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非腫瘍性球の徹底的なグロスおよび標準化された切片化は、高品質で再現性のある病理組織切片を得るために重要です。成人および胎児の非腫瘍性球体の標準化された総売上高に関するガイドラインが本明細書に記載されています。グローブ セクショニングのさまざまなオプションが示され、ケースベースの意思決定の基準などについて説明します。
胎児および成人の球体の肉眼化と切片化は、眼疾患の組織病理学的評価における重要なステップです。腫瘍や、外傷、感染症、以前の外科的処置などの非腫瘍性変化などの状態を正確に診断するには、地球儀の適切な取り扱いが不可欠です。地球儀の向きに続いて外部検査が行われ、サイズ、形状、目に見える病変や異常などの特性が文書化されます。腫瘍の存在、感染性または変性性の変化、ならびに外傷または以前の手術の徴候に特に注意を払う必要があります。球体と角膜や視神経などの関連構造の測定、および胎児の目では解剖学的でタイムリーな発達が記録されます。トランスイルミネーションは、腫瘤や出血、コロボーマなどの萎縮領域での光透過率の増加によって引き起こされる可能性のある影を検出するために不可欠です。
地球の固定は、組織を保存するために4%パラホルムアルデヒドで日常的に行われます。24時間固定した後、グローブを体系的に切片化して、前房、水晶体の状態、ブドウ膜、網膜、硝子体、視神経などの眼内構造を調べます。成体の球体は通常、水平または臨床適応症に応じて垂直/斜めの平面に沿って三等分され、瞳孔視神経(PO)セクションを作成します。カロットの追加セクションは、疑わしい腫瘤や萎縮の領域など、関心のある領域を評価するために取得される場合があります。研究目的のために、さまざまな固定および切片化プロトコルが考慮される場合があります。
各肉眼切片は慎重に検査され、文書化され、顕微鏡検査のために処理され、病理学的所見が適切にサンプリングされていることを確認します。正確なグロスとセクショニングは、臨床所見と組織学的所見を相関させ、診断を容易にし、治療決定を導き、最終的に患者の転帰を改善するために重要です。グロッシングとセクショニングの標準化により、眼球の包括的な評価が保証され、眼科の進歩に貢献します。
眼球の肉眼的検査と切片化は、眼科病理学において不可欠な手順であり、さまざまな眼疾患と手術後の創傷治癒に関する貴重な洞察を提供します1。眼は高度に専門化された器官として、腫瘍(ブドウ膜黒色腫、網膜芽細胞腫など)、炎症過程(ブドウ膜炎、眼内炎など)、神経変性疾患(緑内障、加齢性黄斑変性症など)など、さまざまな病態生理学的および/または病理学的変化を起こしやすい2,3,4。外科的処置後の創傷治癒も、視力を脅かす合併症を引き起こす可能性があります。
眼科病理検査室で評価される成人の眼は、通常、腫瘍や盲目で痛みを伴う眼などの臨床上の理由で摘出されます。ほとんどの国では、剖検によるドナーの眼の調査は研究プロジェクトに限定されています。対照的に、胎児および新生児の眼は通常、剖検標本です(眼内腫瘍の臨床的疑いのある眼を除く)5,6。したがって、胎児および新生児の眼は、小児病理学などの他の分野からの所見に関連して、または法医学的剖検の一部として調査されます7。胎児と成人の両方の目にとって、グロスする前に患者の病歴を知ることは、眼の文書化方法(写真-)と切片化の方法に大きな影響を与える病理組織学的分析の適応を理解するために重要です1,3。
しかし、正確な肉眼的検査、切片作成、および文書化は、眼疾患の診断、予後、および管理に寄与する組織病理学的評価だけでなく、法医学的事件(例えば、虐待的な頭部外傷または医学的側面)8,9にとっても重要である。グロッシングでは、解剖顕微鏡または廃棄された眼科手術用顕微鏡の下で、サイズ、形状、表面特性などの特徴に焦点を当てて、地球の徹底的な外観検査が行われます(補足図S1)。地球全体(前後、水平、垂直)、角膜、視神経の測定は、キャリパー定規で慎重に行い、文書化する必要があります(図1)。斜筋と水平毛様体動脈は、地球の向きを変えるのに役立ちます。残りの縫合糸は外科的処置の指標であり、グロッシング中に取り外す必要はありません。ただし、一部の外科医は、除核中に直腸筋の1つに縫合糸を配置し、球体の除去だけでなく、オリエンテーション(局在化が報告された場合)にも役立つ場合があります。病変、変色、またはその他の異常を正確に文書化することは、これらの所見が根本的な病理への初期の手がかりを提供する可能性があるため、非常に重要です。眼内腫瘍やコロボーマなどの発達障害を検出し、以前の外科的処置の部位を特定するには、トランスイルミネーションが必須です。
