מחקר זה נתמך על ידי מענקי RO1 CA 135,561, R01 CA151494, R01 CA174432 וP3013330 מהמכונים הלאומי לבריאות. ברצוננו להודות למישל יוסטון, אלנה Dhima וד&quot;ר אנה Velcich על הערותיהם מועילות בפיתוח פרוטוקול בידוד קריפטה. אנו מודים גם להדרכת הסוכרת ומרכז המחקר של אלברט איינשטיין קולג &#39;לרפואה נתמך על ידי NIH P60DK20541, וד&quot;ר מיכאל בראונלי וד&quot;ר Xue-יאנג Du, שינחה ויפעיל את מתקן סוסון הים, בהתאמה.

מחקר זה בוצע בהתאם להמלצות במדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה של המכון הלאומי לבריאות. הפרוטוקול אושר על ידי הוועדה לאתיקה של ניסויים בבעלי חיים של אלברט איינשטיין קולג &#39;לרפואה. 1. בידוד קריפטה ותרבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של מאורות מהמעי הדק: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד מאורות מעיים מכל מודל עכברים של עניין. להרדים את העכברים עם CO 2 ואחריו נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את בטן אורכית ולמלא את המעי דק (SI) עם פוספט הקר כקרח שנאגרו, PBS (-Ca 2 +; -Mg 2+) עם (אנטי-אנטי) אנטיביוטיקה antimycotic 2x. מהירות לבודד מעי דק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביסודיות לנתח ללא שומן mesenteric באמצעות אזמל. היזהר שלא לנקב את הרקמה - בכל העת לשמור על הרקמה לחה עם PBS הקר כקרח. פתח את inteStine אורכית ולשטוף ביסודיות עם קרח הקר PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך מעי דק לשני חלקים ולרדד באמצעות קצה צמר גפן רטוב, בעדינות לגרד את villi באמצעות שקופיות מקוררות מראש. לשטוף במרץ כמה פעמים PBS קר כקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה 3 דקות ב 20 מיליליטר 1x PBS לכל חומצת ethylenediaminetetraacetic 3 מ&quot;מ (EDTA) /0.5 dithiothreitol מ&quot;מ (DTT) לניתוק אינו אנזימטית של הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיתוך ברקמה לחתיכות קטנות (2-4 מ&quot;מ) באמצעות סכין גילוח בשקופית מקורר מראש. העבר את החתיכות לתוך צינור 50 מיליליטר המכיל 20 מיליליטר קר PBS קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה מעלה ומטה בעדינות 10x באמצעות פיפטה חד פעמית סטרילי 10 מיליליטר. בואו ברי רקמה משקעים על ידי כוח הכבידה. הסר את supernatant עם טפטפת. חזור שלוש פעמים נוספות; להפוך את supernatant בטוח הוא ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 20 מיליליטר של PBS לכל 2 מ&quot;מ EDTA. מערבולת ודגירה על 4 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות עם נדנדה עדינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו משקעי רקמות ולהשליך supernatant. להוסיף 15 מיליליטר קרח PBS ופיפטה הקריםלמעלה ולמטה 5x עם פיפטה 10 מיליליטר. בואו ברי רקמת משקעים ולאסוף את supernatant כבר 1 (F1). חזור על איסוף F2-F5, כל חלקן בנפרד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 15 מיליליטר קרח הקר PBS ולרעוד הפעם במרץ ביד במשך 15 שניות. לאסוף F6 ולחזור לF7, F8. אם חתיכות רקמה מתחילות לצוף, הקש כדי לעזור להם להתיישב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק aliquot של כל חלק מתחת למיקרוסקופ. בריכת שברים המכילים כוכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את השברים ונקוו דרך מסננת תא ניילון 70 מיקרומטר, איסוף מאורות בשפופרת 50 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה בלמשך 5 דקות 100 XG ב 4 מעלות צלזיוס, זורקת את כדור supernatant וגלול ב-10 PBS קר כקרח מיליליטר עם מאורות אנטי-אנטי והעברת 2x לצינור 15 מיליליטר. חזור על לשטוף עוד פעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את מאורות פעם אחת עם 10 מיליליטר ADF קר כקרח, מתקדם DMEM / (&quot;נשר בינוני / חם של שינוי&quot; Dulbecco של F-12) F-12 - 2x אנטי-אנטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את מאורות פעם אחת עם 10 מיליליטרDF - 1x אנטי-אנטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מאורות באמצעות hemocytometer. התאם את קריפטה פתרון הנפח ומעביר לצינור 1.5 מיליליטר, כך שריכוז קריפטה הסופי כאשר resuspended יהיה 100-500 מאורות לכל 50 μl של תערובת דביקה חלבון (Matrigel). צנטריפוגה בלמשך 5 דקות 100 XG ב 4 מעלות צלזיוס ומאורות גלולים בתערובת החלבונים הדביקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת 50 μl של קריפטה - השעיה תערובת חלבונים דביקה לכל גם בצלחת 24 גם (אזור גידול: 2 סנטימטר 2), הצבה בזהירות טיפת ההשעיה במרכז כל אחד. לשמור את הצלחת בCO 2, 37 ° C חממה ל~ 30 דקות עד שההשעיה מתמצקת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 500 מדיה μl תרבות השלמה קרה כקרח (מתקדם DMEM / F12 עם אנטי 1x - אנטי, 10 מ&quot;מ 4 (2-hydroxyethyl) חומצת -1-piperazineethanesulfonic (HEPES), 1x Glutamax, מוסף 1x B27, מוסף 1x N2, 1 מ&quot;מ N-Acetyl-L-ציסטאין ng / ml (NAC), 50 ng / ml גורם גדילה באפידרמיס (EGF), 100גולגולת של, R-Spondin 500 ng / ml). