בידוד וניתוח של נגעי קשת אבי העורקים ושורש במודל עכבר טרשת עורקים

פרוטוקול זה מספק מתודולוגיה מקיפה לניתוח כמותי של פלאק טרשת עורקים כדי להקל על מחקר מעמיק יותר על המנגנונים וההתקדמות של טרשת עורקים.

טרשת עורקים, גורם מוביל למחלות לב וכלי דם, מחייבת בדיקה מפורטת של התפתחות הנגע והתקדמותו. מחקר זה מציג פרוטוקול מקיף לבידוד וניתוח היסטולוגי של נגעי קשת אבי העורקים והשורש במודל עכברים טרשת עורקים בשימוש נרחב, עכברי נוק-אאוט של קולטן ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה (Ldlr^-/-). קשת אבי העורקים והשורש הם אתרי מפתח לנגעים טרשת עורקים, ובדיקתם קריטית להערכת הופעתה, התקדמותה או נסיגתה של טרשת עורקים, חיזוי סיכונים לאירועים קרדיווסקולריים וזיהוי מטרות טיפוליות פוטנציאליות. פרוטוקול זה מתאר שיטות לכימות עומס טרשת עורקים בקשת אבי העורקים ובשורש, כולל בידוד רקמות, קיבוע, צביעת שמן אדום O, חתך שורש אבי העורקים, צביעת המטוקסילין ואאוזין (HE), צביעת Verhoeff-Van Gieson (VVG) וניתוח תמונה. צביעת שמן אדום O מודדת את שטח הפלאק בקשת אבי העורקים, ומעריכה את חומרת טרשת העורקים, בעוד צביעת HE של שורש אבי העורקים חושפת מרכיבי פלאק כגון ליבת השומנים והכובע הסיבי, מה שמקל על הערכת יציבות הפלאק והסיכון לקרע. צביעת VVG עלולה להכתים סיבי קולגן בתוך רקמות, ולספק תובנות נוספות לגבי הרכב הפלאק ומידע קשור. ניתוח יסודי זה מציע תובנות חשובות לגבי מנגנוני התפתחות הנגעים ועשוי להנחות את יצירת אסטרטגיות טיפוליות חדשות למניעה וטיפול בטרשת עורקים.

מחלות לב וכלי דם, במיוחד טרשת עורקים, התגלו כנטל בריאותי משמעותי וגורם מוות עיקרי ברחבי העולם ^1,2. טרשת עורקים היא מחלה דלקתית כרונית מתקדמת המאופיינת בהצטברות הדרגתית של שומנים והיווצרות פלאק בדופן העורק, מה שמוביל בסופו של דבר להיצרות לומן העורקי ועלול לקרע של פלאק, מה שמעורר אירועים קרדיווסקולריים חריפים כגון אוטם שריר הלב ושבץ מוחי ^1,2,3. בהתחשב בהשפעתו העמוקה על בריאות האדם, יש צורך דחוף להבין את המנגנונים העומדים בבסיס טרשת עורקים ולפתח אסטרטגיות טיפוליות יעילות.

בשנים האחרונות, מודלים של בעלי חיים מילאו תפקיד מכריע בקידום ההבנה שלנו לגבי טרשת עורקים. בקרב מינים שונים, עכברים התגלו כמודל מועדף בשל הרבייה המהירה שלהם, עלויות התחזוקה הנמוכות והזמינות של טכניקות מניפולציה גנטיות מתקדמות ^4,5. בפרט, עכברי נוקאאוט של קולטן LDL (Ldlr^-/-) ועכברי ApoE^-/- שימשו באופן נרחב לחיקוי טרשת עורקים אנושית, מכיוון שהם מציגים מאפיינים פתופיזיולוגיים דומים 4,5,6,7,8,9.