グローブの切片化は、通常、組織構造を維持するために、4%パラホルムアルデヒド(4%PFA)または10%ホルマリンで固定した後に行われます。4% PFA によるルーチン固定を 24 時間行います。電子顕微鏡法では、カルノフスキー固定剤(グルタルアルデヒドを含む)や2.5%グルタルアルデヒドなどの代替固定剤を研究試料に使用できます。固定剤の切開または注入は、不必要なアーティファクトを引き起こすため、推奨されません。ただし、研究目的では、特に網膜の固定のために、PFAの浸透を改善するために地球儀を開くことができますが、これは日常的な標本にはお勧めできません。ドナーの目に関しては、合計でグロスになるか、アイバンクの強膜角膜ボタンを取り外した後にグロスになる場合があります。
切片面の選択(水平、垂直、または斜め)は、臨床上の疑いと、以前の手術部位を含む関心のある解剖学的構造に依存します(たとえば、緑内障の線維柱帯切除術、通常は12時の位置)10。日常的には、球体を水平子午線で切断して、角膜、瞳孔、水晶体、黄斑、および視神経を 1 つのセクションに持つ瞳孔視神経セクション (PO セクション) を取得します。POセクションは、垂直セクションまたは斜めセクションが実行される場合にも達成できます。ただし、このシナリオでは、黄斑は視神経と同じ部分に現れません。POセクションは、病理組織学的検査のゴールドスタンダードです。
肉眼粗化と切片化に続いて、眼内構造を徹底的に検査し、写真記録し、説明します(図1)。各眼の構造(角膜、水晶体の状態、虹彩、毛様体、脈絡膜、網膜、硝子体、視神経)は別々に検査する必要があります。可能な限り、視神経の断面を取得し、別々に提出する必要があります。このすべての検査は、臨床病理学的相関ではないにしても、少なくとも肉眼的組織学的相関の基礎を提供します。
したがって、正確なグロスおよびセクショニングプロセスは、重度の外傷、悪性腫瘍の疑い、または治療抵抗性感染症の後に組織病理学的分析のために除核球が提出されるため、臨床診療において非常に関連性があります。標準化された肉眼検査プロトコルにより、眼科病理医は地球の歴史をたどり、患者の仲間の目だけでなく将来の患者にも関連性のある最も正確な組織病理学的診断を提供することができます。次のプロトコルは、日常的な臨床診断、法医学的調査、および研究アプローチのための(非腫瘍性)胎児および成人の眼の取り扱いについて説明し、文書化しています。
ホルマリン固定検体は皮膚刺激性、発がん性、および胚毒性があるため、ホルマリン固定検体を取り扱うときは、必ず安全上の注意を守ってください11,12,13。
1. オリエンテーション
2.グロス
3. ルーチン検体の切片
4. 胎児標本の切片
注:これらは、セクション1(オリエンテーション)、2(グロッシング)、および3(ルーチン検体のセクション)に記載されている主要なプロトコルの調整のみです。
5. 法医学標本のセクション
6. 代替アプローチ
注:10,21,22を切片化する前に網膜を調査する必要がある場合は、別のアプローチを使用できます。このアプローチは、アイバンクのために強膜角膜組織を切除したドナーグローブと似ています。
7. さらなる処理
向きを変えた後、大人の目の 横方向 を決定することが可能であるべきです。しかし、これは胎児の目では不可能な場合が多いです。横方向は、正しい目が取り外され、レポートと一致していることを確認するために重要です。切片化前の 測定値 は文書化されています。特に、胎児の目の場合、ノモグラムは小眼球症などの眼の大きさの異常を除外するのに役立ちます。
患者の病歴と経照明に基づいて、 切片化 が計画されます。通常、地球儀は水平に切断されるため、上記のように水平面を適切に識別する必要があります。特定の関心領域(例えば、コロボーマ、トランスイルミネーションで特定された疑われない病変、または線維柱帯切除術などの手術部位)がある場合、切片化はそれぞれ適応されます。セクショニングの目標結果は、適切な POセクション です(図5 および 図6)。
