Este trabajo fue financiado en parte por el Premio de Ciencias de la Educación Asociación (SEPA) R25 RR025066 entre 2008-2012 de los Institutos Nacionales de Salud y el Centro Nacional de Recursos para investigación. Gracias a los colegas en el campo gusto por la discusión seria de la literatura, los resultados y la retroalimentación sobre el uso de DPP en varios escenarios de laboratorio: John Hayes, Sue Coldwell, Paul Breslin, Carla Schubert. Gracias también al liderazgo en el Museo de Denver de Naturaleza y Ciencia y el personal de apoyo a la ciencia ciudadana dentro de la Genética del Laboratorio Taste dentro de la Expedición de la Salud. Por último, gracias a todos nuestros ciudadanos científicos voluntarios por su tiempo y dedicación al desarrollo y el uso de este protocolo, incluyendo: Oso de Aragón, Mike Archer, Su Ataman, Michael Bagley, A&#39;nette Bertrand, Diana Boyles, Wendy Covert, Sasha Dooley , Patty Drever, Jessica Ern, Laura Harmacek, Sean Hibbard, Joyce Hutchens, Matt Joo, Leta Keane, Willem Leenhouts, Stephania Lukjan, Ashley Matthews, Mike Mauser, Stephanie Miller, Hallie Morgan-Rodríguez, Griffin Scherma, Alyssa Schickedanz, Terri Simon, Dylan Thomas, Rudy Torres, Tyler Wilson, Diane Woltkamp.