נגעים טרשת עורקים בעכברים יכולים להופיע במקומות שונים של אבי העורקים, אך הם נוטים במיוחד להתפתח באזורים הקשורים קשר הדוק להמודינמיקה, כגון שורש אבי העורקים, קשת אבי העורקים והגזע הברכיוצפלי, בעוד שאבי העורקים היורד מושפע פחות באופן יחסי¹⁰. כדי להעריך במדויק את עומס הנגעים הטרשת במודלים של עכברים, להעריך את נוכחותם, גודלם ושלב הפלאק, ובכך לחקור את ההשפעה של תרופות או גורמים שונים על הופעתה, התקדמותה ורגרסיה של טרשת עורקים, שילוב של טכניקות צביעה היסטולוגיות וניתוח הדמיה הוא חיוני¹¹. צביעת שמן אדום O, שיטה מבוססת היטב, צובעת באופן ספציפי שומנים וליפופרוטאינים ניטרליים¹², ומספקת הדמיה ישירה של היווצרות פלאק בקשת אבי העורקים¹³. בינתיים, צביעת המטוקסילין-אאוזין (HE) של שורש אבי העורקים לא רק תוחמת את אזור הפלאק אלא גם מספקת מאפיינים מבניים מפורטים, כגון הכובע הסיבי והליבה הנמקית של השומנים. פרטים אלה חיוניים להערכת יציבות הפלאק ולניבוי הסיכון לקרע בפלאק¹¹. יחד, טכניקות אלו מאפשרות הערכה מקיפה של חומרת הנגע הטרשת והתקדמותו.

פרוטוקול זה לקח כדוגמאות עכברי C57BL6/J Ldlr^-/- שניזונו מדיאטת צ'או ותזונה מערבית, במטרה לספק מדריך מפורט שלב אחר שלב להערכת נטל הנגעים הטרשת בעכברים באמצעות צביעת שמן אדום O של קשת אבי העורקים וצביעה HE של קטעי שורש אבי העורקים המשובצים בפרפין, ולאחר מכן ניתוח תמונה. הפרוטוקול מכסה את כל ההיבטים של בידוד וקיבוע אבי העורקים, הטמעה וחתך של פרפין, הליכי צביעה וניתוח תמונה תוך שילוב פרטים תפעוליים ושיקולים לשלבי מפתח, מה שמבטיח את יכולת השחזור והאמינות של התוצאות. על ידי ביצוע פרוטוקול זה, חוקרים יכולים להעריך בצורה מדויקת ויעילה את היעילות של התערבויות טיפוליות ולקבל תובנות לגבי המנגנונים העומדים בבסיס טרשת עורקים.

כל הפרוטוקולים בבעלי חיים ששימשו במחקר זה אושרו על ידי ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת שנחאי לספורט.

1. הכנת ריאגנטים וכלי דיסקציה

1. עיקור כלי חיתוך, כולל מספריים עדינים, מלקחיים ישרים, מלקחיים מעוקלים, מספריים קפיציים וסיכות, על ידי חיטוי מראש.
2. 75% אתנול: מערבבים 75 מ"ל של אתנול נטול מים עם 25 מ"ל של ddH₂O.
3. 1x תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS): ממיסים 0.01 M אבקת PBS ב-2 ליטר של ddH₂O.
4. תמיסת 4% פרפורמלדהיד (PFA): מחממים 800 מ"ל של 1x PBS עד כ-60 מעלות צלזיוס על מערבל מגנטי במכסה אדים. מוסיפים לאט לאט 40 גרם אבקת פרפורמלדהיד תוך ערבוב מתמיד. יש לטטר עם 1N NaOH עד להמסה מלאה. מצננים לטמפרטורת החדר, מכוונים את עוצמת הקול ל-1 ליטר עם 1x PBS, מסננים וכווננו את ה-pH ל-7.2-7.4.
   זהירות: PFA הוא כימיקל מסוכן הדורש טיפול זהיר והקפדה על פרוטוקולי בטיחות.
5. תמיסת גרב של שמן אדום O: ממיסים 2.5 גרם אבקת שמן אדום O ב-500 מ"ל של 100% איזופרופנול, אוטמים בבקבוק חום ושומרים במקרר בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס לאחסון לטווח ארוך.
   זהירות: איזופרופנול הוא כימיקל רעיל ומזיק; לכן, כדי להבטיח בריאות ובטיחות, חיוני ללבוש את ציוד המגן האישי הדרוש (PPE), כולל כפפות.
6. פתרון עבודה של שמן אדום O: מערבבים את תמיסת הגרב וסטרילי ddH₂O ביחס של 3:2. הכן טרי לכל שימוש וסנן את התמיסה עם מסנן מזרק סטרילי של 0.22 מיקרומטר או נייר סינון גדול.
7. תמיסת צביעה של Victoria Blue'B: ממיסים 0.5 גרם Victoria Blue'B ב-100 מ"ל של 70% אתנול.

