עבודה זו מומנה בחלק מדע חינוך שותפות פרס (SEPA) R25 RR025066 ידי בין 2,008-2,012 מהמכון הלאומי לבריאות והמרכז הלאומי למשאבי מחקר. תודה לעמיתים בתחום הטעם לדיון מתחשב בספרות, התוצאות שלנו ומשוב על השימוש בDPP בתרחישים שונים במעבדה: ג&#39;ון הייז, סו Coldwell, פול ברסלין, קרלה שוברט. תודה גם להנהגה בדנבר מוזיאון הטבע ומדע ואת צוות בתמיכה של מדע אזרח בגנטיקה של מעבדה טעם בתוך משלחת בריאות. לבסוף, תודה לכולם של מדעני האזרח מתנדב שלנו לזמן שלהם ומסירותו לפיתוח ושימוש בפרוטוקול זה, וביניהם: דוב אראגון, מייק ארצ&#39;ר, סו אטאמן, מייקל באגלים, A&#39;nette ברטרנד, דיאנה וילס, וונדי סמוי, סשה דולי , פטי Drever, ג&#39;סיקה ארן, לורה Harmacek, שון Hibbard, ג&#39;ויס Hutchens, מאט Joo, Leta קין, וילם Leenhouts, סטפניה Lukjan, אשלי מתיוס, מייק מאוזר, סטפני מילר, האלי מורגן-רודריגז, גריפין Scherma, אליסה Schickedanz, טרי סיימון, דילן תומס, רודי טורס, טיילר וילסון, דיאן Woltkamp.

