ארגון הבריאות העולמי מעריך שאחד מכל ארבעה אנשים על פני כדור הארץ נגוע בתולעים טפיליות הידועות בשם הלמינת'ס. אנו שואפים להבין כיצד התגובה החיסונית המגנה נגד הלמינת'ס מופעלת, מווסתת ומבוצעת. הלמינת'ס שורדים בתוך מארחי היונקים במשך עשרות שנים, לפחות מספיק זמן כדי להתרבות, אפילו כאשר הם מתמודדים עם תגובה חיסונית חזקה.
אנו מתחילים להבין כעת כיצד הטפילים האלה מתמרנים, מתחמקים ומדכאים את התגובה החיסונית של המארח שלהם כדי להאריך את הישרדותם. אתגר בחקר זיהום סטרונגילואידס ראטי הוא הנדידה המיוחדת של הטפיל הזה, שמתבצעת בעיקר דרך הרקמה לראש ולמעי. על ידי כימות זחלים נודדים בראש ובמעי, אנו יכולים לנתח אפקטורים חיסוניים שונים באתרים שונים.
הקבוצה שלנו קבעה שתאי פיטום ושדות בסיס ניתנים לוויתור לחלוטין על נדידת רקמות, אך הם חיוניים לפליטת S.ratti מהמעי. לעומת זאת, שדות ניטרליים אינם ממלאים תפקיד חשוב בחסינות המעי, אך הם חיוניים להרג זחלים נודדים ברקמה. במהלך המחקר שלי על הבדלים בין המינים בזיהום S.ratti, הבחנתי שגם לעכברים זכרים וגם לעכברים נקבות יש מספר דומה של זחלים נודדים ברקמה שלהם.
עם זאת, מצאתי מספר טפילים גבוה יותר במעי של עכברים זכרים בהשוואה לעכברים נקבות. זה מצביע על כך שחסינות המעיים משתנה בין המינים הביולוגיים. כדי להתחיל, הכינו את מנגנון ברמן.
בעזרת מהדק, סגור את תחתית הצינור בזווית אלכסונית ומלא את המנגנון במים פושרים עד שהמסננת שקועה. מניחים מגבון טישו במסננת וממלאים אותו בתערובת פחם הצואה. לאחר מכן, הפעל את האור הממוקם ישירות מאחורי מכשיר Baermann ואפשר ל-iL3 בר-קיימא לנדוד באופן פעיל דרך המגבון.
לאחר 30 דקות, פתח לזמן קצר את המהדק כדי לאסוף את הזחלים המיושבים לצינור של 50 מיליליטר, ולמזער את הנפח ככל האפשר. לאחר מכן, מלאו את שפופרת ה-50 מיליליטר ב-PBS המכיל 1% סטרפטומיצין פניצילין. הניחו לזחלים להתיישב בתחתית הצינור על ידי כוח הכבידה בארבע מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפני הסרת הסופרנטנט.
לאחר הכביסה השלישית, השעו מחדש את הגלולה ב-30-50 מיליליטר של סטרפטומיצין פניצילין PBS בהתאם לגודל הגלולה. מיד לפני הפיפטה, ערבבו את התמיסה כשזחלי iL3 מתיישבים במהירות והעבירו טיפה אחת של מיקרוליטר מהתמיסה לשקופית מיקרוסקופיה. בדוק את הטיפות תחת מיקרוסקופ הפוך בהגדלה של פי 40.
ודא שזחלי iL3 נעים בצורה חיה. כדי להתחיל, הכינו 1000 או 2000 זחלי iL3 ב-PBS המכילים 1% סטרפטומיצין פניצילין באמצעות מכשיר ברמן. לאחר שזחלי iL3 מתייצבים על ידי כוח הכבידה, השתמש במזרק של 0.5 מיליליטר כדי לשאוב את הסופרנטנט בצורה מלאה ככל האפשר, ולהשאיר כ-30 מיקרוליטר בצינור.
השעו מחדש את מתלה ה-iL3 על ידי הזזת הצינור או שימוש במזרק של 0.5 מיליליטר ושאפו את המתלה הנותר לתוך המזרק. עכשיו הרם את העכבר מהקשקוש ואבטח רגל אחורית אחת. באופן תת עורי, יש להזריק את כל התמיסה המכילה את זחלי iL3 לתוך כרית כף הרגל בזווית שטוחה ולאחר מכן למשוך לאט את המזרק.
רססו את הבטן והצוואר של העכבר הנגוע בהמתת חסד בחומר חיטוי מסחרי. בעזרת מספריים, חותכים את העור מעל הבטן ומושכים אותו לאחור כדי לחשוף את דופן הבטן הקדמית. לאחר פתיחת חלל הצפק, חותכים את הסרעפת ופותחים את הצלעות לשני הצדדים כדי לחשוף את הריאות בחלל הצדר.
