Il nostro posizionamento della cuffia vascolare consente il flusso sanguigno laminare e utilizziamo un bracciale più grande per l'arteria polmonare del donatore per garantire un ampio ritorno del sangue ai riceventi. Queste modifiche utilizzate in questo protocollo riducono la probabilità di flusso sanguigno turbolento e formazione di trombi e si traducono in un miglioramento dei tassi di sopravvivenza. Questo metodo fornisce informazioni preziose per studiare le risposte immunitarie dopo il trapianto come il danno da ischemia da riperfusione e il rigetto del trapianto.
Inoltre, la nostra tecnica consente un più facile monitoraggio post-trapianto o il re-trapianto. A dimostrare questa procedura sarà il Dr.Wen Jun Li, un microchirurgo esperto nel nostro laboratorio che ha sviluppato questa tecnica. Preparare l'area chirurgica radendo i capelli dal torace e dall'addome usando un rasoio elettrico.
Somministrare 100 unità di eparina per via endovenosa nella vena del pene per i maschi o la vena giugulare esterna per maschi e femmine. Metti i topi in posizione supina con gli arti anteriori sopra la testa. Fissare gli arti anteriori e posteriori con nastro chirurgico e disinfettare la pelle con 0,75% di iodio e 70% di etanolo.
Eseguire un'incisione per la laparosternotomia mediana dall'ombelico all'angolo sternale, seguita da una toracotomia bilaterale lungo ciascun margine costale. Piegare la parete toracica anteriore sopra il collo per una completa esposizione del mediastino. Asportare il timo ed esporre la vena cava inferiore intratoracica.
Per la perfusione retrograda, iniettare 1,5 millilitri di soluzione salina di quattro gradi Celsius nella vena cava inferiore intratoracica con l'ago orientato superiormente verso l'innesto. Ligare la vena cava superiore usando un 8-0 sutura di seta e dividere distalmente. Ripetere la perfusione retrograda iniettando altri 1,5 millilitri di soluzione salina di quattro gradi Celsius attraverso la vena cava inferiore.
Ligare la vena cava inferiore usando un 8-0 sutura di seta e dividere distalmente. Sezionare l'arco aortico e il tronco dell'arteria polmonare per la raccolta dell'innesto e il transetto entrambi distale. Ligare le vene polmonari sulla superficie posteriore del cuore usando una sutura di seta 6-0 e dividere distalmente.
Eseguire la preparazione dell'innesto rimuovendo il cuore del donatore dalla cavità toracica. Metti il cuore asportato in un contenitore di plastica riempito con soluzione salina eparinizzata a quattro gradi Celsius per uno o due minuti. Trasferire l'innesto su un pallone di plastica sterile pieno di ghiaccio per il posizionamento del bracciale.
Posizionare un bracciale angiocatetere lungo un millimetro calibro 20 sopra l'arteria polmonare per il bracciale del donatore. Usando una pinza sottile, piegare delicatamente i bordi dell'arteria sopra il bracciale. Fissare la nave piegata al bracciale usando una cravatta di nylon 10-0.
Conservare il cuore del donatore in soluzione salina eparinizzata o in un'altra soluzione di conservazione a quattro gradi Celsius. Preparare l'area chirurgica radendo i capelli dalla zona cervicale usando un rasoio elettrico. Applicare un unguento oftalmico sterile non medicato sugli occhi per prevenire l'essiccazione corneale.
Metti l'animale in posizione supina con gli arti anteriori adiacenti al corpo e la testa girata leggermente a sinistra. Fissare gli arti anteriori e posteriori con nastro chirurgico. Disinfettare la pelle con 0,75% di iodio e 70% di etanolo.
Dopo aver effettuato un'incisione cervicale della linea mediana dalla mandibola inferiore allo sterno, transettare il muscolo sternocleidomastoideo destro. Asportare il lobo destro della ghiandola inframandibolare per creare spazio per l'impianto dell'innesto. Legare un nodo sulla vena giugulare esterna prossimale usando una sutura di seta 6-0.
Ligare la vena giugulare esterna distale e i rami adiacenti usando un 8-0 sutura di seta. Sutura sotto la vena e copertura con garza. Fai un'incisione trasversale attraverso la parete anteriore della vena giugulare esterna.
Posizionare una sutura di nylon 10-0 attraverso il bordo della vena giugulare esterna prossimale e il tessuto sottostante per fissare la vena durante l'inserimento del bracciale. Ligare l'arteria carotide comune destra distale usando un 8-0 sutura di seta appena inferiore alla biforcazione carotidea. Legare un nodo sull'arteria carotide comune prossimale usando una sutura di seta 6-0.
Transetto l'arteria distalmente tra le suture. Quindi posizionare un bracciale angiocatetere lungo 0,6 millilitri e 24 calibro sopra l'arteria carotide comune destra del ricevente. Usando una pinza sottile, piegare delicatamente i bordi dell'arteria sopra il bracciale.
Fissare la nave piegata al bracciale usando una cravatta di nylon 10-0. Posizionare il cuore del donatore superiore alla zona cervicale destra. Gocciolare soluzione salina fredda sull'innesto di cuore ogni pochi minuti durante l'impianto.
Posizionare una sutura di nylon 10-0 attraverso il bordo dell'aorta donatrice e attraverso un morso superficiale del tessuto sottostante per fissare l'innesto in posizione. Lavare l'aorta del donatore con 0,5 millilitri di soluzione salina eparinizzata allo 0,9%. Inserire la cuffia dell'arteria carotide comune del ricevente nell'aorta del donatore.
Assicurati l'anastomosi con un 8-0 cravatta di seta. Rimuovere la sutura dell'ancora aortica. De-aria la vena giugulare esterna lavando la vena giugulare esterna del ricevente con 0,5 millilitri di soluzione salina eparinizzata allo 0,9%.
Eseguire l'anastomosi dell'arteria polmonare inserendo la cuffia dell'arteria polmonare del donatore nella vena giugulare esterna del ricevente e fissare con un 8-0 cravatta di seta. Rimuovere la sutura di ancoraggio della vena giugulare esterna e transettare la parete posteriore rimanente della vena giugulare esterna per liberare l'innesto dal tessuto sottostante. Assicurarsi che l'innesto sia orientato correttamente senza attorcigliamento o torsione dell'anastomosi.
Rilasciare i nodi sulla vena giugulare esterna del ricevente, seguita dall'arteria carotide comune per avviare la riperfusione dell'innesto cardiaco. La tecnica dimostrata in questo protocollo ha mostrato un tasso di sopravvivenza di circa il 97% Questo potrebbe potenzialmente essere attribuito al bracciale più grande di 20 gauge posizionato sull'arteria polmonare del donatore per garantire un ampio ritorno del flusso sanguigno al ricevente. Inoltre, l'allineamento del flusso sanguigno con il posizionamento della cuffia nella presente tecnica riduce al minimo il rischio di trombosi e turbolenza anastomotica.
Il tempo medio di intervento del ricevente è stato di circa 37 minuti con un tempo medio di ischemia fredda di 20 minuti. Per gli studi di sopravvivenza, gli innesti cardiaci sono stati valutati quotidianamente mediante visualizzazione diretta e palpazione digitale del battito cardiaco. L'imaging intravitale a due fotoni è stato eseguito subito dopo il trapianto per valutare il traffico leucocitario.
È importante controllare che l'innesto sia posizionato correttamente e orientato prima della chiusura della pelle per evitare torsioni. Questo metodo può essere utilizzato in modelli di re-trapianto per identificare le cellule immunitarie residenti negli innesti trapiantati che mediano le risposte alloimmuni.