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחדש גורמי גדילה ב0.1% הסרום אלבומין שור (BSA) ב- PBS. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קריפטה Organoid תרבות ומעבר: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> organoids קריפטה לאחר זריעת 14-21 יום מעבר (או לפי צורך) באופן הבא: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקשורת שינוי בכל יום שישי וביום שני. בימי רביעי, להחליף מחצית התקשורת עם תקשורת טרי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מדיום התרבות. לשטוף את המדגם פעמיים עם 500 μl PBS ב 5 דקות במרווחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר PBS ועדינות לשבור את תערובת חלבונים הדביקה באמצעות קצה פיפטה מייקר P1000 סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף מדיה תרבות 1 מיליליטר מלאה וליחיד וresuspend organoids ב 1 מיליליטר תקשורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לשבש organoids באמצעות P1000 על ידי pipetting למעלה ולמטה 20-30x (לבדוק מתחת למיקרוסקופ לניתוק organoid נכון עם תשואת קריפטה טובה עד שיטה עקבית מפותח). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את המאורות לצינור 1.5 מיליליטר microcentrifuge;צנטריפוגות ב 100 XG ב 4 מעלות צלזיוס, 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את הכדור פעמיים עם 1 מיליליטר תקשורת ותרבות שלמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיצול ביחס של 1: 3 או 1: 6 במידת צורך מאורות resuspending, ב -50 μl Matrigel לכל טוב. המשך כפי שתואר לעיל (סעיף 1.1.16-18). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפאת Organoid קריפטה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מדיום התרבות. לשטוף את המדגם ב500 μl PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפזר את תערובת חלבונים הדביקה באמצעות קצה פיפטה P1000. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מיליליטר תקשורת ולאחת וresuspend organoids ב 1 מיליליטר תקשורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לשבור את organoids באמצעות P1000 על ידי pipetting למעלה ולמטה 20-30x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את organoids לצינור 1.5 מיליליטר. צנטריפוגה ב 100 XG ב 4 מעלות צלזיוס, 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את הכדור פעמיים עם 1 מיליליטר תקשורת ותרבות שלמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאורות גלולים ב500 μl הקפאת תקשורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת מאורות לcryotube, במקום הצינור במכל וחנות הקפאה ב-80 ° C מקפיא overnight. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הכוכים לN 2 טנק נוזלי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחזר organoids קריפטה קפואה במהירות הפשרה באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. לשטוף עם 500 μl מדיה מלאה תרבות אחת, צנטריפוגות ב 100 XG, 5 דקות וגלולות בתערובת חלבונים דביקה, ותרבות כפי שתואר לעיל. להתאוששות טובה יותר, להוסיף מעכב רוק (Y-27632) לתקשורת ההקפאה. </li></ol></li></ol></li></ol> 2. קריפטה Organoid מטבוליזם Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת צלחת 24 גם: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד ולספור מאורות בהתאם לפרוטוקול (ראה סעיף 1.1 לבידוד קריפטה וסעיף 1.2 למעבר קריפטה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאורות גלולים בתערובת חלבונים דביקה (100-200 מאורות לכל 20 μl). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השעיה צלחת קריפטה-דביקה תערובת חלבונים בצלחת 24 גם assay (לוודא שיש בtriplicates לפחות עבור כל דגימה) ולאפשר ההשעיה לבסס על 37 מעלות צלזיוס בCO 2חממה; לאחר מכן להוסיף 500 μl תקשורת ותרבות השלמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאורות תרבות (כמפורט בסעיף 1.1) ולבחון תחת מיקרוסקופ עד מאורות לגדול לתוך organoids פותח באופן מלא. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי השטף Assay: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחסנית מימה הלילה ב2 אינם CO (0% CO 2), 37 ° C חממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מדיום התרבות ולשטוף organoids פעמיים עם 500 DMEM μl (בלי: גלוקוז, L- גלוטמין, פירובט נתרן וסודיום ביקרבונט, ועם: פנול אדום). חכה 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 675 μl לבינוני גם assay (DMEM עם 2 המ&quot;מ L- גלוטמין ו5 מ&quot;מ D-גלוקוז) זה טוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק המורפולוגיה המיקרוסקופית organoids קריפטה כדי להבטיח שorganoids ותערובת החלבונים הדביקה לא ניזוקו לאחר שטיפה. דגירה 1 שעה שבאינו CO 2, 37 ° C חממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 10 מיקרומטר תרכובות להזרקה (oligomycin, קרבוניל ציאניד-p-trifluoro-פניל-hydrazone methoxy (FCCP), rotenone) במדיום assay. