Questa ricerca è stata sostenuta dalle sovvenzioni-in-Aid per la Ricerca Scientifica della Società giapponese per la promozione della scienza (JSP), Grant-in-Aid dal Ministero della Pubblica Istruzione, Cultura, Sport, Scienza e Tecnologia in Giappone, Grants-in- aiuto BIRD e CREST del Giappone Scienza e della Tecnologia Agenzia, Grant-in-Aid da Neuroinformatica Giappone Center (NIJC), RIKEN e da Grant-in-Aid per la ricerca scientifica sulle Settori prioritari-Integrativa Brain Research (Shien) - da MEXT in Giappone. Ringraziamo O&#39;hara &amp; Co. e Mariko Hayashi per la loro assistenza nella creazione di questo film.

Protocollo <ol><li> L&#39;apparecchio utilizzato per la prova più elevata labirinto è nella configurazione di un + e comprende due braccia aperte (25 x 5 x 0,5 cm) di fronte all&#39;altro e da due bracci perpendicolari chiuso (25 x 5 x 16 cm) con un centro piattaforma (5 x 5 x 0,5 cm). Le braccia aperte sono una piccolissima (0,5 cm) a parete per diminuire il numero di cadute, mentre le braccia chiuse hanno una alta (16 cm) a parete per racchiudere il braccio. L&#39;intero apparato è di 50 cm sopra il pavimento (Ohara &amp; Co., Tokyo) e si trova in un serbatoio vuoto circolare (100 cm di diametro, 35 cm di altezza, normalmente utilizzati per l&#39;attività di Morris water maze) per proteggere i topi che cadono o tentativo di fuga durante l&#39;esperimento. L&#39;apparecchio è realizzato in materiali plastici. La piattaforma è bianco e le pareti sono trasparenti. C&#39;è una variazione di materiali e colori degli apparati di più elevata labirinto. </li><li> I topi sono alloggiati con un 12-h luce / ciclo scuro (luci accese alle 7:00), come descritto in precedenza (Takao &amp; Miyakawa, 2006a). Test del comportamento è effettuata 9:00-6:00. Tutti i topi sperimentali vengono trasferiti al comportamento test sala 30 minuti prima di iniziare il primo trial di abituare alla condizione della sala prove comportamento. L&#39;ordine delle prove è controbilanciato tra genotipi. Ci sono due fini della prova, prova pratica con un animale. Uno è quello di assicurarsi che tutto va bene con il sistema di registrazione. Un altro è quello di mantenere la condizione di test il più uniforme possibile. Vale a dire, il mouse prima in tutta la seduta sarebbe stato un po &#39;diversa esperienza con gli altri (cioè, nessun rumore prima fatta da operazioni di collaudo e senza spunti odori provenienti da studi precedenti), senza una prova pratica. Gli animali siano mantenuti secondo le linee guida del Comitato di Ricerca Animale dell&#39;Università di Kyoto. </li><li> La sala collaudo comportamento (170 x 210 x 200 cm, Ohara &amp; Co., Tokyo) è insonorizzata e il livello di illuminazione è mantenuta a 100 lux. Un mouse è posizionato nella zona centrale del labirinto con la testa rivolta verso un braccio chiuso. Il test labirinto più elevato viene registrato con una videocamera collegata a un computer, che è controllato da un dispositivo remoto. Il numero di voci (una voce è definito come il centro di massa del mouse entra al braccio) in ogni braccio e il tempo speso nei bracci aperti sono registrati e queste misure servono come indice di ansia comportamento simile. </li><li> I topi sono autorizzati a muoversi liberamente nel labirinto per 10 min. Ogni topo riceve una prova della nostra batteria di test. L&#39;applicazione utilizzata per l&#39;acquisizione e l&#39;analisi dei dati comportamentali (immagine EP) è basato sul programma di pubblico dominio J immagine (sviluppato da Wayne Rasband presso l&#39;Istituto Nazionale di Salute Mentale e disponibile <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">http://rsb.info.nih.gov/ ij /</a> ), che è stato modificato da Tsuyoshi Miyakawa (disponibile tramite O&#39;Hara &amp; Co., Tokyo, Giappone). </li><li> La distanza percorsa, il numero di voci in ogni braccio, il tempo trascorso in ogni braccio, e la percentuale di inserimenti nelle braccia aperte sono calcolati dal programma PE immagine. </li><li> Dopo ogni prova, tutte le armi e la zona centro vengono puliti con acqua eccellente ipocloroso, che è un efficace agente di rimozione degli odori e ha un odore relativamente debole di se stessa rispetto ad altre soluzioni di pulizia, per evitare un pregiudizio basato su stimoli olfattivi. Così possiamo effettuare i test in condizioni controllate per quanto riguarda stimoli olfattivi. </li></ol>