תמונות הבקיע במחקר זה נאספו כחלק ממחקר גדול יותר שנערך בטעם הגנטיקה של מעבדה טעם בדנבר מוזיאון הטבע והמדע (המוזיאון) 10. נושאים של המחקר הגדול יותר היו מבקרים מוזיאון (n = 1,195) בטווח גילי 18-93. בעוד נושאים הגיעו משישה משבע היבשות, משתתפים היו בעיקר ממוצא אירופאי. נתונים של כל נושא נאספו בפגישה מעבדה 30 דקות אחד. המערבי Institutional Review Board אישר את הפרוטוקול, הודיעה הסכמה בכתב ניתנה, ונושאים התנדבו זמנם ולא פיצו על השתתפותם במחקר. 1. איסוף נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכידת תמונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצג נושאי תצלום של איך לדגמן בעצמם (איור 1) ומה התמונה שצולמה תיראה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig1.jpg" /> איור 1: לכידת תמונת תנוחה. </strאונג&gt; זה התצלום מוצג לנושאים במעבדה קיבל כדי להוות כראוי לתמונה לשונם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נושאים ישירים לייבוש לשונם ביד נייר מגבת ולהשאיר את הלשון בולטת מפיהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל כ 3 מיליליטר של צבע הכחול מזון בריכוז 01:36 לשיא של הלשון באמצעות מוליך סטרילי, זהורית עם טיפ 1 אינץ &#39;. יש נושאים לחזור לשון לפה שלהם ולבלוע כדי להסיר עודפי צבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש נושאים להוות את עצמם כפי שמוצגים באיור 1, עם הסנטר שלהם על הידיים והמרפקים על שולחן ליציבותם. נושאים ישירים להארכת לשונם מרחק נוח ולאבטח אותו בעדינות בין שיניהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדבוק פיסת 2.5 סנטימטר של נייר סינון בקוטר 10 מ&quot;מ מגזרת עגולה אגרופו לקצה הקדמי של הצד השמאלי של הלשון ליד קו האמצע (ראה איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח לפחות שלוש תמונות תקריב של הלשון, CApturing כל חוזר מגזרת 10 מ&quot;מ על מנת להבטיח להדמיה של כל FP בתוך אזור זה. השתמש בהגדרת המאקרו של מצלמה נקודה ולירות דיגיטלית באיכות גבוהה שמחוברת לחצובה ליציבות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקרבתי כדי שכל מגזרת מצולמת ועדיין בתוך טווח הזום של המצלמה המומלצת במידה. ודא שהמטוס של עדשת המצלמה הוא מקביל למישור של הלשון ושניתק מופיע עגול בתמונה במקום מלבני. סקור תמונות כדי לוודא שהם באיכות גבוהה ושימושית לספירה. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונת בחירה והכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העלה את התמונות למחשב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> של התמונות שצולמו בלשון זהה של הנושא, לבחור רק אחד לניתוח נוסף המבוססת על הגדרה ברורה בין מבנים על הלשון בזום הגבוה ביותר ואת הזווית מעוותת לפחות כך הלשון היא רחבה ושטוחה לכיוון המצלמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את תמונת הגלם שנבחרה בקוד הפתוח כךftware, ImageJ. לחץ על &quot;תוספים&quot; ובגלילת התפריט הנפתח כדי &quot;לנתח&quot; ולחץ על &quot;דלפק תא.&quot; כשדלפק התא נפתח, לחץ על &quot;אתחול&quot; לקשר את התמונה לדלפק התא. שים לב: כאן, להשתמש ImageJ 1.45 שניות עם 32 סיביות גרסת Java 1.6.0_10. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש הגדלה סטנדרטית של 50% לעקביות בין ציונים ולשימוש בשלבים הבאים כדי לצבור FP. הזז את התמונה בצד השמאל של המסך ליד דלפק התא. תמונה זו מכונות העתקה (ראה איור 2 צד, שמאל של מסך). </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח עותק שני של תמונת הגלם (עותק B) למדידת הקטרים ​​של גבשושיות שלכמת. זום פנימה והחוצה לפי צורך להעדפה של מלך השערים הבודדים לאורך כל תהליך הניקוד. העבר עותק זה לצד ימין של המסך, כך שני העותקים אינם מבולבלים בטעות. (ראה איור 2, צד ימני שלמסך) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על כלי הקו. שימוש בעותק B, זום בכל מה שנחוץ לצייר במדויק קוטר 10 מ&quot;מ רוחב המעגל הפנימי של נייר הסינון בכל זווית ולחץ על &quot;נתח&quot; ו&quot; קבע קנה מידה. &quot;מלא את&quot; המרחק ידוע &quot;להיות&quot; 10 . &quot;ודא בקנה מידה נכונה על ידי מדידת זווית חלופית ולהבטיח טווח הקוטר הוא בין 9.8-10.2 מ&quot;מ. אם זה לא, חזור על שלב זה. </li></ol><img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig2.jpg" /> איור 2: העתקה והעתקה ב העתקה (משמאל) צמוד לחלון דלפק תא ונשאר בהגדלה של 50% לעקביות מהמלך שערי מלך השערים ולאילו עותק B (מימין) ניתן המוגדל להעדפתו של הפרט. 2. הניקוד FP שימוש בדנבר גבשושיות הפרוטוקול דיכוטומית מפתח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכל מועמד papilלה, להשתמש במפתח הבא דיכוטומית (שלב 2.2-2.5) המפרט את הקריטריונים כדי לקבוע אם זה FP. עיין באיור 3 עבור חזותי של גבשושיות המסווגים כFP ולאלה שדחו בכל שלב בתהליך. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig3.jpg" /> איור 3: לעומת FP נדחה גבשושיות. איור 3 א הוא לשון עם כמה מוקדמות FP תוך 3 ב-3E שהקיף אזורים המפרים כל כלל. (3 ב) האזור הוא אמורפי; גבשושיות (3C) הם קטנות מדי; papilla 3D) היא כחולה בהשוואה לאלו הסובבים אותו, (papilla 3E) היא שקוע בהשוואה לסובבים אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צורה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע אם המועמד היא papilla אמורפי (חסר צורה). בזום 50% לראות אם יש צורה מוכרת בכינוי גיאומטרי (סגלגל, cuboidal, עגול). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יש צורה גיאומטרית (ראה איור 3 א), עבור לשלב 2.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יסדואר הוא לא צורה גיאומטרית (ראה איור 3), ללכת לחלון דלפק תא ולחץ על &quot;סוג 1.&quot; בעותק (זום 50%), לחץ על papilla המועמד כדי לסמן אותו כאמורפי ולא FP. לחיצה על סוגים 1-4 בזה ושלבים הבאים מאפשרת ציונים לדעת שהם התייחסו לכל גבשושיות המועמד לקטגוריות ששלטון הופר בעת דחיית מבנה אשר יסייע בדיון בשלב 2.7.2. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צבע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיין להעתיק ב 50% זום ולקבוע אם יש בידול צבע על פני השטח של הלשון. אם כן, תמשיך 2.3.2 הבא. אם לא, אינו משתמש בצבע כגורם מכריע; עבור לשלב 2.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע אם papilla המועמד היא קלה יותר מאשר הרקמה או גבשושיות המקיפות אותו (ראה איור 3 א). אם חלק כלשהו של papilla המועמד נשאר ורוד או מוכתם קל, עבור לשלב 2.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם papilla המועמד היא כחולה והגבשושיות סביבםקל יותר (ראה איור 3 ג), ללכת לחלון דלפק תא ולחץ על &quot;סוג 2&quot; על דלפק התא. על עותק, לחץ על המועמד לסמן ככחול מדי ולא FP. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גודל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השימוש בעותק B, להתקרב למרחק שבו בנוחות אחד יכול לראות את קווי המתאר של papilla המועמד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על כלי הקו ולמדוד על פני הממד הארוך ביותר של papilla המועמד. לחץ על &quot;נתח&quot; ולאחר מכן &quot;מידה&quot;. אם האורך הנמדד הוא 0.5 מ&quot;מ או יותר (ראה איור 3 א), עבור לשלב 2.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם האורך נמדד הוא .499 מ&quot;מ או פחות, למדוד פעם נוספת כדי להבטיח דיוק. אם זה עדיין .499 מ&quot;מ או פחות (ראה 3D F igure), לחץ על &quot;סוג 3&quot; על חלון דלפק תא ועל עותק, לחץ papilla המועמד כדי לסמן אותו כקטן מדי ולא FP. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיתון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בעותק, להעריך אם papilla המועמד הוא גם מדיוight עם שאר הלשון או גבוהה. אם papilla היא בנקיק, לקבוע את הגובה שלה בהשוואה למבנים האחרים בנקיק, לא על פני השטח של הלשון. אם papilla נמוכה מהגבשושיות המקיפות אותו (ראה איור 3E), להשתמש &quot;סוג 4&quot; ועל עותק, לחץ papilla המועמד כדי לסמן אותו כהפסקה ולא FP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם papilla המועמד היא אחת מגובה אחיד עם שאר הלשון או גבוהה (ראה איור 3 א), להשתמש &quot;סוג 5&quot; ללחוץ עליו ולסמן שזה FP. סך הכל סוג 5 זה ציון FP גלם. אל תסגרו את העותקים בשלב זה כImageJ אינו שומר את הציונים על דלפק התא ולא הסימנים הצבעוניים מסוגים 1-5 על עותק א </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיסכון העתקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום בציון FP גלם מחברת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על חלון דלפק תא, לחץ על &quot;תמונת יצוא.&quot; שמור עם מערכת השמות הרצויה של המעבדה. זה יאפשר הפתיחה של שוטרy בעתיד כדי לשמר את הסימנים הצבעוניים מסוגים 1-5. זה לא יציל את ציון FP גלם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקרת איכות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון כל תמונה על ידי שני ציונים בודדים ולהשוות 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם ציון גלם FP הגבוה הוא תוך 10% מציון גלם FP הנמוך, בממוצע שני הציונים יחד לציון FP קונסנסוס. אם שני ציוני גלם FP שונים על ידי יותר מ -10%, למשוך את שני תמונות הבקיע על גבי המסך. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בסוגי דלפק 1-4 כדי לסייע בדיון בפערים ולהעניק ציון קונסנסוס סופי. אם לא ניתן להגיע להסכמה במהלך הדיון, לקחת הפסקה מניקוד. בשלב מאוחר יותר, rescore התמונה ולדון. אם לא ניתן להגיע להסכמה עדיין, למשוך במלך שערים שלישיים. שאל אותם כדי לצבור את התמונה ודיאלוג עם השניים האחרים. