Name: isolation and cryopreservation of neonatal rat cardiomyocytes
Uploaded: 2015-04-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Cryopreservation of Neonatal Rat Cardiomyocytes at JoVE.com

This work was supported by funding from American Heart Association 12BGIA12040477, NC State University Chancellor&#8217;s Faculty Excellence Program, and National Natural Science Foundation of China H020381370216.

הפרוטוקול הבא מיועד לבידוד של cardiomyocytes מהמלטה אחת מגורי יילודי חולדה (10-14 גורים). אם גודל המלטה הוא שונה באופן מהותי, ההליך עשוי להיות בקנה מידה כדי לפצות. הגורים צריכים להיות סביב 48 ± 6 שעות ישנות. כל הנהלים במסמך זה אושרו על ידי אוניברסיטת מדינה המוסדית הטיפול בבעלי חיים בצפון קרוליינה וועדת שימוש (IACUC). 1. תא בידוד הכנה הערה: בצע את השלבים הבאים ביום שלפני הבידוד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי הבא: מספריים גדולים, מספריים קטנים, מלקחיים קטנים וחדים, המלקחיים גדולים. השתמש מחזור כובד במשך 60 דקות במינימום של 121 ° C וזמן ייבוש של 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים 40 מיליליטר של 0.1% פתרון טריפסין במקרר להפשיר O / N. הפתרון של האנק במקרר מלחים מאוזן (HBSS) אם לא קר כבר. הכן פתרון עוברי 20% בסרום שור (FBS) מניות תקשורת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשנת 400 מיליליטר של Iscהתקשורת השתנה Dulbecco של אובה (IMDM) להוסיף 100 מיליליטר FBS, L-גלוטמין 5 מיליליטר (200 מ&quot;מ), 2.5 מיליליטר גנטמיצין (מיליליטר 10 מ&quot;ג -1), ושל 0.9 מיליליטר 2-mercaptoethanol. לעקר באמצעות מסנן אבק. תקשורת חנות ב C ° 4 עד 3 שבועות וזה ניתן להרחבה לכמויות קטנות יותר או גדולות יותר. לדלל 20% מניות תקשורת FBS 1: 1 עם IMDM לייצר 10% FBS תקשורת NRCM. לעשות רק בקבוצות קטנות כדי למנוע חימום וקירור של תקשורת חוזרים ונשנים. </li></ol></li></ol> יום בידוד 2. תא 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע את העבודה הבאה במנדף תרבות על מנת למנוע זיהום של הדגימות. לעיתוי הטוב ביותר להתחיל את העבודה הזאת בשעתי אחר הצהריים שכן אין O / דגירה N. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את סביבת עבודה בתוך ברדס תרבות סטרילי. הנח כרית ספסל בשכונת התרבות. מלא שתי כוסות 250 מיליליטר עם 70% אתנול ולמקם את הכלים כירורגיים בהם. מניחים דלי קטן של קרח במכסת מנוע. לוודא שהוא גדול מספיק כדי להכיל כמה צינורות ומנת 150 מ&quot;מ. UV לעקר את מכסה המנוע for 10 דקות. מניחים 40 מיליליטר 0.1% טריפסין על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחזר גורי חולדה בילוד מהאם. כדי לשמור על בעלי החיים חמים עד לשימוש, מניח אותם במכל מבודד כגון דלי קרח העטוף בכרית ספסל כדי לשמור אותם חמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למלא צלחת תרבות 150 מ&quot;מ עם 25 מיליליטר HBSS ומניח על קרח. לגולל 2-3 פודה גזה ומקום באזור עבודה. מחזיק גור בעור בצד האחורי של הצוואר, לרסס אותו עם 70% אתנול ומקום במכסת מנוע. הערה: כדי לשמור על סטריליות הטובה ביותר, זה יכול להיעשות על ידי אדם אחר שלאחר מכן מציב את הגור ניקה במכסת המנוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את הגור בעור בצד האחורי של הצוואר. לאחר מכן באמצעות המספריים הגדולים, בחתך אחד מהיר, חזק להרדים על ידי עריפת ראש. כתם הדם עם גזה. הערה: בשל הבדלים בדרישות IACUC, זה יכול להיות מתאים יותר כדי לנקות את הגור עם אתנול לנגב ולא ריסוס זה. הקפד לבדוק עם האוניברסיטה IACUC כלהנחיות שלהם בשלב זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך צמצום צד קדמי של chest דרך בית החזה. לסחוט את העור בצוואר כדי לעזור לפתוח את בית החזה עד הלב גלוי. בעזרת המספריים הקטנים, להסיר את הלב ומקום בצלחת תרבות HBSS על קרח. חזור לגורים האחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל רקמה הלא-לב מהדגימות ולערבל את HBSS בעדינות כדי לשטוף את לבם. העבר את רקמת הלב למנת תרבות אחרת המכילה HBSS הטרי ועוד לשטוף את הרקמה. חותך את הרקמה נוספת עד החתיכות 1-3 מ&quot;מ 3, ולאחר מכן להעביר לפתרון טריפסין. הנח פתרון טריפסין על נדנדה ב 4 ° C O המקרר / N. </li></ol> יום בידוד תא 2 הערה: בעוד aspirating בשלבים הבאים, להשתמש בפיפטה ולא קו ואקום. הרקמה נעה בקלות, וקו ואקום יסתום או להסיר רקמה עדיין מכיל תאים. עדיף להשתמש בפיפטה לשאיפה במקום. אם הרקמה נכנסה לפיפטה, פיפטה לגבות כדי להוציא אותה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך taliquots HREE של 10% Media NRCM: אחד עם 25 מיליליטר ושני עם 15 מיליליטר. מניחים צינור 25 מיליליטר אחד של מדיה 37 ° C אמבט מים. הוסף 4 מיליליטר HBSS עד 5 צינורות חרוטי 15 מיליליטר שונה ולמקם את כל על קרח. כל תווית צינור # 15 מיליליטר 1-5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 40 מיליליטר HBSS לצינור חרוטי 50 מיליליטר. הוסף 10 מיליליטר של HBSS לCollagenase, פיפטה להשעות, ולשלב את הפתרונות כדי ליצור 50 מיליליטר של 1 מיליליטר מ&quot;ג -1 פתרון collagenase. לעקר באמצעות מסנן 0.22 מיקרומטר ואקום, ולאחסן בRT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחזר צינור הרקמה / טריפסין לב. ודא טריפסין זה ברור, והרקמות רכות מופיעה. לאפשר לרקמות להתיישב לפינה של צינור ולשאוב נוזלים עד כמה שניתן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10% FBS תקשורת NRCM 25 מיליליטר חמה לצינור והמערבולת ביד. כובע ולסובב באמבט מים 37 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות. לשאוב נוזל שוב. הרקמה צריכה לצוף בשלב זה; אם כן, לשאוב מהחלק התחתון של הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 מיליליטר collagenase. סובב באמבט מים במשך 2 דקות או עד הפתרון הוא מעונן. Quickly לשאוב את הנוזל. הוסף 10 מיליליטר collagenase הטרי לצינור המכיל את הרקמה ולסובב באמבט מים במשך 2 דקות. פיפטה לערבב, פתרון טרנספר לצינור # 1, ומניחה על קרח. זה יכול להיות לא ניתן להסיר את כל הנוזל. חזור על שלבים 3.2-3.6 לשלושה צינורות 15 מיליליטר חרוטי האחרים. העבר את כל נוזל שנותר לצינור # 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה 15 מיליליטר צינורות ב 410 RCF במשך 8 דקות. בעוד צנטריפוגה, מקום 15 מיליליטר 10% צינור תקשורת FBS NRCM באמבט מים. מניחים 40 מיקרומטר מסננת תא על גבי צינור חרוטי 50 מ&quot;ל ורטוב עם 2 מיליליטר HBSS הקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant מהתאים הסתחררו מטה. הוספת HBSS 6 מיליליטר קר על צינור אחד וגלול. תא פיפטה השעיות דרך המסננת לתוך 50 מיליליטר חרוטי להסיר את כל רקמה. יש לשטוף את הצדדים של כל שפופרת 15 מיליליטר עם HBSS הקר 3 מ&quot;ל ולהוסיף למסננת. תאי צנטריפוגה ב410 RCF במשך 10 דקות. לשאוב supernatant. Resuspend גלולה תא ב 10 מיליליטר של 10% תקשורת FBS NRCM והעברה ל- T-75 בקבוק. יש לשטוף את חרוטי עם תקשורת 5 מ&quot;ל ולהוסיף לflלשאול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה עבור h 1 ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. מניחים 15 מיליליטר 10% צינור תקשורת FBS NRCM האחרון לתוך אמבט מים. העבר את התוכן של T-75 לבקבוק T-175 חדש, לשטוף