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	<li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light/dark+transition+test+for+mice.">Light/dark transition test for mice.</a> J Vis Exp. , (2006).</li><li>Aiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+liaison+for+integrative+brain+research.">Mouse liaison for integrative brain research.</a> Neurosci Res. 58, 103-104 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+knockout+mouse+project.">The knockout mouse project.</a> Nat Genet. 36, 921-924 (2004).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+gene-to-behavior+pathways+in+psychiatric+disorders:+the+use+of+a+comprehensive+behavioral+test+battery+on+genetically+engineered+mice.">Investigating gene-to-behavior pathways in psychiatric disorders: the use of a comprehensive behavioral test battery on genetically engineered mice.</a> Ann N Y Acad Sci. 1086, 144-159 (2006).</li><li>Takao, K., Yamasaki, N., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+brain-behavior+phenotyping+of+genetically-engineered+mice+on+research+of+neuropsychiatric+disorders.">Impact of brain-behavior phenotyping of genetically-engineered mice on research of neuropsychiatric disorders.</a> Neurosci Res. 58, 124-1232 (2007).</li><li>Crawley, J. 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L., Mithani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+alpha-adrenoceptor+agonists+and+antagonists+in+a+maze-exploration+model+of+'fear'-motivated+behaviour.">Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behaviour.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 324, 1-5 (1984).</li><li>Pellow, S., Chopin, P., File, S. E., Briley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+open:closed+arm+entries+in+an+elevated+plus-maze+as+a+measure+of+anxiety+in+the+rat.">Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat.</a> J Neurosci Meth. 14, 149-167 (1985).</li><li>File, S. 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href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+cadherin-11+adhesion+receptor+enhances+plastic+changes+in+hippocampal+synapses+and+modifies+behavioral+responses.">Loss of cadherin-11 adhesion receptor enhances plastic changes in hippocampal synapses and modifies behavioral responses.</a> Mol Cell Neurosci. 15, 534-546 (2000).</li><li>Miyakawa, T., Yamada, M., Duttaroy, A., Wess, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivity+and+intact+hippocampus-dependent+learning+in+mice+lacking+the+M1+muscarinic+acetylcholine+receptor.">Hyperactivity and intact hippocampus-dependent learning in mice lacking the M1 muscarinic acetylcholine receptor.</a> J Neurosci. 21, 5239-5250 (2001).</li><li>Seeger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M2+muscarinic+acetylcholine+receptor+knockout+mice+show+deficits+in+behavioral+flexibility,+working+memory,+and+hippocampal+plasticity.">M2 muscarinic acetylcholine receptor knockout mice show deficits in behavioral flexibility, working memory, and hippocampal plasticity.</a> J Neurosci. 24, 10117-10127 (2004).</li><li>Morishima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+cocaine+responsiveness+and+impaired+motor+coordination+in+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+2+knockout+mice.">Enhanced cocaine responsiveness and impaired motor coordination in metabotropic glutamate receptor subtype 2 knockout mice.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 102, 4170 (2005).</li><li>Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+in+Schwann+cells+of+peripheral+myelinated+axons:+a+lesson+from+claudin-19-deficient+mice.">Tight junctions in Schwann cells of peripheral myelinated axons: a lesson from claudin-19-deficient mice.</a> J Cell Biol. 169, 527-538 (2005).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFAT+dysregulation+by+increased+dosage+of+DSCR1+and+DYRK1A+on+chromosome+21.">NFAT dysregulation by increased dosage of DSCR1 and DYRK1A on chromosome 21.</a> Nature. 441, 595-600 (2006).</li><li>Hattori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enriched+environments+influence+depression-related+behavior+in+adult+mice+and+the+survival+of+newborn+cells+in+their+hippocampi.">Enriched environments influence depression-related behavior in adult mice and the survival of newborn cells in their hippocampi.</a> Behav Brain Res. 180, 69-76 (2007).</li><li>Niemann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+ablation+of+NMDA+receptor+subunit+NR3B+in+mouse+reveals+motoneuronal+and+non-motoneuronal+phenotypes.">Genetic ablation of NMDA receptor subunit NR3B in mouse reveals motoneuronal and non-motoneuronal phenotypes.</a> Europ J Neurosci. 26, 1407-1420 (2007).</li><li>Sano, H., Nagai, Y., Miyakawa, T., Shigemoto, R., Yokoi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+social+interaction+in+mice+deficient+of+the+striatal+medium+spiny+neuron-specific+phosphodiesterase+10A2.">Increased social interaction in mice deficient of the striatal medium spiny neuron-specific phosphodiesterase 10A2.</a> J Neurochem. 105, 546-556 (2008).</li><li>Horii, Y., Yamasaki, N., Miyakawa, T., Shiosaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+anxiety-like+behavior+in+neuropsin+(kallikrein-related+peptidase+8)+gene-deficient+mice.">Increased anxiety-like behavior in neuropsin (kallikrein-related peptidase 8) gene-deficient mice.</a> Behav Neurosci. 122, 498-504 (2008).</li><li>Fukuda, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+protocadherin-&#945;,+A+isoforms+in+mice+changes+contextual+fear+conditioning+and+spatial+working+memory.">Down-regulation of protocadherin-&#945;, A isoforms in mice changes contextual fear conditioning and spatial working memory.</a> Eur J Neurosci. , .</li><li>Ikeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+YWHAE,+a+gene+encoding+14-3-3epsilon,+as+a+possible+susceptibility+gene+for+schizophrenia.">Identification of YWHAE, a gene encoding 14-3-3epsilon, as a possible susceptibility gene for schizophrenia.</a> Behav Neurosci. , .</li><li>Korte, S. M., De Boer, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+animal+model+of+state+anxiety:+fear-potentiated+behaviour+in+the+elevated+plus-maze.">A robust animal model of state anxiety: fear-potentiated behaviour in the elevated plus-maze.</a> Eur J Phamacol. 463, 163-175 (2003).</li><li>Hogg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+validity+and+variability+of+the+elevated+plus-maze+as+an+animal+model+of+anxiety.">A review of the validity and variability of the elevated plus-maze as an animal model of anxiety.</a> Pharmacol Biochem Behav. 54, 21-30 (1996).</li><li>Holmes, A., Parmigiani, S., Ferrari, P. F., Palanza, P., Rodgers, R. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+Behavioral+Phenotyping+of+Calpastatin-Knockout+Mice.">Comprehensive Behavioral Phenotyping of Calpastatin-Knockout Mice.</a> Molecular Brain. , .</li><li>Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+calcineurin+knockout+mice+exhibit+multiple+abnormal+behaviors+related+to+schizophrenia.">Conditional calcineurin knockout mice exhibit multiple abnormal behaviors related to schizophrenia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 8987-8992 (2003).</li><li>Yamasaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factor+analyses+of+large-scale+data+justify+the+behavioral+test+battery+strategy+to+reveal+the+functional+significances+of+the+genes+expressed+in+the+brain.">Factor analyses of large-scale data justify the behavioral test battery strategy to reveal the functional significances of the genes expressed in the brain.</a> , (1985).</li><li>Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+mouse+behavior:+interactions+with+laboratory+environment.">Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment.</a> Scienc. 284, 1670-1672 (1999).</li></ol>