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. ציונים הדרכה לשימוש DPP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקע על הדרכה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש שני ציונים לספור מגוון רחב של תמונות,הבקיע בנפרד ומקנה באופן קבוע על מנת להבטיח שהם משתמשים באותם קריטריונים. רק כאשר ספירה בודדת היו באופן עקבי בטווח של 10% מזה בזה על כל התמונות כאשר הבקיע היה השיטה (הסופית לעיל) נחשבת מקובלת וכינתה DPP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר 15 תמונות רשמיות ו- 15 תמונות הכשרה (נוסף איורים 2-17) בסדר רציפים להבקיע. אם תמונה נחשבה לאינספור במהלך בחירה, לדלג על התמונה ולבחור תמונה רציפה הבאה. הערה: תמונות אלה משתנות באיכות ובגודל כפי שהם נבחרו ואילו המעבדה עדיין מאסטרינג טכניקת צילום הנכון. אחת התמונות שנבחרו נחשב לאינספור דרך תהליך ספירה ראשוני זה, אבל נשאר ב, כדי להבטיח שציונים היו מסוגלים לעשות את השיחה בעת הצורך. לכן יש 16 תמונות הניתנות לחניכים כי רק 15 הבקיע תמונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות DPP, שהציונים הנ&quot;ל לספור את 15 תמונות הדרכה וליצור קונסנסוסציון לכל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תנו חניכים 15 תמונות רשמיות ולבקש להבקיע באמצעות מילר ורידי ליצור בסיס. שיא ניקוד. לנהל אימוני קבוצה שבאו בעקבות צעד 3.2. ברגע שהשלב 3.2 הושלם, יש הציונים ציון 15 התמונות רשמיות שוב ולהקליט את ציוניהם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אימון כובשים לאחר בDPP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן ציונים הכשרת תמונת האימון הראשונה ולהפגין DPP לכמה גבשושיות על תמונה זו. לדון הנמקה לבחירה או לדחות כל papilla כFP. לאפשר חניכים להמשיך להתאמן ניקוד עבור שאר צילום ושלהתייעץ עם מספר הקונצנזוס (למספר הקונצנזוס של מעבדת לי והקלידו 1-5 סמנים, ראו איור משלים 1). לתמונה זו לדון בכל פערים ללא קשר ל-10% כדי להבטיח הבנה של DPP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן ציונים הבאים תמונת אימון השנייה ויש להם להבקיע באמצעות DPP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם ציון FP גלם המתאמן הוא בתוך עשראחוזים מהקונצנזוס הוקם לספור מסעיף 3.1.3., לאפשר חניך לעבור על התמונה הבאה וחזור על שלבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם התוצאה היא מחוץ לטווח של עשרה אחוזים, להשתמש בסימנים הצבעוניים של המתאמן מייצגים סוגים 1-5 להבין ולזהות את חוסר העקביות ולאחר מכן לטפל בהבנה סותרת של DPP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן למתאמן הזדמנות rescore התמונה ולאמת את הציון החדש פעם נוספת. אם יצליח, חניך עובר על התמונה הבאה עד שכל התמונות הושלמו. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Miller, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+taste+bud+density+across+adult+age+groups.">Human taste bud density across adult age groups.</a> J Gerontol. 43 (1), B26-B30 (1988).</li><li>Miller, I. J., Reedy, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+fungiform+papillae+and+taste+pores+in+living+human+subjects.">Quantification of fungiform papillae and taste pores in living human subjects.</a> Chem Senses. 15 (3), 281-294 (1990).</li><li>Miller, I. J., Reedy, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+Human+Taste+Bud+Density+and+Taste+Intensity+Perception.">Variations in Human Taste Bud Density and Taste Intensity Perception.</a> Physiol Behav. 47 (6), 1213-1219 (1990).</li><li>Shahbake, M., Hutchinson, I., Laing, D. G., Jinks, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+quantitative+assessment+of+fungiform+papillae+density+in+the+human+tongue.">Rapid quantitative assessment of fungiform papillae density in the human tongue.</a> Brain Res. 1052 (2), 196-201 (2005).</li><li>Bartoshuk, L. M., Duffy, V. B., Miller, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTC/PROP+tasting:+anatomy,+psychophysics,+and+sex+effects.">PTC/PROP tasting: anatomy, psychophysics, and sex effects.</a> Physiol Behav. 56 (6), 1165-1171 (1994).</li><li>Essick, G. K., Chopra, A., Guest, S., McGlone, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lingual+tactile+acuity,+taste+perception,+and+the+density+and+diameter+of+fungiform+papillae+in+female+subjects.">Lingual tactile acuity, taste perception, and the density and diameter of fungiform papillae in female subjects.</a> Physiol Behav. 80 (2-3), 289-302 (2003).</li><li>Delwiche, J. F., Buletic, Z., Breslin, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+papillae+number+to+bitter+intensity+of+quinine+and+PROP+within+and+between+individuals.">Relationship of papillae number to bitter intensity of quinine and PROP within and between individuals.</a> Physiol Behav. 74 (3), 329-337 (2001).</li><li>Kim, U. K., Jorgenson, E., Coon, H., Leppert, M., Risch, N., Drayna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positional+cloning+of+the+human+quantitative+trait+locus+underlying+taste+sensitivity+to+phenylthiocarbamide.">Positional cloning of the human quantitative trait locus underlying taste sensitivity to phenylthiocarbamide.</a> Science. 299 (5610), 1221-1225 (2003).</li><li>Hayes, J. E., Bartoshuk, L. M., Kidd, J. R., Duffy, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supertasting+and+PROP+bitterness+depends+on+more+than+the+TAS2R38+gene.">Supertasting and PROP bitterness depends on more than the TAS2R38 gene.</a> Chem Senses. 33 (3), 255-265 (2008).</li><li>Garneau, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crowdsourcing+taste+research:+genetic+and+phenotypic+predictors+of+bitter+taste+perception+as+a+model.">Crowdsourcing taste research: genetic and phenotypic predictors of bitter taste perception as a model.</a> Front Integr Neurosci. 8 (33), (2014).</li><li>Fox, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+chemical+constitution+and+taste.">The relationship between chemical constitution and taste.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 18 (1), 115-120 (1932).</li><li>Tepper, B. J., Nurse, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+Perception+is+related+to+PROP+taster+status.">Fat Perception is related to PROP taster status.</a> Physiol Behav. 61 (6), 949-954 (1997).</li><li>Duffy, V. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bitter+receptor+gene+(TAS2R38.),+6-n.-Propylthiouracil+(PROP)+bitterness+and+alcohol+intake.">Bitter receptor gene (TAS2R38.), 6-n.-Propylthiouracil (PROP) bitterness and alcohol intake.</a> Alcohol Clin Exp Res. 28 (11), 1629-1637 (2004).</li><li>Yackinous, C., Guinard, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+between+PROP+taster+status+and+fat+perception,+touch,+and+olfaction.">Relation between PROP taster status and fat perception, touch, and olfaction.</a> Physiol Behav. 72 (3), 427-437 (2001).</li><li>Fischer, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+related+to+fungiform+papillae+density:+The+Beaver+Dam+Offspring+Study.">Factors related to fungiform papillae density: The Beaver Dam Offspring Study.</a> Chem Senses. 38 (8), 669-677 (2013).</li><li>Feeney, E. L., Hayes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+differences+in+suprathreshold+intensity+for+bitter+and+umami+stimuli.">Regional differences in suprathreshold intensity for bitter and umami stimuli.</a> Chemosens Percept. 7 (3-4), 147-157 (2014).</li><li>Saito, T., Narita, N., Yamada, T., Manabe, Y., Ito, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+of+human+fungiform+papillae+after+severing+chorda+tympani+nerve.">Morphology of human fungiform papillae after severing chorda tympani nerve.</a> Ann Otol Rhinol Laryngol. 120 (5), 300-306 (2011).</li><li>Miller, I. J., Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+peripheral+taste+system.">Anatomy of the peripheral taste system.</a> Handbook of Olfaction and Gustation. , 521-547 (1995).</li><li>Cheng, L. H. H., Robinson, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distribution+of+fungiform+papillae+and+taste+buds+on+the+human+tongue).">The distribution of fungiform papillae and taste buds on the human tongue).</a> Arch Oral Biol. 36 (8), 583-539 (1991).</li><li>Cruickshanks, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+taste+impairment+in+epidemiologic+studies-The+Beaver+Dam+Offspring+Study.">Measuring taste impairment in epidemiologic studies-The Beaver Dam Offspring Study.</a> Ann N Y Acad Sci. 1170, 543-552 (2009).</li><li>McNamara, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+Taste+summative+evaluation+report+prepared+for+Denver+Museum+of+Nature+&amp;+Science.">Genetics of Taste summative evaluation report prepared for Denver Museum of Nature &amp; Science.</a> Independent Evaluator. , (2012).</li><li>Arvidson, K., Friberg, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+taste:+Response+and+taste+bud+number+in+fungiform+papillae.">Human taste: Response and taste bud number in fungiform papillae.</a> Science. 209 (4458), 807-808 (1980).</li></ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

