We thank Ellen Ytebrouck for her valuable information regarding method application in rat. This work was supported by the Research Council of the KU Leuven (OT09/22) and the Fund for Scientific Research-Flanders (FWO Vlaanderen). Jeroen Aerts is supported by a Ph.D. fellowship of the Agency for Innovation through Science and Technology Flanders (IWT Vlaanderen) and Julie Nys by a Ph.D. grant from FWO Flanders.

כל הניסויים אושרו על ידי ועדת המחקר האתית של KU Leuven והיו בהתאם קפדן עם הקהילות האירופיות הנחיית המועצה של 22 ספטמבר 2010 (2010/63 / איחוד אירופי) ועם החקיקה הבלגית (KB של 29 מאי 2013). כל מאמץ אפשרי נעשה כדי למזער את הסבל של בעלי חיים ולצמצם את מספרם של בעלי החיים. .1 בעלי החיים טיפול וחומרי הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם זריקת intraperitoneal של תערובת של קטמין הידרוכלוריד (75 מ&quot;ג / מ&quot;ל) וhydrochloride medetomidine (1 מ&quot;ג / קילוגרם) בתמיסת מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את הרפלקסים ידי צובט את קצות האצבעות עם מלקחיים כדי להבטיח את העכבר הוא מסומם לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 70% אתנול לחיטוי העפעפיים והאזור שמסביב לעין באמצעות קצה כותנה. בדוק את רפלקס העפעף כדי להעריך את מידת ההרגעה בנוסף. </li></ol> 2 הסרת עין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא בעלי החיים שוכנות ובשטוח, יבשמשטח חלק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר מלקחיים עם קצה משונן (גודל העדיף טיפ: 0.5 x 0.4 מ&quot;מ) מעוקל,. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ בעדינות על גבי canthus (פינה של העין) עם המלקחיים עד גלגל העין היא עקור מהשקע ועצב הראייה הוא נגיש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדריך המלקחיים מאחורי העין. לחץ והחזק את עצב הראייה בתקיפות, רצוי עם תחילת העקומה ולא את קצה קצהו של המלקחיים. זה יעזור להרים את העולם מהשקע ומהדק את עצב ראייה המלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות תנועות מעגליות עם היד האוחזת במלקחיים בכיוון עם ההתנגדות לפחות בזמן שהעכבר נשאר על המשטח השטוח. העכבר יהיה נדנדה על פני השטח בהתאם לכיוון של תנועת הידיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע פעולה זו במהירות הולכת וגוברת בהדרגה עד לעצב הראייה מכווץ בשני (בדרך כלל בין 7 עד 15 תנועות סיבוביות, כ חצי לסיבוב מלא אחד לשנייה). לפיכך, גלגל העין המנותק היאהוסר. </li></ol> טיפול .3 לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקרה של דימום (נדיר), למלא את המסלול עם להקריש צמיג וסוכן עוצר דמום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את ההרדמה על ידי הזרקת 1 מ&quot;ג / ק&quot;ג atipamezol hydrochloride מלוחים intraperitoneally. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל 1 מ&quot;ג / ק&quot;ג Meloxicam intraperitoneally כל שעה 24 כדי להקל על כאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה עין לעין שנותרה על מנת למנוע התייבשות של הקרנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו החיה להתאושש על צלחת חימום או לעטוף את החיה בחומר בידוד בכלוב נפרד כדי לשלוט בטמפרטורת גוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את המשקל של העכבר בכל יום לפחות 2 ימים. ירידה במשקל של יכולה להצביע על סבל ובמקרה הזה, להמשיך את טיפול Meloxicam עד שהחיה הוא התאושש באופן מלא. </li></ol>

