Abbiamo gentilmente Ringraziamo Sabine Reckinger per l&#39;assistenza tecnica eccellente e di sostegno.

1. preparati <ol><li> raccolta dei campioni Nota: Il metodo agitatore magnetico può essere utilizzato per i campioni muscolari singole o in pool. <ol><li> Raccogliere campioni dai siti di predilezione appropriati e in una quantità appropriata 9. Fare riferimento ai requisiti nazionali o alle raccomandazioni del TIC, UIE o ISO. <ol><li> Per l&#39;Unione europea, ad esempio, prendere un campione di 1 g da un pilastro del diaframma nella zona di transizione verso la parte tendinea dei suini domestici. Assicurarsi che tutti i campioni muscolari sono privi di tutto il grasso e fascia. </li></ol></li><li> Se la lingua è testato, rimuovere lo strato superficiale prima del test. </li><li> Fare attenzione se i campioni sono congelati, come la maggior parte delle larve di Trichinella non sono congelare resistente e Srotolare dopo la morte, sono meno resistenti alla digestione e tendono ad aderire alle pareti del contenitore, con conseguente diminuzione della sensibilità del test. Nota: Se congelato, raddoppiare la dimensione del campione a Lest e aumentare il tempo di sedimentazione (vedi sotto). </li></ol></li><li> Preparazione di liquido di digestione <ol><li> Aggiungere 25% HCl (16 ± 0,5 mL) per 2 L di acqua di rubinetto preriscaldato a 46 - 48 ° C in un bicchiere di vetro 3 L. Troppo basso di un risultato di temperatura in incompleta digestione; troppo elevato di temperatura disattiva le proprietà enzimatiche della pepsina. </li><li> Inserire una barra di agitazione nel becher, e agitare la soluzione su una piastra preriscaldata (46 - 48 ° C). </li><li> Aggiungere 10 ± 0,2 g di pepsina (1: 10.000 NF, 1: 12.500 BP, 2.000 FIP) alla soluzione acida. Nota: La qualità della pepsina è della massima importanza e l&#39;attività enzimatica devono essere certificati dal produttore. Per motivi di sicurezza di laboratorio e per mantenere l&#39;attività della pepsina, la sequenza di aggiunta componenti fluidi digestione deve essere rispettata. </li></ol></li><li> Preparazione del campione muscolare <ol><li> Tritare fino a 100 g di campioni di muscolo in un frullatore o macinino. Per facilitare blending, aggiungere 2 ml preriscaldata acqua per i campioni e si fondono alla massima velocità per 2 - 3 s. </li><li> Prima della seconda fusione, aprire il frullatore e trasferire qualsiasi campione di muscolo in cima miscelazione ciotola margine del bordo di fondo e ripetere la miscelazione. Continuare la miscelazione con esplosioni di 2 - 3 s fino a quando non frammenti visibili di carne rimangono. Nota: Troppo poco miscelazione può causare digestione incompleta, mentre troppa fusione può danneggiare il Trichinella larve presenti nei campioni 6. </li></ol></li></ol> 2. procedura <ol><li> Muscle campione digestione <ol><li> Trasferire 1 L del fluido di digestione in un cilindro. Trasferire la carne macinata nel becher e diffondere nel fluido di digestione con un cucchiaio o forchetta. Sciacquare la ciotola coperchio frullatore, lama e frullatore con 500 ml di succo di digestione preriscaldato nel 3 L bicchiere. Nota: risciacquo incompleta può comportare la perdita di sensitivity. </li><li> Coprire il becher con foglio di alluminio e mantenere una temperatura costante 44 - 46 ° C e controllare con un termometro. </li><li> Mescolare il succo di digestione per 30 minuti per creare un vortice profondo senza spruzzi fino a quando le particelle di carne scompaiono. A seconda del tipo di carne provati (per esempio carne di animali selvatici), aumentare il tempo di digestione fino ad un massimo di 60 min. </li></ol></li><li> Filtrazione e sedimentazione del fluido di digestione <ol><li> Per determinare la quantità di tessuto non digerito, regolare la scala a zero, pesare il setaccio prima dell&#39;uso, e annotare il suo peso. Il setaccio deve essere pulita e priva di eventuali particelle di tessuto, che potrebbero ostacolare le larve di Trichinella raggiungere l&#39;imbuto di sedimentazione. Controllare che l&#39;imbuto di separazione è livellato in senso verticale. </li><li> Dopo la digestione, con attenzione versare il liquido di digestione attraverso un setaccio di 180 micron in un imbuto di vetro di separazione. La larghezza del imbuto di vetro di separazione non deve be più grande di 55% della lunghezza per consentire una buona larva sedimentazione. Fare attenzione per evitare qualsiasi troppo pieno. </li><li> Per evitare la perdita di sensibilità, sciacquare il bicchiere di vetro e il setaccio con circa 200 ml di acqua di rubinetto da una bottiglia di lavaggio squeeze e trasferire l&#39;acqua di risciacquo nell&#39;imbuto bicchiere sedimentazione. Fare attenzione a lavare con cura i bordi del 3 L bicchiere. Sollevare il setaccio e lavare l&#39;area sotto il setaccio accuratamente. </li></ol></li><li> Determinazione della quantità di tessuto non digerito Nota: A causa di errori nella esecuzione del metodo, tessuto muscolare può rimanere sul setaccio, nonché fascia e tessuto connettivo che sono indigeribili. La quantità di tessuto non digerito è determinato durante la prima fase di sedimentazione 10 min (vedere 2.5). Questo permette circa 30 minuti per il setaccio a secco, come l&#39;acqua residua può influenzare il peso determinato del tessuto non digerito. <ol><li> Mettere un tovagliolo di carta su una scala, e pesare il setaccio con le undigestessuti TED. </li><li> Sottrarre il peso del setaccio prima della filtrazione dal peso del setaccio con i tessuti non digerite. Il processo di digestione è considerato soddisfacente se non più del 5% del peso del campione iniziale rimane sul setaccio (cioè 5 g / 100 g materiale di partenza). </li><li> Se la quantità di tessuto