Bark Disease: Proceedings of the Beech Bark Disease Symposium. , 79-87 (2005).</li><li>Koch, J. L., Carey, D. W., Mason, M. E., Nelson, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+beech+scale+resistance+in+full-+and+half-sib+families.">Assessment of beech scale resistance in full- and half-sib families.</a> Can. J. For. Res. 40, 265-272 (2010).</li><li>Koch, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beech+bark+disease:+The+oldest+&#8220;new&#8221;+threat+to+American+beech+in+the+United+States.">Beech bark disease: The oldest &#8220;new&#8221; threat to American beech in the United States.</a> Outlooks Pest Manag. 21, 64-68 (2010).</li><li>Koch, J. L., Mason, M. E., Carey, D. W., Palmieri, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+resistance+to+beech+bark+disease:+improvements+and+results+from+seedlings+and+grafted+field+selections.">Screening for resistance to beech bark disease: improvements and results from seedlings and grafted field selections.</a> Proceedings of the 4th International Workshop on Genetics of Host-Parasite Interactions in Forestry. , (2012).</li><li>Leak, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fifty+year+impacts+of+the+beech+bark+disease+in+the+Bartlett+Experimental+Forest,+New+Hampshire.">Fifty year impacts of the beech bark disease in the Bartlett Experimental Forest, New Hampshire.</a> Northern J. Appl. For. 23, 141-143 (2006).</li><li>Koch, J. L., Carey, D. W., Yaussy, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+cross-pollinations+with+American+beech+trees+that+are+resistant+to+beech+bark+disease.">Controlled cross-pollinations with American beech trees that are resistant to beech bark disease.</a> Proceedings of the 14th Central Hardwood Forest Conference. , 358-364 (2004).</li><li>Carey, D. W., Mason, M. E., Bloese, P., Koch, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+callusing+for+propagation+of+American+beech+by+grafting.">Hot callusing for propagation of American beech by grafting.</a> HortSci. 48, 620-624 (2013).</li><li>Koch, J. L., Carey, W. W., Evans, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+resistance+of+American+beech+to+beech+bark+disease:+knowledge+through+2004.">The genetics of resistance of American beech to beech bark disease: knowledge through 2004.</a> Beech Bark Disease: Proceedings of the Beech Bark Disease Symposium. , 98-105 (2005).</li></ol>

著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。

このアッセイの成功のために必要な重要なステップは、卵と試験された各サイトで、鉢植えの材料との影響を受けやすいコントロールの使用上の実行可能性テストを実行することを含む。これは、木または実生ごとに複数のテスト用パッドを使用することも重要である。我々は、フィールド内の鉢植えの植物に、より制御された試験の両方において、頻繁なエラーの源は、パッド不良である?...