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת המחסנית על ידי טעינת 75 μl של 10 מיקרומטר תרכובות להזרקה ליציאות ברצף המחסנית: נמל - oligomycin; הנמל B - FCCP; והנמל C - rotenone (הריכוזים הסופיים במהלך assay יהיה 1 מיקרומטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה דקות 30 מחסנית - שעת 1 ב 37 ° C בחממת 2-CO שאינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקביל, מפעיל את מנתח XF וליצור תבנית פרוטוקול assay. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח מחסנית וצלחת שירות לXF Analyzer ולהפעיל &quot;לכייל&quot; מחסנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק organoids קריפטה מיקרוסקופית כדי לוודא שהם מחוברים לתערובת החלבונים הדביקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת תרבית תאי עומס לפרוטוקול assay המכשיר ולהפעיל. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Jemal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CA Cancer J Clin. 58, 71-96 (2008).</li><li>Slattery, M. L., Boucher, K. M., Caan, B. J., Potter, J. D., Ma, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eating+patterns+and+risk+of+colon+cancer.">Eating patterns and risk of colon cancer.</a> Am J Epidemiol. 148, 4-16 (1998).</li><li>Warburg, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+origin+of+cancer+cells.">On the origin of cancer cells.</a> Science. 123, 309-314 (1956).</li><li>Coles, N. W., Johnstone, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamine+metabolism+in+Ehrlich+ascites-carcinoma+cells.">Glutamine metabolism in Ehrlich ascites-carcinoma cells.</a> Biochem J. 83, 284-291 (1962).</li><li>Medina, M. A., Castro I, N. u. n. e. z. d. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutaminolysis+and+glycolysis+interactions+in+proliferant+cells.">Glutaminolysis and glycolysis interactions in proliferant cells.</a> Int J Biochem. 22, 681-683 (1990).</li><li>Anso, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+changes+in+cancer+cells+upon+suppression+of+MYC.">Metabolic changes in cancer cells upon suppression of MYC.</a> Cancer Metab. 1, 7 (2013).</li><li>Malmgren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinate+changes+in+histone+modifications,+mRNA+levels,+and+metabolite+profiles+in+clonal+INS-1+832/13+&#946;-cells+accompany+functional+adaptations+to+lipotoxicity.">Coordinate changes in histone modifications, mRNA levels, and metabolite profiles in clonal INS-1 832/13 &#946;-cells accompany functional adaptations to lipotoxicity.</a> J Biol Chem. 288 (17), 11973-11987 (2013).</li><li>Whitehead, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+conditionally+immortalized+epithelial+cell+lines+from+both+colon+and+small+intestine+of+adult+H-2Kb-tsA58+transgenic+mice.">Establishment of conditionally immortalized epithelial cell lines from both colon and small intestine of adult H-2Kb-tsA58 transgenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 90 (2), 587-591 (1993).</li><li>Roig, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalized+epithelial+cells+derived+from+human+colon+biopsies+express+stem+cell+markers+and+differentiate+in+vitro.">Immortalized epithelial cells derived from human colon biopsies express stem cell markers and differentiate in vitro.</a> Gastroenterology. 138 (3), 1012-1021 (2010).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+LGR5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single LGR5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459, 262-265 (2009).</li><li>Sato, T., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+self-organizing+mini-guts+from+a+single+intestinal+stem+cell:+mechanism+and+applications.">Growing self-organizing mini-guts from a single intestinal stem cell: mechanism and applications.</a> Science. 340, 1190-1194 (2013).</li><li>Yilmaz, O. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTORC1+in+the+Paneth+cell+niche+couples+intestinal+stem-cell+function+to+calorie+intake.">mTORC1 in the Paneth cell niche couples intestinal stem-cell function to calorie intake.</a> Nature. 486, 490-495 (2012).</li></ol>