<ol>
	<li>Toldi, J., Feh&#233;r, O., Wolff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+plasticity+induced+by+neonatal+monocular+(and+binocular)+enucleation.">Neuronal plasticity induced by neonatal monocular (and binocular) enucleation.</a> Progress in Neurobiology. 48 (3), 191-218 (1996).</li><li>Steeves, J. K. E., Gonz&#225;lez, E. G., Steinbach, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vision+with+one+eye:+a+review+of+visual+function+following+unilateral+enucleation.">Vision with one eye: a review of visual function following unilateral enucleation.</a> Spatial vision. 21 (6), 509-529 (2008).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cross-modal+plasticity+in+adult+mouse+visual+cortex+following+monocular+enucleation.">Evidence for cross-modal plasticity in adult mouse visual cortex following monocular enucleation.</a> Cerebral Cortex. 21 (9), 2133-2146 (2011).</li><li>Nys, J., Aerts, J., Ytebrouck, E., Vreysen, S., Laeremans, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cross-modal+aspect+of+mouse+visual+cortex+plasticity+induced+by+monocular+enucleation+is+age-dependent.">The cross-modal aspect of mouse visual cortex plasticity induced by monocular enucleation is age-dependent.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (4), 950-970 (2014).</li><li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+eye+enucleation+for+remote+high-throughput+phenotyping.">Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e57 (2011).</li><li>Morales, B., Choi, S. -. Y., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dark+rearing+alters+the+development+of+GABAergic+transmission+in+visual+cortex.">Dark rearing alters the development of GABAergic transmission in visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 22 (18), 8084-8090 (2002).</li><li>Chen, X. J., Rasch, M. J., Chen, G., Ye, C. Q., Wu, S., Zhang, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binocular+input+coincidence+mediates+critical+period+plasticity+in+the+mouse+primary+visual+cortex.">Binocular input coincidence mediates critical period plasticity in the mouse primary visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 34 (8), 2940-2955 (2014).</li><li>Konur, S., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+spine+and+filopodial+motility+in+primary+visual+cortex:+Reduced+effects+of+activity+and+sensory+deprivation.">Developmental regulation of spine and filopodial motility in primary visual cortex: Reduced effects of activity and sensory deprivation.</a> Journal of Neurobiology. 59 (2), 236-246 (2004).</li><li>Parrilla-Reverter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-course+of+the+retinal+nerve+fibre+layer+degeneration+after+complete+intra-orbital+optic+nerve+transection+or+crush:+A+comparative+study.">Time-course of the retinal nerve fibre layer degeneration after complete intra-orbital optic nerve transection or crush: A comparative study.</a> Vision Research. 49 (23), 2808-2825 (2009).</li><li>Galindo-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axotomy-induced+retinal+ganglion+cell+death+in+adult+mice:+Quantitative+and+topographic+time+course+analyses.">Axotomy-induced retinal ganglion cell death in adult mice: Quantitative and topographic time course analyses.</a> Experimental Eye Research. 92 (5), 377-387 (2011).</li><li>Kanold, P. O., Kim, Y. A., GrandPre, T., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-regulation+of+ocular+dominance+plasticity+and+NMDA+receptor+subunit+expression+in+glutamic+acid+decarboxylase-65+knock-out+mice.">Co-regulation of ocular dominance plasticity and NMDA receptor subunit expression in glutamic acid decarboxylase-65 knock-out mice.</a> The Journal of Physiology. 587 (12), 2857-2867 (2009).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+localization+of+functional+subdivisions+in+the+visual+cortex+of+the+adult+mouse.">Identification and localization of functional subdivisions in the visual cortex of the adult mouse.</a> Journal of Comparative Neurology. 514 (1), 107-116 (2009).</li><li>Avwenagha, O., Bird, M. M., Lieberman, A. R., Yan, Q., Campbell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+expression+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+tyrosine+kinase+B+mRNAs+and+distribution+and+ultrastructural+localization+of+their+proteins+in+the+visual+pathway+of+the+adult+rat.">Patterns of expression of brain-derived neurotrophic factor and tyrosine kinase B mRNAs and distribution and ultrastructural localization of their proteins in the visual pathway of the adult rat.</a> Neuroscience. 140 (3), 913-928 (2006).</li><li>Hernandes, M. S., Britto, L. R. G., Real, C. C., Martins, D. O., Lopes, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+the+structural+remodeling+of+the+visual+system+after+ocular+enucleation.">Reactive oxygen species and the structural remodeling of the visual system after ocular enucleation.</a> Neuroscience. 170 (4), 1249-1260 (2010).</li><li>Cuyvers, A., Paulussen, M., Smolders, K., Hu, T. -. T., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+cell+proliferation+upon+enucleation+in+direct+retinal+brain+targets+in+the+visual+system+of+the+adult+mouse.">Local cell proliferation upon enucleation in direct retinal brain targets in the visual system of the adult mouse.</a> Journal of Experimental Neuroscience. 4, 1-15 (2010).</li><li>Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+binocular+competition+in+the+visual+cortex+begins+at+eye+opening.">Experience-dependent binocular competition in the visual cortex begins at eye opening.</a> Nature Neuroscience. 10 (3), 370-375 (2007).</li><li>Toldi, J., Farkas, T., V&#246;lgyi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+enucleation+induces+cross-modal+changes+in+the+barrel+cortex+of+rat.+A+behavioural+and+electrophysiological+study.">Neonatal enucleation induces cross-modal changes in the barrel cortex of rat. A behavioural and electrophysiological study.</a> Neuroscience Letters. 167 (1-2), 1-4 (1994).</li><li>Newton, J. R., Sikes, R. W., Skavenski, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-modal+plasticity+after+monocular+enucleation+of+the+adult+rabbit.">Cross-modal plasticity after monocular enucleation of the adult rabbit.</a> Experimental Brain Research. 144 (4), 423-429 (2002).</li><li>Lalonde, J., Chaudhuri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+CREB+phosphorylation+and+neuroadaptive+gene+expression+in+area+V1+of+adult+monkeys+after+monocular+enucleation.">Dynamic changes in CREB phosphorylation and neuroadaptive gene expression in area V1 of adult monkeys after monocular enucleation.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (1), 24-37 (2007).</li><li>You, Y., Gupta, V. K., Graham, S. L., Klistorner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterograde+degeneration+along+the+visual+pathway+after+optic+nerve+injury.">Anterograde degeneration along the visual pathway after optic nerve injury.</a> PLoS ONE. 7 (12), e52061 (2012).</li><li>Kelly, K. R., McKetton, L., Schneider, K. A., Gallie, B. L., Steeves, J. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+anterior+visual+system+development+following+early+monocular+enucleation.">Altered anterior visual system development following early monocular enucleation.</a> NeuroImage: Clinical. 4, 72-81 (2014).</li><li>Chow, A. M., Zhou, I. Y., Fan, S. J., Chan, K. W. Y., Chan, K. C., Wu, E. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+changes+in+visual+cortex+of+neonatal+monocular+enucleated+rat:+a+proton+magnetic+resonance+spectroscopy+study.">Metabolic changes in visual cortex of neonatal monocular enucleated rat: a proton magnetic resonance spectroscopy study.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 29 (1), 25-30 (2011).</li><li>Dyer, R. S., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+enucleation+in+retinal+degenerate+mice.">Effects of enucleation in retinal degenerate mice.</a> Physiology &amp; behavior. 14 (2), 207-210 (1975).</li><li>Smith, S. A., Bedi, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+eye+enucleation+in+adult+rats+causes+neuronal+loss+in+the+contralateral+superior+colliculus.">Unilateral eye enucleation in adult rats causes neuronal loss in the contralateral superior colliculus.</a> Journal of Anatomy. 190 (4), 481-490 (1997).</li><li>Gonzalez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+enucleation+on+calbindin-D+28k+and+c-Fos+expression+in+the+lateral+geniculate+nucleus+in+rats.">Effects of monocular enucleation on calbindin-D 28k and c-Fos expression in the lateral geniculate nucleus in rats.</a> Okajimas folia anatomica Japonica. 82 (1), 9-18 (2005).</li><li>Faguet, J., Maranhao, B., Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ipsilateral+eye+cortical+maps+are+uniquely+sensitive+to+binocular+plasticity.">Ipsilateral eye cortical maps are uniquely sensitive to binocular plasticity.</a> Journal of Neurophysiology. 101 (2), 855-861 (2008).</li><li>Van der Gucht, E., Hof, P. R., Van Brussel, L., Burnat, K., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+protein+and+neuronal+activity+markers+define+regional+architectonic+parcellation+in+the+mouse+visual+cortex.">Neurofilament protein and neuronal activity markers define regional architectonic parcellation in the mouse visual cortex.</a> Cerebral Cortex. 17 (12), 2805-2819 (2007).</li><li>Chaudhuri, A., Matsubara, J. A., Cynader, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+in+primate+visual+cortex+assessed+by+immunostaining+for+the+transcription+factor+Zif268.">Neuronal activity in primate visual cortex assessed by immunostaining for the transcription factor Zif268.</a> Visual Neuroscience. 12 (1), 35-50 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