Tutte le procedure sono state approvate con l&#39;uso degli animali e del Comitato cura dell&#39;Università di Kyoto.

Sebbene il genoma del topo è stato sequenziato, le funzioni della maggior parte dei geni non sono noti. Tecniche di modificazione genetica consentono la cancellazione o la manipolazione di altri di uno specifico gene nei topi (Austin et al, 2004;.. Aiba et al, 2007). L&#39;influenza di un dato gene in un comportamento specifico può essere determinato da condurre analisi del comportamento dei topi mutanti (Takao e Miyakawa, 2006b;. Takao et al, 2007). La prova più elevata labirinto è una delle prove più popolari di tutti i modelli animali attualmente disponibili di ansia (Rodgers e Dalvi, 1997; Crawley, 2007). Questo test per l&#39;ansia comportamento simile è stato utilizzato per lo screening e fenotipizzazione topi transgenici e knockout (Crawley, 1999) e per la scoperta (Hogg et al 1996;. Crawley, 2007). La prova più elevata labirinto ha una forte validità predittiva per lo screening di farmaci ansiolitici (Rodgers e Dalvi, 1997; Mechiel Korte e De Boer, 2003; Crawley, 2007); farmaci ansiolitici specificamente aumentare, e le droghe ansiogeno specificamente diminuire, il numero di voci in le braccia aperte e il tempo trascorso. Il punteggio totale le voci e la distanza totale sono considerate un utile indice di attività generali. Punteggio totale le iscrizioni è anche un indice di ansia, e le percentuali di voci e di tempo speso in ogni braccio costituiscono l&#39;indice di ansia primaria (Rodgers e Dalvi, 1997, Mechiel Korte e De Boer, 2003). Le braccia aperte e chiuse sono considerati per evocare la stessa unità esplorativa, pertanto, di evitare le braccia aperte è considerata una conseguenza della induzione di alti livelli di paura (Rodgers e Dalvi, 1997). Si pensa che l&#39;avversione dei topi per esplorare le braccia aperte del labirinto è causato dalla paura degli spazi aperti ed elevato. Nel 1984, Handley e Mithani riferito sul lavoro preliminare con l&#39;elevato X (più) test del labirinto descritto sopra. L&#39;apparato sperimentale originale è stato sollevato 70 centimetri sopra il pavimento, e comprendeva due chiuse e due braccia aperte, ognuna delle quali misura 45 cm di lunghezza per 10 cm di larghezza. Nei loro studi iniziali, hanno segnalato il rapporto di aperto / totale voci braccio (Handley e Mithani, 1984). Successivamente, altri indici sono stati sviluppati che includevano il numero di voci tra le braccia chiuse e aperte e il tempo trascorso nei bracci chiusi e aperti per i ratti (Pellow et al, 1985; Pellow e File, 1986) e topi (Lister, 1987) . Modifiche alla prova più elevata labirinto incluso allungamento di entrambe le braccia aperte (50 x 10 cm) e le braccia chiuso (50 x 10 x 40 cm) con alte mura e un tetto aperto sulle braccia chiuse, e il labirinto intera è stata elevata ad un&#39;altezza di 50 cm (Pellow et al, 1985; Pellow e File, 1986). Attualmente, nel nostro laboratorio, la più elevata di prova labirinto è configurato in forma di +, con due braccia aperte (25 x 5 cm, con un lievissimo, 0,5 cm, parete) di fronte all&#39;altro e perpendicolari a due braccia chiuso (25 x 5 x 16 cm), ed è sollevato 50 cm sopra il pavimento (Miyakawa et al, 1996; Manabe et al, 2000; Miyakawa et al, 2001; Seeger et al, 2004; Morishima et al, 2005; Miyamoto et al, 2005; Arrow et al, 2006; Hattori et al, 2007; Niemann et al, 2007; Sano et al, 2008; Horii et al, 2008; Fukuda et al, 2008; Ikeda et al, 2008). Il mouse è posizionato al centro del + (5 cm x 5 cm) ed è permesso di esplorare il labirinto liberamente. Se 5 minuti di registrazione è comune, il comportamento è registrato per 10 minuti nel nostro protocollo per aumentare la possibilità di rilevare il fenotipo. Le braccia aperte e chiuse elevato indurre un conflitto di esplorazione (Mechiel Korte e De Boer, 2003; Crawley, 2007). Le misure della prova più elevata labirinto vengono registrati da un osservatore durante l&#39;esperimento. Nel nostro laboratorio, il test viene registrato con una videocamera collegata ad un computer e dei dati comportamentali (Immagine EP) vengono acquisiti e analizzati utilizzando il programma PE immagine. Numero di voci sulla braccia aperte contro