אין גילויים.

בדקנו את שיעור צריכת חמצן (OCR) והמחיר תאי החמצה (ECAR) של מאורות מבודדים מעכברים בן 8 חודשים וגדלו והפכו לorganoids ex vivo. לאחר המדידה של קצב הבסיסי, חילוף החומרים קריפטה הוערך על ידי הוספת oligomycin, ציאניד קרבוניל -p-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP) וrotenone, ברצף. <p class="jove_content" style=";text-align:ri...

סרטן מעי גס (CRC) הוא הגורם המוביל השלישי של מקרי מוות מסרטן הקשורים בארצות הברית. סרטן מעי גס לא סדיר - כלומר, שנובע מאוחר יותר בחיים (&gt; 50 שנים) וללא גורמים גנטיים לנטייה ברורה - חשבונות ל~ 80% מכל המקרים, עם שכיחות מאוד מושפעות דפוסי תזונה ארוך טווח 1,2. גידולים אלה תערוכת משמרת חילוף חומרים לכיוון התלות בגליקוליזה חמצוני, הידוע בשם האפקט ורבורג, שעשוי בחלק לעשות ריכוזים גבוהים יותר של בלוקים סלולריים בניין זמינים ואנרגיה (באמצעות glutaminolysis) להתיר ואולי לנהוג שיעור גבוה של תאים סרטניים התפשטות 3-5 . מחקרים של סרטן המעי הגס, כמו גם סוגי סרטן אחרים במערכת העיכול, כולל סרטן המעי דק מספקים תובנה חשובה לסיבת היווצרות גידול. חוקר את ההבדלים מטבוליים בין מדינות נורמליות, פרו-סרטניות וסרטניות של מערכות איברים במערכת העיכול עשוי לסייע determination של סיכון יחסי להתפתחות גידולים, כמו גם גילוי המוקדם של גידולים. יתר על כן, הבנת חילוף חומרים ביו-אנרגטיים הכוללים נשימה וגליקוליזה המיטוכונדריה תספק תובנה בסיסית לתוך איך מדינת פיזיולוגיה של תא, הזדקנות והמחלה מדאיגה את הומאוסטזיס מעיים. ניצול של טכנולוגית assay ביו-האנרגיה לניתוח שטף תאי יכול להעריך את השיעורים של נשימה וגליקוליזה המיטוכונדריה בו זמנית בתאי גידול בתרבות בזמן אמת 6,7. עד לאחרונה, מחקרים במבחנה של מעי דק היו מוגבלים לשורות תאים שמקורם בגידולים או שפיר או ממאיר 8,9 ואינו מייצגים את הפיסיולוגיה של אפיתלים מעיים רגילים ואת השפעתם של מייקרו-הסביבה שבה הם מתגוררים. בשינה 2009, סאטו et al. 10 הציג מערכת ex vivo תרבות לגדול organoids אפיתל במעי עכבר תלת-ממדי (3D), או epith&quot;מיני-אומץ&quot; elial, מתאים לחקירות ניסיוניות, אבחון וטיפול 10,11. יתר על כן, מאורות מבודדים מעכברים מוגבלים calorically לשמור על מאפייני הצמיחה שינו כorganoids בתרבויות כגון 12. בהשוואה לשורות תאים הפכו, ניתן להשתמש תרבויות organoid קריפטה להפיק נתונים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית הצגת מודל הרבה יותר טוב כדי להבין את מצב in vivo. מתאמנים את טכנולוגיית ניתוח ביו-אנרגיה לassay חילוף חומרים של אנרגיה של organoids קריפטה מעיים. organoids קריפטה המעיים העכבר היה בתרבית ex vivo לפתח מחקרי חילוף חומרים של אנרגיית קריפטה organoid הוצגו. שיעור צריכת החמצן (OCR) והמחיר תאי החמצה (ECAR) של organoids קריפטה נמדדו בהעדר ונוכחותם של שני מעכבים שונים חילוף חומרים (oligomycin, rotenone) ונושאת יון (ציאניד-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone קרבוניל). Orga קריפטהתגובה המטבולית noid לתרכובות כימיות אלה באו לידי ביטוי בהצלחה באמצעות ECAR משתנה וערכי OCR. מחקרים ביו-אנרגטיים תאיים יבהירו את יחסי הגומלין ההדדיים בין מצב מטבולים וסיכון למחלות ופנוטיפ בסרטן, השמנת יתר, סוכרת, הפרעות בחילוף חומרים ומחל מיטוכונדריאליות ולעזור שיטות הקרנה מראש עם השלכות ישירות על רפואת translational. כאן, אנו מתארים פרוטוקול מפורט לבודד את מאורות מעי דקים וorganoids קריפטה התרבות. יתר על כן, אנו מציגים שיטה חדשה לשימוש תרבויות organoid קריפטה למבחנים מטבולים.