ブナ樹皮病（BBD）が1890年代後半3ノバスコシア州のカナダの州では、侵襲的なブナカイガラムシの導入以来、北米でクリプトコッカスfagisugaをアメリカのブナに有害な影響を与えました。ブナカイガラムシが真菌（NeonectriaのditissimaまたはNeonectriaのfaginata）のNeonectria種の 1による感染のために玄関を提供する小さな亀裂を作成樹皮にその送りスタイを挿入すると、この昆虫病錯体が開始されます。真菌菌糸が成長するにつれ、組織の大部分は、最終的には完全に木を環状剥皮、死ぬかもしれない。病気による被害は強風4でスナップにそれが発生しやすいこと、木を弱める。疾患の最初の波の死亡率レベルは50％5と高いことが報告されている。潰瘍は、木材製品としてツリーの値を小さく形成するように、生存している木はしばしばひどく変形される。0;このような木は、確立スタンド6の経済的、生態学的価値を減らすことから、他のより望ましい種を防ぐ「ブナの藪」の形成につながるルート発芽する傾向を持っている。ブナ樹皮病はアメリカのブナの絶滅につながる可能性はありませんが、それは野生生物の7,8のために食料や生息地の減少につながる物と健康をスタンド変える。 何年も前からBBDの影響を受け、スタンドでは、疾患の症状がないままの木が​​報告されている。人工接種試験は、これらの木がカイガラムシ2に耐性であることが示されている。スケールの侵入がないと、Neonectria感染の機会がほとんどないが、真菌の影響を最小限に抑えることがある。前のスケールの侵入がない場合のNeonectriaの感染によるアメリカのブナにおける大規模な死亡率は決してありません報告されたので、BBDへの抵抗におけるブナのスケール昆虫結果に対する抵抗されて。 BBDの管理に関する最近の研究では、識別、繁殖、飼育、およびブナカイガラムシに対する抵抗性とアメリカのブナの木の保持に焦点を当てている。遺伝学的研究は、カイガラムシに対する耐性が遺伝性であり、耐木の慎重な選択および繁殖は、単一世代9の有意な改善をもたらすことができることを示している。この知見は、復元作付け10,11のための遺伝的に多様なBBD耐性種子の供給源を提供するために、耐性のアメリカのブナの地域採種園を確立するために、米国の州および国家森林管理者の努力に燃料を供給しています。研究はまた影響を受けやすい樹木や耐性樹木の維持を除去することにより、スタンドの遺伝学の育林操作はスタンド改良9,12をもたらすことができることを示した。 &lt;/ pの&gt; 木の改善活動を通して、または造林処方を行うを通じてBBDの管理はのために選択し、ブナのスケール性と感受性の木々の間を区別する能力を必要とします。ここで紹介する方法は、まず、人工的にブナのスケールの卵1を苗に接種するためにデイブヒューストンによって導入方法から適応されている。この方法は、耐性に関連する量的形質遺伝子座（QTL）を同定するために、または遺伝的研究に耐性と感受性の鉢植え苗木又はグラフト化ラミートを区別するためのスクリーニングツールとして使用することができる。あるいは、採種園の開発、またはフィールドでの保持のために耐性ツリーを識別するためにフィールド内の成木をスクリーニングするために使用することができる。感受性の樹木を同定し、疾患の影響を最小限にするために除去することができる。

<table><tbody><tr><td>Nylon Mesh Sheet, 250 micron</td><td><a href="http://www.amazonsupply.com/dp/B000FMWH1S/ref=sp_dp_g2c_asin" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Small Parts</a></td><td>CMN-0250-D</td><td>Mesh opening size: 250 microns square, % of open area: 34, thread diameter: 180 micron, width: 24&amp;rdquo;, Length: 12&amp;rdquo;, Package quantity: 1</td></tr><tr><td>Tyvek Home Wrap</td><td><a href="http://www.lowes.com/pd_14582-2020-D13499991_0__" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> DuPont</a></td><td>D1349991</td><td>9 ft x 150 ft roll, can ask for it to be cut in half.</td></tr><tr><td>Polyethylene foam, &amp;frac12;&amp;rdquo; thick&amp;nbsp;</td><td><a href="http://www.colsfoam.com/apcfp/products.htm" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Columbus Foam Products</a></td><td></td><td>2 ft x 50 ft roll</td></tr><tr><td>MetroMix 510</td><td><a href="http://sungro.com/products_displayProduct.php?product_id=118&amp;amp;brand_id=17" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sun Gro Horticulture</a></td><td></td><td>2.8 cu. ft. bark, peat moss, vermiculite, bark ash, starter nutrient charge (with Gypsum), slow release nitrogen and&amp;nbsp;dolomitic limestone.</td></tr><tr><td>Osmocote Plus 15-9-12</td><td><a href="http://everris.us.com/product/15-9-12" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Everris</a></td><td>E903206</td><td>Standard 3-4 month release</td></tr><tr><td>Sight Savers 10X</td><td><a href="http://www.amleo.com/Bausch---Lomb-Illuminating-Codington-Magnifier-10x/p/CM10/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Bausch &amp;amp; Lomb</a></td><td>813434</td><td>10X magnification illuminated coddington</td></tr><tr><td>Nikon Mini Field Stereoscope</td><td><a href="http://www.opticsplanet.com/nikon-fieldmicroscope.html" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Nikon</a></td><td>7314</td><td>20X magnification</td></tr><tr><td>Silicone II clear</td><td><a href="http://www.midlandhardware.com/159538.html" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> GE</a></td><td>159538</td><td>2.9 oz clear window &amp;amp; door caulk</td></tr></tbody></table>

a technique to screen american beech for resistance to the beech scale insect (cryptococcus fagisuga lind.)