T-75 עם 15 מיליליטר תקשורת ולהוסיף ל- T-175. דגירה עבור שעה 1. </li></ol> 4. Cryopreservation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח הקפאת תקשורת על קרח. העבר את התקשורת סלולארי מצינור חרוטי 50 מיליליטר-175 T, ולאסוף 10 μl של השעיה תא לתא הספירה באמצעות Trypan כחול. צנטריפוגה ב -410 RCF במשך 5 דקות. בעוד צנטריפוגה, לספור תאים באמצעות דלפק תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקשורת לשאוב תרבות, ותאים גלולים בהקפאת תקשורת בריכוז של 2-4 מיליון תאים לכל מיליליטר. מקום 1 מיליליטר של השעיה תא בבקבוקון קריוגני, אז מקום בקבוקוני קצב מבוקר קירור הקפאת מיכל, ומקום ב-80 O מקפיא C ° / N. בתוך 1-2 ימים, להעביר בקבוקונים בחנקן נוזלי. </li></ol> 5. תאי הפשרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת מעיל בפיברונקטין על ידי המסת 250 μl60; של פיברונקטין (ריכוז מניות 1 מ&quot;ג מיליליטר -1) ל9.75 מיליליטר מים (ריכוז סופי 0.025 מיליליטר מ&quot;ג -1). הוסף מספיק פתרון לכיסוי צלחת התרבות ולדגור על 37 מעלות צלזיוס במשך לפחות 30 דקות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצינורות חרוטי ארבעה 15 מיליליטר, להפיק את תערובות DMSO / מדיה כדלקמן ידי הוספת DMSO למדיה 20%. להוסיף (5%) 9.5 מיליליטר תקשורת עם 500 μl DMSO. להוסיף (2.5%) 9.75 מיליליטר תקשורת עם 250 μl DMSO. הוסף 10 מיליליטר תקשורת (להפוך את שני אלה). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים את תערובת התקשורת האמורה באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. הסרת תאים מחנקן נוזלי ומניח על קרח יבש. כאשר תערובות תקשורת חמות, להפשיר תאים 37 ° C אמבט מים עד ממש מופשרים. אל תשאירו תאים באמבט מים במשך זמן רב מדי מכיוון שהם עלולים לגרום נזק לתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את התוכן של בקבוקון קריוגני 5% צינור DMSO / תקשורת. צנטריפוגה ב -410 RCF במשך 8 דקות. לשאוב supernatant עוזב תא גלולה. הוסף תוכן של 2.5% צינור DMSO / תקשורת ועד לתא גלולה וresuspend. צנטריפוגה ב -410 RCF במשך 8 דקות. לשאוב supernatant עוזב תא גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת תוכן של 0% צינור DMSO / תקשורת אחד לתא גלולה וגלול. צנטריפוגה ב -410 RCF במשך 8 דקות. לשאוב supernatant עוזב תא גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת תוכן של DMSO / מדיה 0% השניה לתא גלולה וגלול. קח דוגמא קטנה לספירת תאים. צנטריפוגה ב -410 RCF במשך 8 דקות. בעוד תאי ספירת צנטריפוגה בhaemocytometer באמצעות Trypan הכחול לתייג תאים מתים. סכום שיא תא, כמו גם יכולת קיום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant עוזב תא גלולה. Resuspend ב 10% תקשורת NRCM (אופציונאלי: להוסיף bromodeoxyuridine 100 מיקרומטר (BrdU)) ותאי צלחת על מנות מצופים פיברונקטין. </li></ol> תרבות 6. Cell <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט תאים בכ 100k תאים לכל 2 סנטימטר. התאם את צפיפות הציפוי המבוססת על השימוש המיועד של התרבות. הכן 2% תקשורת NRCM על ידי דילול מדיה של 20% בIMDM ביחס 1:10. הבא הוא קווי המתאר של תרבות טיפוסית. &lt;/ Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 1, לשטוף תאים מתים משם עם IMDM החם, להוסיף 10% NRCM (האופציונלי 100 מיקרומטר BrdU). ביום 2, לשטוף תאים מתים משם עם IMDM החם, להוסיף 10% NRCM. יום 3-להוסיף 2% NRCM. ביום 4 להוסיף 2% NRCM. ביום 5 להבטיח שהתאים ומחוברות ומכות. לשמור על תאים בתרבית למשך כשבוע. בשלב זה fibroblasts עשוי להתחיל להיגמל באופן משמעותי את NRCMs. </li></ol>