non digerito supera il 5%, ripetere il test utilizzando campioni di muscolo freschi. Se il tessuto rimanente è prevalentemente costituito da tessuto muscolare non digerito e campioni freschi non sono disponibili, digerire ancora i resti non digeriti ed esaminare in aggiunta ai campioni originali. </li></ol></li><li> La sedimentazione del fluido di digestione <ol><li> Mantenere il fluido di digestione filtrato nell&#39;imbuto separatore per 30 min. Se lasciati indisturbati, le larve Trichinella si depositerà sul fondo dell&#39;imbuto. </li><li> Se si utilizzano campioni congelati, aumentare il tempo di sedimentazione a un massimo di 60 min. </li><li> Una volta che la sedimentazione è completa, aprire completamente il rubinettodell&#39;imbuto separatore di lasciare almeno 40 ml di succo di digestione rapidamente in un recipiente cilindrico (80 mL se campioni di muscolo erano stati precedentemente congelati). </li><li> Per prima cosa, la metà del fluido nel cilindro e quindi aprire completamente il rubinetto nella direzione opposta per consentire 10 ml di succo di digestione per passare. Infine, aprire il rubinetto in senso opposto per altri 10 mL. Questa procedura garantisce che larve di Trichinella non sono intrappolati nel rubinetto. Nota: è necessaria la velocità sufficiente per evitare le larve che rimane nella imbuto separatore, diminuendo la sensibilità. </li></ol></li><li> La sedimentazione del fluido di digestione nel cilindro <ol><li> Lasciare il sedimento nel cilindro per 10 minuti per permettere alle larve di sedimenti. Rimuovere 30 mL surnatante mediante aspirazione con una pipetta senza disturbare il sedimento 10 mL. </li><li> Per ridurre la quantità di fibre di tessuto nel campione, aggiungere 30 ml di acqua di rubinetto per il sedimento e lasciar riposare per altri 10 ma. Ripetere fino a quando il liquido è chiaro. </li><li> Rimuovere il surnatante e trasferire i 10 ml lavato sedimenti di una capsula di Petri a griglia o vaschetta per il conteggio delle larve. Lavare il cilindro con 10 mL di acqua di rubinetto e quindi aggiungere l&#39;acqua al campione. Nota: Come grandi quantità di detriti nel campione possono impedire l&#39;identificazione delle larve Trichinella (Figura 1), ulteriori fasi di lavaggio devono essere eseguite, se necessario. </li></ol></li><li> Esame microscopico <ol><li> Utilizzare trichinoscopio o stereomicroscopio con una sorgente luminosa sottostadio trasmessa di intensità regolabile da 15 a 20 ingrandimenti per esaminare i campioni immediatamente dopo le fasi di lavaggio. </li><li> Dopo aver versato il campione nella capsula di Petri con griglia, esaminare il piatto / bacino sistematicamente griglia per griglia. Se non si trovano le strutture sospette, spostare delicatamente il liquido nella scatola di Petri con griglia o vaschetta per il conteggio delle larve in modo circolare per consentire a qualsiasi Trichinella larvae, che sono stati potenzialmente trascurato, si accumuli nel centro del piatto Petri. Ripetere l&#39;esame. </li><li> Se viene trovata una struttura di sospetto, aumentare l&#39;ingrandimento di 40 - 100X. Rimuovere larve di Trichinella dal piatto / vasca con una pipetta e raccogliere in un tubo con etanolo al 90%. </li><li> Dopo il piatto completo è stato esaminato, ripetere la procedura partendo dal leggero scuotimento del piatto / bacino. Ripetere la procedura almeno tre volte o fino a quando non più larve si trovano. </li><li> Contare il numero di larve. Correlare alla quantità di tessuto muscolare testati e presente come larve per grammo (GPL). </li><li> Se troppe le larve sono presenti nel succo di digestione per determinare il numero delle larve in modo affidabile, restituire il fluido contenente le larve al cilindro di misura, sciacquare con acqua di rubinetto da una bottiglia di lavaggio di compressione, e lasciare le larve di depositarsi sul fondo. </li><li> Dopo un tempo di sedimentazione 10 min, ridurre il supernatante in un volume definito (ad esempio10 mL). Per determinare il volume esatto, trasferire il surnatante in un nuovo cilindro con una pipetta. </li><li> Sospendere larve omogeneamente nel fluido da agitazione vigorosa. Durante il movimento di agitazione, aggiungere 12 gocce di 20 microlitri di sospensione delle larve su una capsula di Petri. </li><li> Esaminate ogni goccia al microscopio. Determinare il numero di larve in 240 ml ed eliminare il più alto e il più basso conteggio. Estrapolare il numero di larve al volume totale (ad esempio 10 ml) del surnatante. Nota: La qualità della stereomicroscopio è di fondamentale importanza per l&#39;identificazione di larve di Trichinella. </li><li> Quando le larve sono raccolti in un tubo da una pipetta, verificare attentamente che le larve non ha attaccato sulla parete pipetta, ma vengono trasferiti al tubo. Nota: Trichinella Positive risultati di campioni aggregati devono essere ricondotte dalla piscina alla carcassa di origine. Qui, la dimensione del pool dovrebbe progressivamente diminuire fino a quando la carcassa positivo è identificata. La dimensione del campione può essere aumentata durante questo processo per aumentare la sensibilità. Se l&#39;esame di un campione aggregato produce un risultato positivo o incerto, un ulteriore campione di 20 g è preso da ciascun suino. I 20 g di campioni provenienti da cinque suini vengono raggruppati ed esaminati con il metodo descritto. In questo modo saranno esaminati campioni provenienti da 20 gruppi di cinque suini. Quando viene rilevato Trichinella in un campione composito da cinque suini, campioni di 20 g vengono raccolti dai singoli suini del gruppo e ciascuno viene esaminato separatamente fino a quando viene rilevata la carcassa positiva di origine. </li></ol></li></ol>