כדי לבצע אנוקלאציה מוצלחת על פי השיטה שלנו, השלבים הקריטיים ביותר שיש לשקול הם: 1) שימוש במלקחיים עם קצה מעוגל ומשונן בגודל המתאים; 2) ביצוע אנוקלאציה על משטח חלק ויבש; ו 3) נהיגה במהירות מופרזת בהדרגה עד התנועות הסיבוביות בכיוון עם החיכוך לפחות. לתוצאה אפקטיבית הוא חיוני לשימוש במלקחיים מתאימים מאופיינים בקצה מעוגל ומשונן (גודל קצה העדיף: עכבר: 0.5 x 0.4 מ&quot;מ; חולדה: 2.15 x 1.3 מ&quot;מ). העקמומיות מאפשרת גישה קלה לעצב הראייה לאחר עקירת גלגל העין ויש צורך ליד המיקום נכון בעת ​​ביצוע התנועות מעגליות. טיפים חלקים אינם מומלצים מכיוון שהם חסרים את האחיזה ההכרחית כאשר מחזיקים את עצב הראייה. כישלון להחזיק את עצב הראייה כראוי במהלך התנועות הסיבוביות תוצאות בקרע של עורק העיניים, ניתוק עני של העין ושחזור עני ומכאן.לכן מומלץ לאימון ראשון בטכניקה זו על בעלי חיים מורדמים לאופטימיזציה של המלקחיים טיפול על מנת להבטיח את רווחת בעלי חיים מקסימלי פעם יישום שיטת in vivo. אנוקלאציה עין המוצלחת לאחרונה גם בוצעה בעכברים במעבדה שלנו משתמשת באותה הטכניקה, פרט להפיכת הגוף של בעלי החיים באופן ידני ושמירה נייחת מלקחיים. מגבלה אחת של הטכניקה היא שזה יכול לגרום נזק לרשתית. לכן שיטה זו היא פחות מתאימה לאיסוף רשתיות לבצע היסטולוגיה 5. יתר על כן, השיטה שלנו היא מוגבל לפרסם גילאי עין פתיחה מאז גלגל העין צריכה להיות עקורה מהשקע מבלי להסיר או חיתוך העפעפיים. אנוקלאציה עין במינים שונים, ביניהם מכרסמים, מבוצעת באופן שוטף תוך שימוש בשיטות חלופיות, אשר לעתים קרובות כרוכה בהסרה של העפעפיים וחיתוך עצב הראייה 18,23-25. metho אלהds נוטה להיות פולשנית יותר ויש להם עקומה למידה גבוהה יותר מאשר הטכניקה המתוארת כאן. ללא צורך בהסרה או תפירת העפעפיים, זמן ההחלמה לאחר ניתוח הוא ממוזער, וכתוצאה מכך לרווחת בעלי חיים גבוהה יותר ותוצאות לשחזור יותר.