<ol>
	<li>Louch, W. E., Sheehan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+cardiomyocyte+isolation,+culture,+and+gene+transfer.">Methods in cardiomyocyte isolation, culture, and gene transfer.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 51 (3), 288-298 (2011).</li><li>Miragoli, M., Salvarani, N., Rohr, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+Induce+Ectopic+Activity+in+Cardiac+Tissue.">Myofibroblasts Induce Ectopic Activity in Cardiac Tissue.</a> Circulation Research. 101, 755-758 (2007).</li><li>Simpson, P., Savion, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+rat+myocytes+in+single+cell+cultures+with+and+without+proliferating+nonmyocardial+cells.+Cross-striations,+ultrastructure,+and+chronotropic+response+to+isoproterenol.">Differentiation of rat myocytes in single cell cultures with and without proliferating nonmyocardial cells. Cross-striations, ultrastructure, and chronotropic response to isoproterenol.</a> Circulation Research. 50 (1), 101-116 (1982).</li><li>Simpson, P., McGrath, a., Savion, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocyte+hypertrophy+in+neonatal+rat+heart+cultures+and+its+regulation+by+serum+and+by+catecholamines.">Myocyte hypertrophy in neonatal rat heart cultures and its regulation by serum and by catecholamines.</a> Circulation Research. 51 (6), 787-801 (1982).</li><li>Rohr, S., Fl&#252;ckiger-Labrada, R., Kucera, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photolithographically+defined+deposition+of+attachment+factors+as+a+versatile+method+for+patterning+the+growth+of+different+cell+types+in+culture.">Photolithographically defined deposition of attachment factors as a versatile method for patterning the growth of different cell types in culture.</a> Pfl&#252;gers Archive : European Journal of Physiology. 446 (1), 125-132 (2003).</li><li>Zhang, B., Green, J. V., Murthy, S. K., Radisic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+enrichment+of+functional+cardiomyocytes+using+microfluidic+deterministic+lateral+flow+displacement.">Label-free enrichment of functional cardiomyocytes using microfluidic deterministic lateral flow displacement.</a> PloS One. 7 (5), e37619 (2012).</li><li>Boateng, S. Y., Hartman, T. J., Ahluwalia, N., Vidula, H., Desai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+fibroblast+proliferation+in+cardiac+myocyte+cultures+by+surface+microtopography.">Inhibition of fibroblast proliferation in cardiac myocyte cultures by surface microtopography.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 285 (1), C171-C182 (2003).</li><li>Fu, J. -. D., Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crucial+role+of+the+sarcoplasmic+reticulum+in+the+developmental+regulation+of+Ca2++transients+and+contraction+in+cardiomyocytes+derived+from+embryonic+stem+cells.">Crucial role of the sarcoplasmic reticulum in the developmental regulation of Ca2+ transients and contraction in cardiomyocytes derived from embryonic stem cells.</a> FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 20 (1), 181-183 (2006).</li><li>Liu, J., Fu, J. D., Siu, C. W., Li, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+Functional+sarcoplasmic+reticulum+for+calcium+handling+of+human+embryonic+stem+cell-derived+cardiomyocytes:+insights+for+driven+maturation.">a Functional sarcoplasmic reticulum for calcium handling of human embryonic stem cell-derived cardiomyocytes: insights for driven maturation.</a> Stem Cells. 25 (12), 3038-3044 (2007).</li><li>Knollmann, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes:+boutique+science+or+valuable+arrhythmia+model.">Induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes: boutique science or valuable arrhythmia model.</a> Circulation Research. 112 (6), 969-976 (2013).</li><li>Uchida, T., Nagayama, M., Taira, T., Shimizu, K., Sakai, M., Gohara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+temperature+range+for+low-temperature+preservation+of+dissociated+neonatal+rat+cardiomyocytes.">Optimal temperature range for low-temperature preservation of dissociated neonatal rat cardiomyocytes.</a> Cryobiology. 63 (3), 279-284 (2011).</li><li>Miyamura, K., Nagayama, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+viability+of+cryopreserved+rat+cardiac+myocytes+and+effects+of+dimethyl+sulfoxide+concentration+on+cryopreservation.">Evaluation of viability of cryopreserved rat cardiac myocytes and effects of dimethyl sulfoxide concentration on cryopreservation.</a> Cryobiology. 59 (3), 375 (2010).</li><li>Rana, P., Anson, B., Engle, S., Will, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes:+bioenergetics+and+utilization+in+safety+screening.">Characterization of human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes: bioenergetics and utilization in safety screening.</a> Toxicological Sciences: An Official Journal of the Society of Toxicology. 130 (1), 117-131 (2012).</li><li>Yokomuro, H., Mickle, D. a. G., Weisel, R. D., Li, R. -. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+conditions+for+heart+cell+cryopreservation+for+transplantation.">Optimal conditions for heart cell cryopreservation for transplantation.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 242 (1-2), 109-114 (2003).</li><li>Simpson, P., McGrath, a., Savion, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocyte+hypertrophy+in+neonatal+rat+heart+cultures+and+its+regulation+by+serum+and+by+catecholamines.">Myocyte hypertrophy in neonatal rat heart cultures and its regulation by serum and by catecholamines.</a> Circulation Research. 51 (6), 787-801 (1982).</li><li>Evans, H. J., Western Goodwin, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=array+analysis+of+cell+cycle+protein+changes+during+the+hyperplastic+to+hypertrophic+transition+in+heart+development.">array analysis of cell cycle protein changes during the hyperplastic to hypertrophic transition in heart development.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 303 (1-2), 189-199 (2007).</li><li>Golden, H. B., Gollapudi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+Molecular+Biology.">Methods in Molecular Biology.</a> , 205-214 (2012).</li><li>Zlochiver, S., Mu&#241;oz, V., Vikstrom, K. L., Taffet, S. M., Berenfeld, O., Jalife, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrotonic+myofibroblast-to-myocyte+coupling+increases+propensity+to+reentrant+arrhythmias+in+two-dimensional+cardiac+monolayers.">Electrotonic myofibroblast-to-myocyte coupling increases propensity to reentrant arrhythmias in two-dimensional cardiac monolayers.</a> Biophysical Journal. 95 (9), 4469-4480 (2008).</li><li>Chang, M. G., Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spiral+waves+and+reentry+dynamics+in+an+in+vitro+model+of+the+healed+infarct+border+zone.">Spiral waves and reentry dynamics in an in vitro model of the healed infarct border zone.</a> Circulation Research. 105 (11), 1062-1071 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