<table><tbody><tr><td>BD Matrigel Basement Membrane Matrix, GFR, Phenol Red-free, LDEV-free</td><td>BD Biosciences</td><td>356231</td><td></td></tr><tr><td>PBS (phosphate buffered saline), no magnesium, no calcium, pH 7.2</td><td>Life Technologies</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F-12 (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>12634-028</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;prime;s Modified Eagle&amp;prime;s Medium w/o glucose, L-glutamine, phenol red, sodium pyruvate, and sodium bicarbonate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5030</td><td></td></tr><tr><td>Phenol red sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4758</td><td>Final Concentration 15 mg/l in DMEM (D5030) - &lt;strong&gt;step 2.2.2&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Antibiotic-Antimycotic, 100x, 100 ml</td><td>Life Technologies</td><td>15240-062</td><td>Final concentration 1x or 2x</td></tr><tr><td>Penicilin-Streptomycin, liquid</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td>Final concentration 1x</td></tr><tr><td>Gibco&amp;reg; GlutaMAX&amp;trade; supplement</td><td>Life Technologies</td><td>35050061</td><td>Final concentration 1x</td></tr><tr><td>Gibco&amp;reg; HEPES (N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethane sulfonic acid), 1 M</td><td>Life Technologies</td><td>15630-080</td><td>Final concentration 10 mM</td></tr><tr><td>N-acetyl-L-cysteine, 25 g</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165-25G</td><td>Final concentration 1 mM</td></tr><tr><td>100x N-2 supplement, liquid</td><td>Invitrogen</td><td>17502-048</td><td>Final concentration 1x</td></tr><tr><td>50x B-27&amp;reg; supplement minus Vitamin A, liquid</td><td>Invitrogen</td><td>12587-010</td><td>Final concentration 1x</td></tr><tr><td>Recombinant Mouse R-Spondin 1, CF, 50 &amp;mu;g</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>3474-RS-050</td><td>Final concentration 500 ng/ml</td></tr><tr><td>Recombinant Murine EGF, 100 &amp;mu;g</td><td>Peprotech</td><td>315-09</td><td>Final concentration 50 ng/ml</td></tr><tr><td>Recombinant Murine Noggin, 20 &amp;mu;g</td><td>Peprotech</td><td>250-38</td><td>Final concentration 100 ng/ml</td></tr><tr><td>Gibco&amp;reg; L-glutamine, 200 mM</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td>Final concentration 2 mM</td></tr><tr><td>Gibco&amp;reg; glucose powder</td><td>Life Technologies</td><td>15023-021</td><td>Final concentration 5 mM</td></tr><tr><td>Ambion&amp;reg; 0.5 M EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), pH 8.0</td><td>Life Technologies</td><td>AM9260G</td><td>Final concentration 3 mM for &lt;strong&gt;step 1.1.5&lt;/strong&gt;; 2 mM for &lt;strong&gt;step 1.1.8&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td>DTT (dithiothreitol), 1M</td><td>Life Technologies</td><td>P2325</td><td>Final concentration 3 mM</td></tr><tr><td>Albumin from bovine serum (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2058</td><td>0.1% in PBS</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Life Technologies</td><td>16000-044</td><td>1% in PBS</td></tr><tr><td>Recovery&amp;trade; Cell Culture Freezing Medium</td><td>Life Technologies</td><td>12648-010</td><td></td></tr><tr><td>ROCK inhibitor (Y-27632)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Y0503</td><td>Final concentration 10 &amp;mu;M</td></tr><tr><td>Oligomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O4876</td><td>Final concentration 1 &amp;mu;M</td></tr><tr><td>Carbonyl cyanide-p-trifluoro-methoxy-phenyl-hydrazone (FCCP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td>Final concentration 1 &amp;mu;M</td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td>Final concentration 1 &amp;mu;M</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td>Final concentration 0.1 N in PBS</td></tr><tr><td>XF24 Extracellular Flux Analyzer (XF Analyzer)</td><td>Seahorse Bioscience</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

real time analysis of metabolic profile in ex vivo mouse intestinal crypt organoid cultures

רירית המעי הקטנה מציגה ארכיטקטורה חוזר על עצמו מחולק לשני מבנים בסיסיים: villi, מקרינים לתוך חלל המעי ומורכב מenterocytes הבוגר, תאי גביע ותאי enteroendocrine; ובכוכים, המתגוררים הפרוקסימלי לsubmucosa וmuscularis, חסת גזע בוגרים ובתאים ותאים הבוגר פנט, כמו גם סטרומה ותאי חיסון של מייקרו-סביבת קריפטה. עד השנים האחרונות, במחקרי מבחנה של מעי דק היה מוגבל לשורות תאים שמקורם בגידולים או שפיר או ממאיר, ואינו מייצג את הפיסיולוגיה של אפיתלים מעיים רגילים ואת השפעתם של מייקרו-הסביבה שבה הם מתגוררים. הנה, אנחנו מדגימים שיטה המותאמת מאל סאטו ואח. (2009) לculturing organoids קריפטה העיקרי מעיים עכבר נגזר מעכברי C57BL / 6. בנוסף, אנו מציגים את השימוש בתרבויות organoid קריפטה לassay הפרופיל המטבולי קריפטה בזמן אמת על ידי מדדment של הצריכה בסיסית חמצן, קצב glycolytic, ייצור ATP ויכולת נשימה. Organoids לשמור על מאפיינים שהוגדרו על ידי המקור שלהם ולשמר היבטים של ההסתגלות המטבולית שלהם באו לידי ביטוי בצריכת חמצן ושיעורי החמצה תאיים. מחקרים מטבוליים בזמן אמת בorganoid מערכת תרבות קריפטה זה הם כלי רב עוצמה כדי לחקור את חילוף החומרים של אנרגיית organoid קריפטה, ואיך זה יכול להיות מווסת על ידי גורמים תזונתיים ותרופתיים.

organoids קריפטה הוקמו מ8 חודש C57BL / 6 עכברים ישנים האכיל מטוהר דיאטה מכרסם מכון לתזונת 76A (AIN76A) אמריקאי. ניתן לגדל organoids קריפטה מעיים בתרבות לפרקי זמן ארוך מכוך בודד (איור 1 א, חץ אדום יחיד). Organoids לצמוח מתוך מבנים דמויים מערים ב18-20 ימים בתרבות (איור 1, חיצים אד?...

Watch this Scientific Journal Video about Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures at JoVE.com

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

organoids קריפטה מעי הדק תרבית ex vivo לספק מערכת תרבית רקמה שמשחזרת צמיחה של מאורות תלויים בתאי גזע והנישה שלהם. הקמנו שיטה לassay הפרופיל המטבולי בזמן אמת בorganoids קריפטה עכבר העיקרי. מצאנו organoids לשמור על מאפיינים פיסיולוגיים שהוגדרו על ידי המקור שלהם.

