⁶⁸个 Ga-labeled Nano 分子的放射性合成、质量控制和小动物正电子发射断层扫描成像

本文描述了一种新的放射性标记探针（即 ⁶⁸Ga标记的纳米抗体 NM-02）的放射性合成、配方、质量控制，以及它在异种移植模型中用于小动物 PET/CT 成像。

小动物正电子发射断层扫描 （PET） 和单光子发射计算机断层扫描 （SPECT） 成像技术在临床前癌症研究中至关重要，因此需要密切关注放射性示踪剂合成、质量保证和 体内 注射方案。本研究提出了一种全面的工作流程，旨在提高小动物 PET 实验的稳定性和可重复性。详细介绍了放射化学实验室使用 ⁶⁸Ga 的合成过程，强调了每种放射性示踪剂生产的严格质量控制和保证协议。浓度、摩尔活性、pH 值和纯度等参数受到严格监测，与适用于人体研究的标准一致。该方法引入了简化的注射器制备和定制设计的 30G 套管，用于对小鼠进行精确的静脉注射。在扫描过程中监测动物的健康状况，包括体温和心率，确保它们在整个过程中的健康。PET 和 SPECT 扫描的剂量是预先确定的，以平衡数据采集与最大限度地减少对动物和研究人员的辐射暴露。同样，CT 扫描采用预编程设置来限制辐射暴露，尤其是在评估治疗效果的长期研究中。通过优化这些步骤，该工作流程旨在标准化程序，减少变异性，并提高小动物 PET/SPECT/CT 成像的质量。该资源为寻求提高分子成像临床前研究的准确性和可靠性的研究人员提供了宝贵的见解，最终推动了该领域的发展。

一个最相关的主题是乳腺癌领域的研究。乳腺癌仍然是一种频繁发生的癌症，约占女性所有癌症的 1/3。治疗是根据肿瘤的生物学和组织学特征以及疾病的阶段量身定制的。除非肿瘤已经转移，否则生存机会通常很好，在这种情况下，5 年生存率仅为 30% ^左右1。其他妇科癌症也遭受类似的命运，例如，卵巢癌的 1 期肿瘤的 5 年生存率> 95%，但转移性 4 期肿瘤的 5 年生存率仅为 15% ^2,3。

无创成像，尤其是正电子发射断层扫描 （PET），一直在改变癌症研究，因为它为肿瘤分子方面提供了无与伦比的见解，例如新陈代谢、受体表达和治疗反应 ^4,5,6。它允许对特定代谢区域进行可视化和量化 - 不仅可以准确诊断，还可以在非常短的时间内监测（新）疗法的效果。事实上，PET 允许在 1-3 个治疗周期后评估反应与无反应，并且与经典计算机断层扫描 （CT） 成像所见的形态变化相比，PET 可以更好、更快地做到这一点⁷。PET 的非侵入性也使纵向研究成为可能。

任何动物模型都需要最大程度的标准化，以便彻底评估新（放射性）药物的治疗能力，因此必须强调这一点 - 无论是在肿瘤模型的生成还是在小动物 PET 成像/数据分析中。人们可以争论动物中最好的肿瘤模型（皮下接种或原位植入、小鼠、人类或同基因肿瘤，伴有或不伴有常规临床护理），但这超出了本出版物的目标。我们使用了几种模型进行癌症研究，这里描述的是一种相对简单的皮下模型。

放射化学的质量控制对于动物安全和治疗效果至关重要。这不仅影响放射性药物本身，还影响产品配方。关于临床应用放射性药物的生产有广泛的立法 ^8,9（有关当前立法和指南的广泛概述，请参见 ¹⁰），以及关于用于临床前研究的放射性药物特性的几项指南（有关广泛概述，请参见 ¹¹）。我们生产用于临床和临床前应用的放射性药物，简化了从临床应用合成中的高端质量控制到临床前应用的转化。

我们的研究重点是定向治疗诊断学，尤其是人表皮生长因子受体 2 （HER2） 阳性癌症。因此，我们开发了新的放射性药物来诊断和监测治疗期间的癌症。成功的诊断放射性药物也被评估为使用不同放射性同位素的治疗化合物。这些放射性药物的评估首先在动物模型中进行，在有希望的临床前结果后力争进行临床转化。在本文中，我们将介绍用于确保质量控制和保证的方案，以一种放射性药物为例，以及小鼠静脉注射和 PET/CT 扫描的标准做法，以提高分子成像临床前研究的准确性和可靠性。该方案分为三个不同的部分：放射化学（示踪剂合成和质量控制）、动物模型生成（皮下肿瘤模型）和成像。