il numero di voci braccio totale, e il tempo trascorso sulle braccia aperte rispetto a braccia chiuse, di fornire le misure di ansia comportamento simile. Abbiamo valutato più di 90 ceppi di topi mutanti geneticamente modificati utilizzando il protocollo mostrato nel film e hanno un grande insieme di dati grezzi per più di 5000 topi (compresi wild-type e topi mutanti). Nella nostra batteria di test, wild-type fratellini sono di solito usati come controllo. Come un ceppo di fondo, i topi C57BL/6J sono ampiamente utilizzati. Abbiamo raccolto i dati di topi C57BL/6J nei test comportamentali. I valori ottenuti dai topi C57BL/6J nel nostro test labirinto più elevate sono le seguenti (n = 914; media ± SEM); distanza totale percorsa: 1.547,55 14,27 centimetri; durata del tempo trascorso: 56,49 2,42 s (braccia aperte), 384,02 3,13 s (braccia chiuso), 161,90 2,17 s (centro labirinto); rapporto tra tempo trascorso in braccia aperte: 9,19 0,36%, il rapporto del tempo trascorso tra le braccia chiuse: 63,82 0,52%, il numero di voci: 7.64 0.21 (braccia aperte), 24,32 0,28 (braccia chiuso); voci braccio% aperto: 21.9 0.05, chiuso% voci braccia: 78.1 0.05. Topi C57BL/6J passare meno tempo a braccia aperte che chiuse in armi (p &lt;0.0001, n = 914, appaiati-t test). Questo indica che i topi C57BL/6J tendono ad evitare le braccia aperte, e che il tempo trascorso in braccia aperte è un indice valido di ansia comportamento simile. Inoltre, l&#39;ordine delle prove è controbilanciato tra genotipi, perché il numero di prova riguarda il tempo trascorso in braccia aperte e la piattaforma centrale. Cioè, gli indici di tutti aumentare durante i topi 3 e 4 rispetto al primo topi (p = 0,0089, n = 476) (dati non pubblicati). Con il nostro protocollo, l&#39;analisi di più di 1661 topi hanno mostrato che l&#39;ordine sequenziale dei topi testati in una gabbia non influenza significativamente il tempo di permanenza aperto braccio (dati non pubblicati). Cioè, le performance dei topi prima preso dalla gabbia non molto diverse da quelle del secondo, il terzo o il topo scorso. Anche se la prova più elevata labirinto e il chiaro / scuro prova transizione sono entrambi utilizzati per valutare l&#39;ansia, come il comportamento, i risultati non sono sempre coerenti tra loro (Holmes et al, 2000; Tujimura et al, 2008; Nakajima et al, in press ) Ad esempio, proencefalo specifici calcineurina-topi knockout trascorrere una diminuzione della quantità di tempo nella camera di luce nella luce / buio prova di transizione, ma una maggiore quantità di tempo tra le braccia aperte nella prova più elevata labirinto (Miyakawa et al. , 2003). L&#39;analisi fattoriale della nostra batteria di test comportamentali indica che il test labirinto più elevate e la luce / buio prova transizione valutare diversi aspetti di ansia comportamento simile, come ad esempio luminoso spazio-ansia alla luce / buio prova di transizione e open-space ansia-come comportamento nel test a campo aperto (Takao e Miyakawa, 2006b; Yamasaki et al, 2006). Di conseguenza, sia il chiaro / scuro prova di transizione e il test più elevata labirinto sono inclusi nella nostra batteria di test comportamentali. Tiger e colleghi hanno riportato che le variabili incontrollate e sperimentazioni che caratterizzano i mutanti possono dare risultati che sono specifici di un laboratorio di particolare (Crabbe et al., 1999). Le differenze procedurali che esistono tra i laboratori rendono difficile da replicare o confrontare i risultati tra di loro. Stabilire documentazione visiva del protocollo intende promuovere una migliore comprensione delle procedure sperimentali, permettendo per la standardizzazione dei protocolli utilizzati in laboratori e confronti tra i fenotipi comportamentali dei vari ceppi di topi mutanti valutata usando questi test. Abbiamo già pubblicato un protocollo film della luce / buio prova di transizione (Takao e Miyakawa, 2006a). Allo stesso modo, i filmati di altri protocolli, come ad esempio per il test a campo aperto, il porsolt costretto prova nuotare, e prove di condizionamento alla paura che usiamo nella nostra batteria di test comportamentali sono attualmente in corso per la pubblicazione di articoli di giornale futuro video.