ぎこちなく切片化された地球儀は、正確な臨床病理学的相関と組織学的所見の解釈を損ない、患者のフォローアップに影響を与える可能性があります。たとえば、考慮すべき最も脅威的な診断の1つは、交感神経性眼炎23 であり、ブドウ膜の両側性の慢性肉芽腫性炎症であり、残りの仲間の眼(交感神経眼)の失明につながる可能性があります。この実体は、すべての地球で、特に、盲目で痛みを伴う目で除外される必要があります。これは残りの眼を保存するために重要であるため、地球の代表的な切片、できればPO切片として評価に必須です。
角膜全体を誤って切断するのではなく、周辺部を切片にした場合は、角膜と前部セグメント、および失敗したPOセクションを備えたカロットを提出します。2番目のカロットは、グローブをカセットに収めるために、上記のように取り外す必要があります。特に、眼球は網膜色素上皮の 骨性化生 を示すことがあり、地球を切片にすることはほぼ不可能です。5%硝酸で24時間、続いて5%リチウムまたは硫酸ナトリウム溶液で24時間地球を脱灰し、水道水で24〜48時間保存し、地球を切断することを再試行します。グローブを切片にできるまで脱灰を繰り返します。最後に、すべての地球の写真記録を実行する必要があります。これは法医学的な理由だけでなく、予期せぬ組織学的所見が発生した場合にも役立ちます。
図1:非腫瘍性の眼の調製、向き付け、および切片化のためのフローチャートは、チェックリストのようなアプローチで関連するステップをリストアップしています。 略語:LED =発光ダイオード。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図 2: 向き。 角膜は正面から見るとはっきりと見えます。(A)4つの直筋の挿入は矢印で強調表示されています。(B)視神経(アスタリスク)は、後ろから見える。長い毛様体動脈(矢印)は水平子午線を示します。下斜筋(矢じり)の典型的な肉質の挿入は、ほぼ時間的です。渦状静脈のうち2つは細い矢印で強調表示されています。(C)上斜筋(矢じり)の腱挿入は、上腹直筋と視神経との間に上にあります。渦脈は細い矢印でマークされています。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3:グロス(A)水平および垂直直径(mm)の測定(点線)。角膜の直径、例えば角膜形成術の直径の測定。(B)前後径をmm単位で測定します(赤線)と視神経の長さ(緑線)を測定します。視神経は断面(点線)され、さらなる処理のために別々に提出されます。(C)LEDライトによる地球儀の定期的な透過照明。(D)透過照明では、脈絡膜腫瘍(矢印)による影が見られます。略語:LED =発光ダイオード。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図4:眼外異物(A)包囲バンド/子宮頸管縫縮術(矢印;視神経はアスタリスクでマークされています)。(B)水平解剖後、囲むバンドはまだ球体に取り付けられています(矢印)。(C)プレート(アスタリスク)といくつかの強膜バックル(矢印)からなる歴史的な網膜剥離手術のための複数の外部異物アプリケーション。(D)対応するヘマトキシリンとエオシンの切片は、バックルの強膜内位置(矢印)と強膜外プレートのネガティブイメージ(アスタリスク)を示しています。角膜はCとDで細い矢印でマークされ、視神経はDで矢印でマークされています。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図5:セクショニング。 (A)球体は角膜を下にして配置され( 図2と同じ目)、(B)上(赤)と下(青)の断面面がマークされています。(C)断面面は、理想的には末梢の角膜/辺縁領域を通過します。(D)上カロットの除去後、漏斗状の網膜剥離が見られる。切片は角膜末梢部(矢印)にしか近づいていませんが、これも分析には十分です。(E)下カロットの除去(セクションの末梢角膜に注意してください、矢印)は、意図した瞳孔視神経セクションをもたらします。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図6:POセクションとカロット(A)POセクション、(B)スーペリアカロット、(C)インフェリアカロット。