LarvaSPA 是第一个允许连续活化活化活的活虫幼虫超过10小时，具有高时空分辨率的方法。此方法用于揭示幼虫周围感觉神经元的动态细胞过程，并研究发生在幼虫体壁附近的许多其他细胞过程。这种方法使用方便，对幼虫大小的限制较小。
可同时在成像室中安装六至九只幼虫，使实验成为可能。PDMS 长方体成像室可以以最低的成本制造，并且可重复使用。这种方法对于研究树突发育和树突退化的机制特别有用，使用嗜生幼虫树突授权神经元。
能够对同一神经元进行数小时成像可以揭示树突模式的长期全球变化如何产生于单个分支级别的短期行为。使用与幼虫大小相匹配的PDMS长体将增加幼虫固定成功率。请在故障排除部分找到更多有用的磁带。
从机器车间构建铝块后，使用带紫外线胶的长盖滑封住金属框架的底部。使用手持式紫外线灯治疗紫外线线索 30 秒。将包装胶带层连接到矩形培养皿或圆形细胞培养板的内表面。
使用一层作为第二个星内幼虫，两层用于早期第三颗星内幼虫，三层用于晚期第三星幼虫。用剃须刀刀片将胶带切成特定宽度的行程，一层胶带为 1.5 毫米，两层或三层胶带为 2 毫米。在两条条之间至少留下五毫米的空间。
拆下覆盖空间的胶带层。使用胶带清除板内表面的灰尘。之后，模具即可使用。
要准备 PDMS 混合物，请将 7 克 PDMS 基在 0.7 克固化剂中彻底混合在一个小容器中。将容器放入真空干燥器中至少 15 分钟，以清除混合物中的空气。缓慢地将约 5.5 克 PDMS 混合物倒入模具，达到 1 到 2 毫米的厚度。
将 PDMS 混合物再次放入真空干燥器中至少 15 分钟，以清除混合物中剩余的气泡。用移液器尖端打破最后几个气泡。在65摄氏度的热培养箱中，在平坦的表面上固化PDMS两小时。
接下来，使用剃须刀刀片沿模具边缘松开固化的 PDMS，然后将其从模具中分离出来。在室温下将 PDMS 存放在两块大胶带之间。对于早期和晚期的第三颗星幼虫，通过将胶带带创建的凹槽定位在长边长侧的中心，将 PDMS 切成八比一毫米的长方体。
对于第二个星体幼虫，将长方体一毫米切成八毫米。要准备安装顶盖滑，请选择六个 PDMS 长方体，其凹槽与幼虫的大小相匹配。用胶带清除 PDMS 表面的灰尘。
将四块尺寸为 12 到 5 毫米的双面胶带安装到 22 到 50 毫米的长盖上，用于以后固定 PDMS 长方体。将两块双面胶带之间的空间调整为与 PDMS 凹槽宽度相同的空间。将一小滴紫外线胶放入每个 PDMS 长方体凹槽中，并在盖滑的双面胶带之间的空间中加入六小滴 UV 胶。
要准备幼虫的安装，使用一对钳子，清洁水中的幼虫，以去除身体表面的食物。将干净的幼虫放在一小块湿润的纸巾上，放在没有盖子的小培养皿中，然后将小培养皿放入含有一块干纸巾的大培养皿中。在化学罩中，使用塑料转移移液器将 160 至 240 微升异氟兰涂抹在干纸巾上，然后合上大型 Petri 盘的盖子。
在监测幼虫时等待两到三分钟。一旦他们的嘴钩停止移动，从大培养皿中拿出幼虫。将固定化的幼虫放在盖滑双面胶带之间的 UV 胶水上，而后侧角质层面向盖滑。
用 PDMS 块盖住每个幼虫，将幼虫的树干放入 PDMS 的凹槽中。将幼虫的头部和尾部留在 PDMS 槽外。避免用胶水阻挡幼虫的螺旋。
按下 PDMS 块的末端，无需在凹槽上施加力即可将双面胶带压上。轻轻拉上幼虫的尾巴，将 PDMS 下的角质层压平。戴上安全眼镜，使用手持式紫外线灯在高设置下固化紫外线胶四分钟。
将盖滑倒置，使用紫外线灯再固化紫外线胶四分钟。将一张尺寸为 15 到 30 毫米的小镜头纸放在成像室的底部。用20到30微升的水润湿纸张。
将盖滑放在腔室上，使幼虫朝向腔室内部。使用 UV 胶水将盖板的两端粘附在金属表面。幼虫的后侧准备在共和显微镜下成像。
成像后，使用透镜纸取出顶盖滑上的机油。用剃须刀切割到盖滑和金属框架之间的空间，将顶盖滑从金属框架中分离。成像室已准备好重复使用。
用钳子将 PDMS 长极性从顶盖滑道上拆下。将 PDMS 长方体卷到胶带上，以去除胶水残留物和灰尘。PDMS 长方体已准备好重复使用。
在该协议中，嗜血幼虫被固定超过10小时进行连续成像。这个数字显示了六个晚三星幼虫安装在室内。幼虫的躯干是固定的，而它们的头和尾巴可以自由移动。
在这里，我们演示了LarvaSPA在研究神经元树突动力学和树突变性方面的应用，以四类DA神经元为模型。为了使用这种方法成功地固定幼虫，一旦嘴钩停止移动并治愈紫外线胶，在幼虫完全觉醒之前，停止将幼虫暴露在异氟中至关重要。为了研究树突变性和再生，当幼虫在成像室中固定时，可以进行激光损伤。
LarvaSPA 帮助我们了解动态生长的树突如何不能像肝细胞蛋白细胞那样内皮表皮细胞，以及磷酸盐素在激光损伤后如何暴露在退化的树突上。使用紫外线灯时，用安全眼镜保护眼睛。使用异氟兰的幼虫应在烟罩中进行。