2. בידוד אבי העורקים והלב

1. יש לשכן את כל העכברים ב-3-5 בעלי חיים בכלוב, עם מחזור אור/חושך של 12 שעות, בסביבה מבוקרת טמפרטורה ולהאכיל דיאטת צ'או סטנדרטית (צ'או) או דיאטה מערבית (WTD) המכילה 0.2% כולסטרול ו-21.2% שומן. בחר עכברים זכרים C57BL6/J LDLr-/- בני 12 שבועות ומשקלם בין 25 ל-30 גרם. להקריב עכברים בתא CO₂ .
2. לפני הדיסקציה, הניחו את העכברים במצב שכיבה (צד הגחון כלפי מעלה) על לוח קצף מכוסה ב 1-2 שכבות של נייר סופג וקבעו את הגפיים בעזרת סיכות.
3. ריססו 75% אתנול על בטן העכברים כדי לנקות ולהרטיב את הפרווה.
4. השתמש במלקחיים כדי לתפוס את עור הגחון של העכברים והשתמש במספריים עדינים כדי לחתוך את העור מבסיס הבטן ועד לחלק העליון של הצוואר.
5. פתח את דופן הבטן, ולאחר מכן השתמש במלקחיים כדי להרים את עצם החזה ולחתוך את הסרעפת והצלעות כדי לחשוף את חלל בית החזה.
6. הסר את הוושט וקנה הנשימה, מה שיאפשר ניקוי קל יותר של עורקי הצוואר. הסר איברים, כולל הכבד, הריאות, הטחול, מערכת העיכול והלבלב, תוך שמירה על הכליות הממוקמות מאחורי הצפק ואבי העורקים הבטני לצד עמוד השדרה. בעת ניתוח העורקים המזנטריים, הקפד להרים את המעיים ולבצע חתכים הרחק מאבי העורקים כדי למנוע פגיעה באבי העורקים הבטני.
7. כדי לספק שדה תצפית ברור, הנח את העכברים מתחת לסטריאומיקרוסקופ ויישר את מקור האור הקר עם אזור הדיסקציה.
8. הזרקו לאט מזרק של 10 מ"ל מלא ב-PBS עם מחט RWLB בגודל 0.45 x 15 (II) לקודקוד החדר השמאלי והתבוננו בהתרחבות אבי העורקים.
9. נגב בעדינות את הדם והנוזל באזור החיתוך עם נייר טישו כדי לחשוף את שדה הראייה במלואו.
10. קל לחשוף את אבי העורקים החזי. השתמש בו כפריצת דרך על ידי שימוש במלקחיים כדי לתפוס את המקטע הסרעפתי המחובר לקצה אבי העורקים החזי ומספריים קפיציים כדי לחתוך את רקמת החיבור בין אבי העורקים לדופן שריר בית החזה.
11. משוך בעדינות את הלב בעזרת מלקחיים והרם את אבי העורקים החזי, תוך התבוננות בענפי קשת אבי העורקים, ונתח את השומן ההרפתקני ורקמת החיבור סביב קשת אבי העורקים וענפיו כלפי מעלה לאורך אבי העורקים החזי.
    הערה: היזהר, שמור על אבי העורקים שלם, הימנע מקריעה או פציעה שלו והסר ביסודיות את השומן ורקמת החיבור שמסביב. שלב זה דורש תרגול חוזר כדי להשיג מניפולציה מיומנת.
12. נתח את אבי העורקים הבטני ועורקי הכסל הנפוצים כלפי מטה לאורך אבי העורקים החזי.
13. חותכים את עורקי הכסל הנפוצים 1-2 מ"מ מתחת להתפצלותם, חותכים את הענפים הקטנים של אבי העורקים לאורך עמוד השדרה כדי לשחרר אותו, מנתקים את עורקי הכליה ליד הכליות, חותכים את שלושת כלי הענפים בצוואר מהקצוות הדיסטליים שלהם, ולבסוף חותכים את אבי העורקים העולה ליד הלב.
14. לפני ניתוח קשת אבי העורקים, הניחו אטם קטן בצבע כהה עם ניגודיות גבוהה לכלי הדם שמתחתיו וצלמו את אזור קשת אבי העורקים.
15. חתוך את רקמת הלב וחתוך את החצי התחתון של הלב לאורך מישור מקביל לפרוזדורים. תקן את הלב הקצוץ (איור 1A).