אמיתי ניתוח זמן של פרופיל המטבולי ב<em&gt; Ex Vivo</em&gt; תרבויות עכבר המעיים קריפטה Organoid

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and ...

real-time-analysis-metabolic-profile-ex-vivo-mouse-intestinal-crypt

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

16.2K Views.  Albert Einstein College of Medicine.  organoids קריפטה מעי הדק תרבית ex vivo לספק מערכת תרבית רקמה שמשחזרת צמיחה של מאורות תלויים בתאי גזע והנישה שלהם. הקמנו שיטה לassay הפרופיל המטבולי בזמן אמת בorganoids קריפטה עכבר העיקרי. מצאנו organoids לשמור על מאפיינים פיסיולוגיים שהוגדרו על ידי המקו...

Video: Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to manipulate gene expression in organoids have made limited progress in this arena. While CRISPR/Cas9 technology allows for precise genome editing of cells for organoid generation, this strategy requires extensive selection and screening by sequence analysis, which is both time-consuming and costly. Here, we provide a detailed protocol for efficient viral transduction of intestinal organoids. This approach is rapid and highly efficient, thus decreasing the time and expense inherent in CRISPR/Cas9 technology. We also present a protocol to generate frozen sections from intact organoid cultures for further analysis with immunohistochemical or immunofluorescent staining, which can be used to confirm gene expression or silencing. After successful transduction of viral vectors for gene expression or silencing is achieved, intestinal stem cell and crypt function can be rapidly assessed. Although most organoid studies employ in vitro assays, organoids can also be delivered to mice for in vivo functional analyses. Moreover, our approaches are advantageous for predicting therapeutic responses to drugs because currently available therapies generally function by modulating gene expression or protein function rather than altering the genome.

We describe step-by-step instructions to: 1) efficiently engineer intestinal organoids using magnetic nanoparticles for lenti- or retroviral transduction, and, 2) generate frozen sections from engineered organoids. This approach provides a powerful tool to efficiently alter gene expression in organoids for investigation of downstream effects.

הנדסה גנטית של מעיים עכבר ראשי אורגנואידים באמצעות מגנטית ננו-חלקיק התמרה וקטורים ויראלי עבור הקפאת שימוש

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Developmental Biology

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of the crypt region. IESCs include active stem cells, which self-renew and differentiate into various epithelial cell types, and quiescent stem cells, which serve as the reserve stem cells in the case of injury. Regeneration of the intestinal epithelium is controlled by the self-renewing and differentiating capabilities of these active IESCs. In addition, the balance of the crypt stem cell population and maintenance of the stem cell niche are essential for intestinal regeneration. Organoid culture is an important and attractive approach to studying proteins, signaling molecules, and environmental cues that regulate stem cell survival and functions. This model is less expensive, less time-consuming, and more manipulatable than animal models. Organoids also mimic the tissue microenvironment, providing in vivo relevance. The present protocol describes the isolation of colonic crypts, embedding these isolated crypt cells into a three-dimensional gel matrix system and culturing crypt cells to form colonic organoids capable of self-organization, proliferation, self-renewal, and differentiation. This model allows one to manipulate the environment-knocking out specific proteins such as claudin-7, activating/deactivating signaling pathways, etc.-to study how these effects influence the functioning of colonic stem cells. Specifically, the role of tight junction protein claudin-7 in colonic stem cell function was examined. Claudin-7 is vital for maintaining intestinal homeostasis and barrier function and integrity. Knockout of claudin-7 in mice induces an inflammatory bowel disease-like phenotype exhibiting intestinal inflammation, epithelial hyperplasia, weight loss, mucosal ulcerations, epithelial cell sloughing, and adenomas. Previously, it was reported that claudin-7 is required for intestinal epithelial stem cell functions in the small intestine. In this protocol, a colonic organoid culture system is established to study the role of claudin-7 in the large intestine.

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

The present protocol describes establishing a murine colonic organoid system to study the activity and functioning of colonic stem cells in a claudin-7 knockout model.

תרבית תלת-ממדית של קריפטות המעי הגס של מורין לחקר תפקוד תאי גזע במעיים ex vivo

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of ...

Cancer Research

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the complexities of the organoid growth characteristics carry significant caveats for the investigator. Specifically, the growth patterns of each individual organoid are highly variable and create a heterogeneous population of epithelial cells in culture. With such caveats, common tissue culture practices cannot be simply applied to the organoid system due to the complexity of the cellular structure. Counting and plating based solely on cell number, which is common for individually separated cells, such as cell lines, is not a reliable method for organoids unless some normalization technique is applied. Normalizing to total protein content is made complex due to the resident protein matrix. These characteristics in terms of cell number, shape and cell type should be taken into consideration when evaluating secreted contents from the organoid mass. This protocol has been generated to outline a simple procedure to culture and treat small intestinal organoids with microbial pathogens and pathogen associated molecular patterns (PAMPs). It also emphasizes the normalization techniques that should be applied when protein analysis are conducted after such a challenge.

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Here, a protocol to harvest, maintain, and treat mouse small intestinal organoids with pathogen associated molecular patterns (PAMPs) and Listeria monocytogenes is described, as well as emphasis on gene expression and proper normalization techniques for protein.

ה<em&gt; Ex Vivo</em&gt; גירוי קולטן הכרת תרבות תבנית של עכבר המעיים Organoids

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the ...