באמצעות DPP, את השונות בתוך תמונה סופרת על פני ציונים עצמאיים וספירה של מלך השערים ב- ירדה באופן משמעותי. למרות ששיטה זו הופכת את ניתוח צפיפות FP חזותי ללא videomicroscopy פחות סובייקטיבית, יש לציין כי בשיטה זו רק FP ציונים. לא יכול להבטיח שיש לי DPP מבנים מסווגים כFP נקבוביות טעם ולכן התעוררו אצלם ולא גבשושיות שמקובעת הם רעיוני של צפיפות ניצן טעם אמיתי 20,23 טבעם של שיטה זו הוא שהיא קובעת אמינות באמצעות עקביות ודיוק; עם זאת, הוא עשוי להיות הטיית תוצאות בכיוון עקבי. כדי לבדוק את הדיוק יחסי לשיטות אחרות באמצעות מדד אמיתי של צפיפות טעם ניצן (לדוגמא, videomicroscopy) תרחיב מעבר להיקף של study.However זה, על ידי המאפיין את המורפולוגיה של FP יותר מחמיר ויצירת מפתח דיכוטומית, שיטה זו מטפלת מילר ו הפריצה של רידי לשדה שיותר אפיון של FPצריך לעשות כדי שיהיה לי קונסנסוס על המורפולוגיה והכימות 2. בנוסף, הם ציינו כי אפיון זה עשוי &quot;להבהיר חלק מההבדלים בין נבדקים ולהסביר חלק מהתוצאות השונות בין חוקרים 2.&quot; על ידי מתן שיטה אחידה של כימות, רב של אי-ההתאמות בתפקיד של FP בטעם וnutrition- מחקר הקשורים ניתן לתקן. המפתח דיכוטומית עשוי להיות מותאם לטכניקות לכידת תמונה השונות. המרחק הידוע בקנה המידה ניתן להגדיר בקלות לקוטר שימוש בכל מעבדה ומיתון ניתן לשלול אם ניילון נצמד או זכוכית הונחו על הלשון ללכידת תמונה. במעבדה קיבל, נמצא כי הלשון הניטרלית סיפקה את ההגדרה הטובה ביותר של גבשושיות. זה יכול להיות בגלל כמות האור במעבדה שגרמה לעטוף או זכוכית נצמדה כדי לשקף את האור בחזרה אל המצלמה יצירת בוהק שגרמו ישבניםsment קשה. מעבדות חלקם אמרו שהם ימצאו את הצבע יותר מאתגר לספור, אבל המעבדה לי מצאה צבע כחול מזון מדולל בריכוז של 1:36 סיפק את הניגוד בין אידאל fungiform וגבשושיות filiform ברוב הלשונות. יצירת מפתח דיכוטומית לאפיון FP תאפשר לחוקרים במעבדות שונות, תוך שימוש במגוון של שיטות לכידה תמונה, כדי לנתח באופן עקבי מבנים על הלשון ויש לי אמון בדיווח של התוצאות שלהם. לבסוף, שימוש במפתח דיכוטומית עשוי להיות מטרות בתחומים אחרים של מתודולוגיה המדעית שבו איכויות של מבנים או חפצים מספקות מספרים עקביים ממחקר למחקר.

