世界卫生组织估计，这个星球上每四个人中就有一个感染了被称为蠕虫的寄生虫。我们的目标是了解针对蠕虫的保护性免疫反应是如何启动、调节和执行的。蠕虫在哺乳动物宿主体内存活了几十年，即使面临强烈的免疫反应，至少也足够长的时间进行繁殖。
我们现在开始了解这些寄生虫如何纵、逃避和抑制宿主的免疫反应以延长它们的生存时间。研究 Strongyloid Ratti 感染的一个挑战是这种寄生虫的特殊迁移，它主要通过组织到达头部和肠道。通过量化头部和肠道中迁移的幼虫，我们可以解剖不同部位的不同免疫效应物。
我们小组确定肥大细胞和基底区对于组织迁移是完全可有可无的，但对于从肠道中射出 S.ratti 至关重要。相比之下，中性场在肠道免疫中不起重要作用，但对于杀死组织中迁移的幼虫至关重要。在我研究 S.ratti 感染的性别差异期间，我观察到雄性和雌性小鼠的组织中迁移幼虫数量相似。
然而，我发现雄性小鼠肠道中的寄生虫数量比雌性小鼠高。这表明肠道免疫力在生物性别之间有所不同。首先，准备 Baermann 装置。
使用夹子将软管底部倾斜关闭，并在设备中注入温水，直到筛子浸没。将纸巾抹布放入筛子中，并用粪便木炭混合物填充。然后，打开位于 Baermann 装置正后方的灯，让活的 iL3 通过擦除主动迁移。
30 分钟后，短暂打开夹具，将沉淀的幼虫收集到 50 毫升的试管中，尽可能减少体积。然后，用含有 1% 青霉素链霉素的 PBS 填充 50 毫升试管。让幼虫在 4 摄氏度的重力作用下在试管底部沉淀 30 分钟，然后去除上清液。
第三次洗涤后，根据沉淀大小，将沉淀重新悬浮在 30-50 毫升 PBS 青霉素链霉素中。移液前，当 iL3 幼虫迅速沉淀时，搅拌溶液，并将一微升溶液滴到显微镜载玻片上。在倒置显微镜下以 40 倍放大倍率检查液滴。
确保 iL3 幼虫生动地移动。首先，使用 Baermann 装置在含有 1% 青霉素链霉素的 PBS 中制备 1000 或 2000 个 iL 3 幼虫。一旦 iL3 幼虫在重力作用下沉降，使用 0.5 毫升注射器尽可能完全吸出上清液，在试管中留下大约 30 μL。
通过轻弹试管或使用 0.5 毫升注射器重悬 iL3 悬液，并将剩余的悬液吸入注射器中。现在捡起老鼠的骷髅并固定一只后脚。皮下注射，将含有 iL3 幼虫的整个溶液以平角注射到脚垫中，然后慢慢缩回注射器。
用市售消毒剂喷洒安乐死、受感染小鼠的腹部和颈部。用剪刀剪开腹部的皮肤并将其向后拉，露出前腹壁。打开腹膜腔后，切开隔膜并向两侧打开肋骨，露出胸膜腔内的肺。
然后，将肺叶收集到一个 24 孔板中，板上标有大约 4 毫米的线条，每孔填充 1 毫升自来水。现在，将整个肺切成六块，每块大约 0.75 厘米 x 0.75 厘米。切掉鼠标的头部后，用手指去除皮肤和毛发，尽量减少肌肉组织的去除。
通过切开眼睛后面并纵向穿过头部中心，将整个头部分成四个部分。将前象限和后象限放入装有 2 毫升自来水的六孔板中。孵育后，最后一次旋转板，然后用镊子从孔中取出剩余的组织部分并丢弃。
在 40 倍倒置显微镜下计数孔中的所有幼虫。按照井底的线条进行作，以确保完整计数。将腹部区域浸泡在市售消毒剂中后，用剪刀剪开腹部的皮肤，然后将其向后拉，露出前腹壁。
做一个中线切口以打开腹膜腔。用剪刀在胃和近端十二指肠之间以及结肠和肛门之间剪开，以分离整个肠道。然后，用手指轻轻拉出肠道，将其放入装有自来水的培养皿中。
将肠段纵向切开，并在自来水中用力摇晃至少 10 秒，以洗掉粪便和粘液。将清洁后的肠切片转移到装有 20 毫升自来水的 50 毫升试管中并孵育。孵育 3 小时后，将肠道组织从水中去除。
将试管在室温下垂直放置，让寄生虫在重力作用下沉淀 30 分钟。吸出上清液，直到试管中剩余约 5 毫升水。用自来水重新填充试管，总体积为 25 毫升。
当悬浮液的可见度清晰时，吸出上清液，直到剩余约 5 毫升水。将此液体转移到每个小鼠肠道的两个孔中，在标有线条的 6 孔板中。在倒置显微镜下以 40 倍的放大倍数，沿着井底上绘制的线条移动，对成年雌性寄生虫进行计数。
感染后第一天首次在头部检测到幼虫，呈现均匀分布，还有一小部分也从肺部取出。感染后第二天，头部幼虫数量显著增加，头部平均有 174 只幼虫，肺部平均有 17 只幼虫。感染后第 3 天，头部的幼虫数量显著减少，到第 4 天没有从头部取出幼虫。
从感染后第 4 天开始，在肠道中检测到寄生虫，其中大部分位于十二指肠，空肠的前三分之二持续到第 6 天。到感染后第 7 天，大多数成虫位于盲肠中，它们一直持续到第 9 天，然后到第 11 天它们的数量开始显着下降。感染后第 14 天没有从肠道中回收寄生成虫，此时肠道寄生虫总数降至零。
首先，在感染后第 5 天和第 12 天，将感染了 Strongyloid ratti 的大鼠关在笼子里，笼子里有几层纤维素和最少的垫料。在感染后第 6 至 8 天和第 13 至 15 天，将大鼠转移到新鲜笼子中，并从旧笼子中收集所有粪便颗粒。将从一个笼子收集的粪便汇集到一个 50 毫升的试管中。
取预先浸泡过的活性炭，使用前清洗。将粪便与等量的预浸泡活性炭混合。将混合物对角线排列以形成梯度，并用额外的活性炭层覆盖，以达到 1 比 2 的最终比例。
然后，用透明薄膜盖住玻璃烧杯，确保打出气孔以允许空气流通。