大幅に弱体化して変形している遺族の木を残しブナ樹皮病（BBD）初期の死亡率の高レベルの結果、。この疾患は、真菌のNeonectria種のいずれによる感染のエントリポイントを作成侵襲ブナカイガラムシ、 クリプトコッカスfagisugaの活動を供給することによって開始される。スケールの侵入がなければ、真菌感染症のために少し機会がある。人工的に重くBBD影響スタンドで健全な木をはびこるようにスケールの卵を使用すると、これらの木は病気の複雑な1のスケール昆虫の部分に耐性であったことを明らかにした。ここでは、フィールド内の小さな鉢植えの苗と移植片におけるスケール耐性樹木をスクリーニングするために使用することができヒューストン2による人工侵入技術をベースに我々が開発したプロトコルを提示する。スケール耐性樹木の同定はツリーをBBDの管理の重要な要素である改善プログラムや育林操作。

図6は、感受性の異なる程度を示す抵抗性苗（C）および2の影響を受けやすい苗（D、E）を示しています。人工侵入テストを設定した後の影響を受けやすく、成熟した木は57週間どのように見えるかの例を図5（b）に示します。発泡体が離れて木から剥離するときにツリーとフォームパッドの両方からデータを収集することが必須である理由で?...

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A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect Cryptococcus fagisuga Lind.

ブナ樹皮病は、樹皮における真菌のエントリポイントを作成ブナスケール昆虫の活動を供給することによって開始される。カイガラムシに耐性のある木々はまた、疾患抵抗性である。ここで我々はブナの規模耐性について、個々のブナの木をスクリーニングするために開発したプロトコルを提示する。

ブナスケール昆虫への抵抗のためのアメリカのブナを（画面ための技術<em&gt;クリプトコッカスfagisuga</em&gt;リンド。）

Beech bark disease (BBD) results in high levels of initial mortality, leaving behind survivor trees that are greatly weakened and deformed.&#160;The ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Environment

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect (Cryptococcus fagisuga Lind.)

9.5K ビュー.  US Forest Service. ブナ樹皮病は、樹皮における真菌のエントリポイントを作成ブナスケール昆虫の活動を供給することによって開始される。カイガラムシに耐性のある木々はまた、疾患抵抗性である。ここで我々はブナの規模耐性について、個々のブナの木をスクリーニングするために開発したプロトコルを提示する。 

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Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms. Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear young, feed, or hide from natural enemies or harsh environmental conditions outside of the tree. Organisms that persist within the phloem habitat are difficult to observe given their location under bark. We provide a technique to preserve intact phloem and prepare it for experimentation with invertebrates and microorganisms. The apparatus is called a &#8216;phloem sandwich&#8217; and allows for the introduction and observation of arthropods, microbes, and other organisms. This technique has resulted in a better understanding of the feeding behaviors, life-history traits, reproduction, development, and interactions of organisms within tree phloem. The strengths of this technique include the use of inexpensive materials, variability in sandwich size, flexibility to re-open the sandwich or introduce multiple organisms through drilled holes, and the preservation and maintenance of phloem integrity. The phloem sandwich is an excellent educational tool for scientific discovery in both K-12 science courses and university research laboratories.

We provide a technique to preserve intact tree phloem and prepare it for observation. We create an apparatus called a phloem sandwich that allows for the introduction and observation of arthropods, microbes, and other organisms that inhabit phloem tissues.