3. קיבוע וטיפול מקדים בקשת אבי העורקים

1. הכן מראש 1 מ"ל של תמיסת PFA 4% בצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל.
2. הכניסו את אבי העורקים לתוך הצינור וקבעו אותו לפחות 24 שעות בטמפרטורת החדר.
   הערה: ניתן לשמר את אבי העורקים ב-4% PFA עד חודש מבלי להשפיע על איכות צביעת Oil Red O. כדי לשמור על התצורה הרגילה שלה, הנחת הרקמה על גומי לפני הקיבוע יכולה להיות אפשרות מתאימה.
3. מעבירים את אבי העורקים לצלחת פטרי המכילה PBS כדי למנוע את התייבשותו. תחת סטריאומיקרוסקופ, השתמש במלקחיים ובמספריים קפיציים כדי להסיר בזהירות את כל השומן האדוונטיציאלי שנותר שלא הופשט לחלוטין במהלך הדיסקציה על מנת להפחית את ההפרעה לכימות הפלאק בתוך אבי העורקים.
4. השתמשו במספריים קפיציים כדי לחתוך בזהירות את אבי העורקים לאורך ציר האורך הפנימי שלו, ולאחר מכן חתכו ברצף את שלושת הענפים של קשת אבי העורקים לאורך הצד הצדדי עד לרמת העקמומיות של קשת אבי העורקים, מה שמאפשר לה להתפשט במלואה (איור 1C).
5. בשלב זה יש להשתמש בצבע O אדום שמן או לאחסן ב-4% PFA.

4. שמן אדום O מכתים את קשת אבי העורקים

1. מניחים את אבי העורקים החתוך לצלחת של 12 בארות. יש להוסיף 1 מ"ל של ddH₂O סטרילי לכל באר, ולשטוף במשך 5 דקות על שייקר, לחזור על הפעולה פעמיים.
2. הנח את צלחת 12 הבארות עם התמיסה שהוסרה במכסה אדים וייבש באוויר למשך 20 דקות עד שאין סימני מים גלויים.
3. הוסף 1 מ"ל של תמיסת עבודה Oil Red O שהוכנה טרייה לכל באר ונער במשך 20 דקות על השייקר, ולאחר מכן הסר את תמיסת העבודה Oil Red O.
4. הוסף 2 מ"ל של ddH₂O סטרילי לכל באר ושטוף במשך 5 דקות, חזור על שלב זה 3x. לאחר מכן, שמור את אבי העורקים ב-ddH₂O.
5. הנח את אבי העורקים על שקופית ופזר אותו מתחת לסטריאומיקרוסקופ. כדי לשפר את הניגודיות, הנח כרית גומי שחורה מתחת לשקופית.
6. הנח את השקופית על נייר לבן כדי לשפר עוד יותר את הניגודיות, עם סרגל לצידו, וצלם תמונה באמצעות מצלמה. כדי לשמור על לחות אבי העורקים, אחסן את אבי העורקים המטופל בצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל המכיל 1 מ"ל PBS.

5. ניתוח תמונה של קשת אבי העורקים

1. פתח את תמונת אבי העורקים שצולמה במחשב המצויד בתוכנת Image J.
2. בחר את האזור עם תיבה מלבנית, כגון 450 פיקסלים x 900 פיקסלים, המכיל את אבי העורקים כולו, ושמור אותו כתמונת .tiff חדשה.
3. פתח את תמונת .tiff החדשה שנשמרה בתמונה J. לחץ על ערוך > הפוך, ולאחר מכן בחר תמונה ולחץ על הקלד > מחסנית RGB.
4. עבור אל תמונה, לחץ על ערימות > ערימה לתמונות ולאחר מכן בחר את הירוק עם הניגודיות הטובה ביותר.
5. עבור אל תמונה, לחץ על התאם > בהירות/ניגודיות. שנה את הערך המינימלי לכ- 200, מזער את הרקע תוך שמירה על רקעים דומים עבור כל תמונה ולאחר מכן לחץ על החל.
6. עבור אל ניתוח ובחר הגדר מדידה. בחר/י ״אזור״, ״שבר שטח״, ״הגבל לסף ״ ו״ תווית תצוגה״ ולאחר מכן לחץ/י על ״אישור״.
7. עבור אל ניתוח, בחר מדידה והעתק את התוצאה לגיליון אלקטרוני.
8. עבור אל ניתוח, לחץ על כלי > מנהל החזר ROI ולאחר מכן בחר את חלק הקשת של אבי העורקים עם תיבה מלבנית. עבור אל מנהל החזר ההשקעה ובחר הוסף [t] ולאחר מכן מדוד. העתק את התוצאות הנמדדות לגיליון אלקטרוני.
9. לנתח את השטח שנמדד בקבוצות העכברים על סמך בדיקות נורמליות. p < 0.05 מצביע על כך שההבדל מובהק סטטיסטית.
   הערה: בחר את השיטה הסטטיסטית המתאימה בהתאם לתכנון הניסוי.