הסרת עין ובכך באופן בלתי הפיך בהרס המשטח החושי קולט (רשתית), מטיל אובדן ניכר של קלט חושי לאורך המסלול החזותי. מודל אנוקלאציה במערכת הראייה לנוער ומבוגרים הוכיח להיות יקר בהבנת ההתפתחות, הפלסטיות והתפקוד של מרכזים חזותיים השונים 1-4. השלכות מולקולריות, תאיות ופיזיולוגיות של החסך החושי הזה יכול לספק תובנות על אופן בי פיתוח מוסדר וכיצד הוקם מעגלים בקליפת המוח להתמודד ולשנות את המבנה והתפקוד שלהם בתגובה לשינוי נרחב כזה בניסיון. שיטות שונות של קיפוח חזותי קיימות ולכולם יש יתרונות הספציפיים שלהם במחקר הקשור לחזון. לגידול כהה דוגמא ספציפית מבטל חזותי מונע פעילות עדיין זה לא משפיע על פעילות הרשתית הספונטנית. visua באופן דומה, תפרי מכסה או רטיות להסיר את הדוגמתקלט l מבלי להפריע פעילות ספונטנית אך הם מאפשרים חדיר אור מפוזר דרך עיניו הסגורות. שיטות אלה הן הפיכים והוכחו להיות בעל ערך בהבנת תפקידו של מתאם חזון ורמה נמוכה בדוגמת תשומות משקפת בפיסול מעגלים בקליפת המוח במהלך ההתפתחות 6-8. במחקר גלאוקומה, המודל למעוך עצב הראייה בבעלי חיים מבוגרים כבר בשימוש נרחב משום שהוא קובע אובדן הדרגתי של תשומות תא הגנגליון ברשתית, המהוות את עצב הראייה 9,10. מצד השני, אנוקלאציה, בו העין ובכך הרשתית נמחקה לחלוטין ומייד, היא הבחירה המתאימה של קיפוח כאשר המטרה היא להסיר את החזון שני ספונטני ובלתי הפיך בדוגמת בבת אחת. זה גם גורם לחוסר איזון בפעילות התוך עיני חזק שיכול לשפר את יחס האות לרעש במחקרי מיפוי פעילות 11,12. השוואת שינויים תפקודיים ומבניים בתגובה לאנוקלאציה עם הOSE לאחר החסך בשיטות דרסטיים פחות כגון תפר מכסה למשל, עשויים גם לחשוף תובנות חדשות על תפקידה של פעילות רשתית ספונטנית בשני סוגים ההומיאוסטטית והסינפטי של פלסטיות. Enucleation מפעיל אובדן של השפעות תזונתיות ביעדי רשתית ישירים. לדוגמא, רמות BDNF הם downregulated באופן משמעותי בגרעין לרוחב הברכיתיים (LGN) וcolliculus מעולה של חולדות enucleated מבוגרות 13. מיני חמצן תגובתי, שמתפקדים כמולקולות שליח לתווך שיפוץ מבני, גם התגלו במבנים קורטיקליים של החולדה הבוגרת מערכת ראייה 14. יתר על כן, microglial והפעלת astroglial פני מבני יעד שונים קורטיקליים חזותיים בעכבר מתרחשים במסגרת זמן ההודעה אנוקלאציה ספציפית של שבוע 15 אחד. יחד, תוצאות deafferentation אופטיות בתגובות קורטיקליים שונות בגליה, הרמה מבנית ומולקולרית. למרות קורטיקליים אלהאפקטים, זה לא בהכרח לסבך השפעות ברמת קליפת המוח 16. פלסטיות ראויה לציון, צלב מודאלית בקליפת המוח, ובכלל זה שינויים באזורים חושיים אחרים הבא לחיזוקו של תשומות שאינן חזותיות לנשללה קליפת הראייה מתרחשת לאחר שתי המשקפת (ME) 3,4,17,18 ומשקף (BE) 1,17 אנוקלאציה. מלבד תרומה למדעי מוח חזותי, אנוקלאציה כסוג של deafferentation יכולה לשמש כדי ללמוד את האיזון בין 20-22 תכונות הגנה עצביות 19 וניווניות של מערכת העצבים המרכזית. הליכים שונים לביצוע אנוקלאציה כבר תוארו בספרות. מתודולוגיות מסוימות לin vivo ME בחולדות ועכברים הן פחות ברורות בשל חתך מיותר של שרירים ורקמות 23-25 ​​מסלולית. פרסומים אחרים כגון Mahajan et al. (2011) 5 מספקים פרוטוקול מפורט באמצעות<html> נתיחה בוטה לאוסף תפוקה גבוהה של עיניים כדי ללמוד את מתאמי גנוטיפ, פנוטיפ, שלאחר המוות צפוי. למטרתם, השיטה נוחה ומהירה. עם זאת, שיטה זו היא פחות מתאימה לאנוקלאציה in vivo, כאשר אחד בוחר ללמוד במסלול החזותי מביא הבא אנוקלאציה (בבעלי חיים), ולא בעין עצמה. בסביבה כזו, הישרדות ההודעה אנוקלאציה-היא בעל חשיבות גבוהה. כמו כן, מינימאלי בנזק vivo ושימור של עצב הראייה ורקמות מסלולית הוא חיובי. כאן, אנו מציגים שיטת אנוקלאציה חלופית, יותר דומה לזה שתואר על ידי פאגה et al (2008) 26, המציע מאפייני יתרון מסוימים:. זה קשור להתאוששות שלאחר ניתוח מהיר ומאופיין בסף למידה נמוך מאוד לחוקרים. באופן כללי, שיטות שונות משלימות בהתאם למוקד של המחקר הבא: מורפולוגיה עין או מחקר מסלול חזותי. ve_content &quot;&gt; לסיכום, אנוקלאציה ניתן ליישם ממחקר חזון כלפי חקירות של פלסטיות ההומיאוסטטית וחוצת מודאלי מוח, מאפייני תגובת גליה, ויציבות האקסון. במאמר דמיין את זה, אנחנו מדגימים שיטה ריאלי ואמינה לin vivo אנוקלאציה עין ב העכבר.