研究方案遵守动物福利的最高标准，并严格遵守亚琛工业大学医院的动物护理指南。我们致力于确保所有参与研究的动物得到道德和人道的待遇，并且这些程序由当地动物伦理委员会审查和批准。所有动物实验均已获得德国主管机构 （Landesamt für Natur， Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen， LANUV） 的批准，以遵守《动物保护法》以及用于实验和其他科学目的的动物保护法规。

注： 材料表中提供了整个研究中使用的设备、材料和试剂的完整列表。需要注意的是，应尽可能使用移液器处理 ⁶⁸Ga，并且当然要避免使用任何金属，因为铁会大大降低标记产量。这意味着在放射化学程序完成之前，必须避免使用针头。

1. 放射化学

1. NM-02-DOTA-GA 的 ⁶⁸Ga 放射性标记
   注意：该协议涉及放射性物质的处理和作。研究人员必须遵守当地有关处理放射性物质的法规、ALARA（尽可能低）做法，使用铅屏蔽，尽量减少直接接触时间，并在辐射暴露的每个步骤中保持最大距离。必须使用放射性检测设备监控实验程序。
   1. 在 10 mL 0.6 M HCL （1.2 GBq/10 mL） 中手动或自动洗脱 ⁶⁸Ge/⁶⁸Ga-Generator。将洗脱液穿过小柱，将 ⁶⁸Ga 捕集在 PS-H⁺ 小柱（尺寸 M - 0.8 mL）上。用总共 1 mL 的 4 M NaCl 逐步缓慢洗脱 PS-H⁺ SPE 小柱到微量离心管中。
   2. 丢弃前 0.3 mL 洗脱液，将剩余的 0.7 mL 收集在另一个微量离心管中。
   3. 取新的微量离心管，按照制造商方案中的说明进行 NM-02-DOTA-GA 的放射性标记。
      注意：纳米抗体 - 螯合剂偶联物 （NM-02-DOTA-GA） 先前根据供应商的方案制备。偶联物可以在 -80 °C 下分装储存数月。
   4. 使用最多 5 μL 的 3 M NH₄OAc 将产品的 pH 值调节至 7 左右。
2. 质量管理
   1. 使用活性计以正确的设置（⁶⁸Ga 同位素;1 mL 注射器，0.1 mL 几何结构）测量微量离心管中浓缩样品的活性。放射化学产率（衰变校正）应至少为 40%。
   2. 通过在 pH 试纸 （10-15 μL） 上点样足量，用 pH 试纸 （0-14） 测定 pH 值。
   3. 薄层色谱 （TLC）
      1. 在二氧化硅浸渍的 TLC 条上点 1 μL 放射性标记反应混合物。让等分试样干燥约 1 分钟。在封闭的 TLC 室中使用柠檬酸作为流动相，预填充约 2-3 mm，运行 TLC。当液体到达条带顶部时，从腔室中取出 TLC 条带。
      2. 将 TLC 条放在无线电 TLC 扫描仪上，并根据制造商的协议进行测量。产物应出现在原点 （R_f < 0.2），而游离的 ⁶⁸Ga 阳离子将与溶剂前沿一起洗脱 （R_f > 0.9）。
      3. 通过使用放射色谱图计算反应的放射性标记产率，将 R_f 0.0-0.2 的积分曲线下面积 （AUC） 除以总 AUC （R_f 0.0-1.0），然后乘以 100。