Las imágenes anotados en este estudio fueron recolectados como parte de un estudio más grande realizado en el gusto la Genética del Laboratorio de Sabor en el Museo de Denver de Naturaleza y Ciencia (Museo) 10. Los sujetos del estudio fueron los visitantes del museo más grande (n = 1195) de edades comprendidas entre 18 a 93. Mientras los sujetos procedían de seis de los siete continentes, los participantes fueron principalmente de origen europeo. Los datos de cada sujeto se recogieron en una sesión de laboratorio 30 min. La Junta de Revisión Institucional Occidental aprobó el protocolo, se le dio el consentimiento informado por escrito, y los sujetos se ofreció voluntariamente su tiempo y no fueron compensados ​​por su participación en el estudio. 1. Recolección de Datos <ol><li> Captura de imagen <ol><li> Mostrar somete una fotografía de cómo posar sí mismos (Figura 1) y lo que la imagen capturada se verá así. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig1.jpg" /> Figura 1: Captura de imagen Pose. </strong&gt; Esta es la fotografía se muestra a los sujetos en el laboratorio se puso en orden para plantear correctamente para su foto de la lengua. </li><li> Sujetos directos se sequen su lengua con una toalla de papel a mano y dejar la lengua fuera de la boca. </li><li> Aplicar aproximadamente 3 ml de colorante alimenticio azul a una concentración 01:36 hasta el ápice de la lengua usando un aplicador estéril de rayón con una punta de 1 pulgada. Haga que los sujetos regresen lengua a la boca y tragar para eliminar el exceso de tinte. </li><li> Tener temas plantean a sí mismos como se muestra en la Figura 1, con la barbilla en las manos y los codos apoyados en la mesa para la estabilidad. Sujetos directos para extender su lengua una distancia cómoda y segura suavemente entre los dientes. </li><li> Adherir una pieza de 2,5 cm de papel de filtro con un diámetro recorte circular 10 mm perforado en ella a la punta de la parte anterior del lado izquierdo de la lengua al lado de la línea media (véase la Figura 1). </li><li> Tomar por lo menos tres imágenes en primer plano de la lengua, capturing todo el recorte circular de 10 mm para asegurar la visualización de toda la FP dentro de esa área. Utilice el ajuste macro de un punto y disparar la cámara digital de alta calidad montada en un trípode para la estabilidad. <ol><li> Acercar la medida en que todo el recorte es fotografiado mientras que aún dentro del rango de zoom recomendado de la cámara. Asegúrese de que el plano de la lente de la cámara es paralelo al plano de la lengua y de que el recorte circular aparece en la foto en lugar de oblonga. Revise las fotos para asegurarse de que son de alta calidad y útil para contar. </li></ol></li></ol></li><li> Selección de imagen y Preparación <ol><li> Sube las fotos al ordenador. </li><li> De las imágenes tomadas de la lengua del mismo tema, seleccionar sólo una para su posterior análisis en base a una definición clara entre las estructuras de la lengua en el más alto del zoom y el ángulo menos distorsionada por lo que la lengua es ancha y plana hacia la cámara. </li><li> Abre la imagen en bruto seleccionado en la fuente abierta paraftware, ImageJ. Haga clic en &quot;Plugins&quot; y en el desplazamiento de menú desplegable para &quot;Analizar&quot; y haga clic en &quot;Counter Cell.&quot; Cuando se abra el contador de células, haga clic en &quot;Iniciar&quot; para vincular la imagen para el contador celular. Nota: En este caso, utilizar ImageJ 1.45 segundos con 32 bits de Java 1.6.0_10 versión. <ol><li> Utilice un aumento estándar de 50% de coherencia entre goleadores y para uso en los pasos subsiguientes para marcar FP. Mueva esta imagen en el lado izquierdo de la pantalla junto a la contador de células. Esta imagen se denomina Copia A (Ver Figura 2, lado izquierdo de la pantalla). </li></ol></li></ol></li><li> Abra una segunda copia de la imagen en bruto (copia B) para la medición de los diámetros de las papilas se cuantifica. Acercar y alejar según sea necesario para la preferencia del goleador individuo a lo largo del proceso de puntuación. Mueva esta copia en el lado derecho de la pantalla para las dos copias no son accidentalmente confundido. (Vea la Figura 2, lado derecho depantalla) </li><li> Haga clic en la herramienta de línea. El uso de la copia B, acercar tanto como sea necesario para dibujar con precisión un diámetro a través del círculo íntimo del papel de filtro de 10 mm en cualquier ángulo y haga clic en &quot;Analizar&quot; y &quot;Ajuste de escala.&quot; Complete la &quot;distancia conocida&quot; ser &quot;10 . &quot;Verifique la escala es correcta midiendo un ángulo alternativo y asegurar el rango de diámetro está entre 9.8 a 10.2 mm. Si no es así, repita este paso. </li></ol><img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig2.jpg" /> Figura 2: Copia A y B. Copia Copia A (izquierda) está vinculada a la ventana contador de células y se mantiene en 50% de aumento para la consistencia de anotador anotador mientras copia B (derecha) puede ser ampliada a la preferencia de la persona. 2. Puntajes FP Utilizando el Protocolo dicotómicos Key Denver papilas <ol><li> Para cada papil candidatola, utilice la clave dicotómica siguiente (paso 2.2 a 2.5) que detalla los criterios para determinar si se trata de una FP. Consulte la Figura 3 para una representación visual de las papilas que se clasifican como FP y para los que son rechazados en cada paso del proceso. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig3.jpg" /> Figura 3: FP vs. Rechazado papilas. La figura 3a es una lengua con varios calificación FP mientras 3b-3e han circundado áreas que violan cada regla. (3b) área es amorfo; (3c) papilas son demasiado pequeños; 3d) papila es azul en comparación con aquellos que lo rodean, (3e) papila está rebajada en comparación con aquellos a su alrededor. </li><li> Forma <ol><li> Determinar si la papila candidato es amorfo (sin forma). Al 50% de zoom ver si hay una forma geométrica reconocido comúnmente (oval, cúbico, redondo). </li><li> Si hay una forma geométrica (véase la figura 3a), vaya al paso 2.3. </li><li> Si del there es sin forma geométrica (ver Figura 3b), vaya a la ventana del contador celular y haga clic en &quot;Tipo 1.