Sono stati descritti modelli di trapianto laringeo in topi e ratti. Il precedente lavoro di Senior alter si è concentrato sull'ideazione di un metodo più efficiente utilizzando le arterie carotidi del donatore per l'anastomosi, ovviando alla necessità di sezionare le arterie tiroidee superiori. In questo video, abbiamo descritto questa procedura nei topi.
Questo modello di trapianto laringeo murino consente di condurre studi immunologici con facilità e a basso costo. Sebbene tecnicamente più impegnativo a causa delle dimensioni ridotte dei vasi rispetto a un modello di ratto, questa procedura può essere eseguita in circa tre ore se si ottiene familiarità con le fasi chirurgiche. Dopo che l'animale è completamente anestetizzato, trasferire il topo nell'area di rasatura dove verrà erogato l'isoflurano all'1,5% con un litro al minuto di flusso di ossigeno tramite una maschera facciale per il mantenimento dell'anestesia.
Confermare la profondità dell'anestesia con un pizzico di punta. Rasare il petto e il collo del topo fino alla mascella e applicare la crema depilatoria. E dopo 30 secondi, pulire la crema e trasferire il mouse nell'area chirurgica.
Immobilizzare il topo e preparare l'area chirurgica tre volte con povidone-iodio e alcool, quindi drappeggiare. Fai una piccola incisione orizzontale appena superiore alla tacca soprasternale. Usando le forbici sottili, sollevare la pelle bilateralmente attraverso l'incisione fino alla mandibola e asportare un segmento di pelle a forma di trapezio.
Eliminare le ghiandole salivari bilaterali usando il cauterizzazione nella parte superiore dove viene visualizzata una piccola vena che viaggia attraverso la ghiandola. Sezionare i muscoli sternocleidomastoidei bilaterali dai tessuti circostanti e ritrarli lateralmente. Fare un'incisione della linea mediana sui muscoli della cinghia e asportarli bilateralmente facendo attenzione a non danneggiare la ghiandola tiroidea sottostante e lasciarla sul complesso laringotracheale esofageo o LTE.
Dopo questo passaggio, sono visibili arterie carotidi bilaterali. Sezionare circonferenzialmente le arterie carotidi comuni al livello della clavicola inferiormente e al livello della biforcazione carotidea superiormente. Il nervo vago e la vena giugulare interna sono sezionati liberi dalle arterie carotidi e non inclusi nell'innesto procurato.
Sezionare le arterie carotidi interne ed esterne abbastanza in alto da essere in grado di legare e dividere. Utilizzando una sutura di nylon 10-0, ligate le arterie carotidi interne da due a tre millimetri superiori alla biforcazione carotidea. Ligare le arterie carotidi esterne almeno tre millimetri sopra il punto di ramificazione dell'arteria tiroidea superiore e ligare le arterie carotidi comuni a livello dello sterno.
Tagliare tutte le navi ligate bilateralmente. Mantenere i peduncoli vascolari sulla parte superiore del complesso LTE per evitare danni accidentali durante un'ulteriore dissezione. Per evitare perdite di gas o perdita involontaria di anestesia, assicurarsi che l'animale sia scaduto prima di effettuare tagli alle vie aeree.
Transettare la trachea sotto il quinto anello tracheale e portare l'incisione attraverso l'esofago fino alla fascia prevertebrale per liberare il complesso LTE inferiormente. Liberare la trachea e l'esofago dalla fascia prevertebrale sottostante da inferiore a superiore. Creare una faringectomia anteriore appena inferiore allo ioide.
Portare l'incisione fino alla fascia prevertebrale per liberare il complesso LTE superiormente. Dividere eventuali attacchi linfoidi o del tessuto connettivo rimanenti tra il complesso LTE e il tessuto circostante. E infine, rimuovere l'innesto.
Posizionare l'innesto procurato in una capsula di Petri sterile e lavare con soluzione salina normale per eliminare eventuali coaguli di sangue. Dilatare le arterie carotidi bilaterali usando microdilatatori di un millimetro. Utilizzando un ago smussato calibro 30, iniettare circa due millilitri di soluzione salina eparinizzata in ciascuna arteria carotide per lavare l'innesto.
Sangue e soluzione salina saranno visti sciacquare fuori dall'arteria carotide controlaterale e piccole estremità dei vasi liberi che confermano intatte arterie tiroidee superiori. L'innesto può essere lasciato in soluzione salina eparinizzata e una breve pausa può essere presa per un massimo di tre ore prima di trapiantarlo nel ricevente. Preparare il topo ricevente esattamente nello stesso modo descritto per il donatore dopo l'induzione dell'anestesia, la rasatura e le fasi di preparazione chirurgica.