גבשושיות הן הבליטות הגלויות על פני השטח של הלשון. ישנם ארבעה סוגים של גבשושיות: fungiform (FP), foliate, circumvallate, וfiliform. בעוד גבשושיות filiform פרושות על פני השטח של הלשון, circumvallate הם מקומיים בלבד בחלק האחורי של הלשון, וfoliate נמצא בצדדים. לעומת זאת, FP ממוקם לכיוון חזית הלשון. FP, foliate, וגבשושיות circumvallate נחשבים התעורר אצלם כי יש להם את הפוטנציאל להכיל את בלוטות טעם ואילו filiform לא. בלוטות טעם הן אשכולות של תאים אחראים לאיתור tastants הכימי וtransducing הגירויים לאות התעורר אצלם במוח. מולקולות רוק ומזון להיכנס לבלוטות הטעם דרך פתחים הנקראים נקבוביות טעם שבו מולקולות טעם אז יש פוטנציאל של הפעלת תאי טעם. מעניין לציין, שיש הבדלים אישיים גדולים בצפיפות ניצן טעם, כפי שנצפו לראשונה במחקר היסטולוגית של לשונותמ -18 גופות (מילר, 1988) 1. בלוטות טעם של עצמם אינם גלויים על פני השטח של הלשון, לעומת זאת, נקבוביות טעם גלויות בעת שימוש בטכניקות הגדלה, תאורה, וצביעה נכונה שהובילו מילר &amp; רידי (1990) לפתח שיטה לזיהוי נקבוביות טעם וגבשושיות fungiform באמצעות videomicroscopy בחיים 2 בני אדם. מספר המעבדות שינה טכניקת videomicroscopy המקורית שלהם, באמצעות צילום ועדיין מעט או ללא הגדלה. עם זאת, מאז גבשושיות fungiform הן הרבה יותר קלים לדמיין מאשר נקבוביות באמצעות טכניקות אלה האחרונים, מעבדות פנו לספירת גבשושיות fungiform במקום נקבוביות טעם. בכך, ההנחה היא כי צפיפות papilla fungiform היא מדד ה- Proxy סביר לצפיפות נקבובית טעם, למרות שגבשושיות רבות fungiform אינן מכילות נקבוביות טעם או בלוטות טעם 3; לא רק הם FP יותר גלוי ונגיש יותר מcircumvallate וגבשושיות foliate, אבל לכידת התמונה שלהם היא פחות tiשלי רב יותר מאשר ניתוח נקבובית טעם באמצעות השיטה החלופית של videomicroscopy 2,4. בשנת 1990, מילר ורידי השתמש בטכניקה זו כדי למצוא טעם שצפיפות נקבובית מתואמת עם צפיפויות FP 3 שאומתו נוסף בet al Bartoshuk. 5 בנוסף ליחסים אנטומיים זה, מילר ורידי גם מצא כי 8 אנשים בעליונים מחצית מהפצת הצפיפות נקבובית הטעם גם מדורגת סוכרוז, NaCl, וpropylthiouracil (PROP) כמשמעותי יותר אינטנסיבי מאשר 8 אנשים האחרים 3. עבודה לאחר מכן על ידי Bartoshuk et al. (1994) נצפתה מתאם בין עוצמת טעם PROP suprathreshold וצפיפות papilla fungiform, כמו גם צפיפות נקבובית טעם, ב -42 מקצועות 5. שיטה זו נוחה הובילה למחקרים משפיעים דיווחו כי נושאים לשונות שיש הרבה גבשושיות לעורר תגובה חזקה יותר לtastants רב, כולל phenylthiocarbamide tastants המר (PTC) וPROP 6,7. PTC וPROP הם tastants חקר היטב לעתים קרובות בשימוש בשל הקשר ברור בין פנוטיפ רגישות טעמו של אדם וגנוטיפ. מחקרי אוכלוסייה הראו כי אנשים שיש להם diplotype רצסיבי הומוזיגוטים של הגן, TAS2R38, יש רגישות נמוכה יותר באופן משמעותי כדי לתמוך יותר מדיסקים של הגרסה הדומיננטית או הטרוזיגוטיים של הגן 8-10. תופעה תורשתית זה דווחה לראשונה בשנת 1932 כאשר ארתור ל &#39;פוקס הודיע ​​גילוי &quot;עיוורון טעם&quot; שלו ל -11 PTC. בין אנשים יוכלו לטעום תרכובות המרות הללו, עוצמת הטעם דיווחה יכולה להשתנות בכל מקום ממעט לא נעימות, 6 עד כאב המר. כדי להסביר את שונות שלא יכול להיות מוסברת על ידי TAS2R38, התאוריה שהציגה שזה יכול להיות מיוחס לצפיפות של FP על הלשון 4. כמו מחקר טעם התקדם, fielד היה מחולק לשתי אסכולות סביב תאוריה זו הנוגעות לתפקידו של FP ורגישות טעם מר. למרות שמחקרים רבים מאששים את הטענה המקורית שצפיפות FP היא גורם בPROP רגישויות 4,6,12,13, חל מגירה קטנה, אבל חשובה שמצאה ראיות כדי להפריך את זה, שדיווח על חוסר יכולת לשכפל את התפקיד 10, 14,15,16. Delwiche et al. (2001) הזהיר כי המגמה היא משתנה מאוד; צפיפות FP עושה חשבון לא אחיד להבדלים ברגישות מרירות על פני נושאים, והייתה רק הדגמה לנושאים עם לפחות רגישות מתונה כדי לתמוך 7. בנוסף לשימוש בשיטת מילר &amp; רידי פחות קפדנות מוגדרת על איך לכמת FP, חשוב לשים לב כי עם יוצא מן הכלל של צאצאי Beaver Dam 15 המחקר שנערכו על ידי פישר, רוב המחקרים היה מעל et al. מדגם קטן גדלים אשר עשוי גם לתרום לממצאים עולים בקנה אחד בהתפקיד של FP בטעם. בקצרה, במאמרו של מילר ורידי מתודולוגיה זרע (1990), המחברים מוכתמים לשונות כחולות לכמת FP כי FP יישאר ורוד בעוד גבשושיות filiform לספוג את הצבע ולהכחיל. הם מסווגים כFP &quot;מבנים מעוגלים הוורודים על 0.5 מ&quot;מ בקוטר&quot; 2. בעוד שהכותבים מומלץ כי לפני השימוש בשיטה זו לעבודה אנליטית נוספת, מאפייני FP צריכים להיות מוגדרים יותר בקפדנות והגיעו למסקנה שהשינוי כבר ציין בספרות &quot;יכול להיות מיוחס לאוכלוסיות שונות נושא, בשיטות שונות, וחוקרים שונים&quot; 2, מחקר הוביל למאפיינים המקובלים שFP עגול 17,18, גדול 2, ורוד או מוכתם קל 2, ומוגבה 4. צולם בערך הנקוב, מאפיינים אלה מופיעים מאוד ישר קדימה. בגנטיקה של מעבדה טעם (לי מעבדה או מעבדה), השימוש בנפגשהוד היה מסובך בניסיונות הבודדים של הציונים במוקדמות ומתן עדיפות לחשיבות של המאפיינים הנ&quot;ל כאשר חלק, אך לא כולם, של המאפיינים נכחו. סיבוכים אלה כללו גבשושיות קטנות שהופיעו ורוד בעיצומה של גבשושיות גדולות בהרבה; כל הלשון סופגת את הצבע הכחול ובכך לחסל סיווג המבוסס על וריאציה צבע; גבשושיות מלבניות במקום עגול; ולשונות שאין שינוי בגובה, כולם תרם לציוני דיווח ספירת FP נרחב מגוונת של אותה תמונה. וריאציות אלה בניתוח הובילו אותנו לסקור את הספרות כדי לאתר את הסובייקטיביות, לזהות בחריגים למאפייני FP המקובלים וסופו של דבר לגבש פרוטוקול להגדיר בצורה מדויקת ואובייקטיבי ולהבקיע FP. ראשית, צורת FP מתוארת בספרות כ17,18 מבנה מעוגל, כמו פטריות. עם זאת, ראוי לציון מלבדיונים גם הוזכרו. מילר הדגיש כי &quot;fungiform&quot; המונח מטעה ושFP רב אינם פטרייה בצורת אבל יכול להשתנות במידה רבה בגודל ומורפולוגיה 18. מליס et al. (2013) תאר גם כמה גבשושיות שנחשבו &quot;מעוות&quot;, שבו קוטר FP בכיוון אחד היה לפחות שתי סטיות תקן יותר בכיוון אחר 19. יתר על כן, נג ורובינסון מצא כי כאשר מצביעים FP על ידי צביעה, הם נע בין שטוח עקף למוארכים בהופעה 20. בשים לב לחריגים לעיל, האפיון של FP להיות עגול ומופיע בצורת הפטרייה גם לצמצם הגדרה. שנית, צבע FP הוא כפי שתואר &quot;חוגים הוורודים על רקע כחול&quot; 7 לאחר מכתים את הלשון עם צבע כחול. למרות שמכתים קל היה הקריטריון של FP העקבי ביותר בכל הספרות שהיא עדיין לא הייתה במוקדמות אחידות. נג &amp;<html> ; רובינסון ציין כי FP לא תמיד מוכתם קל, מה שהופך את זיהוי קשה ולא בטוח 20. נראה כי אז לשונות לספוג צבע שונה ותוך הניגוד ניכר בלשונות רבות, חלק הפך כחול לגמרי ללא הבחנה, בעוד שאחרים מאבדים כל שמץ של צבע הכחול 21 באופן מיידי. המאפיין השלישי, גודל FP, היה עקבי למדי בין ניירות, הנע בין 0.5 מ&quot;מ ל0.97 מ&quot;מ 6,18. בספרות מילר ציין כי היו שני טווחי גודל של גבשושיות על הגבית הקדמי של הלשון. גבשושיות בקטרים ​​גדולים יותר היו בעיקר fungiform וגבשושיות חרוטי, בעוד גבשושיות בקוטר קטן יותר היו בעיקר filiform 18. עם זאת, למעט Offspring Beaver Dam מחקר 21, גודל לא הופיע כדי לקבוע אם מבנה הוא FP בספרות, אבל סופק לגבשושיות כבר סווגו כ&quot; fungiform &quot;. _content &quot;&gt; לבסוף, ההעלאה מופיעה בתור FP הרביעי מאפיין 4 למרות שמילר ציין כי הבחנה בין filiform וגבשושיות fungiform היא קשה בעת השימוש בקריטריון זה ליד השוליים של הלשון. הוא נתן שתי דוגמאות של FP שהשתנו באופן משמעותי בגובה, להיות 0.8 מ&quot;מ הגובה בזמן אחר היה פחות מ -0.1 מ&quot;מ גובה, אבל עדיין היו שני נקבוביות טעם שנצפו בבירור 18 אחד. תצפית זו הייתה גם במעקב ואושרה על ידי et al Shahbake. 4 הגדרות אלה וחריגים דיווחו להראות ששדה הטעם הכיר עוד את חוסר העקביות באפיון FP והחסרונות של הפרוטוקול הנפוץ בשימוש ממילר ורידי. ואכן, מילר ורידי האיץ השדה להגדיר נוסף התכונות של FP 2. חוקרים שערנו כי ציונים היו נותנים משקל שונה למאפיינים ולתעדוף חשיבותם באופן שונה כאשר פאפillae לא הצליח לעמוד בכל קריטריון, כגון כאשר papilla הייתה גדולה ובפטריות בצורה, אבל מוכתם כחול. זה היה מנומק כי חוקרים של המחקרים שפורסמו בעבר סביר עשו את אותו הדבר ש, בשילוב עם גודל מדגם קטן, עשוי להסביר את התוצאות המגוונות המגיעות מהשימוש בשיטה זו. מעבדת לי התייחסה הפער הזה במתודולוגיה FP-ידי פיתוח קו מנחה שמגדיר כל מאפיין באמצעות מדידות אובייקטיביות ועדיפים מאפיינים כדי לציין שמקבלת קדימות בניתוח. שיטה זו היא דנבר גבשושיות הפרוטוקול (DPP), מפתח דיכוטומית עם מאפיינים ברורים ומובחנים של FP על מנת להבטיח ספירה מדויקת ודיר מתצלומים דיגיטליים של הלשון. DPP הוא שיטה מוצעת כדי לתקנן את שיטת מילר &amp; רידי השתמש בעבר, ובכך להסיר את פרשנות אישית ולהבטיח תוצאות עקביות יותר בעת ניתוח צפיפות FP. בעשותם כך, DPP יכול לשמש ליותר ביטחון דetermine התפקיד של FP בטעם. התמונות שצולמו הלשון של הנושאים נותחו על ידי מדעני האזרח (ציונים) של מעבדת שהנושאים האמיתיים של מחקר זה. הליבה של המעבדה של מדעני אזרח מורכבת מחברים מהקהילה החל בגיל (שנים) מ -16 ועד אמצע שנות ה -80. דו&quot;ח הערכה מסכם שהוזמן על ידי המוזיאון בשנת 2012 מתאר מדעני אזרח כבעל עניין חזק במדע ובשני שלישים שהרוויחו תואר אקדמי בדיסציפלינה מדעית 22. מדעני אזרח מועמד כרגע גויסו באמצעות מילה של פה, חייב להשלים בהצלחה תהליך ראיון עם מתנדב ותיק במוזיאון, ולעבור תקופת ניסיון בתערוכה של המוזיאון הקבועה בריאות, משלחת הבריאות, לפני שהם צריכים את ההזדמנות להגיש בקשה למעמד ב המעבדה. ברגע שהתקבל למעבדה, מדעני אזרח לעבור הכשרת 12 שבועות כדי להיות מוסמך לרשום נושא אנושיים. בעקבות אישור זה, הם יכולים לקחת מודולים הכשרה בטכניקות שונות במעבדה (ספירה למשל גבשושיות, מיצוי DNA) והבאים אישורים נוספים ואמצעי בקרת איכות רגילה, יש לי מדעני אזרח אלה את ההזדמנות להשתתף באופן פעיל בניתוח הנתונים. מדעני אזרח מתנדבים מהזמן ואינם מתוגמלים על תרומתם למוזיאון.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Food dye, Deep Blue Shade</td>
			<td>Esco</td>
			<td>http://escofoods.com/blue-food-coloring.html</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Rayon Tipped OB/GYN Applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-808 1PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grade 1 Filter Paper</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>Whatman No.: 1001-325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coolpix P100 (10.3 megapixels) and P500 (12.1 megapixels)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/</td>
			<td>neither model appears to be available on the website any longer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper Hand Towels</td>
			<td>Kleenex</td>
			<td>https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