&quot; En la copia A (50% de zoom), haga clic en la papila candidato para marcarlo como amorfo y no un FP. Al hacer clic en los tipos 1-4 en esto y los pasos posteriores permite goleadores sepan que han abordado todas las papilas candidato y categoriza qué regla fue violada al rechazar una estructura que ayudará en la discusión en el paso 2.7.2. </li></ol></li><li> Color <ol><li> Consulte copiar A en 50% de zoom y determinar si hay alguna diferenciación de color sobre la superficie de la lengua. Si es así, continúe con el siguiente 2.3.2. Si no es así, no use el color como un factor determinante; vaya al paso 2.4. </li><li> Determinar si la papila candidato es más ligero que el tejido o papilas que lo rodea (véase la figura 3a). Si alguna parte de la papila candidato ha mantenido rosa o manchado ligero, vaya al paso 2.4. </li><li> Si la papila candidato es azul y las papilas circundantes sonmás ligero (ver Figura 3c), vaya a la ventana del contador de células y haga clic en &quot;Tipo 2&quot; en el contador de células. En la copia A, haga clic en el candidato marcar como demasiado azul y no una FP. </li></ol></li><li> Tamaño <ol><li> El uso de la copia B, acercar a la distancia donde se puede ver cómodamente el contorno de la papila candidato. </li><li> Haga clic en la herramienta de línea y medir a través de la dimensión más larga de la papila candidato. Haga clic en &quot;Analizar&quot; y luego &quot;medida&quot;. Si la longitud medida es de 0,5 mm o más (véase la figura 3a), vaya al paso 2.5. </li><li> Si la longitud medida es 0,499 mm o menos, medir una vez más para asegurar la exactitud. Si todavía es 0.499 mm o menos (ver F igura 3d), haga clic en &quot;Tipo 3&quot; en la ventana contador de células y en el ejemplar A, haga clic en la papila candidato para marcarlo como demasiado pequeño y no un FP. </li></ol></li><li> Recesión <ol><li> El uso de la copia A, evaluar si la papila candidato es bien uniforme queight con el resto de la lengua o elevada. Si la papila es en una grieta, determinar su altura en comparación con las otras estructuras en la grieta, no la superficie de la lengua. Si la papila es más baja que las papilas que lo rodea (ver Figura 3e), utilice &quot;Tipo 4&quot; y en el ejemplar A, haga clic en la papila candidato para marcarlo como empotrado y no una FP. </li><li> Si la papila candidato es o bien de altura uniforme con el resto de la lengua o elevada (véase la figura 3a), utilice &quot;Tipo 5&quot; para hacer clic y marcar que esta es una FP. Este tipo 5 es la puntuación total de FP en bruto. No cierre las copias en este punto como ImageJ no guarda las puntuaciones en el contador de células ni las marcas de colores de los tipos 1-5 en el ejemplar A. </li></ol></li><li> Ahorro Copia A <ol><li> Anote en la puntuación de FP prima portátil. </li><li> En la ventana de contador de células, haga clic en &quot;Exportar imagen.&quot; Guarda con el sistema de denominación deseada del laboratorio. Esto permitirá la apertura de policíay A en el futuro para retener las marcas de colores de tipos 1-5. No va a salvar a la puntuación FP prima. </li></ol></li><li> Control De Calidad <ol><li> Puntuación cada foto por dos goleadores individuales y compara 7. </li><li> Si el mayor puntaje bruto FP está dentro del 10% de la puntuación bruta FP inferior, el promedio de los dos resultados juntos por una puntuación de consenso FP. Si los dos puntajes brutos FP difieren en más de un 10%, tire de ambas fotos anotados en la pantalla. <ol><li> Utilice tipos de contador 1-4 para ayudar en la discusión de las discrepancias y de conferir a una puntuación de consenso final. Si no se pueda alcanzar consenso durante el debate, tomar un descanso de puntuación. En un momento posterior, rescore la imagen y discutir. Si un consenso todavía no se puede alcanzar, tirar en un tercer goleador. Pídales que marcar la imagen y el diálogo con los otros dos. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Formación Goleadores de utilizar DPP <ol><li> Antecedentes de Formación <ol><li> Tener dos goleadores contar una variedad de imágenes,anotando de forma individual y que confiere regularmente para asegurarse de que estaban utilizando los mismos criterios. Sólo cuando los recuentos individuales fueron consistentemente dentro del 10% de cada uno para cada las imágenes cuando marcó fue el método (finalizado arriba) considera aceptable y calificó DPP. </li><li> Elija 15 imágenes oficiales y 15 imágenes de entrenamiento (Suplementario Figuras 2-17) en orden secuencial para anotar. Si una imagen se consideró incontable durante la selección, no tome la imagen y elija siguiente imagen secuencial. Nota: Estas imágenes varían en calidad y tamaño que fueron elegidos, mientras que el laboratorio seguía dominando la técnica de la fotografía correcta. Una de las imágenes seleccionadas se consideró incontable a través de este proceso de escrutinio primario, pero fue dejado en asegurar que goleadores fueron capaces de hacer esa llamada cuando sea necesario. Por lo tanto hay 16 imágenes dadas a los alumnos aunque sólo 15 obtuvieron imágenes. </li><li> El uso de DPP, se los goleadores mencionados contar las 15 imágenes de entrenamiento y crear un consensoanotar para cada uno. </li><li> Dé alumnos las 15 imágenes oficiales y pida calificar usando Miller &amp; Reedy para crear una línea de base. Anota récord. Llevar a cabo un entrenamiento en grupo que siguió el paso 3.2. Una vez completado el paso 3.2, tienen los goleadores puntúan las 15 imágenes oficiales de nuevo y registrar sus puntuaciones. </li></ol></li><li> Formación Goleadores posteriores sobre DPP <ol><li> Dé goleadores formación la primera imagen de formación y demostrar DPP para unos pocos papilas en esta imagen. Discuta el razonamiento para seleccionar o rechazar cada papila como FP. Permitir a los alumnos a que sigan practicando puntuable para el resto de la foto y consultan con el número de consenso (por número consenso del Gobierno de Taiwán y Laboratorios Tipo 1-5 marcadores, ver Figura 1). Por esta foto discutir cualquier discrepancia con independencia del 10% para asegurar la comprensión del DPP. </li><li> Dé goleadores posteriores la segunda imagen de formación y hacer que se puntúan usando DPP. </li><li> Si la puntuación FP prima aprendiz es dentro de los diezpor ciento del consenso establecido recuento de la sección 3.1.3., deje de aprendiz para mover a la siguiente imagen y repita los pasos. </li><li> Si la puntuación está fuera del rango del diez por ciento, utilice marcas coloreadas del aprendiz que representan tipos 1-5 para entender e identificar la inconsistencia y luego abordar la comprensión discrepante del DPP. </li><li> Dar al alumno la oportunidad de rescore la imagen y verificar la nueva puntuación una vez más. Si tiene éxito, aprendiz mueve a la siguiente imagen hasta que se completen todas las imágenes. </li></ol></li></ol>