ツリー組織内節足動物と微生物群集を研究するための技術

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

環境学

Building Double-decker Traps for Early Detection of Emerald Ash Borer

Emerald ash borer (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire), the most destructive forest insect to have invaded North America, has killed hundreds of millions of forest and landscape ash (Fraxinus spp.) trees. Several artificial trap designs to attract and capture EAB beetles have been developed to detect, delineate, and monitor infestations. Double-decker (DD) traps consist of two corrugated plastic prisms, one green and one purple, attached to a 3 m tall polyvinyl chloride (PVC) pipe supported by a t-post. The green prism at the top of the PVC pipe is baited with cis-3-hexenol, a compound produced by ash foliage. Surfaces of both prisms are coated with sticky insect glue to capture adult EAB beetles. Double-decker traps should be placed near ash trees but in open areas, exposed to sun. Double-decker trap construction and placement are presented here, along with a summary of field experiments demonstrating the efficacy of DD traps in capturing EAB beetles. In a recent study in sites with relatively low EAB densities, double-decker traps captured significantly more EAB than green or purple prism traps or green funnel traps, all of which are designed to be suspended from a branch in the canopy of ash trees. A greater percentage of double decker traps were positive, i.e., captured at least one EAB, than the prism traps or funnel traps that were hung in ash tree canopies.

Effective traps to attract and capture the emerald ash borer (EAB) are a key element of detecting and managing this invasive pest. Double-decker traps, placed in full sun near ash trees, incorporate visual and olfactory cues and were more likely to capture EAB than other trap designs in field trials.

エメラルド灰中くり盤の早期発見のため 2 階建てトラップを構築

Emerald ash borer (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire), the most destructive forest insect to have invaded North America, has killed hundreds of millions ...

The Hawaii Protocol for Scientific Monitoring of Coffee Berry Borer: a Model for Coffee Agroecosystems Worldwide

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at capturing and quantifying the dynamics and impact of this invasive insect pest as well as the development of its host plant across a heterogeneous landscape. The cornerstone of this comprehensive monitoring system is timely georeferenced data collection on CBB movement, coffee berry infestation, mortality by the fungus Beauveria bassiana, and coffee plant phenology via a mobile electronic data recording application. This electronic data collection system allows field records to be georeferenced through built-in global positioning systems, and is backed by a network of weather stations and records of farm management practices. Comprehensive monitoring of CBB and host plant dynamics is an essential part of an area-wide project in Hawaii to aggregate landscape-level data for research to improve management practices. Coffee agroecosystems in other parts of the world that experience highly variable environmental and socioeconomic factors will also benefit from implementing this protocol, in that it will drive the development of customized integrated pest management (IPM) to manage CBB populations.

Comprehensive monitoring of coffee berry borer and host plant dynamics is essential for aggregating landscape-level data to improve management of this invasive pest. Here, we present a protocol for scientific monitoring of coffee berry borer movement, infestation, mortality, coffee plant phenology, weather, and farm management via a mobile electronic data recording application.

コーヒーのベリーの穴あけ器の科学的なモニタリングのためのハワイ プロトコル: コーヒー生態系世界のモデル

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at ...

Evaluating Dryocosmus Kuriphilus-induced Damage on Castanea Sativa

Dryocosmus kuriphilus Yasumatsu has become a major pest for Castaneasativa since its arrival in Europe. Its galling activity results in the formation of different gall types and prevents the development of normal shoots. Repeated and uncontrolled attacks cause, besides the production of galls and the attendant gall-related reduction in leaf area, progressive corruption of the branch architecture, including the death of branch parts, and an increase in dormant bud activation. Thus far, there have been few attempts to quantify branch architecture damage. Further, the different methods for assessing infestation degree (MAID) that have been developed focus only on the galls' presence and abundance.
Using the leaf area to sapwood area relationship as a green biomass indicator, we developed in a previous study a damage composite index (DCI) that takes into account the most important branch architectural features, allowing for realistic damage assessment during the entire epidemic process. 
The aim of this study is to present this novel method and highlight differences in the damage description with respect to other broadly used indices. Results show how the DCI depicts branch damage better, especially during the epidemic peak, compared to MAID, which tend to underestimate it. We conclude by suggesting how to properly evaluate the overall impact of the pest by means of our composite damage index, the infestation degree using classic methods, and crown transparency evaluations.

