تلطيخ مطاطي على الشرائح جزءا لا يتجزأ من البارافين من أنسجة سرطان المعدة pT3N0M0

هذه الطريقة تساعد في تحديد ما إذا كانت الخلايا الورم غزت وراء lamina مرنة في pT3 سرطان المعدة. مرونة تآكل الصفيحة في الصورة التكهنية لسرطان المعدة pT3. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها مريحة، ونهج دقيق لتحديد lamina مرنة، مما يجعلها أكثر دقة لأخصائي علم الأمراض لتقييم ما إذا كانت الخلايا السرطانية تغزو وراء اللامينا مرنة في pT3 سرطان المعدة.

يمكن أن يكون هذا الأسلوب نحو تشخيص مرحلة الاختبار الباثولوجي لسرطان الرئة والسرطان. ويمكن أيضا تطبيق هذه الطريقة على نظام المرحلة TNM من سرطان الرئة وسرطان المستقيم كولو. أولاً، اغمر الشرائح في الزيلين في جرة كوبلين لمدة 10 دقائق.

إزالة الشرائح من هذه الجرة وتزج بها في إكسيلين الطازجة في جرة كوبلين مختلفة لمدة 10 دقائق أخرى. اغمر الشرائح في 100٪ الإيثانول لمدة خمس دقائق، ثم قم بنقلها إلى الإيثانول الطازج 100٪ لمدة خمس دقائق أخرى. بعد ذلك، غمر الشرائح في 95٪ الإيثانول لمدة دقيقتين.

نقل الشرائح إلى جرة تحتوي على 70٪ الإيثانول لمدة دقيقتين. بعد ذلك، شطف الشرائح لفترة وجيزة مع الماء المقطر في جرة كوبلين جديدة. أولاً، استخدم ورق الأنسجة لمسح أي محلول زائد على الشريحة أو حول الأنسجة.

ضع الشرائح في ظروف تتطابق مع درجة حرارة الغرفة والرطوبة. إضافة بضع قطرات من برمنغنات البوتاسيوم إلى كل شريحة لأكسدة لهم، والتأكد من أن حجم المضافة يكفي لتغطية قسم الأنسجة على كل شريحة. بعد خمس دقائق، شطف الشرائح المؤكدة بالماء المقطر في جرار كوبلين، وتكرار الشطف مرتين إلى ثلاث مرات واستخدام جرة جديدة من الماء لكل شطف.

وينبغي أن يكون للأنسجة لون بني ملحوظ. الآن، إضافة بضع قطرات من حمض الأوكسيليك إلى كل شريحة لتبييض لهم، والتأكد من أن حجم المضافة يكفي لتغطية قسم الأنسجة على كل شريحة. بعد خمس دقائق، شطف الشرائح المبيضة بالماء المقطر، وتكرار شطف مرتين إلى ثلاث مرات واستخدام جرة جديدة من الماء لكل شطف.

غسل الشرائح لفترة وجيزة في 95٪ الكحول. اغمر الشرائح المغسولة في محلول الإيلاستين لمدة ثماني إلى 24 ساعة. ثم تزج الشرائح مباشرة في 95٪ الإيثانول لمدة دقيقة إلى دقيقتين للتمييز بين كل قسم الأنسجة بشكل جيد.

شطف الشرائح تماما مع الماء المقطر. تحقق مجهرياً للألياف المرنة الزرقاء السوداء التي تلطيخ الخلفية الرمادية. قم بـ Counterstain الشرائح في حل فان غيسون لمدة دقيقة واحدة ، مع التأكد من أن الحجم المستخدم يكفي لتغطية قسم الأنسجة على كل شريحة تمامًا.

بعد ذلك، بسرعة إسقاط 95٪ الإيثانول على شرائح الأنسجة لبضع ثوان لتمييز كل قسم الأنسجة بشكل جيد. للبدء، غمر الشرائح في 95٪ من الكحول لمدة خمس دقائق لتجفيفها بسرعة. نقل الشرائح إلى 100٪ الكحول لمدة خمس دقائق لمواصلة الجفاف.

ثم، نقل الشرائح إلى الكحول الطازجة 100٪ لمدة خمس دقائق إضافية. اغمر الشرائح في تغييرين مختلفين من الزيلين مع كل غمر يدوم لمدة ثلاث دقائق. بعد ذلك، إضافة قطرة واحدة من الراتنج تصاعد المتوسطة إلى الشريحة ووضع زلة غطاء على القمة.

باستخدام المجهر، ومراقبة أقسام الأنسجة على النحو المبين في بروتوكول النص. في هذه الدراسة، يتم استخدام تلطيخ مرنة لتحديد بصريا lamina مرنة تحت المنظار. ممثل تلطيخ ناجحة يكشف أنه بعد تلطيخ حل الإيلاستين، ولكن قبل مواجهة فان غيسون، يمكن رؤية lamina مرنة بوضوح في شكل خيوط التي هي ملطخة الأزرق والأسود.

فهي قريبة من الخلايا السوسية السوسية، ولا يزال ينظر إلى كمية معينة من المسافة بين اللامينا المرنة والخلايا السرطانية. تلطيخ مطاطية نموذجية مع عداد فان غيسون تثبت أن اللامينا مرنة ملطخة باللون الأزرق والأسود. ألياف الكولاجين هي حمراء ملطخة، والألياف العضلية والخلايا السرطانية ملطخة باللون الأصفر.

الخلايا السرطانية اختراق lamina مرنة يعتبر الغزو اللامينا مرنة. في حين أن الخلايا السرطانية التي تكون قريبة من ولكن لا غزو lamina مرنة يعتبر lamina مرنة غير الغزو. إذا كان تلطيخ يكشف عن بنية متكررة تدل على طبقات متعددة من اللامينا المرنة ، والورم لا يغزو خارج الطبقة الخارجية ، فيجب تشخيص العينة على أنها لامينا مرنة غير غزو.

حل Elastin هو وقت تلوين نسبيا طويلة، لذلك فمن الأفضل أن تزج جميع الشرائح مع تلطيخ elastin في حاوية مغلقة. بعد تلطيخ حل الإيلاستين ، يجب أن يتم غسلها بالماء المقطر.