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	<li>Gottstein, B., Pozio, E., N&#246;ckler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+Diagnosis,+Treatment,+and+Control+of+Trichinellosis.">Epidemiology, Diagnosis, Treatment, and Control of Trichinellosis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 22, 127-145 (2009).</li><li>Pozio, E., Murrell, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematics+and+epidemiology+of+Trichinella.">Systematics and epidemiology of Trichinella.</a> Adv. Parasitol. 63, 367-439 (2006).</li><li>9 CFR Part 318.10 - Prescribed treatment of pork and products containing pork to destroy trichinae. U.S. Government Publishing Office Available from: <a target="_blank" href="https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf">https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf</a> (2012)</li><li>Gamble, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Commission+on+Trichinellosis:+recommendations+on+methods+for+the+control+of+Trichinella+in+domestic+and+wild+animals+intended+for+human+consumption.">International Commission on Trichinellosis: recommendations on methods for the control of Trichinella in domestic and wild animals intended for human consumption.</a> Vet. Parasitol. 93 (3-4), 393-408 (2000).</li><li>Gajadhar, A. A., Forbes, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+internationally+recognized+quality+assurance+system+for+diagnostic+parasitology+in+animal+health+and+food+safety,+with+example+data+on+trichinellosis.">An internationally recognized quality assurance system for diagnostic parasitology in animal health and food safety, with example data on trichinellosis.</a> Vet. Parasitol. 103, 133-140 (2002).</li><li>N&#246;ckler, K., Kapel, C. M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Detection+and+surveillance+for+Trichinella:+meat+inspection+and+hygiene,+and+legislation.">Chapter 3, Detection and surveillance for Trichinella: meat inspection and hygiene, and legislation.</a> FAO/WHO/OIE Guidelines for the surveillance, management, prevention and control of trichinellosis. , 69-98 (2007).</li><li>Boch, J., Schnieder, T., Supperer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Veterin&#228;rmedizinische Parasitologie. , (2006).</li><li>Despommier, D. D., M&#252;ller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stichosome+and+its+secretion+granules+in+the+mature+muscle+larva+of+Trichinella+spiralis.">The stichosome and its secretion granules in the mature muscle larva of Trichinella spiralis.</a> J. Parasitol. 62 (5), 775-785 (1976).</li><li>Marucci, G., Interisano, M., La Rosa, G., Pozio, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+nematode+larvae+different+from+those+of+the+Trichinella+genus+detected+by+muscle+digestion.">Molecular identification of nematode larvae different from those of the Trichinella genus detected by muscle digestion.</a> Vet Parasitol. 194, 117-120 (2013).</li><li>Forbes, L. B., Gajadhar, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+Trichinella+digestion+assay+and+an+associated+sampling+and+quality+assurance+system+for+use+in+testing+pork+and+horse+meat.">A validated Trichinella digestion assay and an associated sampling and quality assurance system for use in testing pork and horse meat.</a> J. Food Prot. 62, 1308-1313 (1999).</li><li>Malakauskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+epidemiology+of+Trichinella+spp.+in+three+Baltic+countries:+Lithuania,+Latvia,+and+Estonia.">Molecular epidemiology of Trichinella spp. in three Baltic countries: Lithuania, Latvia, and Estonia.</a> Parasitol. Res. 100 (4), 687-693 (2007).</li><li>Kapel, C. M., Webster, P., Gamble, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+distribution+of+sylvatic+and+domestic+Trichinella+larvae+in+production+animals+and+wildlife.">Muscle distribution of sylvatic and domestic Trichinella larvae in production animals and wildlife.</a> Vet. Parasitol. 132 (1-2), 101-105 (2005).</li><li>Interisano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+latex+agglutination+test+for+the+detection+of+Trichinella+infections+in+pigs.">Validation of a latex agglutination test for the detection of Trichinella infections in pigs.</a> Vet. Parasitol. 194, 121-124 (2013).</li><li>Pozio, E., La Rosa, ., G, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR-derived+methods+for+the+identification+of+Trichinella+parasites+from+animal+and+human+samples.">PCR-derived methods for the identification of Trichinella parasites from animal and human samples.</a> Methods Mol. Biol. 216, 299-309 (2003).</li></ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Sebbene il metodo agitatore magnetico può essere facilmente eseguita, non strettamente aderente ai dettagli tecnici conduce alla sensibilità insufficiente, mettendo così in pericolo la salute dei consumatori. I punti critici di controllo sono stati evidenziati nel testo di cui sopra. Inoltre, l&#39;uso di attrezzature adeguate è fondamentale per il buon esito del test. Tutte le navi devono essere di punte di vetro e pipette rivestite con silicone per ridurre l&#39;aderenza delle larve in superficie. La sensibilità del metodo di digestione dipende dalla densità larvale nei muscoli e la quantità di campione di muscolo testato. Per una densità larvale di 3 - 5 lpg di tessuti muscolari, è stata riportata una sensibilità del 100%, ma inferiore 1 lpg la sensibilità è scesa al 40% 13. A seconda della specie ospite animali esaminate, la sensibilità del test può essere migliorata aumentando la quantità di campione usato. l&#39;infection onere di fauna selvatica è solitamente basso, campioni di conseguenza più grandi dimensioni vengono utilizzati 14. I siti di predilezione variano anche tra gli animali ospiti. Qui, la digeribilità inferiore alcuni tessuti muscolari come la lingua deve essere presa in considerazione, che può anche provocare campione più taglie 15. Inoltre, è importante comprendere che il metodo agitatore magnetico non include controlli interni. Pertanto, la gestione garanzia di qualità dal campionamento alla documentazione è essenziale per ottenere risultati accurati e precisi. La qualità delle prestazioni del laboratorio per rilevare larve di Trichinella nei campioni di muscolo deve essere monitorata dalla partecipazione regolare di ogni analista in prove di competenza. Ulteriori limitazioni del metodo sono che la fase di identificazione finale delle larve muscolare al microscopio è molto soggettiva e heaVily dipende dalla conoscenza della morfologia larvale dall&#39;analista esaminando. Un metodo alternativo interessante per aggirare questo problema è il metodo agitatore magnetico / isolamento mediante filtraggio seguito da rilevamento larve mediante un test di agglutinazione al lattice. Tuttavia, secondo la legislazione UE questo metodo è considerato solo equivalente per la sperimentazione di carni di suini domestici, ma non per gli animali che sono a più alto rischio di infezione, come cinghiale 4. L&#39;identificazione dell&#39;antigene larvale con anticorpi monoclonali rende il test più obiettivo, ma nega il laboratorio la possibilità di determinare il numero di larve per grammo di carne 16. Ulteriori variazioni del metodo agitatore magnetico comprendono la tecnica metodo / sedimentazione digestione di campioni aggregati assistito meccanicamente, lo scavo campione composito assistito meccanicamenteMetodo estion / sulla tecnica di isolamento del filtro, e il metodo di digestione automatica per campioni aggregati tecnica fino a 35 g. Queste tecniche sono tutti basati sulla digestione artificiale della carne e la visualizzazione e conteggio delle larve di Trichinella, ma differiscono per l&#39;apparecchiatura utilizzata per le fasi di filtrazione e sedimentazione. Le larve isolato può essere ulteriormente identificato a livello di specie da un test molecolare (ad esempio, multiplex PCR) 17. Secondo la legislazione UE, tutti i campioni positivi devono essere trasmessi al laboratorio nazionale di riferimento o al EURLP per la determinazione delle specie Trichinella.