Evaluating Dryocosmus Kuriphilus-induced Damage on Castanea Sativa

It is common practice to assess the damage caused by Dryocosmus kuriphilus by considering the abundance of galls alone rather than by also taking related branch corruption into consideration. We propose a composite damage index that takes into account the most important branch features, thus enabling more realistic damage assessment.

クリタマバチの評価-ヨーロッパグリを照射

Dryocosmus kuriphilus Yasumatsu has become a major pest for Castaneasativa since its arrival in Europe. Its galling activity results in the formation of ...

A Method for Quantifying Foliage-Dwelling Arthropods

Terrestrial arthropods play an important role in our environment. Quantifying arthropods in a way that allows for a precise index or estimates of density requires a method with high detection probability and a known sampling area. While most described methods provide a qualitative or semi-quantitative estimate adequate for describing species presence, richness, and diversity, few provide an adequately consistent detection probability and known or consistent sampling areas to provide an index or estimate with adequate precision to detect differences in abundance across environmental, spatial, or temporal variables. We describe how to quantify leaf-dwelling arthropods by sealing the leaves and end of branches in a bag, clipping and freezing the bagged material, and rinsing the previously frozen material in water to separate arthropods from the substrate and quantify them. As we demonstrate, this method can be used at a landscape scale to quantify leaf-dwelling arthropods with adequate precision to test for and describe how spatial, temporal, environmental, and ecological variables influence arthropod richness and abundance. This method allowed us to detect differences in density, richness, and diversity of leaf-dwelling arthropods among 5 genera of trees commonly found in southeastern deciduous forests.

We describe how to quantify leaf dwelling arthropods by sealing the leaves and end of branches in a bag, clipping and freezing the bagged material, and rinsing the previously frozen material in water to separate arthropods from the substrate for quantification.

葉住まいの節足動物を定量化する方法

Terrestrial arthropods play an important role in our environment. Quantifying arthropods in a way that allows for a precise index or estimates of density ...

Methodology to Test Control Agents and Insecticides Against the Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei

Prior to recommending insecticides to treat the coffee berry borer (CBB) Hypothenemus hampei, it is valuable to know the mortality and repellency of these insecticides against adult insects or their impact on reproductive output. However, currently available methods assess adult mortality only, limiting the selection of novel insecticides with a different mode of action. In this work, different experimental methods were examined to identify the diverse effects on the CBB under laboratory conditions. For this, green coffee fruits (GFs) were collected and disinfected by immersion in sodium hypochlorite solution followed by UV light irradiation. In parallel, CBB adults from a colony were disinfected by immersion in sodium hypochlorite solution. To assess fruit protection (preinfestation), the fruits were placed in plastic boxes, and the insecticides were applied. Then, the CBB adults were released at a rate of two CBBs per GF. The GFs were left under controlled conditions to evaluate CBB infestation and survival after 1, 7, 15, and 21 days. To evaluate insecticide efficacy after CBB infestation (postinfestation), CBB adults were released to the GFs in a 2:1 ratio for 3 h at 21 &#176;C. Infested fruits showing CBB adults with their abdomens partially exposed were selected and placed in 96-well racks, and the CBBs boring into the fruits were treated directly. After 20 days, the fruits were dissected, and the CBB biological stages inside each fruit were recorded. The GFs served as substrates that mimic natural conditions to evaluate toxic, chemical, and biological insecticides against the CBB.

Methodology to Test Control Agents and Insecticides Against the Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei

A method using green coffee fruits (GFs) was developed to test the toxicity of insecticides against the coffee berry borer (CBB). Insecticides or toxic substances were applied to disinfected GFs before or after CBB infestation. Insect mortality, repellency, and reproductive capacity, in addition to other parameters, were evaluated.

コーヒーベリーボーラーハイポテネマスハンペイに対する対照剤および殺虫剤をテストするための方法論

Prior to recommending insecticides to treat the coffee berry borer (CBB) Hypothenemus hampei, it is valuable to know the mortality and repellency of these ...