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Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

El uso de DPP, la varianza dentro de la imagen a través de cuenta goleadores independientes y cuenta de dentro-goleador disminuyó significativamente. Si bien este método hace que el análisis de densidad FP visual sin videomicroscopia menos subjetiva, debe tenerse en cuenta que este método sólo puntuaciones de FP. DPP no puede garantizar que las estructuras clasificadas como FP tienen poros de sabor y son, por tanto, las papilas gustativas ni que los recuentos son un reflejo de la densidad brote verdadero sabor 20,23 .La naturaleza de este método es que establece la confiabilidad a través de la consistencia y precisión; sin embargo, puede ser sesgando los resultados en una dirección coherente. Para probar la precisión con respecto a otros métodos utilizando una verdadera medida de la densidad de yema del gusto (por ejemplo, videomicroscopía) se extendería más allá del alcance de esta study.However, mediante la caracterización de la morfología de FP más estricta y la creación de una clave dicotómica, este método se dirige a Miller &amp; cargo de Reedy al campo que más caracterización de FPque hay que hacer para tener un consenso sobre su morfología y cuantificación 2. Además, indicaron que esta caracterización puede &quot;aclarar algunas de las diferencias entre los sujetos y explicar algunos de los resultados dispares entre los investigadores 2.&quot; Al proporcionar un método uniforme de cuantificación, muchas de las discrepancias sobre el papel de la FP en sabor y nutricionalmente investigación relacionada puede ser rectificado. La clave dicotómica se puede ajustar para las diferentes técnicas de captura de imagen. La distancia conocida para la escala de medición se puede configurar fácilmente al diámetro utilizado en cada laboratorio y la recesión se puede descartar si envoltura o vidrio saran se colocaron sobre la lengua para la captura de imágenes. En el Laboratorio de GOT, se encontró que la lengua neutra proporciona la mejor definición de las papilas. Esto puede ser debido a la cantidad de luz en el laboratorio que causó envoltura o vidrio saran para reflejar la luz de nuevo en la cámara de la creación de una mirada que hizo asnoseva- difícil. Algunos laboratorios han dicho que encuentran el tinte más difícil de contar, pero el laboratorio GoT encontrado un colorante alimenticio azul diluido a una concentración de una y treinta y seis minutos siempre que el contraste ideal entre fungiformes papilas filiformes y en la mayoría de las lenguas. La creación de una clave dicotómica para la caracterización FP permitirá a los investigadores en diferentes laboratorios, utilizando una variedad de métodos de captura de imagen, para analizar sistemáticamente las estructuras en la lengua y tener confianza en la comunicación de sus resultados. Por último, el uso de una clave dicotómica puede tener efectos en otras áreas de la metodología científica en donde las cualidades de estructuras u objetos están proporcionando los números inconsistentes de estudio a estudio.