毛様体のpars plicataは、BとCの矢印で強調表示されています。臨床的に関連する詳細がないカロットは、さらに処理する必要はなく、代わりにアーカイブされます。略語:PO =瞳孔視神経。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図7:胎児および小眼科の眼 (A)通常の胎児の眼、妊娠21週、AP直径10mm。(B)鉗子で優しく押すと、水平子午線を示す長い後毛様体動脈(矢印)が現れます。(C)二切開後、硝子体動脈(矢印)を含む眼内構造を検査することができます。(D)成人の小眼科用眼。角膜は矢印で強調表示されています。(E)地球儀は二等分されていた。長後毛様体動脈は特定できませんでした。略語:AP = anterioposterior。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図8:冠状切開。 冠状切開は、眼底の死後画像化が意図されている場合に役立ちます。透過照明中、毛様体の扁平部は円形の帯状構造として識別できます。(A)メスを用いて、扁平部(点線)に円形切開を行い、前眼部を切除します。(B)網膜と視神経を文書化し、画像化することができます。(C)次に、前眼部を別々に調査します。(D)前部セグメントが除去された水平セクション。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
補足図S1:解剖顕微鏡ユニット。 廃棄された眼科手術用顕微鏡を備えたワークユニット。(A)LEDパイプ(矢印)とグロスおよびセクショニングに必要な機器。必要な材料は、(B)定規、キャリパー定規、鉗子、および(C)ミクロトーム/カミソリの刃です。成虫の球体の切片化には、ミクロトームブレード(右)をお勧めします。胎児の目やその他の眼の標本には、カミソリの刃(左)で十分です。(D)接続されたカメラで顕微鏡を解剖し、標本を文書化します。 このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。
このプロトコルは、非腫瘍性眼球の肉眼的検査を標準化することを目的としています。文献のグロージングガイドラインは、主に眼内腫瘍のある眼に焦点を当てています24,25。それぞれの切片化プロトコルは、American Academy of Ophthalmology26のウェブサイト、さまざまな大学のウェブサイト、College of American Pathologistsのウェブサイト、および眼科病理学の教科書7,10に記載されています。また、研究目的のための特定のプロトコル、例えば、眼血管系27,28,29のためのライトシート蛍光もあります。
私たちの知る限りでは、除核された非腫瘍性球の体系的なグロスに関する公開された指示はありません。特に、本ガイドラインは、核摘出標本の評価を強化することを目的としており、これは腫瘍眼とは異なり、研究の主な焦点が事前に決定されていない可能性がある点です。さらに、非腫瘍性の眼は通常、手術を含む長い眼科歴があり、眼疾患の病態生理学と創傷治癒を解明する多様な眼内変化があります。内臓摘出術(眼内構造が切除され、強膜と視神経が患者に残る)では、眼所見の正確な位置を特定することはできません。
腫瘍以外の適応症で核摘出術が必要な場合、他のすべての利用可能な治療選択肢は失敗し、患者は通常、二次性緑内障(例えば、増殖性糖尿病性網膜症または網膜中心静脈閉塞後)、重度の眼外傷、制御不能な角膜穿孔疾患、またはイライラする網膜剥離手術(網膜手術技術の向上によりまれになっている)により、盲目の痛みを伴う眼を報告しています。眼科は高度に専門化された外科分野であるため、患者の視力を維持するか、少なくとも目を痛みのない状態に保つための多くの選択肢があり、幸いなことに、上記の核摘出の理由はまれです。したがって、除核術を受ける多くの患者は、角膜形成術、圧力低下術、網膜手術などの複数の外科的介入の病歴があります。病理学のリクエストフォームに必ずしも詳細に記載されていない患者の病歴を追跡することは、眼の切片をどのように切開するかを決定するために重要です。
