מודל של העכבר של ואסיאני הטרוגרההשתלת הטחול ללמוד תא הטחול ביולוגיה וחסינות להשתלות

מודל העכבר של השתלת טחול מציע הזדמנות מצוינת לחשוף את התפקיד של תאי טחול בוויסות של תגובות חיסוניות מקומיות ומערכתיות במחלות דלקתיות. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא כי באמצעות עכברים חביבים, השתלת טחול מאפשרת לבדוק את גורלם, אריכות ימים, ותפקוד של תאי טחול. לפני תחילת ההליך, מניחים וילון חד פעמי סטרילי מעל הפלטפורמה הכירורגית ומאשרים את חוסר התגובה לצביטת בוהן בעכבר התורם הרדמה.

גילחו את השיער מכל אזור הבטן והמקמים את העכבר על פלטפורמה כירורגית סטרילית תחת מיקרוסקופ הפעלה בהגדלה של פי 6 עד 10. לעקר את העור החשוף עם כרית הכנת אלכוהול ולאבטח את הגפיים עם סרט כירורגי. הזן את הבטן באמצעות חתך עור אנכי של שלושה עד ארבעה סנטימטרים מהעווית לתהליך הקסיפואיד.

לצרוב את כלי העור ולהרחיב את החתך לבטן הצדדית משני הצדדים כדי להשיג חשיפה טובה יותר. באמצעות צמר גפן סטרילי, להעביר את המעיים לאגף הימני של הבטן כדי לחשוף את הטחול ולהשתמש צרוב טמפרטורה נמוכה סטרילית כדי לצרוב את וריד הקיבה הקצר המחובר לטחול. מניחים חתיכת גזה סטרילית ספוגה מלוחים 37 מעלות צלזיוס מעל הטחול כדי לשמור אותו לח ונפרד ולגייס את וריד הפורטל מרקמת הלבלב.

Ligate הענפים של וריד הפורטל כפי שהוכח. מניחים תפר סביב דיסטל וריד הפורטל מן וריד הטחול ולהפוך את הטחול לצד ימין כדי לחשוף את אבי העורקים ואת העורק הטחול על גזע הצליאק. לנתח ולגייס את העורקים הטחול של הצליאק האורטי ולה מניחים תפר סביב העורקים proximal אל עורק הצליאק.

להזריק 100 יחידות בינלאומיות של הפרין לתוך ונה קאווה נחות או IVC כדי heparinize את כל הגוף. לאחר שלוש דקות, ליגטה את עורקי הלחץ והקיבה ב- aorta proximal לעורק הצליאק. חוצים את וריד הפורטל ומבלבלים את כל הגוף עם 10 מיליליטר של מלוחים בעלי 4 מעלות צלזיוס מאבי העורקים בבטן דיסטלי לתא המטען של הצליאק.

לאסוף את שתל הטחול ולחסום עם קטע הצליאק האורטי הקשורים בווריד הפורטל יחד עם קטע של וריד הטחול וחלק קטן של רקמת הלבלב. ואז לשמר את השתל בחמישה מיליליטר של ארבע מעלות צלזיוס מלוחים. הזן את הבטן המטופל באמצעות חתך קו האמצע לאחר האזור הכירורגי מוכן כפי שהוא עבור התורם ולהסיר טחול יליד המטופל על ידי קשירה של וריד הטחול ואת העורק.

מכסים את רקמות המעי עם גזה ספוגה 37 מעלות צלזיוס בזהירות להעביר את המעי לצד שמאל. לנתח וללקט את הענפים המותניים של האב העורקים המסגרתיים ב- IVC ולהצליב את האב העורקים המסגרתיים ב- IVC עם שני מלחציים מיקרו-וסקולריים ארבעה מיליליטר. מניחים תפר ניילון 11-0 דרך ביתן infrarenal ולמשוך את הכלי כדי לאפשר יצירה של aortotomy אליפטי עם מיקרו-סיסורים.

השתמש מחט מד 30 לנקב את IVC כדי ליצור venotomy אליפטי ולהרחיב את הפתח לאורך וריד פורטל התורם. לשטוף את העורקים ו- IVC עם 500 microliters של מלוחים heparinized כדי לנקות את הדם התוך-תאי או קרישי דם מכלי הדם ולהמקם את שתל הטחול התורם לתוך האגף הימני של הבטן המטופל. זהה בזהירות את שרוול אבי המין התורם ואת וריד הפורטל.

לאחר אישור כי כלי הדם אינם מעוותים, לכסות את שתל הטחול עם גזה ספוגה מלוחים ארבע מעלות צלזיוס. באמצעות שני תפרים שהייה 11-0, לחבר את האזיק אבי האאורטיק התורם לשיא proximal ודיסטלי של אבי האאורטוטומיה המטופל ולעשות anastomosis עם שתיים עד שלוש ביסים של תפרים רציפים 11-0 ניילון בין שרוול אבי האאורטיק התורם ואת הקיר האחורי של aortotomy הנמען. סובבו את שתל הטחול לצד שמאל של המטופל והפכו את האנטומוזיס בין שרוול אבי העורקים התורם לקיר האחורי של אבי העורקים של המטופל.

בצע את האנטומיה הווריד בין וריד פורטל התורם לבין IVC הנמען עם ארבע עד חמש ביסים של תפרים רציפים בכל צד. תפר תחילה את הקיר האחורי בתוך כלי השיט ולאחר מכן סגור את הקיר האחורי באמצעות אותו תפר. להשלים את האנטומיה עם קשר ממוקם בפינה התחתונה מחוץ IVC.

עכשיו לשחרר את מהדקי כלי ולהשתמש ספוגית כותנה סטרילית כדי טמפונדה הדימום עד צבע הטחול הוא התאושש. סגור את הבטן עם תפר Vicryl סינטטי 5-0 נספג בתבנית רציפה ולסגור את שכבת העור עם תפר ניילון 5-0 בתבנית מופרעת. ואז להזריק 250 microliters של מלוחים חמים תת עורית לארבעה מקומות נפרדים לחמם את העכבר באינקובטור מבוקר טמפרטורה 30 מעלות צלזיוס במשך השעות הראשונות לאחר הפעולה עם ניטור עד החיה חזרה להכרה מספקת להעברה לכלוב הבית.

Hematoxylin ו- eosin של טחול isografts ימים אחד ושבע לאחר ההשתלה מגלה כי הארכיטקטורה של isografts הטחול נשאר שלם במהלך השבוע שלאחר הניתוח הראשון. ניתוח ציטומטרי זרימה כדי לחקור את הגירת תאי הטחול התורם לאחר ההשתלה מראה כי כ -50% מתאי הטחול נגזרים ביום אחד לאחר ההשתלה וכ -46% נגזרים. שבעה ימים לאחר ההשתלה, לויקוציטים נגזר התורם מהווים כ 32% מכלל תאי הטחול בעוד התאים הנגזרים הנמען גדל עד כ 53% לויקוציטים טחול התורם גם היגרו לתוך בלוטות הלימפה, דם, ומח העצם כבר ביום הראשון ומתוחזקים לפחות יום שבע יצירת כימרה ייחודי יקר עבור מחקר סחר splenocyte.

שימוש בעכברים מהונדסים גנטית כתורמים טחול יאפשר את חקירת התפקידים של מתווכים שמקורם בתא הטחול או מסלולי איתות מרכזיים בתהליכי מחלה. מודל זה יכול להיות כלי רב עוצמה לחקר המנגנונים של אוכלוסיות תאי הטחול בתגובה לפתוגנים, פציעה, דלקת או דחיית השתלה.