Iniettare nel topo ricevente un analgesico a rilascio prolungato per via sottocutanea 30 minuti prima dell'inizio dell'intervento. Usando un bisturi, fai un'incisione del collo della linea mediana che si estende dalla mascella superiormente allo sterno inferiormente. Sollevare la pelle sul lato sinistro e ritrarla lateralmente.
Asportare la ghiandola salivare sinistra cauterizzando i vasi superiori come precedentemente descritto. Asportare il tessuto adiposo e linfoide dividendo eventuali vasi visibili con cauterizzazione a bassa temperatura. Fare attenzione a non danneggiare la sottostante vena giugulare esterna.
Sezionare circonferenzialmente la vena giugulare esterna. Utilizzare almeno cinque millimetri di lunghezza libera della nave per l'anastomosi. Sezionare il muscolo sternomastoideo e ritrarlo lateralmente.
Sezionare circonferenzialmente l'arteria carotide comune dalla clavicola inferiormente fino alla biforcazione carotidea superiormente. Passare il materiale di fondo sotto la vena giugulare esterna e applicare i morsetti per vasi B-3 a doppia approssimazione. Posizionare una sutura di nylon 10-0 attraverso la parete anteriore della vena giugulare esterna nella posizione della monotomia desiderata e utilizzare la sutura per tirare anteriormente l'intento della nave.
Tagliare in profondità la sutura con micro forbici per facilitare la creazione della venotomia a fessura singola di dimensioni adeguate e per garantire che il taglio sia completamente attraverso la parete venosa. Utilizzando un ago smussato calibro 30, lavare l'interno della vena con soluzione salina eparinizzata. Posizionare il complesso LTE del donatore tra l'arteria carotide sinistra ricevente e la vena giugulare esterna sinistra.
Allineare l'estremità libera dell'arteria carotide sinistra del donatore verso la vena giugulare esterna sinistra del ricevente e smussare l'estremità usando forbici affilate. Utilizzando quattro suture interrotte in nylon 10-0, anastomosi l'arteria carotide sinistra del donatore e la vena giugulare esterna sinistra del ricevente in modo end-to-side. Far scorrere il materiale di sfondo sotto l'arteria carotide comune ricevente e applicare i morsetti dei vasi A-3 a doppia approssimazione.
Creare un'arteriotomia allo stesso modo della venotomia. Anastomosi l'arteria carotide destra del donatore all'arteria carotide sinistra ricevente in modo end-to-side. L'utilizzo di sei punti di sutura interrotti con nylon 10-0 è ideale per l'anastomosi arteriosa.
Rimuovere i morsetti sul lato venoso. Se si riscontra sanguinamento, applicare una leggera pressione con punte di cotone. Rimuovere i morsetti sull'arteria e applicare immediatamente una leggera pressione con punte di cotone.
Un certo sanguinamento è previsto al passo che di solito si ferma dopo un minuto con una leggera pressione. Controllare l'integrità del flusso sanguigno nell'arteria nella vena. Con il flusso arterioso intatto, di solito si osserva la pulsazione dell'arteria carotide del donatore e la ghiandola tiroidea del donatore cambierà dal suo colore trasparente arrossato al suo colore rossastro originale.
Si può anche osservare la colorazione rossa delle piccole navi sul complesso LTE. Chiudere l'incisione cutanea con sutura monofilamento 5-0 in modo eseguito. Applicare un adesivo cutaneo sull'incisione.
Iniettare un millilitro di soluzione salina calda per via sottocutanea per tenere conto della perdita di liquidi durante l'intervento chirurgico. Interrompere l'anestesia e trasferire il mouse in una gabbia di recupero. Osservare il mouse su una piastra riscaldante fino a quando non è completamente sveglio per evitare l'ipotermia.
Il successo chirurgico può essere valutato immediatamente dopo aver rimosso i morsetti del vaso. La figura A è rappresentativa di un intervento chirurgico di successo perché il flusso sanguigno può essere visualizzato nelle arterie carotidi della laringe del donatore e le ghiandole tiroidee sono diventate rosse. La figura B è rappresentativa di un intervento chirurgico non riuscito perché il flusso sanguigno non può essere visualizzato nelle arterie carotidi della laringe del donatore e le ghiandole tiroidee sono rimaste pallide.
Dopo 15 giorni in assenza di immunosoppressione, la maggior parte dei riceventi non ha flusso di sangue al trapianto. La pervietà dell'arteria può essere valutata macroscopicamente sezionando il complesso laringotracheale libero dal tessuto ricevente circostante e visualizzando l'anastomosi end-to-side. Grazie. Dopo aver visto questo video, dovresti capire come trapiantare eterotopicamente un complesso tracheoesofageo laringeo da un topo all'altro in circa tre ore.
Questo modello fattibile e relativamente a basso costo offre un potenziale significativo nello studio del ruolo del sistema immunitario nel rigetto del complesso laringotracheale, offrendo così il potenziale per nuove terapie nel trapianto di organi.