Las papilas son los golpes visibles en la superficie de la lengua. Hay cuatro tipos de papilas fungiformes: (FP), foliadas, caliciformes y filiformes. Mientras papilas filiformes se extienden sobre la superficie de la lengua, circumvallate se localizan sólo en la parte posterior de la lengua, y foliadas se encuentran en los lados. En contraste, FP están situados hacia la parte delantera de la lengua. FP, foliadas, y papilas caliciformes se consideran gustativa porque tienen el potencial de contener papilas gustativas filiformes, mientras no lo hagan. Las papilas gustativas son grupos de células responsables de la detección de estimulantes del gusto químicos y la transducción de los estímulos en una señal gustativa en el cerebro. Saliva y alimentos moléculas entran en las papilas gustativas a través de aberturas llamadas poros papilas gustativas donde las moléculas y luego tienen el potencial de activar células gustativas. Curiosamente, hay grandes diferencias individuales en la densidad de la yema del gusto, como se observa por primera vez en un estudio histológico de las lenguasde 18 cadáveres (Miller, 1988) 1. Las papilas gustativas en sí no son visibles en la superficie de la lengua, sin embargo, los poros del gusto son visibles cuando se utilizan las técnicas adecuadas de ampliación, de iluminación y de tinción que llevaron Miller &amp; Reedy (1990) para desarrollar un método para identificar los poros del gusto y papilas fungiformes utilizando videomicroscopía en la vida los seres humanos 2. Varios laboratorios han modificado su técnica videomicroscopía original, utilizando la fotografía fija y poco o ningún aumento. Sin embargo, desde papilas fungiformes son mucho más fáciles de visualizar que son poros utilizando estas últimas técnicas, laboratorios se volvieron a contar papilas fungiformes en lugar de poros gustativas. Al hacerlo, se asume que la densidad de papila fungiformes es una medida de proxy razonable para la densidad de poro gusto, a pesar de que las papilas fungiformes muchos no contienen poros de sabor o paladar 3; no sólo son FP más visible y accesible que circunvaladas y papilas foliadas, pero su captura de imagen es inferior time consume que el análisis de los poros gusto por el método alternativo de videomicroscopía 2,4. En 1990, Miller &amp; Reedy utilizan esta técnica para encontrar ese sabor densidades de poro se correlacionan con densidades de PF 3 que fue corroborada en Bartoshuk et al. 5 Además de esta relación anatómica, Miller &amp; Reedy también encontraron que los 8 individuos en la parte superior medio de la distribución de la densidad de poros gusto también una clasificación de sacarosa, NaCl, y el propiltiouracilo (PROP) como significativamente más intensa que lo hicieron las otras 8 personas 3. Trabajos posteriores por Bartoshuk et al. (1994) observó una correlación entre la intensidad de sabor PROP supraumbral y densidad papila fungiformes, así como la densidad de poros gusto, en 42 sujetos 5. Este método conveniente llevó a los estudios influyentes de información que los sujetos cuyas lenguas tienen muchas papilas provocan una reacción más fuerte a muchos estimulantes del gusto, incluyendo el estimulantes del gusto amargo feniltiocarbamida (PCT) y PROP 6,7. PTC y PROP son estimulantes del gusto bien investigados frecuentemente utilizados debido a la clara relación entre fenotipo sensibilidad del gusto de una persona y su genotipo. Los estudios de población han demostrado que las personas que tienen la diplotype recesiva homocigota del gen, TAS2R38, tienen una sensibilidad significativamente menor para sostener que los portadores de la variante dominante o heterocigótico del gen 8-10. Este fenómeno hereditario se informó por primera vez en 1932, cuando Arthur L. Fox anunció su descubrimiento de la &quot;ceguera gusto&quot; a PTC 11. Entre las personas capaces de probar estos compuestos amargos, la intensidad del gusto informó pueden variar en cualquier lugar desde un poco desagradable para terriblemente amarga 6. Para tener en cuenta la varianza que no puede ser explicado por TAS2R38, la teoría fue propuesta que podría atribuirse a la densidad de FP en la lengua 4. Como la investigación gusto avanzaba, el field se dividió en dos escuelas de pensamiento en torno a esta teoría sobre el papel de FP y sensibilidad sabor amargo. Aunque muchos estudios corroboran la afirmación original de que la densidad de FP es un factor en el PROP sensibilidades 4,6,12,13, ha habido una contingencia pequeña, pero importante, que se ha encontrado evidencia para refutarlo, reportando una incapacidad para replicar la función 10, 14,15,16. Delwiche et al. (2001) advirtió que la tendencia es muy variable; Densidad FP hace cuenta no uniforme de las diferencias en la sensibilidad a la amargura a través de temas, y fue sólo demostrable para los sujetos con al menos una sensibilidad moderada a PROP 7. Además de la utilización de la Miller &amp; Reedy método definido con menos rigor en la forma de cuantificar FP, es importante señalar que con excepción de la Offspring Beaver Dam Study 15 realizado por Fischer et al., La mayoría de los estudios anteriores tenían pequeña muestra tamaños que también pueden contribuir a resultados inconsistentes enel papel de la FP en el sabor. En pocas palabras, en Miller &amp; Reedy del documento sobre la metodología seminal (1990), los autores manchadas lenguas azules de cuantificar porque FP FP siguen siendo de color rosa, mientras que las papilas filiformes absorben el colorante y se vuelven azules. Se clasifican FP como &quot;estructuras redondeadas de color rosa alrededor de 0,5 mm de diámetro&quot; 2. Si bien los autores informaron que antes de utilizar este método para su posterior labor de análisis, las características de FP deberían estar más estrictamente definidos y concluyeron que la variación ya se ha señalado en la literatura &quot;podría ser atribuible a diferentes poblaciones sometidas, diferentes métodos y diferentes investigadores&quot; 2, su la investigación ha dado lugar a las características comúnmente aceptadas que el FP sean redondos 17,18, amplio 2, rosa o manchado ligero 2, 4 y elevado. A primera vista, estas características parecen muy sencillo. En la Genética del Laboratorio Taste (GOT Lab o laboratorio), el uso del conocidohod se complicó por los intentos individuales de artilleros en la clasificación y priorización de la importancia de las características anteriores, cuando algunas, pero no todas, de las características estaban presentes. Estas complicaciones incluyen pequeñas papilas que apareció rosa en medio de mucho mayor papilas; toda la lengua que absorbe el colorante azul eliminando así clasificación basada en la variación de color; papilas oblonga en vez de todo el año; y las lenguas que no tienen variación en elevación, todo lo cual contribuyó a goleadores de informes ampliamente variados conteos de PF de la misma imagen. Estas variaciones en el análisis nos llevó a revisar la literatura con el fin de determinar la subjetividad, se determinarán las excepciones a las características de PF comúnmente aceptadas y finalmente elaborar un protocolo para definir y marcar con precisión y objetividad FP. En primer lugar, FP forma se describe en la literatura como un redondeado, en forma de hongo estructura 17,18. Sin embargo, notable excepciónTambién se mencionaron los iones. Miller hizo hincapié en que el término &quot;fungiformes&quot; es un término equivocado y que muchos FP no están en forma de seta, pero puede variar ampliamente en tamaño y morfología de 18. Melis et al. (2013) también describe varios papilas que se considera &quot;distorsionada&quot;, donde el diámetro FP en una dirección era por lo menos dos desviaciones estándar por más tiempo que en otra dirección 19. Por otra parte, Cheng &amp; Robinson encontraron que al indicar FP mediante tinción, que oscilaron entre plana rematada a alargada en aspecto 20. Tomando nota de las excepciones mencionadas, la caracterización de un FP de ser redonda y aparece en forma de hongo una definición demasiado estrecha. En segundo lugar, el color FP se describe como &quot;círculos de color rosa contra un fondo azul&quot; 7 después de la tinción de la lengua con colorante azul. Aunque las manchas más ligero era el criterio más coherente de FP en toda la literatura todavía no era un partido de clasificación uniforme. Cheng y<html> ; Robinson observó que el FP no siempre se tiñeron levemente, por lo que la identificación difícil e incierta 20. Parece entonces que las lenguas absorben tinte diferente y mientras que el contraste es evidente en muchas lenguas, algunas se vuelven completamente azul sin distinción, mientras que otros pierden inmediatamente cualquier rastro de colorante azul 21. La tercera característica, el tamaño de FP, era bastante consistentes entre los papeles, que van desde 0,5 mm a 0,97 mm 6,18. En la literatura Miller observó que había dos rangos de tamaño de papilas en la parte anterior dorsal de la lengua. Las papilas con diámetros más grandes eran principalmente fungiformes y papilas cónica, mientras que las papilas con un diámetro más pequeño eran en su mayoría filiforme 18. Sin embargo, con la excepción de la Offspring Beaver Dam Study 21, el tamaño no apareció para determinar si una estructura es un FP en la literatura, pero se proporcionan para papilas ya clasificada como &quot;fungiformes&quot;. _content &quot;&gt; Por último, la elevación aparece como el cuarto FP característica 4 aunque Miller señaló que la distinción entre filiformes y papilas fungiformes es difícil cuando se utiliza este criterio cerca del margen de la lengua. Dio dos ejemplos de FP que variaron en gran medida en la elevación, uno de ellos 0,8 mm de altura, mientras que otro fue de menos de 0,1 mm de altura, pero todavía tenía dos poros gustativas que se observaron con claridad 18. Esta observación también fue seguido y confirmado por Shahbake et al. 4 Estas definiciones y sus excepciones reportados muestran que el campo gusto ha reconocido desde hace tiempo la falta de coherencia en la caracterización de FP y las deficiencias del protocolo de uso común de Miller &amp; Reedy. De hecho, Miller &amp; Reedy exhortaron el campo para definir con más detalle las características de FP 2. La hipótesis de que goleadores estaban dando un peso diferente a las características y priorizar su importancia de manera diferente cuando papillae no cumplió con todos los criterios, por ejemplo, cuando una papila era grande y con forma de hongo, pero manchada azul. Se razonó que los investigadores de los estudios publicados anteriormente probablemente hicieron lo mismo que, cuando se combina con pequeños tamaños de muestra, puede dar cuenta de la variedad de resultados procedentes del uso de este método. El Gobierno de Taiwán Lab abordó este vacío en la metodología FP mediante el desarrollo de una guía que define cada característica utilizando mediciones objetivas y prioriza las características para indicar que tiene prioridad en el análisis. Este método es el Protocolo de Denver papilas (DPP), una clave dicotómica con características claras y distintas de FP para garantizar recuentos precisos y repetibles a partir de fotografías digitales de la lengua. DPP es un método propuesto para estandarizar el método de Miller &amp; Reedy utilizado previamente, eliminando así la interpretación individual y garantizar resultados más consistentes en el análisis de la densidad de FP. Al hacerlo, DPP se puede utilizar para más confianza determine el papel de la FP en el sabor. Las imágenes tomadas de la lengua de los temas fueron analizados por los científicos ciudadanos (goleadores) del laboratorio que son los verdaderos sujetos de este estudio. Núcleo del Laboratorio de ciudadanos científicos está compuesta por miembros de la comunidad con edades (años) de 16 a mediados de los años 80. Un informe de evaluación sumativa encargado por el Museo en 2012 describe ciudadanos científicos como tener un fuerte interés por la ciencia y con dos tercios de haber ganado un título universitario en una disciplina científica 22. Ciudadanos científicos Candidato son reclutados actualmente a través del boca a boca, debe completar con éxito un proceso de entrevistas con voluntarios veteranos en el Museo, y someterse a un período de prueba en la exposición permanente de salud del Museo, la Expedición de la Salud, antes de que tengan la oportunidad de aplicar para una posición en el laboratorio. Una vez aceptado en el laboratorio, los científicos ciudadanos se someten a un entrenamiento de 12 semanas para obtener la certificación para inscribirse sujeto humanos. A raíz de esta certificación, que son capaces de tomar los módulos de formación en diversas técnicas en el laboratorio (por ejemplo, recuento papilas, la extracción de ADN) y siguientes certificaciones adicionales y medidas regulares de control de calidad, estos científicos ciudadanos tienen la oportunidad de participar activamente en el análisis de datos. Ciudadanos científicos ofrecen voluntariamente su tiempo y no son compensados ​​por sus contribuciones al Museo.

