חקירת תהליכים על רמות גנטיות וחלבון היא חיונית במחקר היבול. הגישה שלנו מאפשרת בדיקה של חלבוני מבוך מופרשים עם רזולוציית הזמן המרחבית הגבוהה ביותר בצדדים ורקמות זיהום שונים. שיטת הסוס הטרויאני בוחנת יכולות הפרשה אוטומטיות שימושיות.
היא עוקפת טרנספורמציות מבוך זמן רב ומאתגרות, ומאפשרת מחקרים מפורטים על חלבונים מופרשים בתוך ה-appelplatz במבוך. מידע מפורט על זיהום נכון של עלים מבוך נוסף, גדילים ואוזן. ומראה את המחקר המוצלח של התקדמות זיהום ותפקוד חלבון ברקמת היעד.
הפגנת ההליך תהיה איזבל פידלר, סטודנטית לתואר שני מהמעבדה. כדי להתחיל את הניסוי, לגרד Eumadous מצלחת pediatr באמצעות פיפטה פסטר סטרילי. לחסן 5 מיליליטר של YEPS בינוני קל עם Eumadous.
לגדל את התרבות ב 28 מעלות צלזיוס, עם רעידות קבועות ב 200 סל"ד במשך 16 שעות. למחרת מערבבים 900 מיקרוליטרים של תאורת YEPS טרייה עם 100 מיקרוליטרים של תרבות הלילה. למדוד את OD-600 באמצעות YEPS בהיר בינוני כמו ריק בניתוח ספקטרופוטומטר.
לדלל את תרבות הלילה עם בינוני אור YEPS טרי כדי OD-600 של 2. תן לתרבות לגדול ב 28 מעלות צלזיוס עם רעידות קבועות ב 200 סל"ד, עד שהוא מגיע לשלב הצמיחה באמצע יומן, מסומן על ידי OD-600 של 8 עד 1.0. לאחר הדגירה, לקצור את התאים על ידי ספינינג אותם ב 3000 פעמים צ'י במשך 10 דקות.
השלך את העל-טבעי. לאחר מכן, לשטוף את פילט התא פעם אחת עם נפח תרבות אחד של DDH2O. לסובב את התאים ב 3000 זמן צ'י במשך 10 דקות ולהשליך את העל טבעי.
לאחר מכן, להשעות מחדש את פילט התא בזהירות DDH2O, באמצעות פיפטה זכוכית 20 מיליליטר. ובכך להתאים את OD-600 הסופי כדי 3.0 עבור מדוד סוס טרויאני או 1.0 עבור דירוג המחלה. מטפחים את צמחי המבוך לשלב של עלים בוגרים, שבו לפחות עלה 7 גדל בתוך הגבעול.
לאחר מכן, להעביר את התרבות Eumadous למזרק 3 מיליליטר עם 20 מד דו אחד מחט hypodermic. לחץ על הגבעול בזהירות כדי לוקליזציה של רקמת גזע המראה. הבסיס של גזע המראה ניתן להבדיל על ידי מעבר מ גבעול קשה יותר לרקמה רכה יותר.
סמן את גזע המראה על הגבעול באמצעות עט. להזריק 1.5 מיליליטר של תרבות Eumadous 1 סנטימטר מעל גזע מראה לירות או גזע מראה תפרחת. לאחר שצמחי המבוך מגיעים לשלב צאסלה, לחץ על הגבעול בזהירות כדי לוקליזציה של צ tassel בגזע.
סמן את הקצה ואת בסיס צ tassel על הגבעול באמצעות עט. להעביר את התרבות Eumadous לתוך מזרק 3 מיליליטר עם מחט מזרק 20 מד דו אחד להזריק סך של 1.5 מיליליטר של inoculum סביב הציצית. כדי לבטח חלוקה שווה של inoculum, לאט למקם 5 מיליליטר בקצה, באמצע, ואת הבסיס של ציצית מסומן עם העט.
העבר את תרבות Eumadous למזרק 3 מיליליטר עם 20 מד דו אחד מחט hypodermic. להזריק את מחט החיסון לתוך החלל בין עלי ההצקת עמוק ככל האפשר מבלי לפגוע באוזן, ולאחר מכן לשחרר 1.5 מיליליטר של inoculum סביב האוזן. לאחר מכן, להסיר את המזרק ואת המחט בזהירות לעסות את קלח כדי להפיץ את הפתרון Eumadous באופן שווה.
טיפה 10 microliters של inoculum על צלחת Auger פחם PD. ואז דגירה בטמפרטורת החדר במשך 2 ימים. היפי מפריש ZM Mach1 מוקף באות פלואורסצנטי ודובדבן.
לעומת זאת, היפים שאינם מזכירים מראים רק אות פלואורסצנטי בציטופלסמה הפטרייתית. לוקליזציה לא נכונה של צסול או חלוקה לא שוויונית של אינוקולום עלולה לגרום לטביעה לא מדביקה או לזיהום חלקי בלבד של הטסל בהשוואה להפצה אחידה. סולו פתוגניים סוס טרויאני Progenester זן SG-200, מתורבת על Auger פחם PD, יוצר תריסים מוך לבן על הצלחת כפי שמוצג.
בעוד זן Eumadous FB1 דורש הזדווגות לפני היווצרות תריס זיהומיות. בעקבות זיהום, התגובה האפשרית של סימנים חלבון כבד סוס טרויאני ניתן לנתח בשיטות שונות כולל דירוגי מחלות או הדמיה מיקרוסקופית. עבור פתוגנים רבים, טרנספורמציה והפרשה מובנים היטב ו ניתן לחקור אותם באופן דומה.
לכן, הם מאפשרים את המחקר של המארח, אשר אינם רגישים לשינוי.