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products are labeled for an individual pest within a particular crop system, chemical control options are limited. Therefore, the same product(s) are used repeatedly and continual selection pressure is placed on the target pest. There are both financial and environmental costs associated with the development of resistant populations. The cost of pesticide resistance has been estimated at approximately $ 1.5 billion annually in the United States. This paper will describe protocols, currently used to monitor arthropod (specifically insects) populations for the development of resistance. The adult vial test is used to measure the toxicity to contact insecticides and a modification of this test is used for plant-systemic insecticides. In these bioassays, insects are exposed to technical grade insecticide and responses (mortality) recorded at a specific post-exposure interval. The mortality data are subjected to Log Dose probit analysis to generate estimates of a lethal concentration that provides mortality to 50% (LC50) of the target populations and a series of confidence limits (CL's) as estimates of data variability. When these data are collected for a range of insecticide-susceptible populations, the LC50 can be used as baseline data for future monitoring purposes. After populations have been exposed to products, the results can be compared to a previously determined LC50 using the same methodology.

This manuscript demonstrates and discusses techniques used to survey pesticide susceptibility and detect resistance to contact and systemic pesticides in arthropod pests.

モニタリングの殺虫剤抵抗性のためのバイオアッセイ

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products ...

生物学

Characterizing Herbivore Resistance Mechanisms: Spittlebugs on Brachiaria spp. as an Example

Plants can resist herbivore damage through three broad mechanisms: antixenosis, antibiosis and tolerance1. Antixenosis is the degree to which the plant is avoided when the herbivore is able to select other plants2. Antibiosis is the degree to which the plant affects the fitness of the herbivore feeding on it1.Tolerance is the degree to which the plant can withstand or repair damage caused by the herbivore, without compromising the herbivore's growth and reproduction1. The durability of herbivore resistance in an agricultural setting depends to a great extent on the resistance mechanism favored during crop breeding efforts3.
We demonstrate a no-choice experiment designed to estimate the relative contributions of antibiosis and tolerance to spittlebug resistance in Brachiaria spp. Several species of African grasses of the genus Brachiaria are valuable forage and pasture plants in the Neotropics, but they can be severely challenged by several native species of spittlebugs (Hemiptera: Cercopidae)4.To assess their resistance to spittlebugs, plants are vegetatively-propagated by stem cuttings and allowed to grow for approximately one month, allowing the growth of superficial roots on which spittlebugs can feed. At that point, each test plant is individually challenged with six spittlebug eggs near hatching. Infestations are allowed to progress for one month before evaluating plant damage and insect survival. Scoring plant damage provides an estimate of tolerance while scoring insect survival provides an estimate of antibiosis. This protocol has facilitated our plant breeding objective to enhance spittlebug resistance in commercial brachiariagrases5.

Characterizing Herbivore Resistance Mechanisms: Spittlebugs on Brachiaria spp. as an Example

This video explains mechanisms of host plant resistance to herbivory and demonstrates a no-choice test that estimates the relative contributions of antibiosis and tolerance to spittlebug resistance in Brachiaria spp.

特徴付ける草食動物の耐性機構：上Spittlebugs Brachiaria属。例として

Plants can resist herbivore damage through three broad mechanisms: antixenosis, antibiosis and tolerance1. Antixenosis is the degree to which the plant is ...

Isolation and Selection of Entomopathogenic Fungi from Soil Samples and Evaluation of Fungal Virulence against Insect Pests

Entomopathogenic fungi (EPF) are one of the microbial control agents for integrated pest management. To control local or invasive pests, it is important to isolate and select indigenous EPF. Therefore, the soil bait method combined with the insect bait (mealworm, Tenebrio molitor) system was used in this study with some modifications. The isolated EPF were then subjected to the virulence test against the agricultural pest Spodoptera litura. Furthermore, the potential EPF strains were subjected to morphological and molecular identifications. In addition, the conidia production and thermotolerance assay were performed for the promising EPF strains and compared; these data were further substituted into the formula of effective conidia number (ECN) for laboratory ranking. The soil bait-mealworm system and the ECN formula can be improved by replacing insect species and integrating more stress factors for the evaluation of commercialization and field application. This protocol provides a quick and efficient approach for EPF selection and will improve the research on biological control agents.