denver papillae protocol for objective analysis of fungiform papillae

המטרה של דנבר גבשושיות הפרוטוקול היא להשתמש במפתח דיכוטומית להגדיר ולקבוע סדר עדיפויות המאפיינים של גבשושיות fungiform (FP) כדי להבטיח ניקוד עקבי בין ציונים. פרוטוקול זה בונה את של צורך שנוצר משני העשורים האחרונים של מחקר טעם באמצעות FP כמדד לצפיפות נקבובית טעם. צפיפות FP מבחינה היסטורית נותחה באמצעות האפיונים של מילר ורידי 1990 המורפולוגיה שלהם: עגול, מוכתם קל, גדול, וגבוה. בעבודה זו, המחברים הוזהרו שהגדרות מחמירות של מורפולוגיה FP צריכה להיות מתוארים. למרות קריאה זו לפעולה, ספרות מעקב הייתה נדירה, עם רוב המחקרים ממשיכים לצטט העבודה המקורית של מילר ורידי. כתוצאה מכך, דיווחי צפיפות FP היו משתנים מאוד ו, בשילוב עם גודל מדגם קטן, עשוי לתרום למסקנות סותרות על התפקיד של FP ברגישות טעם. הגנטיקה של מעבדה טעם חקרה incon לכאורה זהsistency בספירה ומצא כי ציונים היו בנפרד עדיפות החשיבות של מאפיינים אלה באופן שונה ולא היה לי הדרכה לכאשר papilla הייתה כמה, אבל לא כולם, של האיכויות המדווחות של FP. התוצאה של זה היא הסובייקטיביות ספירת FP משתנה מאוד של אותה תמונת לשון. דנבר גבשושיות הפרוטוקול פותח כדי לתקן תוצאה זו באמצעות שימוש במפתח דיכוטומית שמגדיר ועוד עדיפות החשיבות של המאפיינים שהציגו מילר &amp; רידי. השיטה המוצעת יכולה לסייע ביצירת דרך סטנדרטית לכמת FP לחוקרים בתחום הטעם ומחקרים תזונתיים.

הנה תצלום נציג הבקיע ידי שני ציונים בודדים בעת שימוש במתודולוגיה מילר &amp; רידי הנפוץ בשימוש לזיהוי FP מבוסס על הסטנדרטים תחום עגול גדול, ורוד, או מוכתם קל, וגבוה, ולאחר מכן אותו התצלום הובקע על ידי שני ציונים באמצעות DPP. הספירה המוצגת היא נציג של השונות גבוהות שנצפו בשיטה המקורית בהשוואה לשונות נמוכות יותר באמצעות DPP. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig4.jpg" /> איור 4:. מילר ורידי כימות לעומת DPP כימות התמונה מהשמאל היא נציג של הספירה &#39;שני ציונים בשיטת מילר &amp; רידי. התמונה מימין מייצגת שני סעיפים &quot;ציונים באמצעות DPP. האדום הוא מלך השערים 1, צהוב הוא מלך השערים 2, גרין הוא בעלים ציונים 1 &amp; 2. אמינות סטטיסטי של DPP נחקר בעבר תוך שימוש במודל ליניארי מעורב להעריך השתנות 10. בקצרה, כדי להפיק נתונים על מנת להעריך את התפקיד DPP משחק בעקביות של ציונים, תמונות חמש עשרה היו קלע פעמיים. במנה הראשונה של ציונים, ציונים נאיביים DPP השתמשו בשיטת מילר &amp; רידי 2. הציונים אז הוכשרו להשתמש DPP והתמונות היו rescored בנפרד ללא צעד הקונצנזוס הסופי המתואר בסעיף 2.7 מפרט בקרת איכות (איור 5). ערכת נתוני ציון FP הייתה אז בשימוש במודל המעורב על מנת להעריך את ההבדלים בשילוב עקב פרוטוקול (איור 6), שונות בתוך-מלך השערים ואת האינטראקציה בין שתיים. מודל זה הראה הבדל משמעותי בשערו בעת השימוש בשיטת מילר &amp; רידי לעומת DPP (p-value &lt;1 x 10 -6) עם DPP המוביל לספירה גבוהה יותר על ידי 6.99 (SE = 0.99); 5.2% מההשתנות בציון היה כתוצאה מאימון, 25.9% בשל מלך השערים, ונותרו עקבלשונות מסוימות לתמונה 10. בשלב הבא, כדי להפיק נתונים כדי לקבוע שונות בתוך-מלך השערים, סדרה של שלושים תמונות בסדר אקראיים הובקעה על ידי 11 אנשים. ללא ידיעה בעלי ציונים, זה סדרה של תמונות כללה שלוש תמונות שחוזרות על עוצמה. אנו נצפו הבדל דרסטי בשונות ציון השוואת תמונות ברורות versusrepeated תמונות. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig5.jpg" /> איור 5:. DPP-נאיבי לעומת ההודעה DPP הדרכת פנלים לספק boxplots של עשרות סוקר במשך 15 תמונות מראש ואימון דנבר גבשושיות פרוטוקול הודעה. לכל boxplot, מילא במעגל מציין את הממוצע ואילו מעגל פתוח מצביע חריג. <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig6.jpg" /> איור 6:. שינוי במלך שערי שונות האפור מייצג tהוא שונה עבור ציונים בודדים לפני אימון DPP. השחור הוא הכשרת DPP אותו פוסט מלך השערים.