<table><tbody><tr><td>Elevated plus maze</td><td>Tool</td><td>O&amp;rsquo;hara Co.</td><td>(none)</td><td></td></tr></tbody></table>

elevated plus maze for mice

Sebbene il genoma del topo è ora completamente sequenziato, le funzioni della maggior parte dei geni espressi nel cervello non sono noti. L&#39;influenza di un dato gene in un comportamento specifico può essere determinato mediante l&#39;analisi del comportamento dei topi mutanti. Se un gene bersaglio è espressa nel cervello, fenotipo comportamentale dei topi mutanti potrebbe chiarire il meccanismo genetico di comportamenti normali. La prova più elevata labirinto è uno dei test più utilizzato per misurare l&#39;ansia comportamento simile. Il test si basa sulla naturale avversione di topi per le aree aperte ed elevato, così come sul loro comportamento naturale, spontaneo esplorative in ambienti romanzo. L&#39;apparato è costituito da braccia aperte e chiuse le braccia, attraversato nel mezzo perpendicolarmente l&#39;uno all&#39;altro, e una zona centrale. I topi hanno accesso a tutte le armi e sono autorizzati a muoversi liberamente tra di loro. Il numero di voci nelle braccia aperte e il tempo trascorso nei bracci aperti sono utilizzati come indici di spazio aperto ansia indotta nei topi. Purtroppo, le differenze procedurali che esistono tra i laboratori rendono difficile da duplicare e confrontare i risultati tra i laboratori. Qui, vi presentiamo un film dettagliato dimostrare il nostro protocollo per la prova più elevata labirinto. Nel nostro laboratorio, abbiamo valutato più di 90 ceppi di topi mutanti utilizzando il protocollo mostrato nel film. Tali dati saranno comunicati come parte di un database pubblico che stiamo costruendo. Visualizzazione del protocollo intende promuovere una migliore comprensione dei dettagli di tutta la procedura sperimentale, che consente per la standardizzazione dei protocolli utilizzati in diversi laboratori e confronti dei fenotipi comportamentali dei vari ceppi di topi mutanti valutata usando questo test.

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Elevated Plus Maze for Mice

La prova più elevata labirinto è uno dei test più utilizzato per misurare l&#39;ansia comportamento simile nei topi. Qui, vi presentiamo un film che mostra le procedure dettagliate per lo svolgimento del test.

Elevata Maze Plus per topi

Although the mouse genome is now completely sequenced, the functions of most of the genes expressed in the brain are not known. The influence of a given ...

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

90.2K Views.  Graduate School of Medicine, Kyoto University. La prova più elevata labirinto è uno dei test più utilizzato per misurare l'ansia comportamento simile nei topi. Qui, vi presentiamo un film che mostra le procedure dettagliate per lo svolgimento del test.

Video: Elevated Plus Maze for Mice

The Successive Alleys Test of Anxiety in Mice and Rats

The plus-maze was derived from the early work of Montgomery. He observed that rats tended to avoid the open arms of a maze, preferring the enclosed ones. Handley, Mithani and File et al. performed the first studies on the plus-maze design we use today, and in 1987 Lister published a design for use with mice. 
Time spent on, and entries into, the open arms are an index of anxiety; the lower these indices, the more anxious the mouse is. Alternatively, a mouse that spends most of its time in the closed arms is classed as anxious. 
One of the problems of the plus-maze is that, while time spent on, and entries into, the open arms is a fairly unambiguous measure of anxiety, time in the central area is more difficult to interpret, although time spent here has been classified as &#x201C;decision making&#x201D;. In many tests central area time is a considerable part of the total test time.
Shepherd et al. produced an ingenious design to eliminate the central area, which they called the &#x201C;zero maze&#x201D;. However, although used by several groups, it has never been as widely adopted as the plus-maze. 
In the present article I describe a modification of the plus-maze design that not only eliminates the central area but also incorporates elements from other anxiety tests, such as the light-dark box and emergence tests. It is a linear series of four alleys, each having increasing anxiogenic properties. It has given similar results to the plus-maze in general. Although it may not be more sensitive than the plus-maze (more data is needed before a firm conclusion can be reached on this point), it provides a useful confirmation of plus-maze results which would be useful when, for example, only a single example of a mutant mouse was available, as, for example, in ENU-based mutagenesis programs.

The plus-maze measures anxiety-like behaviour in rodents. There are two opposite closed and two opposite open arms; anxious rodents avoid the open arms. The central area is neither completely open nor closed, so time spent here is ambiguous and difficult to interpret. Here a modification of the plus-maze protocol eliminating this area is described.