   4. 高效液相色谱 （HPLC）
      1. 确保 HPLC 已使用正确的溶剂运行至少 10 分钟，以便所有管路都充满并调整测量设置。使用乙腈（溶剂 A）的 50：50 混合物和 0.9% NaCl 溶液 （980 mL） 与三氟乙酸 （1 mL） 和柠檬酸盐溶液 （20 mL） 的混合物的等度流作为溶剂 B。测量 280 nm 处的紫外吸光度。
      2. 取 5 μL 产品，用 15 μL 0.9% NaCl 稀释。在分析放射性 HPLC（5 μm SEC-s2000 154 Å 色谱柱;流速：2 mL/min）中注入 15 μL 混合物。
      3. 使用乙腈（溶剂 A）的 50：50 混合物和 0.9% NaCl 溶液 （980 mL） 与三氟乙酸 （1 mL） 和柠檬酸盐溶液 （20 mL） 的混合物的等度流作为溶剂 B。测量 280 nm 处的紫外吸光度。UV 通道和 Gamma 通道之间的保留时间存在微小变化;这是由于 HPLC 的设计（伽马信号串联安装在 UV 检测器之后）。
      4. 通过在 γ 通道中对峰进行积分来确定放射化学纯度。该产品应在先前通过测量非放射性标记纳米抗体确定的积分范围内。此外，对 γ 通道中的所有其他峰进行积分，并将其作为杂质进行评估。纯度应为 >95%。
   5. 内毒素
      1. 使用（经认证的）无内毒素水稀释产品，以 1：20 的比例稀释总体积为 150 μL。
      2. 将一次性内毒素小柱（市售预装了所有必需试剂）插入内毒素检测仪中，并在每个小柱腔中加载 25 μL 稀释产品。
      3. 按 Play（播放）。PTS 具有内部阳性和阴性对照，并将包含在最终报告中。测试大约需要 15 分钟。如果内毒素含量< 8.7 EU/mL，且 V_max = 20 mL，则认为该产品不含内毒素。
   6. 回顾性无菌
      1. 注射和收集质量样品后，将放射性药物储存在 4 °C 冰箱中的无菌小瓶中。
      2. 如果未超过 10、⁵ Bq 或 10 Bq/g 的豁免限值，则将样品交给经认证的无菌分析机构（内部或外部公司），以便根据¹² 进行无菌测试。
3. 注射器制备（每只动物 1 只）
   1. 使用正确设置的活性计（同位素为 ⁶⁸Ga;1 mL 注射器，几何结构为 0.1 mL）测量产品的活性。
   2. 在微量离心管中取 15 MBq 产品（约 25 μL），并用 0.9% NaCl 填充体积至 75 μL。
   3. 向注射器中加入 50 μL，并使用活性计以正确的设置进行测量（⁶⁸Ga 同位素;1 mL 注射器，0.1 mL 几何）。注射器应包含 10 MBq 的产品。
      注意：一旦形成 ⁶⁸Ga标记的纳米抗体 NM-02，处理 ⁶⁸Ga时就不再需要塑料移液器吸头。从这里开始，每当方案提到处理液体时，请使用合适的注射器 （1 mL） 和针头 （27-30G）。