核摘出標本の包括的な検査は、この究極の外科的処置につながる可能性のある深刻な眼の状態をよりよく理解することにより、患者のケアを改善します。適切なグロッシングは、Eagle21で説明されているように、マルチモーダルイメージングと組織学的所見との間の相関関係も強化します。さらに、地球儀の肉眼的検査は、学生や研修医がさまざまな眼疾患の複雑さと程度、および外科的介入の影響をよりよく理解するのに役立つため、大きな教育的価値があります。
胎児の目の場合、標準化された検査は、目の奇形の正確な形態学的診断に役立ちます。胎児の剖検中に得られた他の所見と合わせて、多くの場合、症候群の正確な分類が可能になり、したがって、その後の妊娠での再発のリスクに関する親の遺伝カウンセリングが改善されます。
検体の正しい位置決めは、このプロトコルを適用する上で重要なステップです。この調査フェーズでエラーが発生すると、調査結果の説明とローカリゼーションが損なわれ、誤ったレポートが作成される可能性があります。この方法の制限要因の1つは、地球の保存です。ホルマリンを何時間も含まずに放置された標本は、自己消化の徴候を示すことがあり、免疫組織化学的染色を含む組織病理学的評価を損なう可能性があります1。さらに、フィシカルアイによく見られる建築上の歪みにより、地球儀を正しく配置し、正確で対称的な切開を行うことが難しくなる可能性があります。これを克服するには、主要な解剖学的構造を探します。
結論として、私たちは、診断精度の向上による患者ケアの改善と教育機会の提供を目指して、除核眼の包括的な検査のための体系的なプロトコルを提案します。私たちのアプローチは、標本の解剖学的構造と空間的配向の適切な同定に焦点を当てており、病理学的変化の正しい評価と文書化を保証します。非腫瘍性球体の肉眼的検査の標準化は、臨床および教育目的で記述的および診断的な眼科病理を改善し、臨床病理学的相関に関する将来の研究を支援するために、病理学研究室で実施されるべきです。
Martina C. Herwig-Carlは、Springer 2020の書籍「Fetal and Neonatal Eye Pathology」の共著者です。国際眼科病理学会(ISOP)の書記。ドイツ眼科学会(DOG)内のセクション委員会「眼科病理学」のメンバー。ARVOの「年次総会プログラム委員会」の「解剖学病理学(AP)」セクションのメンバー。フランク・G・ホルツ:アクセラ(C,F,R)、アルコン(C,F,R)、アレクシオン、アペリス(C,R)、アラガン/アッヴィ社(F,R)、バイエル(C,F,R)、ベーリンガーインゲルハイム(C)、CenterVue(F)、エレックス(R)、ジェネンテック/ロシュ(C,F,R)、ギューダー(C)、グレイバーグビジョン(C,R)、カンホン(C,F)、ハイデルベルクエンジニアリング(C,F,R)、リンバイオサイエンス(C,R)、NightStarX(F)、 ノバルティス(C、F、R)、オプトス(F)、オクスリオン(C、R)、ピクシウムビジョン(C、F、R)、ステルスバイオセラピューティクス(C、R)、ツァイス(F、R)。他の著者には、宣言すべき利益相反はありません。[C: コンサルタント;F:財政支援;R:受信者]
この研究は、ボン大学のオープンアクセス出版基金の支援を受けました。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Caliper ruler | Mauser | out of market | INOX Messchieber 0- 200 mm |
Dissecting microscope or discarded ophthalmic surgery microscope | Möller Wedel | out of market | |
Forceps | Fine Science | 11203-23 | SS INOX |
HistoBond | Marienfeld, Germany | DIN ISO 8037-1 | coated slides |
LED pipe for transillumination in a dark room | Schott, Mainz | out of market | KL150 |
Microtome blade | Feather microtome blades | N/A | A35 type |
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