Watch this Scientific Journal Video about Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae at JoVE.com

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

כאן אנו מציגים פרוטוקול למדידת צפיפות papilla fungiform מתמונות דיגיטליות. שיטה זו בונה תעדוף ומדדים אובייקטיביים אופייניים לעבודת תיאורים המקורית על גבשושיות fungiform ידי מילר &amp; רידי (1990).

דנבר גבשושיות פרוטוקול לניתוח אובייקטיבי של Fungiform גבשושיות

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

denver-papillae-protocol-for-objective-analysis-of-fungiform-papillae

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.3K Views.  Denver Museum of Nature & Science.  כאן אנו מציגים פרוטוקול למדידת צפיפות papilla fungiform מתמונות דיגיטליות. שיטה זו בונה תעדוף ומדדים אובייקטיביים אופייניים לעבודת תיאורים המקורית על גבשושיות fungiform ידי מילר & רידי (1990). 

Video: Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple stimuli and complex chemical molecules contained in foods. In human, individual fungiform papillae contain from zero to as many as 20 taste buds. There is no established protocol for culturing human taste cells, although the ability to maintain taste papillae cells in culture for multiple cell cycles would be of considerable utility for characterizing the molecular, regenerative, and functional properties of these unique sensory cells. Earlier studies of taste cells have been done using freshly isolated cells in primary culture, explant cultures from rodents, or semi-intact taste buds in tissue slices1,2,3,4. Although each of these preparations has advantages, the development of long-term cultures would have provided significant benefits, particularly for studies of taste cell proliferation and differentiation. Several groups, including ours, have been interested in the development and establishment of taste cell culture models. Most attempts to culture taste cells have reported limited viability, with cells typically not lasting beyond 3-5 d5,6,7,8. We recently reported on a successful method for the extended culture of rodent taste cells9. We here report for the first time the establishment of an in vitro culture system for isolated human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability. Cells displayed many molecular and physiological features characteristic of mature taste cells. Gustducin and phospholipase C &beta;2, (PLC-&beta;2) mRNA were detected in many cells by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and confirmed by sequencing. Immunocytochemistry analysis demonstrated the presence of gustducin and PLC-&beta;2 expression in cultured taste cells. Cultured human fungiform cells also exhibited increases in intracellular calcium in response to appropriate concentrations of several taste stimuli indicating that taste receptors and at least some of the signalling pathways were present. These results sufficient indicate that taste cells from adult humans can be generated and maintained for at least eight passages. Many of the cells retain physiological and biochemical characteristics of acutely isolated cells from the adult taste epithelium to support their use as a model taste system. This system will enable further studies of the processes involved in proliferation, differentiation and function of mammalian taste receptor cells in an in vitro preparation.
Human fungiform taste papillae used for establishing human fungiform cell culture were donated for research following proper informed consent under research protocols that were reviewed and approved by the IRB committee. The protocol (#0934) was approved by Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Written protocol below is based on published parameters reported by Ozdener et al. 201110.

We aimed to develop a reproducible protocol for isolating and maintaining long-term cultures of human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability.

בידוד והתרבות של האדם בחוש הטעם תאים Fungiform גבשושיות

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Laser Capture Microdissection of Neurons from Differentiated Human Neuroprogenitor Cells in Culture

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor (EGF) and fibroblast growth factor (FGF) to provide an abundant supply of cells. NPCs were differentiated in the presence of a new combination of nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), dibutyryl cAMP (DBC) and retinoic acid on dishes coated with poly-L-lysine and mouse laminin to obtain neuron-rich cultures. NPCs were also differentiated in the absence of neurotrophins, DBC and retinoic acid and in the presence of ciliary neurotrophic factor (CNTF) to yield astrocyte-rich cultures. Differentiated NPCs were characterized by immunofluorescence staining for a panel of neuronal markers including NeuN, synapsin, acetylcholinesterase, synaptophysin and GAP43. Glial fibrillary acidic protein (GFAP) and STAT3, astrocyte markers, were detected in 10-15% of differentiated NPCs. To facilitate cell-type specific molecular characterization, laser capture microdissection was performed to isolate neurons cultured on polyethylene naphthalate (PEN) membrane slides. The methods described in this study provide valuable tools to advance our understanding of the molecular mechanism of neurodegeneration.

Human neuroprogenitor cells (NPCs) were expanded under proliferating conditions. NPCs were differentiated into neuron-rich cultures in the presence of a combination of neurotrophins. Neuronal markers were detected by immunofluorescence staining. To isolate a pure population of neurons, NPCs were differentiated on PEN membrane slides and laser capture microdissection was performed.

Microdissection לכידת לייזר של נוירונים מהתאים מובחנים Neuroprogenitor אדם בתרבות

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor ...

Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty acid receptors housed on taste cells. Previous research has shown that an individual&#39;s oral sensitivity to fatty acid, specifically oleic acid (C18:1) is associated with body mass index (BMI), dietary fat consumption, and the ability to identify fat in foods. We have developed a reliable and reproducible method to assess oral chemoreception of fatty acids, using a milk and C18:1 emulsion, together with an ascending forced choice triangle procedure. In parallel, a food matrix has been developed to assess an individual&#39;s ability to perceive fat, in addition to a simple method to assess fatty food liking. As an added measure tongue photography is used to assess papillae density, with higher density often being associated with increased taste sensitivity.

Oral chemoreception of fatty acids and the association with diet and fatty food preferences may enable the identification of mechanisms involved with the development of obesity and why dietary changes may be difficult for many individuals.