2. 动物模型生成

1. 动物饲养
   1. 使用 6-8 周龄的雌性免疫缺陷 Rj：ATHYM-Foxn1^nu/nu 小鼠（来自商业供应商）发展皮下肿瘤。到达后，将所有小鼠直接安置在动物房间中，并在运输后至少 1 周进行环境适应。
   2. 将动物饲养在 12 小时光照/12 小时黑暗循环下，并免费提供食物和水。将室温和相对湿度分别保持在 20-25 °C 和 45%-65% 之间。
2. 植入细胞的准备
   1. 从 1 x 10⁶ 个 SKOV-3 细胞开始细胞培养，并在 T175 细胞培养瓶中加入 25 mL 富含 10% FBS 和 1% 青霉素/链霉素的预热 DMEM/F12 培养基。
   2. 在 37 °C 和 5% CO₂ 的培养箱中培养细胞，每周至少更换 2 次完全培养基。
   3. 在细胞植入前 1 周或最迟 1 天，从细胞培养瓶中取出 20 μL 培养基以检测支原体¹³。仅使用支原体阴性细胞进行细胞注射。
   4. 在细胞注射当天，吸出完全培养基并将 5 mL PBS 移液到瓶中。来回旋转瓶子数次，以洗掉剩余的培养基。
   5. 向培养瓶中加入 3 mL 胰蛋白酶，并在培养箱中于 37 °C 和 5% CO₂ 孵育 4 分钟以解离细胞。在显微镜下用 40 倍放大倍率检查细胞是否从细胞培养瓶中分离。
   6. 加入 7 mL 培养基以中和胰蛋白酶活性，并将细胞悬液转移至 50 mL 离心管中。
   7. 将细胞以 150 x g 离心 5 分钟（在室温下）以获得细胞沉淀。去除上清液并加入 1 mL 培养基以重悬细胞。
   8. 在微量离心管中取 12 μL 细胞悬液，加入等量的台盼蓝。向血细胞计数器室中加载 10 μL 仔细混合的细胞悬液。
   9. 对定义区域内未染色的活细胞进行计数并计算细胞数。将细胞浓度调节至 5 x 10⁷ 个细胞/mL 培养基，并小心地将细胞悬液与 1 mL 基底膜基质混合。
   10. 在每只小鼠的 1 mL 胰岛素注射器中，在 0.2 mL 细胞培养基和 50% 基底膜基质中取 5 x 10⁶ 个细胞。将注射器保持在冰上直至注射，以防止基底膜基质凝固。
       注：如果小鼠体重低于 20 g，则仅注入 150 μL（15-20 g）或 100 μL（10-15 g）混合物。对于皮下应用，应注意确保 GV-SOLAS 推荐的 10 mL/kg 体重的最大体积不超过¹⁴。
3. 接种和随访
   1. 用一只手固定颈部和尾巴，将细胞悬液皮下注射到清醒动物的侧面。通常，我们更喜欢在左侧进行注射。
   2. 等待 10-15 秒，让基底膜基质变硬，然后取出针头。
   3. 植入后每天使用数字卡尺监测肿瘤生长，以测量两个垂直的肿瘤轴。
   4. 使用这些测量值，使用由以下公式计算的肿瘤体积评估肿瘤生长：
      _{VT =} L × B² × π / 6
      其中 VT 是肿瘤体积，单位为^{mm 3，L} 是肿瘤长度，单位为 mm（即两个垂直轴中的较大者），B 是肿瘤的宽度，单位为 mm（即两个垂直轴中较小的一个¹⁵）。 这种技术往往高估了肿瘤体积，因为它还包括皮肤。
   5. 在电子秤上测量时，肿瘤质量会影响小鼠的体重。要计算校正肿瘤质量的动物的体重，请使用以下公式：
      m_{鼠标 - T} = m_鼠标 - 0.82 × V_T
      其中 m_mouse-T 是小鼠体重（不包括以 g 为单位的肿瘤质量），m_mouse 是根据电子刻度以 g 为单位的小鼠体重，_T 是以 mm³ 为单位计算的肿瘤体积。数字 0.82 g/mm³ 来自从先前的动物实验中分离的一系列肿瘤的平均值，称重并使用给定的公式确定其体积。它代表平均肿瘤密度。
   6. 此外，确定肿瘤与小鼠相比有多大，并使用以下公式监测肿瘤负荷：
      肿瘤负荷 [%] = （0.82 × V_T） / m_小鼠 × 100
      其中肿瘤负荷以百分比表示，0.82 × VT 对应于以 g 为单位的肿瘤质量（即，VT，以 mm³ 为单位的计算肿瘤体积，乘以平均肿瘤密度），m_小鼠是根据以 g 为单位的量表的小鼠体重。
   7. 当动物的肿瘤体积达到超过 200 mm³ 时，根据实验安排它们进行无创 PET/CT 或 SPECT/CT。

