إنّ تحري العمليات على مستويات الجينات والبروتينات أمر بالغ الأهمية في بحوث المحاصيل. نهجنا تمكن من فحص البروتينات المتاهة المفرزة مع أعلى دقة الزمانية المكانية في مختلف جوانب العدوى والأنسجة. تستكشف طريقة حصان طروادة قدرات إفرازية تلقائية مفيدة.
أنه يتحايل على الوقت المستهلكة وتحدي التحولات المتاهة، ويسهل الدراسات التفصيلية على البروتينات المفرزة داخل appelplatz المتاهة. معلومات مفصلة عن العدوى السليمة من أوراق المتاهة المضافة، شرابات والأذن. ويظهر الدراسة الناجحة لتطور العدوى ووظيفة البروتين في الأنسجة المستهدفة.
ومن خلال هذا الإجراء، ستكون إيزابيل فيدلر، وهي طالبة خرّج من المختبر. لبدء التجربة، خدش Eumadous من لوحة pediatr باستخدام ماصة معجنات معقمة. تلقيح 5 ملليلتر من المتوسط الخفيف YEPS مع Eumadous.
تنمو الثقافة في 28 درجة مئوية، مع اهتزاز مستمر في 200 دورة في الدقيقة لمدة 16 ساعة. في اليوم التالي مزيج 900 ميكرولترات من ضوء YEPS الطازجة مع 100 ميكرولترات من ثقافة بين عشية وضحاها. قياس OD-600 باستخدام ضوء متوسطة YEPS كفراغ في تحليل مقياس الطيف.
تمييع ثقافة بين عشية وضحاها مع ضوء YEPS جديدة المتوسطة إلى OD-600 من 2. اسمحوا ثقافة تنمو في 28 درجة مئوية مع اهتزاز مستمر في 200 دورة في الدقيقة، حتى تصل إلى منتصف مرحلة النمو سجل، المشار إليها من قبل OD-600 من 8 إلى 1.0. بعد الحضانة، حصاد الخلايا عن طريق الغزل لهم في 3000 مرات تشي لمدة 10 دقائق.
تجاهل المُندفع. بعد ذلك ، قم بغسل كومة الخلية مرة واحدة مع حجم ثقافة 1 من DDH2O. تدور الخلايا في 3000 وقت تشي لمدة 10 دقائق وتجاهل افر.
ثم, إعادة تعليق كومة الخلية بعناية في DDH2O, باستخدام ماصة زجاجية 20 ملليلتر. وبالتالي تعديل النهائي OD-600 إلى 3.0 لم مقايسة حصان طروادة أو 1.0 لتصنيف المرض. زراعة النباتات المتاهة إلى مرحلة من أوراق الكبار، حيث على الأقل ورقة 7 ينمو داخل ساق.
بعد ذلك، نقل الثقافة Eumadous إلى حقنة 3 ملليلتر مع 20 قياس ثنائية واحد إبرة تحت الجلد. اضغط على ساق بعناية لتوطين الأنسجة الجذعية مرآة. يمكن تمييز قاعدة جذع المرآة بالانتقال من ساق أصعب إلى أنسجة أكثر ليونة.
وضع علامة على جذع المرآة على الساق باستخدام القلم. حقن 1.5 ملليلتر من الثقافة Eumadous 1 سنتيمتر فوق الجذعية تبادل لاطلاق النار مرآة أو استنفرس مرآة الجذعية. بمجرد أن تصل نباتات المتاهة إلى مرحلة شرابة ، اضغط على الساق بعناية لتوطين شرابة في الساق.
وضع علامة على طرف وقاعدة شرابة على الجذعية باستخدام القلم. نقل الثقافة Eumadous في حقنة 3 ملليلتر مع 20 قياس ثنائية واحد هدمة حقن ما مجموعه 1.5 ملليلتر من inoculum حول شرابة. لضمان التوزيع المتساوي للـ inoculum، ضع ببطء 5 ملليلترات في الطرف، الأوسط، وقاعدة شرابة مع علامة القلم.
نقل الثقافة Eumadous في حقنة 3 ملليلتر مع 20 قياس ثنائية واحد إبرة تحت الجلد. حقن إبرة التلقيح في الفضاء بين أوراق قشر أعمق قدر الإمكان دون إصابة الأذن، ثم الافراج عن 1.5 ملليلتر من inoculum حول الأذن. بعد ذلك، قم بإزالة الحقنة والإبرة وتدليك الكوز بعناية لتوزيع محلول Eumadous بالتساوي.
إسقاط 10 ميكرولتر من inoculum على لوحة الفحم PD أوجير. ثم احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 أيام. هيفا يفرز ZM Mach1 محاطة الفلورسنت وإشارة الكرز.
في المقابل، لا تظهر الهزيمة غيرsecreting سوى إشارة الفلورسنت في السيتوبلازم الفطري. غير لائق تعريب شرابة أو توزيع غير متساو من inoculum يمكن أن يؤدي إلى شرابة غير المصابة أو عدوى جزئية فقط من شرابة مقارنة حتى التوزيع. منفردا المسببة للأمراض حصان طروادة سلالة SG-200، مثقف على أوجير الفحم PD، يشكل خيوط زغب أبيض على لوحة كما هو مبين.
في حين أن سلالة Eumadous FB1 يتطلب التزاوج قبل تشكيل خيوط المعدية. بعد العدوى، يمكن تحليل الاستجابة المحتملة للعلامات بروتين الكبد حصان طروادة باستخدام طرق مختلفة بما في ذلك تقييمات المرض أو التصوير المجهري. بالنسبة للعديد من مسببات الأمراض ، فإن التحول والإفراز مفهومان جيدًا ويمكن استكشافهما بطريقة مماثلة.
ولذلك، فإنها تمكن دراسة المضيف، والتي ليست عرضة للتحول.