פרוטוקול זה מאפשר לNRCMs להיות מבודד, cryopreserved, ומופשר. הפשרת התאים היא חלק חיוני של ההליך. סדרה של דילולים DMSO משמשת להסרת לאט DMSO מהתאים 14. חשוב שהחילוץ של DMSO להתבצע מהר ככל התאים רגישים במיוחד למוות מייד לאחר הפשרה. אם יותר או פחות תאים נדרשים להפשרה, הכרכים של פתרונ?...

תרבית תאים של שריר לב היא כלי קריטי במחקר הלב מודרני. cardiomyocytes עכברוש בילוד (NRCMs) נמצא בשימוש נפוץ מאז הבידוד והתרבות היא קלה יותר מזה של cardiomyocytes עכברוש המבוגר 1. שיטת NRCM עדיין יש מספר מגבלות, כולל הליך ארוך בידוד והתפשטות תאים מוגבל בצלחת. ישנם מספר רב של פרוטוקולים לבידודה של NRCMs עם רוב בדרך כלל דורש 4-48 שעות של עבודת 2-6. בנוסף, התאים לעתים קרובות מבודדים בין 1 ל גורי חולדה ישנה 2 ימים 2,4-7; העיתוי של הלידה יכול להיות בלתי צפוי וסכסוך עם עבודה אחרת במעבדה. הבידודים יכולים להיות לא יעילים ובזבזניים אם רק כמות קטנה של תאים דרושות לניסויים. רוב המאמצים בשיפור מיקוד העבודה על צמצום זמן הבידוד, אך זה לא פותר את הבעיות של תזמון הלידה של הגורים. כחלופות, מעבדות רבות לנצלcardiomyocytes שמקורם בתאי גזע עובריים (ESCs) או תאים מושרה pluripotent גזע (iPSCs). עם זאת, תהליך תכנות מחדש ו / או בידול יכול להיות מאוד זמן רב ויקר גם כן. לא יכולה להיות בעיות אחרות בעת שימוש בתאים אלה כמודלים myocyte במבחנה. שני cardiomyocytes נגזר ESC- וiPSC- הוכח להפגין הבדלים באלקטרופיזיולוגיה מcardiomyocytes העיקרי 8-10. NRCMs הניתק הם מסוגל להיות מאוחסן במשך כמה ימים באמצעות קירור 11, אך זה אינו מאפשר לאחסון ארוך טווח. חנקן נוזלי משמש בדרך כלל לשימור תאים לתקופה גדולה יותר של זמן, אבל דורש cryoprotectant כגון sulfoxide דימתיל (DMSO). מחקרים קודמים הראו כי הריכוז האידיאלי בין 5-10% DMSO בתקשורת ההקפאה מאפשר להקפאה של NRCMs, עדיין גם אז הכדאיות נשארה 12 נמוכים. למרות DMSO מסייע להגן על התאים במהלך חופשיזיע, זה יכול להיות רעיל לתאים בריכוזים מעל 1.5% 13. מחקרים קודמים הראו כי הסרת לאט DMSO מהתאים, עשוי לשפר את תא כדאיות 14. אנחנו ביקשנו לשפר את היעילות של מבחני מבוססי תאי NRCM ידי cryopreserving התאים הבאים בידוד. זה מאפשר לתאים להיות מופשרים ושימוש בעת צורך, הפחתת התדירות של בידודים וצריכה של בעלי חיים. באמצעות שיטה זו, אנו מראים כי ניתן cryopreserve NRCMs ולהפשיר אותם לשימוש במועד מאוחר יותר. לאחר הפשרת התאים לשמור על כדאיות מקובלת ולייצר תרבויות NRCM כי הם חיוביים לactinin α-sarcomeric (α-SA) והחוזה באופן ספונטני.

<table><tbody><tr><td>IMDM (+25 mM HEPES +L-glutamine)</td><td>Gibco</td><td>12440-046</td><td>With added 25 mM HEPES and L-glutamine</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30070.03</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Gibco</td><td>15710-064</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Gibco</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>HBSS (+Ca +Mg)</td><td>Corning</td><td>21-020-CV</td><td>With added calcium and magnesium, pH 7.1-7.4</td></tr><tr><td>Trypsin 0.25%</td><td>Gibco</td><td>25300-056</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin 0.05%</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Cryostor CS5</td><td>BioLife Solutions</td><td>205102</td><td>Freezing media</td></tr><tr><td>Cryogenic Vial</td><td>Corning</td><td>430659</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Sigma</td><td>C1889-50MG</td><td></td></tr><tr><td>40 &amp;mu;m Cell Strainer</td><td>Greiner Bio-One</td><td>542040</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizing Vacuum Filter (0.22&amp;mu;m)</td><td>Corning</td><td>431118</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Conical</td><td>Corning</td><td>430828</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Conical</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>trypan blue</td><td>Cellgro</td><td>25-900-CI</td><td></td></tr><tr><td>Mr Frosty Freezing Container</td><td>ThermoScientific</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>Millicell EZ&amp;nbsp;SLIDES</td><td>Millipore</td><td>PEZGS0416</td><td></td></tr><tr><td>&amp;alpha;-sarcomeric actinin antibody</td><td>Sigma</td><td>A7811</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Corning</td><td>356008</td><td></td></tr><tr><td>Bromodeoxyuridine</td><td>BD Biosciences</td><td>51-7581KZ</td><td></td></tr></tbody></table>

isolation and cryopreservation of neonatal rat cardiomyocytes

Cell culture has become increasingly important in cardiac research, but due to the limited proliferation of cardiomyocytes, culturing cardiomyocytes is difficult and time consuming. The most commonly used cells are neonatal rat cardiomyocytes (NRCMs), which require isolation every time cells are needed. The birth of the rats can be unpredictable. Cryopreservation is proposed to allow for cells to be stored until needed, yet freezing/thawing methods for primary cardiomyocytes are challenging due to the sensitivity of the cells. Using the proper cryoprotectant, dimethyl sulfoxide (DMSO), cryopreservation was achieved. By slowly extracting the DMSO while thawing the cells, cultures were obtained with viable NRCMs. NRCM phenotype was verified using immunocytochemistry staining for &#945;-sarcomeric actinin. In addition, cells also showed spontaneous contraction after several days in culture. Cell viability after thawing was acceptable at 40-60%. In spite of this, the methods outlined allow one to easily cryopreserve and thaw NRCMs. This gives researchers a greater amount of flexibility in planning experiments as well as reducing the use of animals.

בעקבות הבידוד של cardiomyocytes העכברוש בילוד, התאים מוקפאים עד לחנקן נוזלי, והוא יכול להיות מאוחסן במשך לפחות כמה חודשים. בדרך כלל על הפשרה, הכדאיות נקבעת על ידי ניתוח Trypan הכחול תהיה בין 40-60%. למרות שזה יהיה נמוך מסוגי תאים אחרים, עם זריעה ותרבות ראויות התאים יתרבו (איור 1...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Cryopreservation of Neonatal Rat Cardiomyocytes at JoVE.com

Isolation and Cryopreservation of Neonatal Rat Cardiomyocytes

The isolation of neonatal rat cardiomyocytes is a time consuming and unpredictable procedure. This study describes methods for cryopreservation and thawing of neonatal rat cardiomyocytes that allows for more efficient use of cells. The thawed NRCMs can be used for various experiments without the need for performing isolations each time.