מדידה אוראלי חומצת שומן ספים, תפיסת שומן, שומן מזון טעם, וצפיפות אדומות בבני אדם

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty ...

Protocol for Three-dimensional Confocal Morphometric Analysis of Astrocytes

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify their functional and structural properties, a condition called reactive astrogliosis. Here, a protocol for assessment of the morphological properties of astrocytes is presented. This protocol includes quantification of 12 different parameters i.e. the surface area and volume of the tissue covered by an astrocyte (astrocyte territory), the entire astrocyte including branches, cell body, and nucleus, as well as total length and number of branches, the intensity of fluorescence immunoreactivity of antibodies used for astrocyte detection, and astrocyte density (number/1,000 &#181;m2). For this purpose three-dimensional (3D) confocal microscopic images were created, and 3D image analysis software such as Volocity 6.3 was used for measurements. Rat brain tissue exposed to amyloid beta1-40 (A&#946;1-40) with or without a therapeutic&#160;intervention was used to present the method. This protocol can also be used for 3D morphometric analysis of other cells from either in vivo or in vitro conditions.

Astrocytes in the CNS change their functional and structural properties in response to harmful stimuli. This report presents a protocol for assessment of three-dimensional astrocyte morphology in diseased conditions or after therapeutic interventions.

פרוטוקול לConfocal ניתוח morphometric תלת ממדי של האסטרוציטים

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify ...

Peering at Brain Polysomes with Atomic Force Microscopy

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, formed by ribosomes, mRNAs, several proteins and non-coding RNAs, represent integrated platforms where translational controls take place. However, while the ribosome has been widely studied, the organization of polysomes is still lacking comprehensive understanding. Thus much effort is required in order to elucidate polysome organization and any novel mechanism of translational control that may be embedded. Atomic force microscopy (AFM) is a type of scanning probe microscopy that allows the acquisition of 3D images at nanoscale resolution. Compared to electron microscopy (EM) techniques, one of the main advantages of AFM is that it can acquire thousands of images both in air and in solution, enabling the sample to be maintained under near physiological conditions without any need for staining and fixing procedures. Here, a detailed protocol for the accurate purification of polysomes from mouse brain and their deposition on mica substrates is described. This protocol enables polysome imaging in air and liquid with AFM and their reconstruction as three-dimensional objects. Complementary to cryo-electron microscopy (cryo-EM), the proposed method can be conveniently used for systematically analyzing polysomes and studying their organization.

While ribosome structure has been extensively characterized, the organization of polysomes is still understudied. To overcome this lack of knowledge, we present here a detailed preparation protocol for accurate imaging of mammalian polysomes by atomic force microscopy (AFM) in air and liquid.

מציץ המוח Polysomes עם מיקרוסקופית כוח אטומי

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral variation. The larval path-length assay was developed to measure individual differences in foraging behavior that were later linked to the foraging gene. Larval path-length is an easily scored trait that facilitates the collection of large sample sizes, at minimal cost, for genetic screens. Here we provide a detailed description of the current protocol for the larval path-length assay first used by Sokolowski. The protocol details how to reproducibly handle test animals, perform the behavioral assay and analyze the data. An example of how the assay can be used to measure behavioral plasticity in response to environmental change, by manipulating feeding environment prior to performing the assay, is also provided. Finally, appropriate test design as well as environmental factors that can modify larval path-length such as food quality, developmental age and day effects are discussed.

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

פרוטוקול נתיב באורך שארגן לעצמו<em&gt; תסיסנית</em&gt; זחלים

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and hypothalamus that supplies blood to the brain and surrounding structures. It has been implicated in several cerebrovascular disorders, including cerebral amyloid angiopathy (CAA)-associated vasculopathies, intracranial atherosclerosis and intracranial aneurysms. Studies of the molecular mechanisms underlying these diseases for the identification of novel drug targets for their prevention require animal models. Some of these models may be transgenic, whereas others will involve isolation of the cerebro-vasculature, including the CoW.The method described here is suitable for CoW isolation in any mouse lineage and has considerable potential for screening (expression of genes, protein production, posttranslational protein modifications, secretome analysis, etc.) studies on the large vessels of the mouse cerebro-vasculature. It can also be used for ex vivo studies, by adapting the organ bath system developed for isolated mouse olfactory arteries.

We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

פרוטוקול בידוד לחוג עכבר של וויליס

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.

מבחן אובייקטיבי, לשחזור של למידה חוש הריח ואפליה בעכברים

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the analysis of density and size gradients of retinal cell types, the direction tuning of direction-selective ganglion cells, and the examination of topographic degeneration patterns in some retinal diseases. However, there are many different ocular dissection methods reported in the literature that are used to identify and label retinal orientation in the mouse retina. While the method of orientation used in such studies is often overlooked, not reporting how retinal orientation is determined can cause discrepancies in the literature and confusion when attempting to compare data between studies. Superficial ocular landmarks such as corneal burns are commonly used but have recently been shown to be less reliable than deeper landmarks such as the rectus muscles, the choroid fissure, or the s-opsin gradient. Here, we provide a comprehensive guide for the use of deep ocular landmarks to accurately dissect and document the spatial orientation of an isolated mouse retina. We have also compared the effectiveness of two s-opsin antibodies and included a protocol for s-opsin immunohistochemistry. Because orientation of the retina according to the s-opsin gradient requires retinal reconstruction with Retistruct software and rotation with custom code, we have presented the important steps required to use both of these programs. Overall, the goal of this protocol is to deliver a reliable and repeatable set of methods for accurate retinal orientation that is adaptable to most experimental protocols. An overarching goal of this work is to standardize retinal orientation methods for future studies.

This protocol provides a comprehensive dissection and analysis guide for the use of deep ocular landmarks, s-opsin immunohistochemistry, Retistruct, and custom code to accurately and reliably orient the isolated mouse retina in anatomical space.

איפה אתה חותך בנושאים: דיסקציה ומדריך ניתוח האוריינטציה המרחבי של הרשתית העכבר מן ציוני דרך עינית

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent development of thin, flexible ECoG electrodes has enabled conduction of stable recordings of large-scale cortical activity. We have developed a whole-cortical ECoG array for the common marmoset. The array continuously covers almost the entire lateral surface of cortical hemisphere, from the occipital pole to the temporal and frontal poles, and it captures whole-cortical neural activity in one shot. This protocol describes a chronic implantation procedure of the array in the epidural space of the marmoset brain. Marmosets have two advantages regarding ECoG recordings, one being the homologous organization of anatomical structures in humans and macaques, including frontal, parietal, and temporal complexes. The other advantage is that the marmoset brain is lissencephalic and contains a large number of complexes, which are more difficult to access in macaques with ECoG, that are exposed to the brain surface.These features allow direct access to most cortical areas beneath the surface of the brain. This system provides an opportunity to investigate global cortical information processing with high resolutions at a sub-millisecond order in time and millimeter order in space.

We have developed a whole-cortical electrocorticographic array for the common marmoset that continuously covers almost the entire lateral surface of cortex, from the occipital pole to the temporal and frontal poles. This protocol describes a chronic implantation procedure of the array in the epidural space of the marmoset brain.

השרשה כרונית של מערך שלם-קורטיקליים Electrocorticographic ב המרמוסט נפוצות

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...