I nematodi del genere Trichinella possono essere rilevati nei muscoli striati di carnivori e onnivori mammiferi, uccelli e rettili in tutto il mondo. Questi nematodi zoonotici possono raggiungere gli esseri umani quando crudo o carne semi-prime e prodotti di carne derivati ​​da suini, cavallo e selvaggina vengono ingeriti. Questo zoonosi può essere una grave malattia negli esseri umani caratterizzati da segni e sintomi patognomonici, ad esempio, diarrea, febbre, edema periorbitale e mialgia e le possibili complicazioni, come la miocardite, malattia tromboembolica e l&#39;encefalite 1. Trichinella spiralis è l&#39;agente eziologico più diffusa di infezione Trichinella negli animali selvatici e domestici e provoca la maggior parte delle infezioni umane in tutto il mondo. In Europa, Nord e West Africa e Asia occidentale, Trichinella britovi è un&#39;altra fonte di infezioni umane. Inoltre, altri dieci taxa sono meno comunemente riportati come causale<html> agenti della malattia umana e si trovano in diverse regioni del mondo, di solito in animali selvatici 2. Oltre agli animali selvatici come cinghiali, orsi, trichechi e tassi, carne di maiale rappresenta la più importante fonte di infezione umana in tutto il mondo. Il modo migliore per prevenire la trichinellosi è quello di astenersi dal mangiare prodotti di carne cruda e per cucinare qualsiasi tipo di carne, soprattutto carne gioco a temperature sicure (&gt; 65 ° C per 1 minuto, vale a dire per cambiare il colore della carne dal rosa al marrone nel nucleo della prodotti a base di carne) 3. L&#39;Unione europea e USDA hanno specificato di congelamento e tempi di cottura e le temperature per i prodotti di carne di maiale che possono essere utilizzati per uccidere T. spiralis larve nella carne 4, 5. Inoltre, le raccomandazioni per l&#39;inattivazione di Trichinella nella carne e derivati sono stati pubblicati dalla Commissione internazionale sulla Trichinellosi&quot;xref&quot;&gt; 6. In Europa, oltre all&#39;introduzione di condizioni di stabulazione controllata in allevamenti suini commerciali in cui il rischio di infezione da Trichinella è trascurabile, la prevenzione di trichinellosi umana si basa su analisi di laboratorio dei campioni di muscolo da animali sensibili 4. Per motivi di sicurezza alimentare, i saggi di digestione sono le uniche procedure affidabili per la rilevazione diretta di larve di Trichinella nella carne 3, 7. Anche se ci sono diverse varianti del saggio di digestione, il metodo agitatore magnetico è il metodo accettato internazionalmente riferimento 3, 4, 7. Questo test si basa sul rilevamento di larve di Trichinella nei tessuti muscolari striate. Dopo la digestione enzimatica di campioni di muscolo e successive fasi di filtrazione e sedimentazione, Trichinella larve sono identificati al microscopio. A seconda obblighi commerciali e la legislazione nazionale, ci sono una moltitudine di piccole variazioni nel protocollo generale del metodo agitatore magnetico. Qui, i dettagli tecnici si basano su requisiti UE 4, le specifiche ISO 8, linee guida ICT 6, e l&#39;esperienza del laboratorio di riferimento dell&#39;Unione europea per i Parassiti (EURLP) e il laboratorio tedesco di riferimento per Trichinella.