בידוד וCryopreservation של שריר לב עכברוש ילודים

Cell culture has become increasingly important in cardiac research, but due to the limited proliferation of cardiomyocytes, culturing cardiomyocytes is ...

isolation-and-cryopreservation-of-neonatal-rat-cardiomyocytes

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

12.5K Views.  College of Veterinary Medicine, North Carolina State University. The isolation of neonatal rat cardiomyocytes is a time consuming and unpredictable procedure. This study describes methods for cryopreservation and thawing of neonatal rat cardiomyocytes that allows for more efficient use of cells. The thawed NRCMs can be used for various experiments without the need for performing isolations each time.

Video: Isolation and Cryopreservation of Neonatal Rat Cardiomyocytes

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of multipotent, self-renewing, and expandable neural stem cells. In serum conditions, these multipotent NSPCs will differentiate, generating neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. The harvested tissue is enzymatically dissociated in a papain-EDTA solution and then mechanically dissociated and separated through a discontinuous density gradient to yield a single cell suspension which is plated in neurobasal medium supplemented with epidermal growth factor (EGF), basic fibroblast growth factor (bFGF), and heparin. Adult rat spinal cord NSPCs are cultured as free-floating neurospheres and adult human spinal cord NSPCs are grown as adherent cultures. Under these conditions, adult spinal cord NSPCs proliferate, express markers of precursor cells, and can be continuously expanded upon passage. These cells can be studied in vitro in response to various stimuli, and exogenous factors may be used to promote lineage restriction to examine neural stem cell differentiation. Multipotent NSPCs or their progeny can also be transplanted into various animal models to assess regenerative repair.

The adult mammalian spinal cord contains neural stem/progenitor cells (NSPCs) that can be isolated and expanded in culture. This protocol describes the harvesting, isolation, culture, and passaging of NSPCs generated from the periventricular region of the adult spinal cord from the rat and from human organ transplant donors.

בידוד של תאי גזע / עצביים מהאזור סביב חדרי המוח של העכברוש למבוגרים וחוט השדרה אנושי

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied successfully to the isolation of mouse and human primary neurons and neural progenitors. Dissociated neurons are maintained in serum-free medium up to several weeks. These cultures can be used for nucleofection, immunocytochemistry, nucleic acids preparation, as well as electrophysiology. Older neuronal cultures can also be transfected with a good efficiency rate by lentiviral transduction and, less efficiently, with calcium phosphate or lipid-based methods such as lipofectamine.

We describe a rapid methodology to isolate and culture hippocampal and cortical neurons from rodent embryos. This protocol allows us to perform experiments in which nearly pure neuronal cultures are required.

בידוד והתרבות של תאים עובריים עצביים עכברוש: ​​פרוטוקול מהיר

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Neuroscience

Isolation and Cultivation of Adult Rat Cardiomyocytes

In an intact heart, adjacent cells influence adult cardiomyocytes. With the method of isolation and cultivation of adult cardiomyocytes, a precise investigation of the behavior of these cells under specific treatments and environments is possible. This manuscript presents a protocol for successful isolation and cultivation of adult rat ventricular cardiomyocytes (ARVC).
The rat is sacrificed by cervical dislocation under deep anesthesia. Then, the heart is extracted and the aorta is uncovered. Subsequently, perfusion on the Langendorff perfusion system with calcium depletion and collagenase treatment is performed. Afterwards, ventricular tissue gets minced, re-circulated, and filtered, followed by three centrifugation steps with gradual addition of CaCl2 until physiological calcium concentration is reached. ARVC are plated on cell culture dishes. After refreshing the cell culture medium, ARVC can be cultivated for up to six days without changing the serum-containing culture medium. Isolation of ARVC is a calcium sensitive process. Small changes in the intracellular calcium concentration cause a decrease in the quality and viability of the isolated cells.
Freshly isolated ARVC are rod shaped. Within the first days of cultivation they lose the rod-shaped morphology and form pseudopodia-like structures (spreading). During this morphological formation ARVC initially degrade their contractile elements followed by a reformation through actin stress fibers and de novo sarcomerogenesis. After one week of cultivation, most ARVC show a widespread appearance with a clearly detectable cross striation. This process is sensitive to intracellular calcium concentration, as treatment with ionomycin attenuates spreading. Key markers in this process of de- and re-differentiation are &#946;-myosin heavy chain (&#946;-MHC), oncostatin M (OSM), and swiprosin-1 (EFHD2). Recent studies have suggested that cardiac re- and de-differentiation occurring under culture conditions mimics features seen in vivo during cardiac remodeling. Therefore, isolation and cultivation of ARVC play a key role in understanding the biology of cardiomyocytes.

Here, we present a protocol for the isolation and cultivation of adult rat ventricular cardiomyocytes (ARVC). Isolated ARVC can be used for short and long-term cultivation. The isolation and cultivation of ARVC can play a key role in developing new treatment regimens for cardiac diseases.

בידוד, טיפוח של עכברים בוגרים Cardiomyocytes

In an intact heart, adjacent cells influence adult cardiomyocytes. With the method of isolation and cultivation of adult cardiomyocytes, a precise ...