6. הטמעת פרפין של הלב

1. הסר את קודקוד הלב וודא שהחתך ישר ומיושר עם כיוון שורש המסתם (איור 1B).
2. הניחו כל דגימת לב בנפרד בקופסת הטמעת פרפין וסמנו את הקופסה בעיפרון.
3. במכסה האדים, הניחו את הקסטה המוטמעת בפרפין עם טישו בכלי ריק ושטפו את קופסת ההטבעה במים זורמים למשך 3 דקות.
4. בצע התייבשות רקמות באמצעות אתנול עם שיפועי ריכוז הולכים וגדלים כדלקמן: 50% אתנול למשך שעתיים, 75% אתנול למשך 30 דקות, 85% אתנול למשך 30 דקות, 95% אתנול למשך 30 דקות ו-100% אתנול למשך 10 דקות. חזור על השלבים על ידי החלפת אתנול בכל שלב.
5. בצע שקיפות רקמות עם קסילן באופן הבא: תערובת 1:1 של קסילן ואתנול למשך 20 דקות, קסילן למשך 15 דקות, חזור על זה 1x על ידי שינוי הקסילן.
6. ממיסים מראש את שעוות הפרפין בתנור בחום של 60 מעלות. טפל בדגימות בתערובת של קסילן ופרפין למשך 30 דקות, ולאחר מכן שעווה רכה של פרפין למשך שעתיים ולאחר מכן שעווה קשה של פרפין למשך שעה.
   זהירות: אתנול הוא ממס אורגני דליק ונדיף. קסילן רעיל במידה בינונית ודורש הגנה בעת השימוש.
7. הטמעת פרפין
   1. בחר את התבנית בגודל המתאים, הפעל אותה וחמם את מכונת ההטבעה מראש.
   2. לאחר הוספת שעוות פרפין מותכת לתבנית, חלצו את הרקמה מקלטת ההטבעה ומקמו אותה, כשפני השטח החתוכים שלה פונים כלפי מטה, בתחתית המרכזית של התבנית באמצעות מלקחיים שחוממו מראש.
   3. לאחר שהתבנית התקררה על שולחן מקפיא והפרפין שבתוכו התמצק, הניחו את מכסה קלטת ההטבעה המצוין על גבי התבנית ומלאו אותו בכמות הפרפין הדרושה.
   4. לאחר ששעוות הפרפין התקררה והתייצבה, הוציאו את הבלוק מהתבנית ושמרו אותו במקרר בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס (איור 1D).

7. קטעי פרפין של שורש אבי העורקים

1. נקה את כל עודפי הפרפין המקיפים את מכסה קלטת ההטבעה, ולאחר מכן הצמידו היטב את גוש הפרפין ל-clamp מושב הממוקם על ראש פורס הפרפין. כוונן את הבלוק למצב מעט מקוזז מהמקום שבו תיחתך הפרוסה, וודא שקטע הרקמה בתוך גוש הפרפין מקביל לקצה החיתוך של הלהב. עבור החתך הראשון, הגדר את עובי הפרוסה ל-10 מיקרומטר על מנת לחשוף את מיקום הרקמה.
2. כאשר החתך הראשון נמצא מתחת למיקרוסקופ, כוונן את עובי הפרוסה ל-6 מיקרומטר ובצע חתך סדרתי. חותכים, פורסים וקטפים קטעים בפורס עד ששלושה שסתומי אבי העורקים השלמים נראים מתחת למיקרוסקופ, ובשלב זה מתחילה ההכנה לחתך. השאירו פרוסה אחת במרווחים של 6 מיקרומטר לכל עכבר, והניחו מיקומי פרוסות שונים על מנשאי זכוכית שונים, למשלample, סעיף 1-11-21-31, כדי לקבל סקירה נכונה.
3. צף את החלקים על מפזר המכיל מים חמים של 37 מעלות צלזיוס כדי לפזר את הרקמה שטוחה ולאחר מכן הרם את הטישו בעזרת שקופית. לאחר המתנה לייבוש המים, מניחים את הפרוסות על טוסטר המכוון ל-42 מעלות למשך הלילה.
4. שטח הפלאק הממוצע של 8 החלקים הללו מייצג את הערך של שטח רובד השורש של אבי העורקים בכל עכבר. לאחר צביעת קטעים אלה, מדוד את שטח הפלאק הממוצע ואת שטח הפלאק.