3. 成像

1. 注射器制备（定制系统）
   注意：老鼠尾巴很小;因此，需要使用 27G 或更小的套管（较大的数字对应于较小的针头）。在雌性小鼠的情况下，唯一可进行推注的静脉是三尾静脉。从解剖学上讲，与两条侧静脉相比，背尾静脉更靠近脊柱;不要在此静脉注射，以避免医源性骨刮伤。根据经验，使用 30G 套管可提供最佳效果，因为也可以进入较小的静脉。由于无法购买 30G 导管，因此这种导管需要研究人员小心制作。
   1. 根据计划的给药途径，准备带有放射性示踪剂的注射器。对于静脉注射，确保 25 g 小鼠的最大体积为 5 mL/kg 体重;这意味着最大进样体积为 125 μL。
   2. 要准备 30G 导管，首先，使用任何 30G 针头并用金属剪刀或将其从塑料上弯曲取出金属针杆。
   3. 手动将直径为 0.3 mm 的 PE10 管插入从轮毂上拆下的轴部分。必须小心避免穿孔管。
      注意：也可以使用其他类型的塑料;然而，PE10 在壁刚度和柔韧性之间提供了最佳平衡。
2. 静脉注射
   注意：清醒的动物也可以进行静脉注射;但是，如果不需要，则必须在异氟醚镇静下注射动物，以减轻研究动物的负担。
   1. 用 0.9% NaCl 缓冲液或任何其他所需的缓冲液填充 30G 导管。
   2. 将鼠标置于感应室中，并不断用氧气（或医用级加压空气）和气态异氟醚的混合物填充，直到动物失去扶正反射。对于诱导，使用 3.5%-5% 异氟醚和 0.8 L/min 的氧气或空气流量。
   3. 立即将镇静小鼠置于加热垫 （37-38 °C） 上的初始腹侧位置，同时仍通过鼻锥保持异氟醚镇静。经常检查小鼠是否有过热迹象（例如，过度拉伸、呼吸急促、皮肤发红）。为了维持麻醉，使用 1.8%-2.5% 异氟醚，氧气或空气流量为 0.8 L/min。
   4. 将眼药膏涂抹在动物的眼睛上，以防止在镇静过程中干燥。检查两侧外侧尾静脉并选择最好的注射。必须考虑静脉的能见度和直径。为获得最佳效果，请轻轻旋转尾部，使所选静脉与加热垫接触，并让静脉扩张 1 分钟。
   5. 将整个鼠标转到横向位置，使所选静脉向上。用胶带固定尾巴的尖端和底部。
   6. 用惯用手取出 30G 导管，将非惯用手的食指轻轻放在选定的静脉上，以在内部形成血液备份。在备份部位，静脉会扩张，形成一个小驼峰。
   7. 用惯用手，将 30G 导管平行于尾部，面向静脉上的驼峰。将惯用手向前移动。大多数情况下，这种技术可以确保直接静脉穿刺。
   8. 一旦进入静脉，塑料管中的血液反流就会变得明显。固定塑料管以确保注射过程中针头不会在静脉内移动。在试管的自由端，插入连接到 30G 针头的示踪注射器。
      注意：当需要评估示踪剂的动态分布时，在将动物放在 PET 扫描仪床上并启动 PET 后，需要执行以下几点。
   9. 缓慢注入示踪注射器的内容物至少 10 秒。在保持 30G 针头仍连接到 30G 导管系统的同时，仅取出示踪注射器，并连接含有 0.9% NaCl 缓冲液（或任何其他所需缓冲液）的注射器以冲洗导管。在注射过程中持续监测呼吸并调整异氟醚浓度以保持大约每秒 1 次呼吸。
   10. 从尾静脉中取出 30G 导管，并使用无菌棉敷布止血。
   11. 要测量剩余活性，请测量 30G 导管、缓冲液注射器、空示踪剂注射器和棉布，因为它们都含有少量未到达动物的示踪剂。
3. PET/CT 采集
   注意：对于 ⁶⁸Ga标记的纳米抗体 NM-02，所有动物都用小动物 PET / CT 系统成像。
   1. PET 采集
      1. 将镇静小鼠置于动物床上的腹侧位置，并将其连接到 PET 扫描仪上。将异氟醚流向 PET 上的鼻锥，并在医用空气中以 0.8 L/min 的速度保持在 1.5%-2.5% 的异氟醚，以便动物在扫描期间的呼吸频率在每分钟 75 到 50 次呼吸之间。
      2. 用医用胶带将老鼠脖子后面固定在动物床上。如有必要，再次将眼药膏涂抹在小鼠的眼睛上，以防止在镇静过程中干燥。
      3. 将动物床中的加热垫打开至 80% 左右的功率，相当于 30 °C 左右。
      4. 将采集时间设置为 45 分钟，然后选择要扫描的 感兴趣区域 。选择 ⁶⁸Ga 作为研究同位素并开始扫描。输入空注射器的注射活性量、注射时间和测量时间。一个 PET 床位置为 160 毫米，对于小鼠全身扫描来说已经足够长了。
      5. 当需要评估示踪剂的动态分布时，首先开始 PET 扫描，等待 30 秒进行采集，然后才继续执行步骤 3.2.9-3.2.10。将导管留在小鼠体内，并连接缓冲注射器以避免进一步失血。在 CT 采集之前，可以在 PET 末端断开导管，以避免伪影。
   2. CT 采集
      1. 断开动物床与 PET 扫描仪的连接，并立即将其连接到 CT 扫描仪。如果需要，还要从尾静脉上拆下套管。静脉穿刺后至少 30 分钟后，注射部位已经凝固，因此不会再发生出血。
      2. 将异氟醚流向 CT 扫描仪中的鼻锥。
      3. 选择要扫描的相同感兴趣区域以进行 PET 成像。选择标准采集协议：440 μA、50 kVp、32 ms 曝光时间和螺旋模式下的 1080° 旋转，曝光次数为 960 次/360°;对于全身小鼠扫描，CT 扫描的持续时间约为 7 分钟。
      4. 控制呼吸频率，打开动物床内的加热垫。在扫描过程中持续监测呼吸并调整异氟醚浓度，以将呼吸频率保持在每分钟 75 到 50 次呼吸之间。