Medicine

Isolation and Culture of Neonatal Mouse Cardiomyocytes

Cultured neonatal cardiomyocytes have long been used to study myofibrillogenesis and myofibrillar functions. Cultured cardiomyocytes allow for easy investigation and manipulation of biochemical pathways, and their effect on the biomechanical properties of spontaneously beating cardiomyocytes.	
The following 2-day protocol describes the isolation and culture of neonatal mouse cardiomyocytes. We show how to easily dissect hearts from neonates, dissociate the cardiac tissue and enrich cardiomyocytes from the cardiac cell-population. We discuss the usage of different enzyme mixes for cell-dissociation, and their effects on cell-viability. The isolated cardiomyocytes can be subsequently used for a variety of morphological, electrophysiological, biochemical, cell-biological or biomechanical assays. We optimized the protocol for robustness and reproducibility, by using only commercially available solutions and enzyme mixes that show little lot-to-lot variability. We also address common problems associated with the isolation and culture of cardiomyocytes, and offer a variety of options for the optimization of isolation and culture conditions.

Primary mouse cardiomyocyte cultures are one of the pivotal tools for the investigation of myofibrillar organization and function. The following protocol describes the isolation and culture of primary cardiomyocytes from neonatal mouse hearts. The resulting cardiomyocyte cultures may be subsequently used for a variety of biomechanical, biochemical and cell-biological assays.

בידוד והתרבות של שריר לב עכבר בילוד

Cultured neonatal cardiomyocytes have long been used to study  myofibrillogenesis and myofibrillar functions. Cultured cardiomyocytes allow  for easy ...

Biology

Isolation of Atrial Cardiomyocytes from a Rat Model of Metabolic Syndrome-related Heart Failure with Preserved Ejection Fraction

In this article, we describe an optimized, Langendorff-based procedure for the isolation of single-cell atrial cardiomyocytes (ACMs) from a rat model of metabolic syndrome (MetS)-related heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF). The prevalence of MetS-related HFpEF is rising, and atrial cardiomyopathies associated with atrial remodeling and atrial fibrillation are clinically highly relevant as atrial remodeling is an independent predictor of mortality. Studies with isolated single-cell cardiomyocytes are frequently used to corroborate and complement in vivo findings. Circulatory vessel rarefication and interstitial tissue fibrosis pose a potentially limiting factor for the successful single-cell isolation of ACMs from animal models of this disease.
We have addressed this issue by employing a device capable of manually regulating the intraluminal pressure of cardiac cavities during the isolation procedure, substantially increasing the yield of morphologically and functionally intact ACMs. The acquired cells can be used in a variety of different experiments, such as cell culture and functional Calcium imaging (i.e., excitation-contraction-coupling).
We provide the researcher with a step-by-step protocol, a list of optimized solutions, thorough instructions to prepare the necessary equipment, and a comprehensive troubleshooting guide. While the initial implementation of the procedure might be rather difficult, a successful adaptation will allow the reader to perform state-of-the-art ACM isolations in a rat model of MetS-related HFpEF for a broad spectrum of experiments.

Here, we describe an optimized, Langendorff-based procedure for the isolation of single-cell atrial cardiomyocytes from a rat model of metabolic syndrome-related heart failure with preserved ejection fraction. A manual regulation of intraluminal pressure of cardiac cavities is implemented to yield functionally intact myocytes suitable for excitation-contraction-coupling studies.

בידוד של פרפור Cardiomyocytes ממודל עכברוש מטבוליות הקשורות תסמונת באי ספיקת לב עם שבריר פליטה משומר

In this article, we describe an optimized, Langendorff-based procedure for the isolation of single-cell atrial cardiomyocytes (ACMs) from a rat model of ...

שיטת הזרקה איטית זעיר פולשנית חדשנית להפחתת פגיעה ברקמות

A Novel Cell Injection Method with Minimum Invasion

Directly injecting cells into tissues is a necessary process in cell administration and/or replacement therapy. The cell injection requires a sufficient amount of suspension solution to allow the cells to enter the tissue. The volume of the suspension solution affects the tissue, and this can cause major invasive injury as a result of the cell injection. This paper reports on a novel cell injection method, called slow injection, that aims to avoid this injury. However, pushing out the cells from the needle tip requires a sufficiently high injection speed according to Newton's law of shear force. To solve the above contradiction, a non-Newtonian fluid, such as gelatin solution, was used as the cell suspension solution in this work. Gelatins solution have temperature sensitivity, as their form changes from gel to sol at approximately 20 &#176;C. Therefore, to maintain the cell suspension solution in the gel form, the syringe was kept cooled in this protocol; however, once the solution was injected into the body, the body temperature converted it to a sol. The interstitial tissue fluid flow can absorb excess solution. In this work, the slow injection technique allowed cardiomyocyte balls to enter the host myocardium and engraft without surrounding fibrosis. This study employed a slow injection method to inject purified and ball-formed neonatal rat cardiomyocytes into a remote area of myocardial infarction in the adult rat heart. At 2 months following the injection, the hearts of the transplanted groups showed significantly improved contractile function. Furthermore, histological analyses of the slow-injected hearts revealed seamless connections between the host and graft cardiomyocytes via intercalated disks containing gap junction connections. This method could contribute to next-generation cell therapies, particularly in cardiac regenerative medicine.