<table><tbody><tr><td>Image J</td><td>National Institutes of Health</td><td>&lt;a href=&quot;http://rsb.info.nih.gov/ij&quot;&gt;http://rsb.info.nih.gov/ij&lt;/a&gt;</td><td></td></tr><tr><td>Food dye, Deep Blue Shade</td><td>Esco</td><td>http://escofoods.com/blue-food-coloring.html</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Rayon Tipped OB/GYN Applicators</td><td>Puritan</td><td>25-808 1PR</td><td></td></tr><tr><td>Grade 1 Filter Paper</td><td>Whatman</td><td>Whatman No.: 1001-325</td><td></td></tr><tr><td>Coolpix P100 (10.3 megapixels) and P500 (12.1 megapixels)</td><td>Nikon</td><td>http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/</td><td>neither model appears to be available on the website any longer</td></tr><tr><td>Paper Hand Towels</td><td>Kleenex</td><td>https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx</td><td></td></tr></tbody></table>

denver papillae protocol for objective analysis of fungiform papillae

El objetivo del Protocolo papilas Denver es utilizar una clave dicotómica para definir y priorizar las características de papilas fungiformes (FP) para asegurarse de puntuación consistente entre goleadores. Este protocolo se basa apagado de una necesidad que ha surgido de las últimas dos décadas de investigación gusto usando FP como sustituto de la densidad de poros gusto. Densidad FP históricamente ha sido analizado utilizando Miller y Reedy de 1990 caracterizaciones de su morfología: redondo, manchado ligero, grande y elevada. En este trabajo, los autores advertidos de que las definiciones más estrictas de FP morfología necesaria a perfilarse. A pesar de este llamado a la acción, el seguimiento de la literatura ha sido escasa, con la mayoría de los estudios continuos para citar Miller &amp; Reedy del trabajo original. En consecuencia, los informes de densidad FP han sido muy variables y, combinado con pequeños tamaños de muestra, puede contribuir a las conclusiones discrepantes sobre el papel de FP en el sentido del gusto. La Genética del Laboratorio Taste exploraron esta aparente inconconsistencia en el conteo y se encontró que goleadores fueron priorizando individualmente la importancia de estas características de forma diferente y no tenía ninguna orientación para cuando una papila tenía algunos, pero no todos, de las cualidades reportados de FP. El resultado de esta subjetividad es recuentos de PF altamente variables de la misma imagen lengua. El Protocolo papilas Denver ha sido desarrollado para remediar esta consecuencia mediante el uso de una clave dicotómica que más define y prioriza la importancia de las características presentadas por Miller &amp; Reedy. El método propuesto podría ayudar a crear una forma estándar para cuantificar la FP para los investigadores en el campo del gusto y estudios nutricionales.

Aquí está una fotografía representativa anotó por dos goleadores individuales cuando se utiliza la metodología de Miller &amp; Reedy comúnmente utilizada para la identificación de FP basado en las normas de procedimiento de la redonda, grande, de color rosa o manchado ligero, y elevado, y luego la misma fotografía anotó por dos goleadores usando DPP. Los recuentos mostrados son representativos de la alta variación observada usando el método original en comparación con la menor varianza usando DPP. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig4.jpg" /> Figura 4:. Miller &amp; Reedy Cuantificación vs DPP Cuantificación La imagen de la izquierda es el representante de los recuentos de dos goleadores &#39;utilizando el método de Miller &amp; Reedy. La imagen de la derecha representa dos cargos goleadores &#39;utilizando DPP. Rojo es el máximo goleador 1, Amarillo es el máximo goleador 2, verde es goleadores 1 y 2. Fiabilidad estadística de DPP fue estudiado previamente usando un modelo lineal mixto para evaluar la variabilidad 10. En pocas palabras, para generar datos para evaluar el papel de la DPP juega en la consistencia de las puntuaciones, imágenes quince se anotó dos veces. En el primer lote de las puntuaciones, DPP goleadores ingenuos utilizan el método de Miller &amp; Reedy 2. Los goleadores fueron entrenados para usar DPP y las imágenes se vuelven a puntuar de forma individual sin la etapa de consenso final se describe en la sección 2.7 detalla Control de Calidad (Figura 5). El conjunto de datos puntuación FP luego se utilizó en el modelo mixto para evaluar las diferencias combinados debido al protocolo (Figura 6), la variabilidad dentro de goleador y la interacción entre los dos. Este modelo mostró una diferencia significativa en la puntuación cuando se utiliza el método de Miller &amp; Reedy en comparación con DPP (valor de p &lt;1 x 10 -6) con DPP que conduce a un aumento en el recuento por 6.99 (SE = 0,99); 5,2% de la variabilidad en la puntuación se debió a la formación, el 25,9%, debido al goleador, y el remanentea la variabilidad específica a la imagen 10. A continuación, para generar datos para determinar la variabilidad dentro de goleador, una serie de treinta imágenes en orden aleatorio fue evaluado por 11 individuos. Sin el conocimiento de goleadores, esta serie de imágenes incluidas tres imágenes que se repiten. Se observó una diferencia drástica en la variabilidad puntuación comparando imágenes distintas versusrepeated imágenes. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig5.jpg" /> Figura 5:. DPP-Naïve vs Publicar DPP Formación paneles proporcionan diagramas de caja de las puntuaciones de los viajeros para 15 imágenes pre y post entrenamiento Protocolo papilas Denver. Para cada diagrama de caja, un lleno en el círculo indica la media, mientras que un círculo abierto indica un valor atípico. <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig6.jpg" /> Figura 6:. Cambio en Goleador Varianza El gris representa tque la varianza de goleadores individuales anteriores a la formación de la DPP. Negro es el entrenamiento mismo puesto goleador DPP.

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Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Aquí se presenta un protocolo para medir la densidad de la papila fungiformes de fotografias digitales. Este método se basa el establecimiento de prioridades y la métrica características objetivas en el trabajo descriptivo original en papilas fungiformes por Miller &amp; Reedy (1990).

Protocolo papilas Denver para el Análisis Objetivo de papilas fungiformes

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.3K vistas.  Denver Museum of Nature & Science.  Aquí se presenta un protocolo para medir la densidad de la papila fungiformes de fotografias digitales. Este método se basa el establecimiento de prioridades y la métrica características objetivas en el trabajo descriptivo original en papilas fungiformes por Miller & Reedy (1990). 

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Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic processes that prepare the alimentary canal for digestion. Steady progress is being made towards understanding the early biochemical and molecular events underlying taste transduction (for a review, Breslin and Spector, 20081). However, progress to date has largely resulted from animal models. Yet, since marked differences in receptor specificity and receptor density vary among species, human taste transduction will only be understood by using human taste tissue. Here we describe a biopsy technique to collect human fungiform papillae, visible as rounded pink anterior structures, about 0.5 mm in diameter that contain taste buds. These biopsied papillae are used for several purposes including the isolation of viable taste bud cells, in situ hybridization, immunohistochemistry and, through techniques of molecular biology, the identification of taste-specific novel proteins.

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Knowledge of molecular mechanisms underlying gustatory transduction has recently enjoyed significant advances, largely due to using animal models. However, the wide diversity in taste sensitivity and specificity among mammals warrants studies in human tissue. We describe a biopsy technique to collect living taste cells from the papillae on human tongue.