Immunology and Infection

An Intestinal Gut Organ Culture System for Analyzing Host-Microbiota Interactions

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for maintaining local and systemic homeostasis; changes to gut microbiota composition (dysbiosis) associate with a wide array of human diseases. Methods for dissecting host-microbiota interactions encompass an inherent tradeoff among preservation of physiological tissue structure (when using in vivo animal models) and the level of control over the experiment factors (as in simple in vitro cell culture systems). To address this tradeoff, Yissachar et al. recently developed an intestinal organ culture system. The system preserves a naive colon tissue construction and cellular mechanisms and it also permits tight experimental control, facilitating experimentations that cannot be readily performed in vivo. It is optimal for dissecting short-term responses of various gut components (such as epithelial, immunological and neuronal elements) to luminal perturbations (including anaerobic or aerobic microbes, whole microbiota samples from mice or humans, drugs and metabolites). Here, we present a detailed description of an optimized protocol for organ culture of multiple gut fragments using a custom-made gut culture device. Host responses to luminal perturbations can be visualized by immunofluorescence staining of tissue sections or whole-mount tissue fragments, fluorescence in-situ hybridization (FISH), or time-lapse imaging. This system supports a wide array of readouts, including next-generation sequencing, flow cytometry, and various cellular and biochemical assays. Overall, this three-dimensional organ culture system supports the culture of large, intact intestinal tissues and has broad applications for high-resolution analysis and visualization of host-microbiota interactions in the local gut environment.

This article presents a unique method for analyzing host-microbiome interactions using a novel gut organ culture system for ex vivo experiments.

מערכת תרבית איברי מעיים לניתוח אינטראקציות מארח-מיקרוביוטה

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for ...

A Video Protocol of Retroviral Infection in Primary Intestinal Organoid Culture

Lgr5-positive stem cells can be supplemented with the essential growth factors Egf, Noggin, and R-Spondin, which allows us to culture ever-expanding primary 3D epithelial structures in vitro. Both the architecture and physiological properties of these &#39;mini-guts&#39;, also called organoids, closely resemble their in vivo counterparts. This makes them an attractive model system for the small intestinal epithelium. Using retroviral transduction, functional genetics can now be performed by conditional gene overexpression or knockdown. This video demonstrates the procedure of organoid culture, the generation of retroviruses, and the retroviral transduction of organoids to assist phenotypic analysis of the small intestinal epithelium in vitro. This novel organotypic model system in combination with retroviral mediated gene expression provides a valuable tool for rapid analysis of gene function in vitro without the need of costly and time-consuming generation for transgenic animals.

This protocol explains primary Lgr5-positve organoid culture and the subsequent performance of retroviral transduction. This enables Cre-inducible overexpression or knockdown of the delivered transgene and allows functional studies to be carried out in the novel in vitro organotypic model system.

פרוטוקול וידאו של זיהום retroviral ביסודי מעיים Organoid תרבות

Lgr5-positive stem cells can be supplemented with the essential growth factors Egf, Noggin, and R-Spondin, which allows us to culture ever-expanding ...

A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth factors. Since organoids are highly similar to the original tissue in terms of homeostatic stem cell differentiation, cell polarity and presence of all terminally differentiated cell types known to the adult intestinal epithelium, they serve as an essential resource in experimental research on the epithelium. The possibility to express transgenes or interfering RNA using lentiviral or retroviral vectors in organoids has increased opportunities for functional analysis of the intestinal epithelium and intestinal stem cells, surpassing traditional mouse transgenics in speed and cost. In the current video protocol we show how to utilize transduction of small intestinal organoids with lentiviral vectors illustrated by use of doxycylin inducible transgenes, or IPTG inducible short hairpin RNA for overexpression or gene knockdown. Furthermore, considering organoid culture yields minute cell counts that may even be reduced by experimental treatment, we explain how to process organoids for downstream analysis aimed at quantitative RT-PCR, RNA-microarray and immunohistochemistry. Techniques that enable transgene expression and gene knock down in intestinal organoids contribute to the research potential that these intestinal epithelial structures hold, establishing organoid culture as a new standard in cell culture.

In this video protocol we give a step by step explanation of lentiviral transduction in organoids of primary intestinal epithelium and of processing and downstream analysis of these cultures by quantitative RT-PCR, RNA-microarray and immunohistochemistry.

פרוטוקול לlentiviral התמרה וניתוח במורד הזרם של המעיים Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth ...

Quantification of Proliferative and Dead Cells in Enteroids

The intestinal epithelium acts as a barrier that prevents luminal contents, such as pathogenic microbiota and toxins, from entering the rest of the body. Epithelial barrier function requires the integrity of intestinal epithelial cells. While epithelial cell proliferation maintains a continuous layer of cells that forms a barrier, epithelial damage leads to barrier dysfunction. As a result, luminal contents can across the intestinal barrier via an unrestricted pathway. Dysfunction of intestinal barrier has been associated with many intestinal diseases, such as inflammatory bowel disease. Isolated mouse intestinal crypts can be cultured and maintained as crypt-villus-like structures, which are termed intestinal organoids or &ldquo;enteroids&rdquo;. Enteroids are ideal to study the proliferation and cell death of intestinal epithelial cells in vitro. In this protocol, we describe a simple method to quantify the number of proliferative and dead cells in cultured enteroids. 5-ethynyl-2&rsquo;-deoxyuridine (EdU) and propidium iodide are used to label proliferating and dead cells in enteroids, and the proportion of proliferating and dead cells are then analyzed by flow cytometry. This is a useful tool to test the effects of drug treatment on intestinal epithelial cell proliferation and cell survival.