<table><tbody><tr><td>Knife, Scissors, Tweezers</td><td></td><td></td><td>Cutting samples and removing non-digestible tissue</td></tr><tr><td>Blender&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td>With a sharp chopping blade</td></tr><tr><td>Magnetic stirrer</td><td></td><td></td><td>With thermostatically controlled heating plate</td></tr><tr><td>Stirring Rod</td><td></td><td></td><td>Teflon-coated, approximately 5 cm long</td></tr><tr><td>Conical glass separation funnel</td><td></td><td></td><td>Capacity of at least 2 L, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation.</td></tr><tr><td>Stands, rings and clamps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sieve</td><td></td><td></td><td>Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh</td></tr><tr><td>Funnel</td><td></td><td></td><td>Internal diameter not less than 12&amp;nbsp;cm, to support the sieves</td></tr><tr><td>Glass beaker</td><td></td><td></td><td>Capacity 3 L</td></tr><tr><td>Glass measuring cylinder</td><td></td><td></td><td>Capacity 50 to 100 mL, or centrifuge tube</td></tr><tr><td>Stereo-microscope</td><td></td><td></td><td>With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td></td><td></td><td>9 cm diameter, marked on their undersides into 10 &amp;times; 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope</td></tr><tr><td>Aluminium foil</td><td></td><td></td><td>Alternatively a lid to cover the beakers</td></tr><tr><td>25% hydrochloric acid</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pepsin</td><td></td><td></td><td>Strength: 1:10,000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12,500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2,000 FIP (F&amp;eacute;d&amp;eacute;ration internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/mL</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td></td><td></td><td>70-90% ethyl alcohol</td></tr><tr><td>Tap water</td><td></td><td></td><td>Heated to 46-48 &amp;deg;C before use</td></tr><tr><td>Balance</td><td></td><td></td><td>Accurate to at least 0.1 g</td></tr><tr><td>Metal tray</td><td></td><td></td><td>Capacity 10 to 15 L, to collect the remaining digestive juice</td></tr><tr><td>Pipettes and pipette holder</td><td></td><td></td><td>Different sizes (1, 10 and 25 mL)</td></tr><tr><td>Thermometer</td><td></td><td></td><td>Accurate to 0.5 &amp;deg;C, temperature range at least from 20 &amp;deg; C to 70&amp;nbsp;&amp;deg;C</td></tr><tr><td>Siphon</td><td></td><td></td><td>For tap water</td></tr></tbody></table>

magnetic stirrer method for the detection of trichinella larvae in muscle samples

La trichinellosi è una malattia debilitante in esseri umani ed è causata dal consumo di carne cruda o poco cotta di animali infettati con le larve di nematodi del genere Trichinella. Le fonti più importanti di infezioni umane in tutto il mondo sono selvaggina e prodotti di carne di maiale o di maiale. In molti paesi, la prevenzione di trichinellosi umana si basa sulla individuazione di animali infetti mediante digestione artificiale dei campioni di muscolo da carcasse animali sensibili. Esistono diversi metodi basati sulla digestione della carne ma il metodo agitatore magnetico è considerato il gold standard. Questo metodo consente l&#39;individuazione di Trichinella larve al microscopio dopo la digestione enzimatica di campioni di muscolo e successive fasi di filtrazione e sedimentazione. Anche se questo metodo non richiede attrezzature speciali e costose, controlli interni non possono essere utilizzati. Pertanto, la gestione della qualità rigorosa dovrebbe essere applied durante tutta la prova. Lo scopo del presente lavoro è quello di fornire istruzioni di manipolazione dettagliate e punti critici di controllo del metodo gli analisti, sulla base dell&#39;esperienza del laboratorio di riferimento dell&#39;Unione europea per i parassiti e il Laboratorio Nazionale di riferimento della Germania per Trichinella.

<html> Dopo la digestione, la forma delle larve muscolare infettivo può variare, rendendo più difficile l&#39;identificazione. Forme tipiche includono larve strettamente arrotolato, larve leggermente arrotolata o a forma di C o larve completamente srotolato (Figure 2B - 2C). Il numero di larve trovato per grammo può variare considerevolmente e può variare da una larva a qualche centinaio larve. La morfologia della larva muscolare infettivo è mostrato nella Figura 2A. Trichinella larve sono 0,7 a 1,5 mm e circa 0,3 mm di larghezza. L&#39;esofago è stretta e ha una fine leggermente arrotondata. La cuticola è liscia. Nella metà anteriore della cavità del corpo, il stichosome, una struttura costituita da un lungo tubo sottile circondata da una fila di 45 a 55 grandi cellule (stichocytes), può essere osservato. Il retto è anche arrotondata senza sporgenze o appendici 10, 11. t &quot;&gt; altre strutture, oltre larve di Trichinella, possono essere trovati dopo la digestione muscolare Alcuni esempi sono riportati nelle figure 3A -.. 3F Gli animali selvatici sono spesso infettati con altri parassiti o campioni di muscolo disponibili per i test sono contaminati durante il processo di eviscerazione da animato o strutture inanimate / organismi. la lunghezza delle larve, l&#39;aspetto delle estremità anteriore e posteriore e la presenza della guida stichosome di discriminare tra i diversi generi nematode 12. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig1.jpg" /> Figura 1: esame microscopico di larve di Trichinella Dopo (A) insufficiente e (B) adeguato risciacquo passi. Barre di scala indicano 100 micron. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare un grande ve</a>rsion di questa figura. <img alt="figura 2" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig2.jpg" /> Figura 2: Morfologia del infettiva larve di Trichinella Mostrando il retto, Stichosome e l&#39;esofago della larva (A). Possibili forme delle larve muscolare dopo digestione mostra (B) strettamente avvolti e leggermente arrotolati movimento larve e (C) srotolato larve. Barre di scala indicano 100 micron. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig3.jpg" /> Figura 3: Esempi di risultati in secondo piano dopo la digestione di Muscle Campioni con il metodo agitatore magnetico. (A) capelli setole-comelombrico trovato nei cinghiali; (B) Alaria alata di cinghiale; (C) delle fibre muscolari di cinghiale; (D) Metastrongylus sp. di cinghiale; Fibra (E) impianto trovato in cinghiale (F): Toxocara sp. larva di cinghiale. Barre di scala indicano 100 micron. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a>

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Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

La prevenzione della trichinellosi umana in molti paesi del mondo si basa su analisi di laboratorio di campioni muscolari di animali sensibili con metodi di digestione, le cui modalità agitatore magnetico è considerato il gold standard.