<table><tbody><tr><td>Ketamine hydrochloride (Anesketin)</td><td>Dechra Veterinary Products (Eurovet)</td><td>BE-V136516</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine hydrochloride (Domitor)</td><td>Orion Corporation (Janssen Animal Health)</td><td>BE-V151742</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezol hydrochloride (Antisedan)</td><td>Orion Corporation (Elanco Animal Health)</td><td>BE-V153352</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotics (cefazolin, Kefzol)</td><td>Eurocept Pharmaceuticals</td><td>BE 106267</td><td></td></tr><tr><td>Eye ointment (Fucithalmic)</td><td>Leo Pharma nv-sa</td><td>BE 144654</td><td></td></tr><tr><td>Moria MC31 Forceps - Serrated Curved</td><td>Fine Science Tools</td><td>11370-31</td><td>For application in the mouse. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td></tr><tr><td>Narrow Pattern Forceps - curved</td><td>Fine Science Tools</td><td>11003-13</td><td>For application in the rat. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td></tr><tr><td>Hemostatic cotton wool</td><td>Qualiphar</td><td>N/A</td><td>Other hemostatic agents are equally suitable (&lt;em&gt;e.g.&lt;/em&gt;, Viscostat, #649, Ultradent Products)</td></tr></tbody></table>

a highly reproducible and straightforward method to perform in vivo ocular enucleation in the mouse after eye opening

Enucleation או הסרה כירורגית של העין, בדרך כלל, יכול להיחשב כמודל לdeafferentation עצב. הוא מספק כלי רב ערך כדי ללמוד את ההיבטים השונים של, מודאלי חוצי החזותי ופלסטיות התפתחותית לאורך מערכת הראייה של היונקים 1-4. הנה, אנחנו מדגימים טכניקה אלגנטית ופשוטה להסרת אחד או בשני העיניים בעכבר, אשר קיבלה תוקף בעכברים של 20 ימים ההם עד מבוגרים. בקצרה, מלקחיים מעוקלים חיטוי משמש כדי לצבוט את עצב הראייה מאחורי העין. בהמשך לכך, תנועות סיבוביות מבוצעות כדי להצר את עצב הראייה ולהסיר את גלגל העין. היתרונות של שיטה זו הם שחזור גבוה, מינימאלי ללא דימום, התאוששות שלאחר ניתוח מהירה וסף למידה נמוך מאוד לניסוי. לפיכך, כמות גדולה של בעלי חיים ניתן להשפיע ומעובד עם כמות מינימאלית של מאמץ. הטבע של הטכניקה עשוי לגרום לניזק קל להרשתית במהלך ההליך. תופעת לוואי זו הופכת שיטה זו פחות מתאים לעומת Mahajan et al. (2011) 5 אם המטרה היא לאסוף ולנתח רקמת רשתית. כמו כן, השיטה שלנו היא רק לגילי הודעה מאיירים עיניים (עכבר: P10 - 13 ואילך) מאז גלגל העין צריכה להיות עקורה מהשקע מבלי להסיר את העפעפיים. לאחרונה in vivo טכניקת אנוקלאציה המתוארת בכתב היד הזה כבר מיושם בהצלחה עם שינויים קלים בחולדות ונראית שימושי כדי ללמוד את המסלול החזותי מביא מכרסמים באופן כללי.

איור 1 מדגים את ההסרה המוצלחת של העין באמצעות הפרוטוקול המתואר ומאופיין בהעדר הדימום או כל נזק פיזי נראית לעין לרקמה מסלולית או שקע העין (איורים 1 א, 1 ב &#39;). יתר על כן, יש לו את העין הוסרה קרנית חלקה, דמית העין ודיסק אופטי, מעיד על עולם שלם לחלוטין (תרשים 1C). מאז הפרוטוקול שלנו כולל ההידוק של עצב הראייה מאחורי העין ומפנה מכאניים, עצב הראייה של העין שהוסרה הוא מכווץ בבסיס של הרשתית (1D איור). ביצוע תוצאות ההליך המתואר בעצב ראייה ומסודר ללא כל נזק לאזור במוח שמסביב (איור 1E). אנוקלאציה משקפת, בשילוב עם מיפוי פעילות (איור 2), מאפשרת לשרטט בחדות אזורי הקלט הפונקציונליים או עין ספציפית בvisua הנגדיקליפת l של העכבר 12,27 או עמודות דומיננטיות אפילו עיניות ביונקים מסדר גבוה כמו קופים 28. בניסויים עם עכברים, הסרת אחד (ME) או בשני העיניים (להיות) בשילוב עם גירוי חזותי ממוקד וזיהוי של zif268 רמות ביטוי חלבון mRNA או c-Fos יושם לחשוף הפעלה עצבית אזורית בקליפת המוח הראייתית 12,27 . בניגוד לבקרות מגורה מבחינה ויזואלית (איור 2 א), עכברי BE הראו פעילות בסיסית בראייה כתוצאה מהשלמת חוסר הקלט החזותי (איור 2) הקליפה. ככזה, הגבולות בין חזותי עם שאינה קליפת ראייה (כלומר. קליפה החושית במקטעים נוספים קדמי וקליפת מוח השמיעתית במקטעים נוספים אחורי) נחשפו. תוצאות מעכברי ME עם זמן הישרדות של שבוע דמיינו אזורי קלט מסוימים עין בנגדית קליפת הראייה. שני האזורים מונעים monocularly היו hypoactive וממוקמים Medi<html> אל ורוחב של האזור המשקפת המרכזי (איור 2 ג). <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1 הערכה איכותית של מדינת פוסט אנוקלאציה-של שקע העין, העין הוסרה ועצב הראייה. לאחר הסרת עין עם מלקחיים מעוקלים () אין דימום או נזק הוא ציין בשקע העין (B). עין שהוסרה היא שלמה לחלוטין כפי שמשתקף במראה רגיל של הקרנית ודמה העין (C, D). עצב הראייה הוא מכווץ בדיסק האופטי שבו הוא עוזב את העין (ד &#39;). בדיקה של החלק הגחוני של המוח מגלה עצב חתך נקי אופטי (כוכבית) ולא נגרם נזק ניכר למבנים אחרים (E). ברים סולם בC, D: 1 מ&quot;מ. סרגל קנה מידה בE: 5 מ&quot;מ. : קדמי; L: שמאל; P: אחורי; R: תקין. &quot;Jove_content&quot; FO: לשמור-together.within-page = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig2highres.jpg" width="500" /> איור 2 יחידות משנה פונקציונליות עין קלט ספציפית בעכבר קליפת המוח הראייתית כפי שנחשפו על ידי אנוקלאציה. קווים שחורים ואפורים המחברים את העיניים וקליפת המוח מייצגים את המעבר של מעל afferents רשתית ואזורי קלט הספציפיים עין. פעילות עצבית היא מדמיין על סעיפי העטרה של שליטה (), BE (B), וME עכברים (C) על ידי רדיואקטיביים בכלאה באתר (ISH) לzif268 (בסולם אפור) סביב רמת גבחת -3.40 מ&quot;מ. בבעלי חיים שליטה (), קליפת המוח הראייתית בשני חצי הכדור מבטאת פעילות גבוהה בעקבות גירוי חזותי. כאשר עין אחת או בשני (ים) הושמדה, ירידה ברורה באות הפעילות גלויה במקביל אזורים בקליפת המוח מקופחים. Monocularly enucleated עכברים (C) להראות אזור הגבוה activity באזור המשקפת של החזותית מוקפות אות ירד באזורים המשקפים נגדי לעין שהוסרה הקליפה. סרגל קנה מידה: 2 מ&quot;מ. הודפס מחדש באישור ומאן בריסל et 12 אל.