מחבר זרקור: שיטת הזרקת תאים חדשנית עם מינימום פלישה  

This method eliminates any major invasion during cell injections caused by the cell suspension solution.

שיטת הזרקת תאים חדשנית עם מינימום פלישה

Directly injecting cells into tissues is a necessary process in cell administration and/or replacement therapy. The cell injection requires a sufficient ...

Bioengineering

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single procedure. Due to advances in microscope technology it is relatively easy to capture live cell images for the purpose of investigating cellular events in real time with minimal concern regarding phototoxicity to the cells. This protocol describes how to take live cell timelapse images of primary rat neonatal cardiomyocytes using a confocal spinning disk microscope following lentiviral and adenoviral transduction to modulate properties of the cell. The application of two different types of viruses makes it easier to achieve an appropriate transduction rate and expression levels for two different genes. Well focused live cell images can be obtained using the microscope&#8217;s autofocus system, which maintains stable focus for long time periods. Applying this method, the functions of exogenously engineered proteins expressed in cultured primary cells can be analyzed. Additionally, this system can be used to examine the functions of genes through the use of siRNAs as well as of chemical modulators.

This protocol describes a method of live cell imaging using primary rat neonatal cardiomyocytes following lentiviral and adenoviral transduction using confocal spinning disk microscopy. This enables detailed observations of cellular processes in living cardiomyocytes.

ההדמיה של תא חי של ראשוני cardiomyocytes ילודים החולדה בעקבות adenoviral וlentiviral התמרה באמצעות דיסק מסתובב confocal מיקרוסקופית

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...

A Simple and Effective Method to Consistently Isolate Mouse Cardiomyocytes

The need for reproducible yet technically simple methods yielding high-quality cardiomyocytes is essential for research in cardiac biology. Cellular and molecular functional experiments (e.g., contraction, electrophysiology, calcium cycling, etc.) on cardiomyocytes are the gold standard for establishing mechanism(s) of disease. The mouse is the species of choice for functional experiments and the described technique is specifically for the isolation of mouse cardiomyocytes. Previous methods requiring a Langendorff apparatus require high levels of training and precision for aortic cannulation, often resulting in ischemia. The field is shifting toward Langendorff-free isolation methods that are simple, are reproducible, and yield viable myocytes for physiological data acquisition and culture. These methods greatly diminish ischemia time compared to aortic cannulation and result in reliably obtained cardiomyocytes. Our adaptation to the Langendorff-free method includes an initial perfusion with ice-cold clearing solution, use of a stabilizing platform that ensures a steady needle during perfusion, and additional digestion steps to ensure reliably obtained cardiomyocytes for use in functional measurements and culture. This method is simple and quick to perform and requires little technical skill.

The gold standard in cardiology for cellular and molecular functional experiments are cardiomyocytes. This article describes adaptations to the non-Langendorff technique to isolate mouse cardiomyocytes.

שיטה פשוטה ויעילה לבודד באופן עקבי קרדיומיוציטים עכבר

The need for reproducible yet technically simple methods yielding high-quality cardiomyocytes is essential for research in cardiac biology. Cellular and ...

בידוד וCryopreservation של שריר לב עכברוש ילודים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

בידוד של תאי גזע / עצביים מהאזור סביב חדרי המוח של העכברוש למבוגרים וחוט השדרה אנושי

בידוד והתרבות של תאים עובריים עצביים עכברוש: פרוטוקול מהיר

בידוד, טיפוח של עכברים בוגרים Cardiomyocytes

בידוד והתרבות של שריר לב עכבר בילוד

בידוד של פרפור Cardiomyocytes ממודל עכברוש מטבוליות הקשורות תסמונת באי ספיקת לב עם שבריר פליטה משומר

שיטת הזרקת תאים חדשנית עם מינימום פלישה

שיטת הזרקת תאים חדשנית עם מינימום פלישה

שיטת הזרקת תאים חדשנית עם מינימום פלישה

ההדמיה של תא חי של ראשוני cardiomyocytes ילודים החולדה בעקבות adenoviral וlentiviral התמרה באמצעות דיסק מסתובב confocal מיקרוסקופית

שיטה פשוטה ויעילה לבודד באופן עקבי קרדיומיוציטים עכבר

בידוד וCryopreservation של שריר לב עכברוש ילודים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

בידוד של תאי גזע / עצביים מהאזור סביב חדרי המוח של העכברוש למבוגרים וחוט השדרה אנושי

בידוד והתרבות של תאים עובריים עצביים עכברוש: ​​פרוטוקול מהיר

בידוד, טיפוח של עכברים בוגרים Cardiomyocytes

בידוד והתרבות של שריר לב עכבר בילוד

בידוד של פרפור Cardiomyocytes ממודל עכברוש מטבוליות הקשורות תסמונת באי ספיקת לב עם שבריר פליטה משומר

שיטת הזרקת תאים חדשנית עם מינימום פלישה

שיטת הזרקת תאים חדשנית עם מינימום פלישה

שיטת הזרקת תאים חדשנית עם מינימום פלישה

ההדמיה של תא חי של ראשוני cardiomyocytes ילודים החולדה בעקבות adenoviral וlentiviral התמרה באמצעות דיסק מסתובב confocal מיקרוסקופית

שיטה פשוטה ויעילה לבודד באופן עקבי קרדיומיוציטים עכבר

בידוד והתרבות של תאים עובריים עצביים עכברוש: פרוטוקול מהיר