לאחר מכן, אספו את אונות הריאה לצלחת של 24 בארות המסומנות בקווים מצוירים או מודפסים באורך של כארבעה מילימטרים וממולאים במיליליטר אחד של מי ברז לבאר. כעת, חותכים את הריאה כולה לשש חלקים, כל אחד כ- 0.75 סנטימטרים על 0.75 סנטימטרים. לאחר כריתת ראש העכבר, הסר את העור והפרווה בעזרת האצבעות, תוך מזעור הסרת רקמת השריר.
נתח את הראש השלם לארבעה רבעים על ידי חיתוך מאחורי העיניים ולאורך דרך מרכז הראש. הנח את הרבעים הקדמיים והאחוריים בצלחת של שש בארות המכילה שני מיליליטר מי ברז. לאחר הדגירה, סובבו את הצלחות בפעם האחרונה, ואז הסירו את חלקי הרקמה הנותרים מהבארות בעזרת מלקחיים והשליכו אותם.
ספרו את כל הזחלים בבארות תחת מיקרוסקופ הפוך פי 40. עקוב אחר הקווים בתחתית הבאר כדי להבטיח ספירה מלאה. לאחר השריית אזור הבטן בחומר חיטוי מסחרי, חותכים את העור מעל הבטן במספריים ומושכים אותו לאחור כדי לחשוף את דופן הבטן הקדמית.
בצע חתך בקו האמצע לפתיחת חלל הצפק. בעזרת מספריים חותכים בין הקיבה לתריסריון הפרוקסימלי וכן בין המעי הגס לפי הטבעת כדי לנתק את כל המעי. לאחר מכן, בעזרת האצבעות, משוך בעדינות את המעי והניח אותו בצלחת פטרי המכילה מי ברז.
חותכים את חלקי המעי פתוחים לאורך ומנערים אותם במרץ במי ברז למשך 10 שניות לפחות כדי לשטוף צואה וריר. העבירו את חלקי המעיים הנקיים לצינורות של 50 מיליליטר המכילים 20 מיליליטר מי ברז ודגרו. לאחר שלוש שעות דגירה, הסר את רקמת המעי מהמים.
הניחו את הצינורות אנכית בטמפרטורת החדר ואפשרו לטפילים לשקוע על ידי כוח הכבידה למשך 30 דקות. שאפו את הסופרנטנט עד שיישארו כחמישה מיליליטר מים בצינור. מלאו את הצינור במי ברז לנפח כולל של 25 מיליליטר.
כאשר הראות של המתלים ברורה, שאבו את הסופרנטנט עד שיישארו כחמישה מיליליטר מים. העבירו את הנוזל הזה לשתי בארות לכל מעי עכבר בצלחת של שש בארות המסומנות בקווים. ספרו את הטפילים הבוגרים תחת מיקרוסקופ הפוך בהגדלה של פי 40 על ידי תנועה לאורך הקווים המצוירים על קרקעית הבאר.
הזחלים זוהו לראשונה בראש ביום הראשון לאחר ההדבקה, והראו פיזור אחיד, כאשר חלק קטן נלקח גם מהריאות. מספר הזחלים בראש גדל משמעותית ביום השני לאחר ההדבקה, עם ממוצע של 174 זחלים בראש ו-17 זחלים בריאות. מספר הזחלים בראש ירד באופן ניכר ביום השלישי לאחר ההדבקה, כאשר לא נלקחו זחלים מהראש ביום הרביעי.
טפילים התגלו במעי מהיום הרביעי לאחר ההדבקה, כאשר רובם ממוקמים בתריסריון ושני השלישים הראשונים של הג'ג'ונום נמשכו עד היום השישי. ביום השביעי לאחר ההדבקה, רוב הטפילים הבוגרים היו ממוקמים בצקום, שם הם המשיכו להתקיים עד היום התשיעי, לפני שמספרם החל לרדת משמעותית ביום ה-11. אף בוגרים טפילים לא הוצאו מהמעי ביום ה-14 לאחר ההדבקה, ומספר טפילי המעיים הכולל ירד לאפס בנקודת זמן זו.
כדי להתחיל, החזיקו חולדות נגועות בסטרונגילואידס ראטי בכלובים עם מספר שכבות של תאית והמלטה מינימלית בימים החמישי וה-12 לאחר ההדבקה. בימים 6 עד 8 ו-13 עד 15 לאחר ההדבקה, העבירו את החולדות לכלובים חדשים ואספו את כל כדורי הצואה מהכלובים הישנים. אסוף את הצואה שנאספה מכלוב אחד לצינור יחיד של 50 מיליליטר.
קחו את הפחם הפעיל שהושרה מראש ושטפו אותו לפני השימוש. ערבבו את הצואה עם פחם פעיל ספוג מראש בכמויות שוות. סדרו את התערובת באלכסון ליצירת שיפוע וכסו אותה בשכבה נוספת של פחם פעיל כדי להגיע ליחס סופי של 1 עד 2.
לאחר מכן, מכסים את הזכוכית בסרט שקוף, ומוודאים כי חורי האוויר עשויים כדי לאפשר זרימת אוויר תקינה.