Watch this Scientific Journal Video about A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening at JoVE.com

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

הסרת עיניים, המכונות גם אנוקלאציה, מספקת אסטרטגיה שימושית ללמוד היבטים של מודלי חוצי חזותיים,, ופלסטיות התפתחותית לאורך מערכת הראייה של יונקים שכן הוא גורם בלתי הפיך חלקית (משקפת) או אובדן ראייה (משקפת) מלא. כאן אנו מתארים גישה לשחזור וברורה מאוד לביצוע באנוקלאציה vivo.

שיטה מאוד לשחזור וישיר לביצוע<em&gt; בVivo</em&gt; Ocular Enucleation בעכבר לאחר פתיחת העיניים

Enucleation or the surgical removal of an eye can generally be considered as a model for nerve deafferentation. It provides a valuable tool to study the ...

a-highly-reproducible-straightforward-method-to-perform-vivo-ocular

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

23.2K Views.  KU Leuven - University of Leuven.  הסרת עיניים, המכונות גם אנוקלאציה, מספקת אסטרטגיה שימושית ללמוד היבטים של מודלי חוצי חזותיים,, ופלסטיות התפתחותית לאורך מערכת הראייה של יונקים שכן הוא גורם בלתי הפיך חלקית (משקפת) או אובדן ראייה (משקפת) מלא. כאן אנו מתארים גישה לשחזור וברורה...

Video: A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular degeneration, photoreceptor degeneration, cataract, glaucoma, retinoblastoma, and diabetic retinopathy have been recapitulated in transgenic mice.1-5 Most transgenic and knockout mice have been generated by laboratories to study non-ophthalmic diseases, but genetic conservation between organ systems suggests that many of the same genes may also play a role in ocular development and disease. Hence, these mice represent an important resource for discovering new genotype-phenotype correlations in the eye. Because these mice are scattered across the globe, it is difficult to acquire, maintain, and phenotype them in an efficient, cost-effective manner. Thus, most high-throughput ophthalmic phenotyping screens are restricted to a few locations that require on-site, ophthalmic expertise to examine eyes in live mice. 6-9 An alternative approach developed by our laboratory is a method for remote tissue-acquisition that can be used in large or small-scale surveys of transgenic mouse eyes. Standardized procedures for video-based surgical skill transfer, tissue fixation, and shipping allow any lab to collect whole eyes from mutant animals and send them for molecular and morphological phenotyping. In this video article, we present techniques to enucleate and transfer both unfixed and perfusion fixed mouse eyes for remote phenotyping analyses.

The dissection technique illustrates enucleation of the mouse eye for tissue fixation to perform phenotyping in high-throughput screens.

