Utilizzo di una biopsia chimica per la valutazione della qualità dell'innesto

La biopsia chimica è una nuova soluzione diagnostica nel trapianto di organi per una valutazione rapida e complessa della qualità dell'innesto. Attualmente, non sono disponibili altri metodi a bassa invasività che consentano tale analisi. Il principale vantaggio di questa tecnica è la possibilità di monitorare le modifiche del tessuto di innesto nel tempo di conservazione grazie alla semplicità e alla bassa invasività delle sonde SPME.

Il piccolo diametro della sonda e una grande varietà di rivestimenti biocompatibili rendono questo metodo adatto per l'analisi degli organi trapiantati e applicabile nella ricerca medica come l'analisi del tumore. Quando si tenta questa tecnica per la prima volta, prestare attenzione ai dettagli e alla tempistica di particolari passaggi perché piccoli errori possono influenzare pesantemente i risultati. Il protocollo è semplice, ma è più facile da capire ed eseguire dopo la dimostrazione visiva.

Iniziare preparando una miscela di precondizione composta da un metanolo e acqua uno a uno. Pipettare un millilitro della soluzione in ogni flaconcino di vetro a due millilitri e posizionare una sonda in ogni flaconcino. Agitare le fiale su un agitatore a vortice a 1200 giri/min per un'ora.

Quindi sciacquare le sonde con acqua di grado LCMS e sterilizzarle secondo il protocollo di sterilizzazione chirurgica standard o nel reparto di lavorazione sterile. Quando è pronto per estrarre il campione, aprire l'imballaggio sterile e inserire due sonde direttamente nella corteccia renale per 10 minuti per tempo, assicurandosi che l'intera lunghezza del rivestimento sia coperta dalla matrice tissutale. Assicurarsi di tenere traccia del tempo di campionamento per ogni sonda.

Ritrarre la sonda estraerla dal tessuto e sciacquare immediatamente il rivestimento con acqua di grado LCMS per rimuovere il sangue rimanente assicurandosi di risciacquare dal sito chirurgico. Per trasportare le sonde, posizionarle in fiale separate e chiuderle. Quindi posizionare le fiale in una scatola piena di ghiaccio secco o azoto liquido.

Conservare i campioni a -80 gradi Celsius o procedere immediatamente con il desorbimento. Preparare una soluzione di desorbimento composta da acetonitrile e acqua per l'analisi metabolomica e un'altra composta da isopropanolo e metanolo per l'analisi lipidomica. Aggiungere 100 microlitri della soluzione agli inserti nei due flaconcini etichettati millilitro e posizionare una sonda in ogni flaconcino agitare i flaconcini a 1200 giri/min per due ore, quindi rimuovere le sonde dai flaconcini e procedere con l'analisi LCMS.

La cromatografia liquida accoppiata con spettrometria di massa ad alta risoluzione è stata utilizzata per effettuare analisi metabolomiche e lipidomiche non mirate. I dati sono stati sottoposti ad analisi dei componenti principali per valutare la qualità intrattenere informazioni generali sui risultati. I campioni di controllo qualità formavano un cluster stretto che confermava la qualità dell'analisi.

I gruppi studiati hanno mostrato una separazione relativamente buona, consentendo la visualizzazione delle differenze nei profili metabolici e lipidomici prima e dopo il trapianto e durante la perfusione di organi. Un ampio spettro di caratteristiche estratte è stato separato sia sulla fase invertita che sulle colonne di cromatografia liquida. Alterazioni e livelli di metaboliti durante l'esperimento sono stati dimostrati con appezzamenti di baffi a scatola dei metaboliti selezionati.

Quando si esegue questa procedura, tenere presente l'eterogeneità degli organi. Posizionare la sonda nella posizione desiderata mantenere il tempo di campionamento identico in tutti i punti di tempo e fissare correttamente la fibra dopo il campionamento. I biomarcatori scoperti con SPME possono essere quantificati utilizzando questo metodo di estrazione accoppiato a MSMS, LCMS o altra strumentazione analitica.

Inoltre, poiché non viene consumato alcun campione, è possibile eseguire analisi di routine come la biopsia. Il metodo può essere adattato per altre metabolomiche tissutali e analisi lipidomiche senza necessità di pretrattamento del campione. Per metaboliti specifici.

Altri rivestimenti possono essere utilizzati per aumentare la selettività e la sensibilità del saggio.