Metodo dell&#39;agitatore magnetico per la rilevazione di<em&gt; Trichinella</em&gt; Le larve in campioni di muscolo

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

28.6K Views.  Federal Institute for Risk Assessment.  La prevenzione della trichinellosi umana in molti paesi del mondo si basa su analisi di laboratorio di campioni muscolari di animali sensibili con metodi di digestione, le cui modalità agitatore magnetico è considerato il gold standard. 

Video: Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. Infective eggs are given by oral gavage, hatch in the distal small intestine, invade the intestinal epithelial cells (IECs) 
that line the crypts of the cecum and proximal colon and upon maturation the worms release eggs into the environment1. This model is a powerful tool to 
examine factors that control CD4+ T helper (Th) cell activation as well as changes in the intestinal epithelium. The immune response that occurs in 
resistant inbred strains, such as C57BL/6 and BALB/c, is characterized by Th2 polarized cytokines (IL-4, IL-5 and IL-13) and expulsion of worms while Th1-associated 
cytokines (IL-12, IL-18, IFN-&gamma;) promote chronic infections in genetically susceptible AKR/J mice2-6. Th2 cytokines promote physiological changes in 
the intestinal microenvironment including rapid turnover of IECs, goblet cell differentiation, recruitment and changes in epithelial permeability and smooth muscle 
contraction, all of which have been implicated in worm expulsion7-15. Here we detail a protocol for propagating Trichuris muris eggs which can 
be used in subsequent experiments. We also provide a sample experimental harvest with suggestions for post-infection analysis. Overall, this protocol will provide 
researchers with the basic tools to perform a Trichuris muris mouse infection model which can be used to address questions pertaining to Th proclivity in 
the gastrointestinal tract as well as immune effector functions of IECs.

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris infection is an intestinal model of Th2 immunity where resistant mice generate a protective Th2 response and susceptible mice generate a pathological Th1 response.

Trichuris Muris Infezione: un modello di tipo 2 Immunità e infiammazione nell&#39;intestino

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

ELIME (Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical) Method for Mycotoxin Detection

Immunoassays are a valid alternative to the more expensive and time consuming quantitative HPLC or GC1, 2 methods for the screening detection of hazardous mycotoxins in food commodities. In this protocol we show how to fabricate and interrogate an electrochemical competitive Enzyme linked immunomagnetic assay based on the use of magnetic beads as solid support for the immunochemical chain3 and screen printed electrodes as sensing platform.
Our method aims to determine the total amount of HT-2 and T-2 toxins, mycotoxins belonging to the trichothecenes family and of great concern for human health4. The use of an antibody clone with a cross reactivity of 100% towards HT-2 and T-2 allows to simultaneously detect both toxins with similar sensitivity5.
The first step of our assay is the coating step where we immobilize HT2-KLH conjugate toxin on the surface of magnetic beads. After a blocking step, necessary to avoid non-specific absorptions, the addition of a monoclonal antibody allows the competition between immobilized HT-2 and free HT-2 or T-2 present in the sample or dissolved in a standard solution.
At the end of the competition step, the amount of monoclonal antibody linked to the immobilized HT-2 will be inversely proportional to the amount of toxin in the sample solution.
A secondary antibody labeled with alkaline phosphatase (AP) is used to reveal the binding between the specific antibody and the immobilized HT-2. The final measurement step is performed by dropping an aliquot of magnetic bead suspension, corresponding to a specific sample/standard solution, on the surface of a screen-printed working electrode; magnetic beads are immobilized and concentrated by means of a magnet placed precisely under the screen-printed electrode. After two minutes of incubation between magnetic beads and a substrate for AP, the enzymatic product is detected by Differential Pulse Voltammetry (DPV) using a portable instrument (PalmSens) also able to initiate automatically eight measurements within an interval of few seconds.

ELIME Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical Method for Mycotoxin Detection

A protocol to detect trichothecenes (mycotoxins of concern for human health) using a newly developed screening method based on a competitive immunochemical method and a final electrochemical detection is demonstrated.

ELIME (Enzyme Linked Immuno magnetica elettrochimici) metodo di rilevazione micotossine

Immunoassays are a valid alternative to the more expensive and time consuming quantitative HPLC or GC1, 2 methods for the screening detection of hazardous ...

Biologia

Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, the muscle stem cell is activated and undergoes cell proliferation to generate a pool of myoblasts, which subsequently differentiate to form new muscle fibers. In many muscle wasting conditions, including muscular dystrophy and ageing, this process is impaired resulting in the inability of muscle to regenerate. The process of muscle regeneration in zebrafish is highly conserved with mammalian systems providing an excellent system to study muscle stem cell function and regeneration, in muscle wasting conditions such as muscular dystrophy. Here, we present a method to examine muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease. The first step involves the use of a genotyping platform that allows the determination of the genotype of the larvae prior to eliciting an injury. Having determined the genotype, the muscle is injured using a needle stab, following which polarizing light microscopy is used to determine the extent of muscle regeneration. We therefore provide a high throughput pipeline which allows the examination of muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease.