Técnica para recopilar fungiformes (gusto) Las papilas de la lengua humana

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

Investigación

Medicina

Method of Studying Palatal Fusion using Static Organ Culture

Cleft lip and palate are among the most common of all birth defects. The secondary palate forms from mesenchymal shelves covered with epithelium that adheres to form the midline epithelial seam (MES). The theories suggest that MES cells follow an epithelial to mesenchymal transition (EMT), apoptosis and migration, making a fused palate 1. Complete disintegration of the MES is the final essential phase of palatal confluence with surrounding mesenchymal cells. We provide a method for palate organ culture. The developed in vitro protocol allows the study of the biological and molecular processes during fusion. The applications of this technique are numerous, including evaluating responses to exogenous chemical agents, effects of regulatory and growth factors and specific proteins. Palatal organ culture has a number of advantages including manipulation at different stages of development that is not possible using in vivo studies.

Studies of palate development are motivated by the incidence of cleft palate, a birth defect that imposes a tremendous health burden and can leave lasting disfigurement. We demonstrate here a technique to culture palatal shelves that can be used to study different signaling pathways involved in palatal development and fusion.

Método de estudio palatina Fusión usando estático Organ Culture

Cleft lip and palate are among the most common of all birth defects. The secondary palate forms from mesenchymal shelves covered with epithelium that ...

Biología del Desarrollo

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple stimuli and complex chemical molecules contained in foods. In human, individual fungiform papillae contain from zero to as many as 20 taste buds. There is no established protocol for culturing human taste cells, although the ability to maintain taste papillae cells in culture for multiple cell cycles would be of considerable utility for characterizing the molecular, regenerative, and functional properties of these unique sensory cells. Earlier studies of taste cells have been done using freshly isolated cells in primary culture, explant cultures from rodents, or semi-intact taste buds in tissue slices1,2,3,4. Although each of these preparations has advantages, the development of long-term cultures would have provided significant benefits, particularly for studies of taste cell proliferation and differentiation. Several groups, including ours, have been interested in the development and establishment of taste cell culture models. Most attempts to culture taste cells have reported limited viability, with cells typically not lasting beyond 3-5 d5,6,7,8. We recently reported on a successful method for the extended culture of rodent taste cells9. We here report for the first time the establishment of an in vitro culture system for isolated human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability. Cells displayed many molecular and physiological features characteristic of mature taste cells. Gustducin and phospholipase C &beta;2, (PLC-&beta;2) mRNA were detected in many cells by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and confirmed by sequencing. Immunocytochemistry analysis demonstrated the presence of gustducin and PLC-&beta;2 expression in cultured taste cells. Cultured human fungiform cells also exhibited increases in intracellular calcium in response to appropriate concentrations of several taste stimuli indicating that taste receptors and at least some of the signalling pathways were present. These results sufficient indicate that taste cells from adult humans can be generated and maintained for at least eight passages. Many of the cells retain physiological and biochemical characteristics of acutely isolated cells from the adult taste epithelium to support their use as a model taste system. This system will enable further studies of the processes involved in proliferation, differentiation and function of mammalian taste receptor cells in an in vitro preparation.
Human fungiform taste papillae used for establishing human fungiform cell culture were donated for research following proper informed consent under research protocols that were reviewed and approved by the IRB committee. The protocol (#0934) was approved by Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Written protocol below is based on published parameters reported by Ozdener et al. 201110.

We aimed to develop a reproducible protocol for isolating and maintaining long-term cultures of human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability.

Aislamiento y cultivo de células humanas las papilas fungiformes gusto

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Neurociencias

Laser Capture Microdissection of Neurons from Differentiated Human Neuroprogenitor Cells in Culture

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor (EGF) and fibroblast growth factor (FGF) to provide an abundant supply of cells. NPCs were differentiated in the presence of a new combination of nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), dibutyryl cAMP (DBC) and retinoic acid on dishes coated with poly-L-lysine and mouse laminin to obtain neuron-rich cultures. NPCs were also differentiated in the absence of neurotrophins, DBC and retinoic acid and in the presence of ciliary neurotrophic factor (CNTF) to yield astrocyte-rich cultures. Differentiated NPCs were characterized by immunofluorescence staining for a panel of neuronal markers including NeuN, synapsin, acetylcholinesterase, synaptophysin and GAP43. Glial fibrillary acidic protein (GFAP) and STAT3, astrocyte markers, were detected in 10-15% of differentiated NPCs. To facilitate cell-type specific molecular characterization, laser capture microdissection was performed to isolate neurons cultured on polyethylene naphthalate (PEN) membrane slides. The methods described in this study provide valuable tools to advance our understanding of the molecular mechanism of neurodegeneration.

Human neuroprogenitor cells (NPCs) were expanded under proliferating conditions. NPCs were differentiated into neuron-rich cultures in the presence of a combination of neurotrophins. Neuronal markers were detected by immunofluorescence staining. To isolate a pure population of neurons, NPCs were differentiated on PEN membrane slides and laser capture microdissection was performed.

Microdisección de captura por láser de neuronas a partir de células diferenciadas neuroprogenitoras humanas en cultivo

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor ...

Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty acid receptors housed on taste cells. Previous research has shown that an individual&#39;s oral sensitivity to fatty acid, specifically oleic acid (C18:1) is associated with body mass index (BMI), dietary fat consumption, and the ability to identify fat in foods. We have developed a reliable and reproducible method to assess oral chemoreception of fatty acids, using a milk and C18:1 emulsion, together with an ascending forced choice triangle procedure. In parallel, a food matrix has been developed to assess an individual&#39;s ability to perceive fat, in addition to a simple method to assess fatty food liking. As an added measure tongue photography is used to assess papillae density, with higher density often being associated with increased taste sensitivity.

Oral chemoreception of fatty acids and the association with diet and fatty food preferences may enable the identification of mechanisms involved with the development of obesity and why dietary changes may be difficult for many individuals.

Medición oral de ácidos grasos Umbrales, Percepción de grasa, alimentos grasos gusto, y papilas Densidad en Humanos

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty ...