Le successive Vicoli test di ansia nei topi e nei ratti

The plus-maze was derived from the early work of Montgomery. He observed that rats tended to avoid the open arms of a maze, preferring the enclosed ones.  ...

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Comportamento

Low-stress Route Learning Using the Lashley III Maze in Mice

Many behavior tests designed to assess learning and memory in rodents, particularly mice, rely on visual cues, food and/or water deprivation, or other aversive stimuli to motivate task acquisition. As animals age, sensory modalities deteriorate. For example, many strains of mice develop hearing deficits or cataracts. Changes in the sensory systems required to guide mice during task acquisition present potential confounds in interpreting learning changes in aging animals. Moreover, the use of aversive stimuli to motivate animals to learn tasks is potentially confounding when comparing mice with differential sensitivities to stress. To minimize these types of confounding effects, we have implemented a modified version of the Lashley III maze. This maze relies on route learning, whereby mice learn to navigate a maze via repeated exposure under low stress conditions, e.g. dark phase, no food/water deprivation, until they navigate a path from the start location to a pseudo-home cage with 0 or 1 error(s) on two consecutive trials. We classify this as a low-stress behavior test because it does not rely on aversive stimuli to encourage exploration of the maze and learning of the task. The apparatus consists of a modular start box, a 4-arm maze body, and a goal box. At the end of the goal box is a pseudo-home cage that contains bedding similar to that found in the animal&#x2019;s home cage and is specific to each animal for the duration of maze testing. It has been demonstrated previously that this pseudo-home cage provides sufficient reward to motivate mice to learn to navigate the maze1. Here, we present the visualization of the Lashley III maze procedure in the context of evaluating age-related differences in learning and memory in mice along with a comparison of learning behavior in two different background strains of mice. We hope that other investigators interested in evaluating the effects of aging or stress vulnerability in mice will consider this maze an attractive alternative to behavioral tests that involve more stressful learning tasks and/or visual cues.

The Lashley III maze is a route-learning task that does not rely on aversive stimuli or visual cues. It is thus a highly attractive option for evaluating learning and memory, especially in aging mice or otherwise where stress is a consideration.

Low-stress Learning percorso con la Maze Lashley III nel Mice

Many behavior tests designed to assess learning and memory in rodents, particularly mice, rely on visual cues, food and/or water deprivation, or other ...

Neuroscienze

Barnes Maze Testing Strategies with Small and Large Rodent Models

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land (Barnes) mazes. Improved performance over sessions or trials is thought to reflect learning and memory of the escape cage/platform location. Considered less stressful than water mazes, the Barnes maze is a relatively simple design of a circular platform top with several holes equally spaced around the perimeter edge. All but one of the holes are false-bottomed or blind-ending, while one leads to an escape cage. Mildly aversive stimuli (e.g.&#160;bright overhead lights) provide motivation to locate the escape cage. Latency to locate the escape cage can be measured during the session; however, additional endpoints typically require video recording. From those video recordings, use of automated tracking software can generate a variety of endpoints that are similar to those produced in water mazes (e.g.&#160;distance traveled, velocity/speed, time spent in the correct quadrant, time spent moving/resting, and confirmation of latency). Type of search strategy (i.e.&#160;random, serial, or direct) can be categorized as well. Barnes maze construction and testing methodologies can differ for small rodents, such as mice, and large rodents, such as rats. For example, while extra-maze cues are effective for rats, smaller wild rodents may require intra-maze cues with a visual barrier around the maze. Appropriate stimuli must be identified which motivate the rodent to locate the escape cage. Both Barnes and water mazes can be time consuming as 4-7 test trials are typically required to detect improved learning and memory performance (e.g.&#160;shorter latencies or path lengths to locate the escape platform or cage) and/or differences between experimental groups. Even so, the Barnes maze is a widely employed behavioral assessment measuring spatial navigational abilities and their potential disruption by genetic, neurobehavioral manipulations, or drug/ toxicant exposure.

The dry-land Barnes maze is widely used to measure spatial navigation ability in response to mildly aversive stimuli. Over consecutive days, performance (e.g.&#160;latency to locate escape cage) of control subjects improves, indicative of normal learning and memory. Differences between rats and mice necessitate apparatus and methodology changes that are detailed here.

Barnes strategie di sperimentazione Maze con piccole e grandi modelli di roditori

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land ...

Use of the Open Field Maze to Measure Locomotor and Anxiety-like Behavior in Mice

Animal models have proven to be invaluable to researchers trying to answer questions regarding the mechanisms of behavior. The Open Field Maze is one of the most commonly used platforms to measure behaviors in animal models. It is a fast and relatively easy test that provides a variety of behavioral information ranging from general ambulatory ability to data regarding the emotionality of the subject animal. As it relates to rodent models, the procedure allows the study of different strains of mice or rats both laboratory bred and wild-captured. The technique also readily lends itself to the investigation of different pharmacological compounds for anxiolytic or anxiogenic effects. Here, a protocol for use of the open field maze to describe mouse behaviors is detailed and a simple analysis of general locomotor ability and anxiety-related emotional behaviors between two strains of C57BL/6 mice is performed. Briefly, using the described protocol we show Wild Type mice exhibited significantly less anxiety related behaviors than did age-matched Knock Out mice while both strains exhibited similar ambulatory ability.