Enucleation עיני העכבר לphenotyping מרחוק תפוקה גבוהה

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

Medicine

Video-oculography in Mice

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the mouse, have a limited capacity to lock their eyes onto a target. In contrast to these target directed eye movements, compensatory ocular eye movements are easily elicited in afoveate animals1,2,3,4. Compensatory ocular movements are generated by processing vestibular and optokinetic information into a command signal that will drive the eye muscles. The processing of the vestibular and optokinetic information can be investigated separately and together, allowing the specification of a deficit in the oculomotor system. The oculomotor system can be tested by evoking an optokinetic reflex (OKR), vestibulo-ocular reflex (VOR) or a visually-enhanced vestibulo-ocular reflex (VVOR). The OKR is a reflex movement that compensates for "full-field" image movements on the retina, whereas the VOR is a reflex eye movement that compensates head movements. The VVOR is a reflex eye movement that uses both vestibular as well as optokinetic information to make the appropriate compensation. The cerebellum monitors and is able to adjust these compensatory eye movements. Therefore, oculography is a very powerful tool to investigate brain-behavior relationship under normal as well as under pathological conditions (f.e. of vestibular, ocular and/or cerebellar origin).
Testing the oculomotor system, as a behavioral paradigm, is interesting for several reasons. First, the oculomotor system is a well understood neural system5. Second, the oculomotor system is relative simple6; the amount of possible eye movement is limited by its ball-in-socket architecture ("single joint") and the three pairs of extra-ocular muscles7. Third, the behavioral output and sensory input can easily be measured, which makes this a highly accessible system for quantitative analysis8. Many behavioral tests lack this high level of quantitative power. And finally, both performance as well as plasticity of the oculomotor system can be tested, allowing research on learning and memory processes9.
Genetically modified mice are nowadays widely available and they form an important source for the exploration of brain functions at various levels10. In addition, they can be used as models to mimic human diseases. Applying oculography on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors under normal and pathological conditions. Here, we describe how to measure video-oculography in mice8.

Video-oculography is a very quantitative method to investigate ocular motor performance as well as motor learning. Here, we describe how to measure video-oculography in mice. Applying this technique on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors.

וידאו oculography ב עכברים

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the ...

Neuroscience

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

Targeted ablations of genes and analysis of animal models is the classical strategy for enrolling specific retinal gene function. However, transgenic, retina-specific or conditional knockout mouse models often display early lethality or suffer from severe malformations, preventing an analysis beyond embryonic or early postnatal stages.
Primary cell culture is an alternative to investigate the effects of exogenously applied recombinant factors, overexpression of genes or siRNA-mediated gene knockdown in a controlled environment. Dissociated cell culture has the advantage that the endogenous signals reaching the target cells are reduced, thereby facilitating the identification of exogenously triggered effects after pharmacological manipulation. However, important cell-cell interactions are initially destroyed by enzymatic digestion or mechanical dissociation, even if re-aggregated retinospheroid cultures1 are used.
By contrast, organotypic retinal wholemount cultures provide a system close to the physiological in vivo situation with neuronal interactions and connections still preserved2-5.
In this video article we provide a step by step demonstration of (1) the establishment of in vivo-like organotypic retinal wholemount cultures including dissection peculiarities of embryonic, postnatal and adult murine eyes and (2) a dissociation and cytospin procedure for analysis of neuronal apoptosis and retinal cell proliferation in organotypic wholemounts, e.g. after culture in the presence of exogenously applied recombinant factors.

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

This video article demonstrates the establishment of organotypic retinal wholemount cultures and a cytospin procedure for analysis of exogenously induced effects. Organotypic retinal wholemount cultures mimic the in vivo situation and significantly facilitate the accessibility of murine retinas for experimental manipulations while circumventing the disadvantages of classical murine animal models.

בשנת vivo, כמו תרבות Wholemount Murine Organotypic רשתית

Targeted ablations of genes and analysis of animal models is the classical strategy for enrolling specific retinal gene function. However, transgenic, ...

Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the cortex to the contralateral eye to a stimulus is much stronger than the response of the ipsilateral eye in the binocular segment of the mouse primary visual cortex (V1). During the mammalian critical period, suturing the contralateral eye will result in a rapid loss of responsiveness of V1 cells to contralateral eye stimulation. With the continuing development of transgenic technologies, more and more studies are using transgenic mice as experimental models to examine the effects of specific genes on ocular dominance (OD) plasticity. In this study, we introduce detailed protocols for monocular visual deprivation and calculate the change in OD plasticity in mouse V1. After monocular deprivation (MD) for 4 days during the critical period, the orientation tuning curves of each neuron are measured, and the tuning curves of layer four neurons in V1 are compared between stimulation of the ipsilateral and contralateral eyes. The contralateral bias index (CBI) can be calculated using each cell&#39;s ocular OD score to indicate the degree of OD plasticity. This experimental technique is important for studying the neural mechanisms of OD plasticity during the critical period and for surveying the roles of specific genes in neural development. The major limitation is that the acute study cannot investigate the change in neural plasticity of the same mouse at a different time.

Here, we present detailed protocols for monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity analysis, which are important methods for studying the neural mechanisms of visual plasticity during the critical period and the effects of specific genes on visual development.

מניעת ויזואלי מונוטוני ושליטה העין הפלסטיות מדידה העכבר קליפת הראיה העיקרית

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...

Developmental Biology

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Implantation of a Cranial Window for Repeated In Vivo Imaging in Awake Mice

To fully understand the cellular physiology of neurons and glia in behaving animals, it is necessary to visualize their morphology and record their activity in vivo in behaving mice. This paper describes a method for the implantation of a chronic cranial window to allow for the longitudinal imaging of brain cells in awake, head-restrained mice. In combination with genetic strategies and viral injections, it is possible to label specific cells and regions of interest with structural or physiological markers. This protocol demonstrates how to combine viral injections to label neurons in the vicinity of GCaMP6-expressing astrocytes in the cortex for simultaneous imaging of both cells through a cranial window. Multiphoton imaging of the same cells can be performed for days, weeks, or months in awake, behaving animals. This approach provides researchers with a method for viewing cellular dynamics in real time and can be applied to answer a number of questions in neuroscience.

Implantation of a Cranial Window for Repeated In Vivo Imaging in Awake Mice

Presented here is a protocol for the implantation of a chronic cranial window for the longitudinal imaging of brain cells in awake, head-restrained mice.