4. 动物护理后成像

1. 扫描结束时，动物至少需要 15 分钟才能醒来。为避免同窝伴侣的攻击性，将动物单独关在笼子里约 15 分钟，或直到它能够自己行走，直到将其放回原来的笼子里。在此期间，使用红外线以避免体温过低。
2. 最初，将动物放在左侧（安全位置）以避免血流动力学休克。让眼药膏留下来，因为一旦它醒来，它就会被动物自己去除。

5. PET/CT 重建

1. 使用 3 维有序子集期望最大化（即具有 30 次迭代的 OSEM-3D）进行 PET 重建，能量窗口为 15%，从 511 keV 的峰值到 0.4 mm 的等距体素大小± 19×2 × 384 矩阵中。将基于 CT 的校正（即衰减校正、散射校正、死时间和随机事件）应用于 PET 重建。
2. 如果需要评估示踪剂的动态分布，请应用多帧重建。例如，以下帧可用于 45 分钟扫描：4 x 30 秒、3 x 1 分钟、5 x 2 分钟、2 x 5 分钟和 2 x 10 分钟。
3. 使用迭代重建算法（即 ISRA）重建过程在 200 × 200 × 425 矩阵中将 CT 标准采集方案重建为 0.2 毫米的等距体素大小。使用供应商软件，使用以下公式将 CT 值转换为 Hounsfield 单位 （胡）：
   
   其中 μ_W 是水的线性衰减系数，μ_a 是空气的线性衰减系数，μ_t 是组织的线性衰减系数。
4. 使用毛细血管体模扫描生成的基质重建后，PET 和 CT 图像自动对齐。存档所有重建的数据，并根据需要使用图像分析软件将它们传输到数据库服务器。

6. 图像处理和分析

注意：共同配准的 PET/CT 图像进一步用于图像分析软件的数据库服务器中的定量，其中每个混合扫描都保存为一个主题。

1. 根据 CT 识别肿瘤并将其选为感兴趣区域。在 CT 上手动掩盖肿瘤基底。
2. 为了实现独立于用户的分割，请在 PET 或 SPECT 上对新形成的肿瘤掩模进行阈值处理。对于 PET，使用标准化摄取值 （SUV） 的最小阈值 1.0。对于 SPECT，使用高于心脏或腹主动脉末端测量的平均血池摄取量的最小阈值。
3. 记录最热的 10 个体素的平均值、最大值、平均值（即热平均值 10）以及新生成的感兴趣体积的总摄取量。
4. 使用这些值生成 SUV 和目标背景 （TBR） 值，这些值将进一步用于统计分析。

放射性药物质量控制的最重要方面之一是通过 HPLC，因为它不仅可以显示化学和放射化学纯度（在本例中为 98.2%），还可以通过将洗脱时间和峰形与非放射性参比化合物进行比较来证明放射性药物的身份。在这种情况下，这种参考化合物是一种未标记的纳米抗体，通过质谱或核磁共振等经典技术证明是正确的化合物。这些技术不能直接应用于放射性化合物（没有足够的质?...

放射性合成
这里描述的放射性合成是新的 ⁶⁸Ga标记化合物的典型特征 - 合成时间短，强调合适的 pH 值并尽可能避免使用金属。为此，严格遵循组件的添加顺序非常重要。在任何情况下，必须首先用 3 M NH₄OAc 将 ⁶⁸Ga 溶液的 pH 值调节至 pH 4;否则，如果 pH 值太酸，纳米抗体可能会降解。⁶⁸Ga合成的一般概念已经在¹⁶

FMM 是 NanoMab Technology Ltd. 和 Advanced Accelerator Applications （AAA） GmbH 的医学顾问。他最近获得了 NanoMab Technology Ltd.、Siemens 和 GE Precision Healthcare LLC 的机构资助。此外，他还与 CURIUM 签订了介入研究合同。

作者感谢 Susanne Allekotte 的技术支持。