Skeletal muscle regeneration is driven by tissue resident muscle stem cells, which are impaired in many muscle diseases such as muscular dystrophy, and this results in the inability of muscle to regenerate. Here, we describe a protocol that allows the examination of muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease.

Esame della rigenerazione muscolare nei modelli zebrafish di malattia muscolare

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, ...

Biologia dello sviluppo

Intramuscular Injections Along the Motor End Plates: A Minimally Invasive Approach to Shuttle Tracers Directly into Motor Neurons

Diseases affecting the integrity of spinal cord motor neurons are amongst the most debilitating neurological conditions. Over the last decades, the development of several animal models of these neuromuscular disorders has provided the scientific community with different therapeutic scenarios aimed at delaying or reversing the progression of these conditions. By taking advantage of the retrograde machinery of neurons, one of these approaches has been to target skeletal muscles in order to shuttle therapeutic genes into corresponding spinal cord motor neurons. Although once promising, the success of such gene delivery approach has been hampered by the sub-optimal number of transduced motor neurons it has so far shown to yield. Motor end plates (MEPs) are highly specialized regions on the skeletal musculature that are in direct synaptic contact to the spinal cord &#945; motor neurons. In this regard, it is important to note that, so far, the efforts to retrogradely transfer genes into motor neurons were made without reference to the location of the MEP region in the targeted muscles. Here, we describe a simple protocol 1) to reveal the exact location of the MEPs on the surface of skeletal muscles and 2) to use this information to guide the intramuscular delivery and subsequent optimal retrograde transport of retrograde tracers into motor neurons. We hope to utilize the results from these tracing experiments in further studies into investigating retrograde transport of therapeutic genes to spinal cord motor neurons through the targeting of MEPs.

The efficacy of intramuscular uptake and retrograde transport of molecules to corresponding motor neurons depends on the location of the injection sites with respect to the motor end plates (MEPs). Here, we describe how to locate MEPs on skeletal muscles to optimise retrograde transport of tracers into motor neurons.

Iniezioni intramuscolari Lungo le piastre Motor finale: un approccio mini-invasivo di navetta Tracers Direttamente nella Motor Neurons

Diseases affecting the integrity of spinal cord motor neurons are amongst the most debilitating neurological conditions. Over the last decades, the ...

Neuroscienze

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in communication with the epidermal cells they innervate and thus their analysis benefits from in situ visualization of both neuronally and epidermally expressed proteins by immunofluorescence. Traditional methods of preparing larval fillets for immunofluorescence experiments leave intact the muscle tissue that covers most of the body wall, presenting several challenges to imaging neuronal and epidermal proteins. Here we describe a method for removing muscle tissue from Drosophila larval fillets. This protocol enables imaging of proteins that are otherwise obscured by muscle tissue, improves signal to noise ratio, and facilitates the use of super-resolution microscopy to study da neuron development.

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Studies of neuronal morphogenesis using Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons benefit from in situ visualization of neuronal and epidermal proteins by immunofluorescence. We describe a procedure that improves immunofluorescence analysis of da neurons and surrounding epidermal cells by removing muscle tissue from the larval body wall.

Rimozione di<em&gt; Drosophila</em&gt; Tessuto muscolare da larvali Filetti per l&#39;analisi di immunofluorescenza dei neuroni sensoriali e cellule epidermiche

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Force Measurement During Contraction to Assess Muscle Function in Zebrafish Larvae

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional measures of muscle health. In this video article, we demonstrate a method to measure force generation during contraction of zebrafish larval trunk muscle. Force measurements are accomplished by placing an anesthetized larva into a chamber filled with a salt solution. The anterior end of the larva is tied to a force transducer and the posterior end of the larva is tied to a length controller. An isometric twitch contraction is elicited by electric field stimulation and the force response is recorded for analysis. Force generation during contraction provides a measure of overall muscle health and specifically provides a measure of muscle function. Although we describe this technique for use with wild-type larvae, this method can be used with genetically modified larvae or with larvae treated with drugs or toxicants, to characterize muscle disease models and evaluate treatments, or to study muscle development, injury, or chemical toxicity.

Force measurements can be used to demonstrate changes in muscle function due to development, injury, disease, treatment or chemical toxicity. In this video, we demonstrate a method to measure force during a maximal contraction of zebrafish larval trunk muscle.

Misura della forza durante la contrazione per valutare la funzione muscolare in larve Zebrafish

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional ...

Single Myofiber Isolation and Culture from a Murine Model of Emery-Dreifuss Muscular Dystrophy in Early Post-Natal Development

Autosomal dominant Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD) is caused by mutations in the LMNA gene, which encodes the A-type nuclear lamins, intermediate filament proteins that sustain the nuclear envelope and the components of the nucleoplasm. We recently reported that muscle wasting in EDMD can be ascribed to intrinsic epigenetic dysfunctions affecting muscle (satellite) stem cells regenerative capacity. Isolation and culture of single myofibers is one of the most physiological ex-vivo approaches to monitor satellite cells behavior within their niche, as they remain between the basal lamina surrounding the fiber and the sarcolemma. Therefore, it represents an invaluable experimental paradigm to study satellite cells from a variety of murine models. Here, we describe a re-adapted method to isolate intact and viable single myofibers from post-natal hindlimb muscles (Tibialis Anterior, Extensor Digitorum Longus, Gastrocnemius and Soleus). Following this protocol, we were able to study satellite cells from Lamin &#916;8-11 -/- mice, a severe EDMD murine model, at only 19 days after birth.
We detail the isolation procedure, as well as the culture conditions for obtaining a good amount of myofibers and their associated satellite-cells-derived progeny. When cultured in growth-factors rich medium, satellite cells derived from wild type mice activate, proliferate, and eventually differentiate or undergo self-renewal. In homozygous Lamin &#916;8-11 -/- mutant mice these capabilities are severely impaired.
This technique, if strictly followed, allows to study all processes linked to the myofiber-associated satellite cell even in early post-natal developmental stages and in fragile muscles.

