Dalak transplantasyonunun fare modeli, inflamatuar hastalıklarda lokal ve sistemik immün yanıtların düzenlenmesinde dalak hücrelerinin rolünü ortaya çıkarmak için büyük bir fırsat sunmaktadır. Bu protokolün en büyük avantajı, konjenijen fareler kullanılarak dalak naklinin dalak hücrelerinin kaderini, uzun ömürlülüğünü ve işlevini kontrol etmeyi mümkün kılmıştır. İşleme başlamadan önce, cerrahi platform üzerine steril bir tek kullanımlık perde yerleştirin ve anestezi donör farede parmak kıskacına yanıt eksikliğini onaylayın.
Tüm karın bölgesinden saç tıraş ve 6 ila 10X büyütme bir işletim mikroskop altında steril bir cerrahi platform üzerine fare yerleştirin. Bir alkol hazırlık pedi ile maruz kalan cildi sterilize ve cerrahi bant ile uzuvları güvenli. Pubis'ten ksifoid sürecine kadar 3-4 santimetrelik orta hat dikey deri kesisinden karına girin.
Cilt damarları cauterize ve daha iyi pozlama elde etmek için her iki tarafta lateral karın kesi uzatmak. Steril bir pamuklu bez kullanarak, dalak maruz bırakmak için karın sağ kanadına bağırsak hareket ve dalak bağlı kısa mide damarı cauterize için steril bir düşük sıcaklık cautery kullanın. Nemli tutmak ve ayrı ve pankreas dokusundan portal ven seferber etmek için dalak üzerinde 37 derece santigrat tuzlu tuzlu ile ıslatılmış steril gazlı bez bir parça yerleştirin.
Gösterildiği gibi portal venin dallarını inkâr edin. Dalak ven portal ven distal etrafında bir dikiş yerleştirin ve çölyak gövde üzerinde aort ve dalak arter ortaya çıkarmak için sağ tarafa dalak çevirmek. Diseksiyon ve aort çölyak dalak arterler seferber ve çölyak artera aort proksimal etrafında bir dikiş yerleştirin.
Tüm vücudu heparinize etmek için inferior vena kava veya IVC içine heparin 100 uluslararası birimleri enjekte. Üç dakika sonra, çölyak artera aort proksimal hepatik ve gastrik arterler ligate. Portal ven transect ve çölyak gövde abdominal aort distal gelen dört derece santigrat heparinize salin 10 mililitre ile tüm vücut perfit.
Dalak grefti toplamak ve portal ven ilişkili aort çölyak dalak segmenti ile blok ve pankreas dokusunun küçük bir kısmı ile birlikte. Sonra grefti dört derece santigrat derece lik beş mililitrede koruyun. Cerrahi bölge donör için olduğu gibi hazırlandıktan sonra orta hat kesi ile alıcı karın girin ve dalak ve arter ligating tarafından alıcı yerli dalak çıkarın.
37 derece santigrat ıslatılmış gazlı bez ile bağırsak dokuları kapak ve dikkatle sol tarafa bağırsak hareket ettirin. IVC'deki infrarenal aortun lomber dallarını kesip inceleyin ve kesin ve ivc'deki infrarenal aortu iki dört mililitrelik mikrovasküler klemplerle çapraz kelepçeleyin. Infrarenal aort yoluyla bir 11-0 naylon dikiş yerleştirin ve mikroscissors ile eliptik bir aortomi oluşturulmasına izin vermek için damar geri.
Eliptik bir venotomi oluşturmak ve donör portal damar uzunluğuna açıklık uzatmak için IVC delmek için 30 gauge iğne kullanın. Aort ve IVC'yi 500 mikrolitre heparinize salin ile yıkayın, intralüminaal kan veya kan pıhtılarını damarlardan temizleyin ve donör dalak greftini alıcı karının sağ kanına yerleştirin. Dikkatle donör aort manşet ve portal ven tanımlayın.
Damarların bükülmediğini doğruladıktan sonra, dalak greftini dört derece santigrat derece tuzlu gazlı bezle kaplayın. İki 11-0 kalmak sütür kullanarak, alıcı aortotomi proksimal ve distal apeks donör aort manşet bağlayın ve donör aort manşet ve alıcı aortotomi ön duvarı arasında sürekli 11-0 naylon dikiş iki ila üç ısırık ile bir anastomoz yapmak. Dalak greftini alıcının sol tarafına çevirin ve donör aort manşeti ile alıcıa aortotominin arka duvarı arasındaki anastomoz yapın.
Donör portal ven ve alıcı IVC arasında venöz anastomoz her iki tarafta sürekli dikiş dört ila beş ısırık ile gerçekleştirin. Önce damar lümeni içindeki arka duvarı dikin ve sonra aynı sütürle ön duvarı kapatın. Anastomozu IVC'nin alt köşesine yerleştirilen bir düğümle tamamlayın.
Şimdi damar kelepçeleri bırakın ve dalak rengi iyileşene kadar kanama tamponade steril bir pamuklu bez kullanın. Sürekli bir desen 5-0 sentetik emilebilir Vicryl dikiş ile karın kapatın ve kesilen bir desen 5-0 naylon dikiş ile cilt tabakası kapatın. Daha sonra 250 mikrolitre ılık salini dört ayrı yere enjekte edin ve fareyi 30 derece sıcaklık kontrollü bir kuluçka makinesinde ilk birkaç saat boyunca hayvan ev kafesine nakletmek için yeterli bilinci kazanana kadar izleyerek ısıtın.
Transplantasyondan bir ve yedi gün sonra dalak İzogreftlerinin hematoksilin ve eozini, ameliyat sonrası ilk hafta boyunca dalak isogreftlerinin mimarisinin bozulmadığını ortaya koymaktadır. Transplantasyon sonrası donör dalak hücre göçünü araştırmak için yapılan akış sitometrik analizi, dalak hücrelerinin yaklaşık %50'sinin transplantasyondan bir gün sonra donör dendiğini ve yaklaşık %46'sının alıcı kaynaklı olduğunu göstermektedir. Transplantasyondan yedi gün sonra, donörden elde edilen lökositler toplam dalak hücrelerinin yaklaşık %32'sini oluştururken, alıcı elde edilen hücreler yaklaşık %53'e kadar artmış olan Donör dalak lökositler de ilk gün gibi erken saatlerde lenf düğümlerine, kana ve kemik iliğine göç etmiş ve en az yedinci güne kadar splenocyte ticareti araştırmaları için değerli benzersiz bir Chimera oluşturur.
Dalak donörleri olarak genetiği değiştirilmiş knock-in farelerin kullanılması, dalak hücre kaynaklı arabulucuların veya hastalık süreçlerinde anahtar sinyal yollarının rollerinin araştırılmasına olanak sağlayacaktır. Bu model patojenler yanıt dalak hücre popülasyonlarının mekanizmalarını keşfetmek için güçlü bir araç olabilir, yaralanma, inflamasyon, veya organ nakli reddi.