השתלת חלון גולגולת להדמיה חוזרת ונשנית In Vivo בעכברים ערים

To fully understand the cellular physiology of neurons and glia in behaving animals, it is necessary to visualize their morphology and record their ...

פרוטוקולי נזק לסיבי חישה בקרנית למחקרי רגנרציה של אקסונים

Three Strategies to Induce Neurotrophic Keratitis and Nerve Regeneration in Murine Cornea

The cornea is a transparent tissue that covers the eye and is crucial for clear vision. It is the most innervated tissue in the body. This innervation provides sensation and trophic function to the eye and contributes to preserving corneal integrity. The pathological disruption of this innervation is termed neurotrophic keratitis. This can be triggered by injury to the eye, surgery, or disease. In this study, we propose three different protocols for inflicting damage on the innervation in ways that recapitulate the three types of cases generally encountered in the clinic.
The first method consists in making an abrasion of the epithelium with an ophthalmic burr. This involves the removal of the epithelial layer, the free nerve endings, and the subbasal plexus in a manner similar to the photorefractive keratectomy surgery performed in the clinic. The second method&#160;only targets the innervation by sectioning it at the periphery with a biopsy punch, maintaining the integrity of the epithelium. This method is similar to the first steps of lamellar keratoplasty and leads to a degeneration of the innervation followed by regrowth of the axons in the central cornea. The last method damages the innervation of a transgenic mouse model using a multiphoton microscope, which specifically localizes the site of cauterization of the fluorescent nerve fibers. This method inflicts the same damage as photokeratitis, an overexposure to UV light.
This study describes different options for investigating the physiopathology of corneal innervation, particularly the degeneration and regeneration of the axons. Promoting regeneration is crucial for avoiding such complications as epithelium defects or even perforation of the cornea. The proposed models can help test new pharmacological molecules or gene therapy that enhance nerve regeneration and limit disease progression.

מחבר זרקור: קידום מחקר אינרבציה של הקרנית באמצעות מודלים חדשניים 

Here, we propose three different methods of damaging the sensory fibres innervating the cornea. These methods facilitate the study of axon regeneration in mice. These three methods, which are adaptable to other animal models, are ideal for the study of corneal innervation physiology and regeneration.

שלוש אסטרטגיות לגרימת קראטיטיס נוירוטרופית והתחדשות עצבית בקרנית מורין

The cornea is a transparent tissue that covers the eye and is crucial for clear vision. It is the most innervated tissue in the body. This innervation ...

Microdissection of the Rodent Eye

The ocular micro-dissection of the rodent eye involves the segmentation of the enucleated eyeball with the attached nictitating membrane, or third eyelid, to obtain the anterior and posterior eyecups. With this technique, the sub-parts of the eye, including the corneal tissue, neural tissue, retinal pigment epithelial (RPE) tissue, and lens, can be obtained for wholemounts, cryo-sectioning, and/or single-cell suspensions of a specific ocular tissue. The presence of the third eyelid presents unique and significant advantages, as it benefits the maintenance of the orientation of the eye, which is important for understanding eye physiology following any localized intervention or in studies involving ocular analysis relating to the eye&#39;s spatial topography.
In this method, we enucleated the eyeball at the socket along with the third eyelid by carefully and slowly cutting through the extraocular muscles and severing the optic nerve. The eyeball was pierced through the corneal limbus using a microblade.&#160;The incision was used as the point of entry, allowing for cutting along the corneal-scleral junction by inserting micro-scissors through the incision point. Small and continuous cuts along the circumference were made until the cups separated. These could be further dissected by gently peeling the translucent layer of the neural retina using Colibri suturing forceps to obtain the neural retina and RPE layers. Further, three/four equidistant cuts were made from the periphery perpendicularly to the optic center until the optic nerve was reached. This opened the hemispherical cups into a floret shape so that they fell flat and could be easily mounted. This technique has been used in our lab for corneal wholemounts and retinal sections. The presence of the third eyelid delineates the nasal-temporal orientation, which allows for the study of various cell therapy interventions post-transplantation and, thus, the targeted physiological validation vital for visualization and accurate representation in such studies.

This paper presents a protocol for ocular micro-dissection in rodents. The process involves the enucleation of the eyeball along with the nictitating membrane (i.e., the third eyelid). This is then followed by the separation of the posterior and anterior eye cups.

מיקרודיסקציה של עין המכרסם

The ocular micro-dissection of the rodent eye involves the segmentation of the enucleated eyeball with the attached nictitating membrane, or third eyelid, ...

שיטה מאוד לשחזור וישיר לביצוע

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Enucleation עיני העכבר לphenotyping מרחוק תפוקה גבוהה

וידאו oculography ב עכברים

בשנת vivo, כמו תרבות Wholemount Murine Organotypic רשתית

מניעת ויזואלי מונוטוני ושליטה העין הפלסטיות מדידה העכבר קליפת הראיה העיקרית

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

השתלת חלון גולגולת להדמיה חוזרת ונשנית In Vivo בעכברים ערים

שלוש אסטרטגיות לגרימת קראטיטיס נוירוטרופית והתחדשות עצבית בקרנית מורין

שלוש אסטרטגיות לגרימת קראטיטיס נוירוטרופית והתחדשות עצבית בקרנית מורין

שלוש אסטרטגיות לגרימת קראטיטיס נוירוטרופית והתחדשות עצבית בקרנית מורין

מיקרודיסקציה של עין המכרסם