Here, we propose a method to efficiently obtain single muscle fibers at early post-natal developmental stages from homozygous mutant Lamin &#916;8-11 mouse model, a very severe model for Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD).

Isolamento e cultura della miofibra singola da un modello Murine della distrofia muscolare di Emery-Dreifuss nei primi sviluppi post-Natal

Autosomal dominant Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD) is caused by mutations in the LMNA gene, which encodes the A-type nuclear lamins, intermediate ...

Medicina

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial respirometric assays from isolated mitochondrial preparations allow for the assessment of mitochondrial function, as well as determination of the mechanism(s) of action of drugs and proteins that modulate metabolism. Current isolation procedures often require large quantities of tissue to yield high quality mitochondria necessary for respirometric assays. The methods presented herein describe how high quality purified mitochondria (~ 450 &#181;g) can be isolated from minimal quantities (~75-100 mg) of mouse skeletal muscle for use in high throughput respiratory measurements. We determined that our isolation method yields 92.5&#177; 2.0% intact mitochondria by measuring citrate synthase activity spectrophotometrically. In addition, Western blot analysis in isolated mitochondria resulted in the faint expression of the cytosolic protein, GAPDH, and the robust expression of the mitochondrial protein, COXIV. The absence of a prominent GAPDH band in the isolated mitochondria is indicative of little contamination from non-mitochondrial sources during the isolation procedure. Most importantly, the measurement of O2 consumption rate with micro-plate based technology and determining the respiratory control ratio (RCR) for coupled respirometric assays shows highly coupled (RCR; &#62;6 for all assays) and functional mitochondria. In conclusion, the addition of a separate mincing step and significantly reducing motor driven homogenization speed of a previously reported method has allowed the isolation of high quality and purified mitochondria from smaller quantities of mouse skeletal muscle that results in highly coupled mitochondria that respire with high function during microplate based respirometirc assays.

Here, we present a modification of a previously reported method that allows for the isolation of high quality and purified mitochondria from smaller quantities of mouse skeletal muscle. This procedure results in highly coupled mitochondria that respire with high function during microplate based respirometirc assays.

L&#39;isolamento di mitocondri da minime quantità di muscolo scheletrico del mouse per misurazioni High Throughput micropiastre respiratorie

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Visualizzazione delle reti di microtubuli nelle giunzioni neuromuscolari e nelle cellule muscolari di Drosophila

Using Drosophila Larval Neuromuscular Junction and Muscle Cells to Visualize Microtubule Network

The microtubule network is an essential component of the nervous system. Mutations in many microtubules regulatory proteins are associated with neurodevelopmental disorders and neurological diseases, such as microtubule-associated protein Tau to neurodegenerative diseases, microtubule severing protein Spastin and Katanin 60 cause hereditary spastic paraplegia and neurodevelopmental abnormalities, respectively. Detection of microtubule networks in neurons is advantageous for elucidating the pathogenesis of neurological disorders. However, the small size of neurons and the dense arrangement of axonal microtubule bundles make visualizing the microtubule networks challenging. In this study, we describe a method for dissection of the larval neuromuscular junction and muscle cells, as well as immunostaining of &#945;-tubulin and microtubule-associated protein Futsch to visualize microtubule networks in Drosophila melanogaster. The neuromuscular junction permits us to observe both pre-and post-synaptic microtubules, and the large size of muscle cells in Drosophila larva allows for clear visualization of the microtubule network. Here, by mutating and overexpressing Katanin 60 in Drosophila melanogaster,&#160;and then examining the microtubule networks in the neuromuscular junction and muscle cells, we&#160;accurately reveal the regulatory role of Katanin 60 in neurodevelopment. Therefore, combined with the powerful genetic tools of Drosophila&#160;melanogaster, this protocol greatly facilitates genetic screening and microtubule dynamics analysis for the role of microtubule network regulatory proteins in the nervous system.

Autore in primo piano: Comprensione della rete di microtubuli nelle giunzioni neuromuscolari di Drosophila 

Here, we present a detailed protocol to visualize the microtubule networks in neuromuscular junctions and muscle cells. Combined with the powerful genetic tools of Drosophila melanogaster, this protocol greatly facilitates genetic screening and microtubule-dynamics analysis for the role of microtubule network regulatory proteins in the nervous system.

Metodo dell'agitatore magnetico per la rilevazione di

Riepilogo

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Trichuris Muris Infezione: un modello di tipo 2 Immunità e infiammazione nell'intestino

ELIME (Enzyme Linked Immuno magnetica elettrochimici) metodo di rilevazione micotossine

Esame della rigenerazione muscolare nei modelli zebrafish di malattia muscolare

Iniezioni intramuscolari Lungo le piastre Motor finale: un approccio mini-invasivo di navetta Tracers Direttamente nella Motor Neurons

Rimozione di

Misura della forza durante la contrazione per valutare la funzione muscolare in larve Zebrafish

Isolamento e cultura della miofibra singola da un modello Murine della distrofia muscolare di Emery-Dreifuss nei primi sviluppi post-Natal

L'isolamento di mitocondri da minime quantità di muscolo scheletrico del mouse per misurazioni High Throughput micropiastre respiratorie

Utilizzo della giunzione neuromuscolare larvale e delle cellule muscolari della Drosophila per visualizzare la rete di microtubuli

Utilizzo della giunzione neuromuscolare larvale e delle cellule muscolari della Drosophila per visualizzare la rete di microtubuli