The presented protocol uses flow cytometry to quantify the number of proliferating and dead cells in cultured mouse enteroids. This method is helpful to evaluate the effects of drug treatment on organoid proliferation and survival.

קוונפיקציה של מתרבים ותאים מתים ב Enteroids

The intestinal epithelium acts as a barrier that prevents luminal contents, such as pathogenic microbiota and toxins, from entering the rest of the body. ...

Analyzing Oxidative Stress in Murine Intestinal Organoids using Reactive Oxygen Species-Sensitive Fluorogenic Probe

Reactive oxygen species (ROS) play essential roles in intestinal homeostasis. ROS are natural by-products of cell metabolism. They are produced in response to infection or injury at the mucosal level as they are involved in antimicrobial responses and wound healing. They are also critical secondary messengers, regulating several pathways, including cell growth and differentiation. On the other hand, excessive ROS levels lead to oxidative stress, which can be deleterious for cells and favor intestinal diseases like chronic inflammation or cancer. This work provides a straightforward method to detect ROS in the intestinal murine organoids by live imaging and flow cytometry, using a commercially available fluorogenic probe. Here the protocol describes assaying the effect of compounds that modulate the redox balance in intestinal organoids and detect ROS levels in specific intestinal cell types, exemplified here by the analysis of the intestinal stem cells genetically labeled with GFP. This protocol may be used with other fluorescent probes.

The present protocol describes a method to detect reactive oxygen species (ROS) in the intestinal murine organoids using qualitative imaging and quantitative cytometry assays. This work can be potentially extended to other fluorescent probes to test the effect of selected compounds on ROS.

ניתוח עקה חמצונית באורגנוידים מעיים מורין באמצעות גשושית פלואורוגנית רגישה למינים של חמצן תגובתי

Reactive oxygen species (ROS) play essential roles in intestinal homeostasis. ROS are natural by-products of cell metabolism. They are produced in ...

תרבית תלת ממדית של אורגנואידים מקריפטים של המעי המוריני ותאי גזע בודדים

The 3D Culturing of Organoids from Murine Intestinal Crypts and a Single Stem Cell for Organoid Research

At present, organoid culture represents an important tool for in vitro studies of different biological aspects and diseases in different organs. Murine small intestinal crypts can form organoids that mimic the intestinal epithelium when cultured in a 3D extracellular matrix. The organoids are composed of all cell types that fulfill various intestinal homeostatic functions. These include Paneth cells, enteroendocrine cells, enterocytes, goblet cells, and tuft cells. Well-characterized molecules are added into the culture medium to enrich the intestinal stem cells (ISCs) labeled with leucine-rich repeats containing G protein-coupled receptor 5 and are used to drive differentiation down specific lineages; these molecules include epidermal growth factor, Noggin (a bone morphogenetic protein), and R-spondin 1. Additionally, a protocol to generate organoids from a single erythropoietin-producing hepatocellular receptor B2 (EphB2)-positive ISC is also detailed. In this methods article, techniques to isolate small intestinal crypts and a single ISC from tissues and ensure the efficient establishment of organoids are described.

מחבר זרקור: התרבות התלת-ממדית של אורגנואידים מקריפטים של מעי מורין ותא גזע יחיד למחקר אורגנואידים  

We describe a protocol to isolate murine small intestinal crypts and culture intestinal 3D organoids from the crypts. Additionally, we describe a method to generate organoids from a single intestinal stem cell in the absence of a sub-epithelial cellular niche.

תרבית תלת-ממדית של אורגנואידים מקריפטים של מעי מורין ותא גזע יחיד למחקר אורגנואידים

At present, organoid culture represents an important tool for in vitro studies of different biological aspects and diseases in different organs. Murine ...

אמיתי ניתוח זמן של פרופיל המטבולי ב

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

הנדסה גנטית של מעיים עכבר ראשי אורגנואידים באמצעות מגנטית ננו-חלקיק התמרה וקטורים ויראלי עבור הקפאת שימוש

תרבית תלת-ממדית של קריפטות המעי הגס של מורין לחקר תפקוד תאי גזע במעיים ex vivo

ה

מערכת תרבית איברי מעיים לניתוח אינטראקציות מארח-מיקרוביוטה

פרוטוקול וידאו של זיהום retroviral ביסודי מעיים Organoid תרבות

פרוטוקול לlentiviral התמרה וניתוח במורד הזרם של המעיים Organoids

קוונפיקציה של מתרבים ותאים מתים ב Enteroids

ניתוח עקה חמצונית באורגנוידים מעיים מורין באמצעות גשושית פלואורוגנית רגישה למינים של חמצן תגובתי

תרבית תלת-ממדית של אורגנואידים מקריפטים של מעי מורין ותא גזע יחיד למחקר אורגנואידים

תרבית תלת-ממדית של אורגנואידים מקריפטים של מעי מורין ותא גזע יחיד למחקר אורגנואידים