A protocol is provided to use an Open Field Maze to access general locomotor activity, anxiety and emotionality in a laboratory mouse model.

L&#39;uso del campo aperto Maze misurare Locomotore e ansia-come comportamento nei topi

Animal models have proven to be invaluable to researchers trying to answer questions regarding the mechanisms of behavior. The Open Field Maze is one of ...

Testing Animal Anxiety in Rats: Effects of Open Arm Ledges and Closed Arm Wall Transparency in Elevated Plus Maze Test

The elevated plus maze test is a behavioral test for assessing animal anxiety in rodents. Although this test is widely applied in the field of behavioral science, conflicting outcomes are often provided from different laboratories. To identify reasons for the different outcomes, we previously focused on arm features, which differ between laboratories, most notably the presence/absence of ledges at the sides of open arms and the transparency/opaqueness of closed arm walls. In a previous report, we used a custom designed container to compare rat behavior on different combinations of open and closed arm designs under otherwise identical experimental conditions, and showed that differences in arm features interfere with experimental outcomes. In brief, open arm ledges significantly increased anxiety-like behavior in rats, while transparent arms may also have decreased this behavior. Furthermore, we verified a higher detection sensitivity of the effect of an anxiolytic drug in a combination of no-ledged open arm + opaque walled closed arm compared with a combination of ledged open arm + transparent walled closed arm. In this report, we introduce our protocol for the elevated plus maze test, together with discussion of the key results from the previous report and our experimental experience. We believe this report will provide useful information for researchers who have employed or who plan to use the elevated plus maze in their studies.

Rats' anxiety-like behavior tested by the elevated plus maze varies highly depending on the testing environment. Here we show how apparatus settings, especially arm structure, affect behavior on the maze, and we explain a reliable protocol to detect effects of anxiolytic drugs. This report will contribute to anxiety research.

Sperimentazione animale ansia in ratti: effetti di sporgenze braccio aperto e chiuso braccio parete trasparenza in Elevated Plus Maze Test

The elevated plus maze test is a behavioral test for assessing animal anxiety in rodents. Although this test is widely applied in the field of behavioral ...

Analyzing Spatial Learning and Prosocial Behavior in Mice Using the Barnes Maze and Damsel-in-Distress Paradigms

The Barnes maze is a reliable measure of spatial learning and memory that does not require food restriction or exposure to extremely stressful stimuli. The Barnes maze can also assess other mouse behaviors, such as general motivation to escape from the maze platform and exploratory behavior. The Barnes maze can measure whether a genetic mutation or environmental variable can impact the acquisition and retention of spatial memories, as well as provide information about the search strategy employed by the mice. Here we use the Barnes maze to detect a memory deficit in adult mice following a single developmental ethanol exposure event. The newly described Damsel-in-Distress paradigm exposes a male mouse to a female mouse trapped in a chamber in the open center field of the arena. It provides an opportunity for the mouse to socially respond to the trapped female and exhibit prosocial behavior. The Damsel-in-Distress paradigm can also be used to examine mouse behavior in a novel arena and measure locomotor activity. Both the Barnes Maze and the Damsel-in-Distress protocols require minimal financial investment and most aspects of the tests can be constructed from common lab supplies. These flexible and accessible tools can also be used to detect behavioral changes over the course of development.

This protocol measures spatial learning and memory using the Barnes maze. A novel Damsel-in-Distress paradigm is used to assess locomotor activity and prosocial behavior in mice.

Analisi apprendimento spaziale e comportamento prosociale nei topi utilizzando il labirinto di Barnes e paradigmi Damsel in Distress

The Barnes maze is a reliable measure of spatial learning and memory that does not require food restriction or exposure to extremely stressful stimuli. ...

Elevated Plus Maze Test Combined with Video Tracking Software to Investigate the Anxiolytic Effect of Exogenous Ketogenic Supplements

The overall goal of this study is to describe the methodology of the elevated plus maze (EPM) test in combination with a video tracking software. The purpose of the method is to document the effect of various potential anxiolytic treatments on laboratory rodent models. The EPM test is based on the rodents&#39; proclivity toward protected, enclosed dark spaces and unconditioned fear of open spaces and heights, and their innate intense motivation to explore novel environments. The EPM test is a widely used behavioral test for investigating the anxiolytic or anxiogenic responses of rodents given drugs that are known to affect behavior. Observation demonstrating a decreased proportion of time spent on closed arms, an increased proportion of time spent on open arms, a reduced number of entries to closed arms, and an elevated number of entries to open arms measured by the EPM test may reflect reduced anxiety levels. Using this method, the effect of exogenous ketone supplements on anxiety-related behavior is tested in Sprague Dawley (SPD) rats. Exogenous ketone supplements are chronically fed to the rats for 83 days or subchronically and acutely orally gavaged, daily for 7 days, before conducting the EPM test. Behavioral data collection is performed using the SMART video tracking system by a blinded observer at the end of the treatments. The main findings indicate that the EPM test is an effective method to detect the ketone supplement-induced anxiolytic effect and can be considered a sensitive measure to assess changes in anxiety behavior associated with drug- or metabolic-based therapies.