Protocol for Three-dimensional Confocal Morphometric Analysis of Astrocytes

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify their functional and structural properties, a condition called reactive astrogliosis. Here, a protocol for assessment of the morphological properties of astrocytes is presented. This protocol includes quantification of 12 different parameters i.e. the surface area and volume of the tissue covered by an astrocyte (astrocyte territory), the entire astrocyte including branches, cell body, and nucleus, as well as total length and number of branches, the intensity of fluorescence immunoreactivity of antibodies used for astrocyte detection, and astrocyte density (number/1,000 &#181;m2). For this purpose three-dimensional (3D) confocal microscopic images were created, and 3D image analysis software such as Volocity 6.3 was used for measurements. Rat brain tissue exposed to amyloid beta1-40 (A&#946;1-40) with or without a therapeutic&#160;intervention was used to present the method. This protocol can also be used for 3D morphometric analysis of other cells from either in vivo or in vitro conditions.

Astrocytes in the CNS change their functional and structural properties in response to harmful stimuli. This report presents a protocol for assessment of three-dimensional astrocyte morphology in diseased conditions or after therapeutic interventions.

Protocolo para tridimensional confocal morfométrico Análisis de astrocitos

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify ...

Oral Biofilm Sampling for Microbiome Analysis in Healthy Children

Oral biofilm and its molecular analysis provide a basis for investigating various dental research and clinical questions. Knowledge of biofilm composition leads to a better understanding of cariogenic and periopathogenic mechanisms. Microbial changes taking place in the oral cavity during childhood are of interest for several reasons. The evolution of the child oral microbiota and shifts in its composition need to be analyzed further to understand and possibly prevent the onset of disease. At the same time, advanced knowledge of the natural composition of oral biofilm is needed. Early stages of caries-free permanent dentition with healthy gums provide a widely unaffected subgingival habitat that can serve as an in situ baseline for studying features of oral health and disease. Analysis of children's oral biofilm during different stages in life is thus an important theme in the field. Modern molecular analysis methods can provide comprehensive information about the bacterial diversity of such biofilms. To enable microbiota data comparison, it is important to standardize each step in the procedure for molecular data generation. This procedure spans from clinical sampling, Next Generation Sequencing (NGS), bioinformatic data processing, to taxonomic interpretation. One of the most critical factors here is biofilm sampling. Sampling in children is even more challenging in particular due to limited space in subgingival areas. We thus focus on the use of paper points for subgingival sampling. This article provides a detailed protocol for oral biofilm sampling of the subgingival sulcus, the mucosa, and saliva in children.

Changes in the oral microbiome throughout childhood are of growing interest. Comparison of different microbiome studies reveals a lack of standardized sampling protocols. Limited space makes sampling the sound subgingival sulcus of children challenging. Paper point sampling is presented here in detail as the method of choice for this area.

Biofilm oral toma de muestras para análisis de microbioma en niños sanos

Oral biofilm and its molecular analysis provide a basis for investigating various dental research and clinical questions. Knowledge of biofilm composition ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement classic taste-testing methods in two ways. First, we explain how to do a brief assessment of the mouth, including the tongue, to ensure that taste papillae are present and to note evidence of relevant disease. Second, we draw on genetics to validate taste test data by comparing reports of perceived bitterness intensity and inborn receptor genotypes. Discordance between objective measures of genotype and subjective reports of taste experience can identify data collection errors, distracted subjects or those who have not understood or followed instructions. Our expectation is that fast and valid taste tests may persuade researchers and clinicians to assess taste regularly, making taste testing as common as testing for hearing and vision. Finally, because many tissues of the body express taste receptors, taste responses may provide a proxy for tissue sensitivity elsewhere in the body and, thereby, serve as a rapid, point-of-care test to guide diagnosis and a research tool to evaluate taste receptor protein function.

This protocol measures human taste responses and includes a brief anatomical assessment, a short taste test, and a validation method using the subject&#39;s reported sensation and taste receptor genotype.

Examen de gusto: Una prueba breve y validada

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells communicate with nerve fibers that carry this information to the brain. Because taste-transducing cells continuously die and are replaced throughout adulthood, the taste-bud environment is both complex and dynamic, requiring detailed analyses of its cell types, their locations, and any physical relationships between them. Detailed analyses have been limited by tongue-tissue heterogeneity and density that have significantly reduced antibody permeability. These obstacles require sectioning protocols that result in splitting taste buds across sections so that measurements are only approximated, and cell relationships are lost. To overcome these challenges, the methods described herein involve collecting, imaging, and analyzing whole taste buds and individual terminal arbors from three taste regions: fungiform papillae, circumvallate papillae, and the palate. Collecting whole taste buds reduces bias and technical variability and can be used to report absolute numbers for features including taste-bud volume, total taste-bud innervation, transducing-cell counts, and the morphology of individual terminal arbors. To demonstrate the advantages of this method, this paper provides comparisons of taste bud and innervation volumes between fungiform and circumvallate taste buds using a general taste-bud marker and a label for all taste fibers. A workflow for the use of sparse-cell genetic labeling of taste neurons (with labeled subsets of taste-transducing cells) is also provided. This workflow analyzes the structures of individual taste-nerve arbors, cell type numbers, and the physical relationships between cells using image analysis software. Together, these workflows provide a novel approach for tissue preparation and analysis of both whole taste buds and the complete morphology of their innervating arbors.

This paper describes methods for tissue preparation, staining, and analysis of whole fungiform, circumvallate, and palate taste buds that consistently yield whole and intact taste buds (including the nerve fibers that innervate them) and maintain the relationships between structures within taste buds and the surrounding papilla.

Tinción, visualización y análisis de papilas gustativas fungiformes, circunvaladas y del paladar

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells ...

Isolation of Circumvallate Papillae (CVP) Epithelium from Mouse Model: An Enzymatic Procedure to Separate CVP Epithelium from Mouse Tongue

Source: Shechtman, L. A. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/62300" target="_blank">Generation and Culture of Lingual Organoids Derived from Adult Mouse Taste Stem Cells</a>. J. Vis. Exp. (2021)
In this video, we describe the isolation of circumvallate papillae (CVP) epithelium from a murine tongue.

Aislamiento del epitelio de papilas circunvaladas (CVP) de un modelo de ratón: un procedimiento enzimático para separar el epitelio de CVP de la lengua de ratón

Source: Shechtman, L. A. et al. Generation and Culture of Lingual Organoids Derived from Adult Mouse Taste Stem Cells. J. Vis. Exp. (2021)
In this video, ...