Trapianto di cellule ad alta risoluzione in zebrafish embrionale e larvale

Il nostro laboratorio studia come la connettività cellulare è modellata nel sistema nervoso durante lo sviluppo e la rigenerazione. Esaminiamo come i segnali ambientali influenzano il comportamento neurale utilizzando il trapianto di cellule per affrontare il modo in cui il loro comportamento cambia quando vengono collocate in diversi ambienti genetici, spaziali o temporali. Sebbene il trapianto sia comune negli embrioni di zebrafish, viene generalmente eseguito durante le fasi di blastula e gastrula, quando le cellule sono in gran parte indifferenziate.

Questo è prezioso per generare mosaici genetici, ma limita la capacità della tecnica di interrogare come le dinamiche di segnalazione spazio-temporale influenzino lo sviluppo oltre queste fasi. Qui presentiamo un protocollo che consente il trapianto di cellule, compresi i neuroni differenziati in embrioni e larve fino ad almeno sette giorni dopo la fecondazione. Possiamo trapiantare anche solo una cellula con un'elevata risoluzione spaziale e temporale e utilizzare la marcatura genetica fluorescente per il monitoraggio a lungo termine delle cellule trapiantate nell'animale ospite.

Questo protocollo ci consente di alterare l'ambiente genetico, spaziale e temporale delle cellule in diversi stadi di sviluppo, aprendo nuove opportunità per esaminare i principi della segnalazione di stile durante lo sviluppo e la rigenerazione.