Here we present a protocol based on the&#160;mealworm (Tenebrio molitor)-bait system that was used for isolating and selecting entomopathogenic fungi (EPF) from soil samples. An effective conidia number (ECN) formula is used to select high stress tolerant EPF based on physiological characteristics for pest microbial control in the field.

土壌サンプルからの病原性真菌の単離と選択と昆虫害虫に対する真菌性毒性の評価

Entomopathogenic fungi (EPF) are one of the microbial control agents for integrated pest management. To control local or invasive pests, it is important ...

<meta charset="utf8"></head><body>森林ウッドボーラーからの昆虫病原性真菌資源の探索

Isolation, Behavioral Identification, and Pathogenicity Assessment of Entomopathogenic Fungi from a Forest Wood Borer

Forest wood borers (FWB) cause severe tree damage and economic losses worldwide. The release of entomopathogenic fungi (EPF) during the FWB emergence period is considered an acceptable alternative to chemical control. However, EPF resources have been significantly less explored for FWBs, in contrast to agricultural insect pests. This paper presents a protocol for exploring EPF resources from FWBs using wild Monochamus alternatus populations as an example. In this protocol, the assignment of traps baited with M. alternatus attractants to different populations guaranteed the collection of adequate samples with natural infection symptoms, during the emergence periods of the beetle. Following finely dissecting integuments and placing them onto a selective medium, fungal species were isolated from each part of beetle bodies and identified based on both molecular and morphological traits.
Several fungal species were certified as parasitic EPFs via re-infection of healthy M. alternatus with spore suspensions. Their behavioral phenotypes on M. alternatus were observed using scanning electron microscopy and further compared with those on the Coleopteran model insect Tribolium castaneum. For EPFs that present consistent parasitism phenotypes on both beetle species, evaluation of their activities on T. castaneum provided valuable information on lethality for future study on M. alternatus. This protocol helped the discovery of EPF newly reported on M. alternatus populations in China, which could be applied as an efficient approach to explore more EPF resources from other FWBs.

<meta charset="utf8"></head><body>著者スポットライト:森林ウッドボーラーの生物的防除アプリケーションのための野生の Monochamus alternatus 個体群における昆虫病原性真菌の評価

Here we present a protocol for obtaining entomopathogenic fungi from a forest wood borer and a substitutive way to evaluate their entomopathogenic activities using a Coleopteran model insect. This method is efficient and convenient for exploring entomopathogenic fungal resources from wood-boring insect pests in natural forests.

森林ウッドボーラーからの昆虫病原性真菌の分離、行動同定、および病原性評価

Forest wood borers (FWB) cause severe tree damage and economic losses worldwide. The release of entomopathogenic fungi (EPF) during the FWB emergence ...

ブナスケール昆虫への抵抗のためのアメリカのブナを（画面ための技術

要約

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この動画の章

ツリー組織内節足動物と微生物群集を研究するための技術

エメラルド灰中くり盤の早期発見のため 2 階建てトラップを構築

コーヒーのベリーの穴あけ器の科学的なモニタリングのためのハワイプロトコル: コーヒー生態系世界のモデル

クリタマバチの評価-ヨーロッパグリを照射

葉住まいの節足動物を定量化する方法

コーヒーベリーボーラーハイポテネマスハンペイに対する対照剤および殺虫剤をテストするための方法論

モニタリングの殺虫剤抵抗性のためのバイオアッセイ

特徴付ける草食動物の耐性機構：上Spittlebugs Brachiaria属。例として

土壌サンプルからの病原性真菌の単離と選択と昆虫害虫に対する真菌性毒性の評価

森林ウッドボーラーからの昆虫病原性真菌の分離、行動同定、および病原性評価

ブナスケール昆虫への抵抗のためのアメリカのブナを（画面ための技術

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