8. מכתים המטוקסילין אאוזין

1. מניחים את הפרוסות במייבש בחום של 60 מעלות למשך 30 דקות. במכסה אדים, בעזרת מתלה מכתים, הניחו חלקים ברצף בקסילן למשך 10 דקות (חזרו על שלב זה פעם אחת, החליפו את הקסילן), 100% אתנול למשך 5 דקות (חזרו על שלב זה, החליפו את האתנול), 95% אתנול למשך 5 דקות, 85% אתנול למשך 5 דקות ו-75% אתנול למשך 5 דקות.
2. שוטפים במים זורמים למשך 5 דקות. טבלו את החלקים בכתם המטוקסילין למשך 8 דקות ושטפו תחת מים זורמים.
3. הבדיל בין החלקים עם אלכוהול חומצה הידרוכלורית 1% למשך מספר שניות ושטוף במים זורמים ושים לב שהחלקים הופכים לסגולים כחולים מתחת למיקרוסקופ.
4. טבלו את החלקים בתמיסת מכתים של אאוזין למשך 5 דקות. מניחים את החלקים ב-95% אתנול למשך 7 מטבלים ולאחר מכן ב-100% אתנול למשך 30 שניות.
5. נקה בקסילן למשך 30 שניות לפחות. אטמו את השקופיות באמצעות מסטיק ניטרלי, צלמו תחת מיקרוסקופ ושמרו תמונות ברזולוציה גבוהה, רצוי בפורמט .tiff.

9. מכתים של ורהוף-ואן גיסון (VVG).

1. בצע הסרת שעווה והתייבשות שגרתית על חלקי הפרפין, בצע את אותם השלבים המתוארים בסעיפים 8.1 ו-8.2.
2. לאחר שטיפה קצרה ב-70% אתנול, טבלו את החלקים בתמיסת צביעה של Victoria Blue'B למשך 15 דקות.
3. הבדיל בין החלקים לכמה שניות באתנול 95%. שוטפים את החלקים פי 2 במים מזוקקים.
4. מכתים את החלקים בתמיסת מכתים של Ponceau למשך 5 דקות על ידי מריחת טיפות. הבדיל וייבש את החלקים באמצעות 100% אתנול.
   הערה: לאחר צביעת פונסו, הימנע מכל מגע עם מים.
5. נקה בקסילן למשך 30 שניות לפחות. הרכיבו את השקופיות עם מסטיק ניטרלי וצלמו אותן תחת מיקרוסקופ.

10. ניתוח תמונה של רובד השורש של אבי העורקים

1. פתח את התמונה במחשב המצויד בתוכנת Image J. בחר אחד מכלי התיבה כדי להוסיף את הלוחית.
2. עבור אל תמונה, לחץ על שכבת-על > הוסף בחירה ולאחר מכן על מדידה כדי למדוד את שטח הלוח. העתק את התוצאות הנמדדות לגיליון אלקטרוני.
3. לנתח את השטח שנמדד בקבוצות העכברים על סמך בדיקות נורמליות. p < 0.05 מצביע על כך שההבדל מובהק סטטיסטית.

התוצאות המייצגות מדגימות את היישום של טכניקת הבידוד והניתוח עבור נגעי קשת אבי העורקים והשורש במודל עכבר טרשת עורקים. תוצאות אלו מספקות ראיות ברורות ליכולתה של הטכניקה לזהות ולאפיין נגעים טרשת עורקים. לדוגמה, תמונות היסטולוגיות עם כתמים ספציפיים (למשל, שמן אדום O) מדגישו?...

כאן, אנו מספקים מידע מפורט על שיטות הדגימה של אבי העורקים בעכברי נוקאאוט Ldlr וניתוח כמותי של פלאק.

הדיוק של הליך הדיסקציה הוא האתגר הטכני הגדול ביותר להפשטת אבי העורקים in vivo במודל העכבר של טרשת עורקים. בהתבסס על הניסיון שלנו, נקודות המפתח הן כדלקמן: (1) ה?...

אין מה להצהיר.

עבודה זו נתמכה על ידי בסיס המחקר המדעי של שנחאי פרונטירס לפעילות גופנית ובריאות מטבולית, תוכנית המחקר של פעילות גופנית ובריאות הציבור (0831) באוניברסיטת שנחאי לספורט, תוכנית מימון הכשרת מורים צעירים להשכלה גבוהה בשנחאי (A2-0213-22-0058-5), ותוכנית המנהיגים האקדמיים המצטיינים של ועדת המדע והטכנולוגיה העירונית של שנחאי (21XD1403200) עבור Longhua Liu.