استخدام خزعة كيميائية لتقييم جودة الكسب غير المشروع

خزعة كيميائية هو حل تشخيصي جديد في زرع الأعضاء لتقييم جودة الكسب غير المشروع سريعة ومعقدة. ولا توجد حالياً طرق أخرى متاحة لأساليب الغازية المنخفضة التي تمكّن من إجراء مثل هذا التحليل. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي إمكانية رصد تعديلات أنسجة الكسب غير المشروع مع مرور الوقت من الحفاظ بسبب بساطة وانخفاض الغازية من تحقيقات SPME.

القطر الصغير للمسبار ومجموعة كبيرة ومتنوعة من الطلاءات التي يمكن التوافق بيولوجيا تجعل هذه الطريقة مناسبة لتحليل الأعضاء المزروعة وقابلة للتطبيق في البحوث الطبية مثل تحليل الورم. عند محاولة هذه التقنية لأول مرة الانتباه إلى التفاصيل وتوقيت خطوات معينة لأن أخطاء صغيرة قد تؤثر بشدة على النتائج. البروتوكول بسيط، ولكن من الأسهل فهم وأداء بعد العرض التوضيحي المرئي.

ابدأ بإعداد خليط من الميثانول والماء يتكون من واحد إلى واحد. Pipette ملليلتر واحد من الحل في كل قارورة الزجاج ملليلتر ووضع مسبار واحد في كل قارورة. تهيج قوارير على المحرض دوامة في 1200 دورة في الدقيقة لمدة ساعة واحدة.

ثم شطف المسابير مع LCMS الصف المياه وتعقيمها وفقا لبروتوكول التعقيم الجراحية القياسية أو في قسم معالجة معقمة. عندما تكون جاهزة لاستخراج العينة، فتح التعبئة والتغليف العقيمة وإدراج اثنين من مسابير مباشرة في قشرة الكلية لمدة 10 دقيقة لكل نقطة زمنية، مع التأكد من أن كامل طول الطلاء مغطى بمصفوفة الأنسجة. تأكد من تتبع وقت أخذ العينات لكل مسبار.

سحب التحقيق عن طريق سحبه من الأنسجة وشطف على الفور طلاء مع LCMS الصف المياه لإزالة أي دم المتبقية التأكد من شطف بعيدا عن موقع الجراحة. لنقل المسابير، ضعها في قارورة منفصلة وإغلاقها. ثم ضع القنينات في صندوق مليء بالثلج الجاف أو النيتروجين السائل.

تخزين العينات في درجة مئوية سلبية 80 أو المضي قدما على الفور مع desorption. إعداد حل إزالة الامتصاص تتألف من الأسيتونيتريل والماء لتحليل المستقلب وآخر يتكون من ايزوبروبانول والميثانول لتحليل الدهون. إضافة 100 ميكرولترات من الحل لإدراج في اثنين من المليلتر المسمى قارورة ووضع مسبار واحد في كل قارورة تهيج قارورة في 1200 دورة في الدقيقة لمدة ساعتين ثم إزالة المسابير من قارورة والمضي قدما مع تحليل LCMS.

واستُخدم الكروماتوغرافيا السائلة إلى جانب قياس الطيف الكتلي العالي الاستبانة لإجراء تحليل مستقلبومومي وغير موجه. وخضعت البيانات لتحليل المكونات الرئيسية لتقييم الجودة التي تُبدي رؤى عامة بشأن النتائج. وشكلت عينات مراقبة الجودة مجموعة ضيقة تؤكد جودة التحليل.

أظهرت المجموعات المدروسة فصلًا جيدًا نسبيًا ، مما سمح بالتصور للاختلافات في ملفات تعريف التمثيل الغذائي والدهون قبل وبعد الزراعة وكذلك أثناء تخبط الأعضاء. تم فصل مجموعة واسعة من الميزات المستخرجة على كل من الأعمدة الطورية المعكوسة وأعمدة الكروماتوغرافيا السائلة. وقد أظهرت مستويات التعديلات والاستقلاب في جميع أنحاء التجربة مع قطع شعيرات مربع من الأيضات المختارة.

عند تنفيذ هذا الإجراء، نضع في اعتبارنا عدم تجانس الأجهزة. ضع المسبار في الموقع المطلوب حافظ على وقت أخذ العينات متطابقًا في جميع النقاط الزمنية ، وتأمين الألياف بشكل صحيح بعد أخذ العينات. ويمكن قياس المؤشرات البيولوجية المكتشفة مع SPME كميا باستخدام طريقة الاستخراج هذه مقرونة بـ MSMS أو LCMS أو أجهزة تحليلية أخرى.

وعلاوة على ذلك، بما أنه لا يتم استهلاك أي عينة، يمكن إجراء تحليل روتيني مثل الخزعة. ويمكن تكييف هذه الطريقة لتحليل الأنسجة الأخرى المستقلبوموم والدهون دون ضرورة ل المعالجة المسبقة للعينة. بالنسبة لمناقعات محددة.

ويمكن استخدام الطلاءات الأخرى لزيادة الانتقائية والحساسية للمقال.