Here, we present a protocol to investigate changes in the anxiety level of rodent animal models. The elevated plus maze (EPM) test, used together with a video tracking software, provides a reliable method to document the effect of various potential anxiolytic treatments in preclinical laboratory scenarios.

Elevato oltre a Test combinato con Video Software di monitoraggio per studiare l'effetto ansiolitico dei supplementi chetogenica esogeni del labirinto

The overall goal of this study is to describe the methodology of the elevated plus maze (EPM) test in combination with a video tracking software. The ...

Chronic Stress Shifts Effort-Related Choice Behavior in a Y-Maze Barrier Task in Mice

Mood disorders, including major depressive disorder, can be precipitated by chronic stress. The Y-maze barrier task is an effort-related choice test that measures motivation to expend effort and obtain reward. In mice, chronic stress exposure significantly impacts motivation to work for a higher value reward when a lesser value reward is freely available compared to unstressed mice. Here we describe the chronic corticosterone administration paradigm, which produces a shift in effortful responding in the Y-maze barrier task. In the Y-maze task, one arm contains 4 food pellets, while the other arm contains only 2 pellets. After mice learn to select the high reward arm, barriers with progressively increasing height are then introduced into the high reward arm over multiple test sessions. Unfortunately, most chronic stress paradigms (including corticosterone and social defeat) were developed in male mice and are less effective in female mice. Therefore, we also discuss chronic non-discriminatory social defeat stress (CNSDS), a stress paradigm we developed that is effective in both male and female mice. Repeating results with multiple distinct chronic stressors in male and female mice combined with increased usage of translationally relevant behavior tasks will help to advance the understanding of how chronic stress can precipitate mood disorders.

The Y-maze barrier task is a behavior test that examines motivation to expend effort for reward. Here, we discuss testing multiple well-validated chronic stressors including chronic corticosterone and social defeat stress with this behavior, as well as the novel chronic non-discriminatory social defeat stress (CNSDS), which is effective in females.

Lo stress cronico sposta il comportamento di scelta correlato allo sforzo in un'attività di barriera del labirinto Y nei topi

Mood disorders, including major depressive disorder, can be precipitated by chronic stress. The Y-maze barrier task is an effort-related choice test that ...

Investigating Migraine-Like Behavior Using Light Aversion in Mice

Migraine is a complex neurological disorder characterized by headache and sensory abnormalities, such as hypersensitivity to light, observed as photophobia. Whilst it is impossible to confirm that a mouse is experiencing migraine, light aversion can be used as a behavioral surrogate for the migraine symptom of photophobia. To test for light aversion, we utilize the light/dark assay to measure the time mice freely choose to spend in either a light or dark environment. The assay has been refined by introducing two critical modifications: pre-exposures to the chamber prior to running the test procedure and adjustable chamber lighting, permitting the use of a range of light intensities from 55 lux to 27,000 lux. Because the choice to spend more time in the dark is also indicative of anxiety, we also utilize a light-independent anxiety test, the open field assay, to distinguish anxiety from light-aversive behavior. Here, we describe a modified test paradigm for the light/dark and open field assays. The application of these assays is described for intraperitoneal injection of calcitonin gene-related peptide (CGRP) in two mouse strains and for optogenetic brain stimulation studies.

Rodents are not able to report migraine symptoms. Here, we describe a manageable test paradigm (light/dark and open field assays) to measure light aversion, one of the most common and bothersome symptoms in patients with migraines.

Studiare il comportamento simile all'emicrania usando l'avversione alla luce nei topi

Migraine is a complex neurological disorder characterized by headache and sensory abnormalities, such as hypersensitivity to light, observed as ...

Validazione di un modello murino della sindrome di Angelman mediante test comportamentali

Behavioral Characterization of an Angelman Syndrome Mouse Model

This manuscript describes a battery of behavioral tests available to characterize Angelman syndrome (AS)-like phenotypes in an established murine model of AS. We use the rotarod learning paradigm, detailed gait analysis, and nest building test to detect and characterize animal motor impairments. We test animal emotionality in the open field and elevated plus maze tests, as well as the affect in the tail suspension test. When AS mice are tested in the open field test, the results should be interpreted with care, since motor dysfunctions influence mouse behavior in the maze and alter activity scores.
The reproducibility and effectiveness of the presented behavioral tests has already been validated in several independent Uba3a mouse lines with different knockout variants, establishing this set of tests as an excellent validation tool in AS research. Models with the relevant construct and face validity will warrant further investigations to elucidate the pathophysiology of the disease and grant the development of causal treatments.

Autore in primo piano: una batteria di test comportamentali altamente riproducibili per convalidare un modello murino della sindrome di Angelman 

This manuscript presents a set of highly reproducible behavioral tests to validate an Angelman syndrome mouse model.

Caratterizzazione comportamentale di un modello murino con sindrome di Angelman

This manuscript describes a battery of behavioral tests available to characterize Angelman syndrome (AS)-like phenotypes in an established murine model of ...